基于Dectin-1-Syk-CARD9信号通路研究三黄汤缓解白念珠菌定植小鼠溃疡性结肠炎作用机制

目的基于Dectin-1-Syk-CARD9信号通路研究三黄汤治疗白念珠菌定植小鼠溃疡性结肠炎的作用机制。方法采用葡聚糖硫酸钠自由饮用联合白念珠菌灌胃建立白念珠菌定植溃疡性结肠炎小鼠模型。将小鼠分为正常对照组、模型组、柳氮磺吡啶组、氟康唑组和三黄汤低、高剂量组,分别予相应药物干预。观察小鼠一般状况并进行疾病活动指数(DAI)评分,检测小鼠肠道白念珠菌载荷,测量结肠长度并进行结肠组织病理学评分,透射电镜观察结肠上皮细胞超微结构,ELISA检测血清和结肠组织肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-12含量,q PCR、Western blot和免疫组化检测结肠上皮细胞和结肠组织Dectin-1、Syk、CARD9及核因子(NF)-κBp65和炎症因子表达。结果与正常对照组比较,模型组小鼠活动减弱、摄食量减少,伴有稀便,DAI评分明显升高,肠道白念珠菌载荷增加,结肠长度缩短,组织病理评分增加,结肠上皮细胞间隙增宽,细胞质溶解,线粒体肿胀,血清和结肠组织TNF-α、IL-6、IL-12含量升高,结肠上皮细胞Dectin-1、CARD9 mRNA和蛋白表达升高,结肠组织p-Syk、p-NF-κBp65、CARD9、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,三黄汤高剂量组小鼠DAI评分明显降低,肠道白念珠菌载荷减少,结肠长度增加,组织病理评分降低,结肠黏膜上皮细胞微绒毛较完整、排列较有序,线粒体轻度肿胀,血清和结肠组织TNF-α、IL-6、IL-12含量均降低,结肠上皮细胞Dectin-1、CARD9 mRNA和蛋白表达降低,结肠组织p-Syk、p-NF-κBp65、CARD9、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05)。结论三黄汤可能通过抑制Dectin-1-Syk-CARD9信号通路、减少炎症因子释放,发挥抗白念珠菌定植UC作用。

Dectin-1通过巨噬细胞极化影响STEMI的机制研究

目的 探究Dectin-1通过巨噬细胞极化影响STEMI的机制研究。方法 将45只SPF级SD大鼠随机分为假手术组(n=15)、模型组(n=15)、si-Dectin-1组(n=15),模型组与si-Dectin-1组分别通过尾静脉注射NC-质粒和si-Dectin质粒,2周后建立ST段抬高型心肌梗死(ST-Segment Elevation Myocardial Infarction, STEMI)模型,2周后分离心脏组织,qPCR检测心脏组织Dectin-1表达水平,TTC染色检测心肌坏死面积,Tunel染色检测心肌凋亡水平,Masson染色检测心肌纤维化水平,ELISA检测心脏组织炎症因子白细胞介素-1(Interleukin-1,IL-1)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)表达水平,Western blot检测心脏组织M1巨噬细胞和M2巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase, iNOS),CD86,精氨酸酶1(Arginase 1,Arg-1),CD163表达水平。结果 与假手术相比,模型组Dectin表达水平显著升高,si-Dectin-1组Dectin表达水平显著降低;模型组心肌坏死面积增加,细胞凋亡增加,组织纤维化增加,炎症因子IL-1、IL-6、IL-10表达水平升高,与模型组相比,si-Dectin-1组心肌坏死面积降低,细胞凋亡降低,组织纤维化降低,炎症因子IL-1、IL-6、IL-10表达水平降低,差异具有显著的统计学意义(P<0.01);模型组大鼠中iNOS、CD86、Arg-1和CD163的表达水平均显著增加;与模型组比较,si-Dectin-1组大鼠心脏组织中iNOS和CD86蛋白表达水平下调,Arg-1和CD163蛋白表达水平显著上调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 si-Dectin-1可发挥STEMI大鼠的心肌保护作用,其机制与巨噬细胞M2极化的调控相关。

Dectin-1受体介导肺炎克雷伯菌诱导的ARDS炎症反应及其病理特征

目的:免疫反应在急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)的病理生理机制中发挥重要作用,而Dectin-1受体介导多个炎症反应通路。本研究旨在探讨Dectin-1受体介导肺炎克雷伯菌诱导的ARDS炎症反应特点及其与病理特征的相关性。方法:提取C57BL/6野生型或Dectin-1^(−/−)小鼠腹腔巨噬细胞,采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)的肺炎克雷伯菌或不同浓度的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下巨噬细胞中白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平;采用蛋白质印迹法检测巨噬细胞相关炎症通路蛋白质胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、p38蛋白、c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的表达水平。取健康野生型小鼠或Dectin-1^(−/−)小鼠随机分为ARDS模型小鼠和对照小鼠,小鼠采用肺炎克雷伯菌经气道感染建立ARDS模型,对照小鼠采用与肺炎克雷伯菌等体积的PBS经气道感染。观察小鼠7 d生存率;采用ELISA法检测各组小鼠3、8、24、48 h血浆IL-6表达水平;采用HE染色法比较小鼠肺组织损伤情况;计算并比较小鼠肺组织载菌量的差异。结果:给予肺炎克雷伯菌刺激后,Dectin-1^(−/−)小鼠巨噬细胞中IL-6、IL-1β和TNF-α的表达水平均高于野生型小鼠巨噬细胞(P<0.05);给予巨噬细胞LPS刺激后,Dectin-1^(−/−)小鼠巨噬细胞表达IL-6明显高于野生型小鼠巨噬细胞(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示:Dectin-1^(−/−)小鼠巨噬细胞在肺炎克雷伯菌刺激45、60 min时ERK表达水平均高于野生型小鼠巨噬细胞(均P<0.05);刺激30、60 min时,Dectin-1^(−/−)小鼠巨噬细胞表达JNK、p38水平均高于野生型小鼠巨噬细胞(均P<0.05)。ARDS建模7 d内,Dectin-1^(−/−)ARDS模型小鼠生存率低于野生型ARDS模型小鼠[20%(1/5)vs 100%(5/5),P<0.01];Dectin-1^(−/−)对照小鼠和野生型对照小鼠生存率均为100%(5/5)。ELISA结果显示:Dectin-1^(−/−)ARDS模型小鼠和野生型ARDS模型小鼠在感染肺炎克雷伯菌3、8、24、48 h血浆中IL-6表达水平均无明显差异(均P>0.05)。Dectin-1^(−/−)对照小鼠和野生型对照小鼠在气道给予PBS 3~48 h后IL-6表达水平均偏低。Dectin-1^(−/−)ARDS模型小鼠Smith评分高于野生型ARDS模型小鼠(P<0.05)。Dectin-1^(−/−)对照小鼠和野生型对照小鼠肺组织Smith评分差异无统计学意义(P>0.05)。感染肺炎克雷伯菌24 h后Dectin-1^(−/−)ARDS模型小鼠与野生型ARDS模型小鼠、Dectin-1^(−/−)对照小鼠与野生型对照小鼠的肺组织载菌量差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:Dectin-1受体与细胞因子表达水平显著相关,提示Dectin-1受体在ARDS早期通过减少细胞因子表达来减轻炎症反应程度,以发挥其在肺炎克雷伯菌诱导ARDS中的保护作用。

树突状细胞相关C型凝集素1(dectin-1)在抗肿瘤免疫中的研究进展

树突状细胞相关C型凝集素1(dectin-1)受体是真菌细胞壁上β葡聚糖的主要模式识别受体。Dectin-1广泛表达于树突状细胞(DC)、巨噬细胞及中性粒细胞等髓样细胞,在与内、外源性配体结合后,dectin-1能够诱导自身胞内信号传导触发一系列的细胞免疫反应,参与机体抗感染及抗肿瘤等过程。Dectin-1与其不同配体之间的相互作用,触发了不同的信号活化途径和细胞功能;与β葡聚糖的识别促进DC的成熟和向T细胞递呈抗原的能力,诱导细胞毒性T淋巴细胞的增殖,激活机体的特异性免疫应答进而发挥抗肿瘤作用。我们主要总结了dectin-1分子的结构、信号通路及其在抗肿瘤免疫中的研究进展。

Dectin-1过表达对树突状细胞成熟的抑制作用及其对小鼠心脏移植物免疫耐受的诱导作用

目的:探讨过表达Dectin-1基因对树突状细胞(DCs)功能的影响,阐明Dectin-1基因抑制DCs成熟活化发挥免疫学功能的机制及对小鼠心脏移植物的免疫保护作用。方法:小鼠骨髓干细胞诱导形成DCs后进行体外培养扩增,采用带有绿色荧光蛋白(GFP)标签的腺病毒载体将Dectin-1基因转染至DCs,经过Dectin-1基因修饰的未成熟DCs (imDCs)为DC-Dectin-1组,同时设未经病毒转染的DCs组和转染GFP (DC-GFP)组,24 h后采用免疫荧光染色法检测腺病毒转染情况,采用Western blotting法检测各组DCs中Dectin-1蛋白表达情况,采用流式细胞术和酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测脂多糖(LPS)刺激前后各组DCs表型、功能和细胞培养上清液中白细胞介素10(IL-10)和白细胞介素12 (IL-12)水平。建立同种异体小鼠腹部异位心脏移植模型,分为DCs组、DC-GFP组和DC-Dectin-1组,于移植术后第1、3和5天分别输入DCs、DC-GFP和DC-Dectin-1,移植术后第7天HE染色观察各组小鼠心脏移植物病理形态表现,TUNEL染色观察各组小鼠心脏移植物细胞凋亡情况,观察各组小鼠心脏移植物中位存活时间(MST)。结果:经基因修饰的Ad5F35载体可提高Dectin-1基因转染效率,转染后GFP可持续在DCs中表达。LPS刺激前,DCs、DC-GFP和DC-Dectin-1组细胞中CD40、CD80、CD86和人类主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)表达水平均较低,呈现imDCs表型;与LPS刺激前比较,LPS刺激后DCs组和DC-GFP组细胞中CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ表达水平升高,呈现成熟DC表型,而DC-Dectin-1组细胞中CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ表达水平仍较低。LPS刺激前,各组细胞培养上清液中IL-10和IL-12水平比较差异无统计学意义(P>0.05);LPS刺激后,与DCs组和DC-GFP组比较,DC-Dectin-1组细胞培养上清液中IL-10水平明显升高(P<0.05),IL-12水平明显降低(P<0.05)。移植术后第7天,与DCs组和DC-GFP组比较,DC-Dectin-1组小鼠心脏移植物组织中炎性细胞浸润减少,排斥反应表现明显减轻,TUNEL染色呈阳性的凋亡细胞明显减少。与DCs组和DC-GFP组比较,DC-Dectin-1组小鼠术后心脏移植物MST明显延长(P<0.01)。结论:Dectin-1基因可抑制未成熟DCs在LPS作用下的成熟和活化,减弱其抗原提呈功能,在一定程度上延长小鼠心脏移植物MST,诱导移植物免疫耐受形成。

Dectin-1在宿主抗隐球菌感染的机制与研究进展

固有免疫在隐球菌感染中发挥着至关重要的作用,宿主建立对隐球菌有效免疫应答的第一步是通过固有免疫应答细胞表达的模式识别受体(PRR)识别隐球菌病原体相关分子模式(PAMP),进一步触发涉及许多蛋白质(脾酪氨酸激酶和胱天蛋白酶募集域蛋白9等)的细胞内信号级联反应。本篇综述中笔者总结了固有免疫应答细胞模式识别受体Dectin-1与隐球菌病原体相关分子模式的相互识别机制,并讨论了Dectin-1信号通路在宿主抗隐球菌感染免疫中的作用及其在隐球菌病药物和疫苗佐剂研发中的潜在应用。

AIDS合并马尔尼菲青霉病患者外周血Dectin-1、炎症细胞因子及CD4^+T淋巴细胞表达情况及其临床意义

目的探讨AIDS合并马尔尼菲青霉菌病(Ps M)患者模式识别受体Dectin-1、炎性细胞因子及CD4^+T淋巴细胞表达情况及其临床意义。方法将120例AIDS患者根据是否合并Ps M分为Ps M组和非Ps M组各60例,比较两组Dectin-1的平均荧光强度、CD4^+T淋巴细胞计数和白细胞介素(IL)-2、IL-6、IL-12、IL-23水平。结果 Ps M组的Dectin-1表达、CD4^+T淋巴细胞计数、IL-2、IL-6、IL-12和IL-23水平均低于非Ps M组(P<0.05)。结论 Dectin-1及其调节产生的炎症细胞因子、CD4^+T水平下降可能是导致AIDS的患者对马尔尼菲青霉菌易感的重要原因。

柔肝方上调肝组织Dectin-1及下调TLR4治疗CCl4造模小鼠肝纤维化的作用机制研究

目的评价柔肝方对CCl4致肝纤维化小鼠的治疗作用及对Dectin-1、Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法C57BL小鼠60只,随机分为对照组、模型组和柔肝方组。模型组与柔肝方组均腹腔注射CCl4,每周3次,共6周;其中第3周起两组分别给予0.9%NaCl溶液与柔肝方灌胃,干预6周。检测各组小鼠肝功能,肝组织中Dectin-1、TLR4及相关下游蛋白和mRNA的水平,探讨柔肝方的抗肝纤维化作用。结果柔肝方组ALT、AST明显低于模型组,ALB明显高于模型组(P<0.01);柔肝方组肝脏假小叶形成和纤维化程度以及肝脏羟脯氨酸(Hyp)水平明显低于模型组(P<0.01);柔肝方组Dectin-1表达高于模型组(P<0.01),TLR4表达水平低于模型组(P<0.01);柔肝方组肌动蛋白α(α-SMA)、转化生长因子受体(TGF-β1 R)、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)表达均明显低于模型组(P<0.01),且柔肝方组脊髓趋化因子受体2(CCR2)表达也明显低于模型组(P<0.01)。结论柔肝方具有较好的抗肝纤维化的作用,其机制可能与上调Dectin-1、下调TLR4的表达有关,也可能与下调CCR2表达有关。

模式识别受体Dectin-1与β-葡聚糖的免疫识别作用

二十多年前,人们首次发现β-葡聚糖受体作为一种非调理素依赖性受体,可在免疫反应早期,通过识别内、外源配体,在清除衰老细胞和防御感染方面发挥重要作用,进而实现其抗肿瘤、抗感染等生物学效应。本文对β-葡聚糖模式识别受体在先天性免疫细胞和组织中的分布及其在炎症反应中的作用进行了综述。

酿酒酵母β-葡聚糖通过膜受体Dectin-1和TLR-2诱导绵羊瘤胃上皮细胞表达SBD-1的机制研究

为了探索酿酒酵母β-葡聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞(ovine ruminal epithelial cells,ORECs)β-防御素-1(sheepβ-defensin-1,SBD-1)表达过程中膜受体Dectin-1和TLR-2可能存在的作用。本研究首先利用免疫组化、RT-PCR、免疫荧光和Western blot等方法检测Dectin-1是否在ORECs内表达,并且采用qPCR和Western blot方法对β-葡聚糖刺激ORECs后细胞膜受体Dectin-1和TLR-2的表达变化进行检测。而后用不同浓度的Dectin-1阻断剂昆布多糖或TLR-2特异性封闭抗体分别预处理ORECs后,采用qPCR和ELISA方法检测SBD-1的表达变化,以确定β-葡聚糖诱导SBD-1表达过程中Dectin-1和TLR-2的参与情况。结果显示:1)绵羊瘤胃组织及ORECs内存在Dectin-1表达,且β-葡聚糖刺激ORECs后Dectin-1和TLR-2的表达水平显著增加(P<0.05);2)不同浓度的昆布多糖和TLR-2封闭抗体均可以极显著降低β-葡聚糖诱导SBD-1的表达(P<0.01),且随着阻断剂和封闭抗体浓度的增加,其抑制SBD-1表达的作用越明显。结果表明,Dectin-1在绵羊瘤胃组织及ORECs内均表达,并且酿酒酵母β-葡聚糖在ORECs中诱导SBD-1的表达是由Dectin-1和TLR-2介导产生的。

热处理光滑念珠菌对大鼠气道上皮细胞Dectin-1、IL-6和TNF-α表达的影响

目的探讨大鼠气道上皮(RTE)细胞与热处理光滑念珠菌孵育后Dectin-1、IL-6和TNF-α的表达及意义。方法以体外培养的RTE细胞与热处理光滑念珠菌孵育后分别于2、4、6h观察RTE细胞形态变化,以未与光滑念珠菌孵育的RTE细胞为对照组。用Western blot法检测Dectin-1蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测IL-6和TNF-αmRNA的表达;ELISA法检测上清液IL-6和TNF-α的分泌。结果随着孵育时间的延长,RTE细胞破坏逐渐加重及Dectin-1、IL-6和TNF-α的表达呈进行性增高。孵育2h组与对照组比较、孵育4h组与孵育2h组比较、孵育6h组与孵育4h组比较,Dectin-1、IL-6和TNF-α的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RTE细胞具有天然免疫功能,其Dectin-1参与了对热处理光滑念珠菌的识别,并激活IL-6和TNF-α的分泌,介导炎性反应。IL-6起负性调节作用。

地塞米松抑制卡氏肺孢子菌肺炎β2-防御素和Dectin-1受体的表达

目的研究卡氏肺孢子菌肺炎(Pneumocystis carinii pneumonia,PCP)鼠肺Dectin-1和β2-防御素的表达变化,探讨地塞米松对Dectin-1和β2-防御素的影响与疾病发生的相互关系。方法实验分4组:正常对照组、Pc刺激组、PCP模型组以及PCP模型恢复组。免疫抑制方法建立PCP动物模型,改良四胺银(Grocoti's methe-namine-silver nitrate method,GMS)染色检测Pc包囊;肺组织切片HE染色观察肺组织病理变化;实时荧光定量和Western blot检测Dectin-1和β2-防御素的mRNA以及蛋白的表达。结果 Pc刺激组的Dectin-1和β2-防御素的mRNA以及蛋白的表达明显高于正常对照组(P<0.05);Pc刺激组和PCP恢复组的Dectin-1和β2-防御素的mR-NA以及蛋白显著高于PCP组(P<0.05),而PCP恢复组与PCP组肺部炎症无明显差别。结论对免疫功能正常宿主,Dectin-1受体和β2-防御素可能在防Pc感染中起重要作用;地塞米松抑制了鼠肺Dectin-1和β2-防御素的表达,这可能与PCP疾病的发生和发展有关。

非粒细胞缺乏肺曲霉病患者血清Dectin-1的检测

目的探讨非粒细胞缺乏肺曲霉病患者血清Dectin-1检测的临床意义。方法收集非粒细胞缺乏的曲霉病患者22例(肺曲霉病组),健康体检者54例(对照组),留取血清,ELISA方法检测两组血清Dectin-1水平。分析Dectin-1水平与血清1,3-D葡聚糖抗原检测(G试验)、半乳甘露聚糖抗原检测(GM试验)和血白细胞计数的关系。结果肺曲霉病组血清Dectin-1水平为(427.2±42.6)pg/mL,对照组为(280.8±39.4)pg/mL,差异有统计学意义(P<0.05);Dectin-1水平与血白细胞计数、G试验、GM试验无相关性。结论在非粒细胞缺乏曲霉病患者血清中,Dectin-1水平明显增高,提示Dectin-1是重要的抗曲霉免疫分子。

模式识别受体Dectin-1与天然免疫反应

在免疫反应早期,抗原递呈细胞表达的模式识别受体通过识别内、外源配体在清除衰老宿主细胞、分子以及防御感染中发挥重要作用。新近发现的树突状细胞相关性C型植物血凝素-1(den driticcell associatedC typelectin- 1, Dectin -1)作为β- 葡聚糖的主要受体,广泛分布于单核巨噬细胞系统、树突状细胞(dendriticcell,DC)及中性粒细胞等。本文对Dectin- 1分子结构、细胞组织分布及其在诱导、调控局部和全身免疫、炎症反应中的作用进行概述。

Dectin-1与真菌β-葡聚糖介导的天然免疫

β-葡聚糖是真菌胞壁的主要多糖成分。天然免疫系统识别这一成分后触发髓系细胞的免疫应答反应,杀伤和清除入侵微生物。该文主要介绍天然免疫细胞的模式识别受体dectin-1与β-葡聚糖的特性以及它们通过何种信号传导途径激活天然免疫系统。对β-葡聚糖和dectin-1的研究必将为研制抗真菌免疫制剂和抗真菌药物靶点提供崭新的思路。

真菌细胞壁病原相关分子模式TLR/Dectin-1通路及相关细胞因子的免疫作用

侵袭性真菌感染(IFI)是致ICU患者死亡的重要原因之一。机体通过天然免疫重要的模式识别受体(PRR)Toll样受体(TLR)及C型凝集素受体(CLR)与病原相关分子模式(PAMP)识别后启动抗真菌免疫反应。目前明确磷脂甘露聚糖(PLM)的识别主要依赖TLR2和TLR4;β-葡聚糖经TLR2/树突状细胞相关性C型凝集素-1(Dectin-1)或只经Dectin-1识别。PLM和β-葡聚糖被识别后及经Dectin-1驱动获得性免疫后产生一系列下游细胞因子,一些下游细胞因子的免疫作用对不同组织有所不同、不确定或存在争议,一些免疫反应在细节上还没有详尽描述。因此,深入研究PAMP与PRR相互作用及其细胞因子对免疫调节影响,对IFI的预防治疗有重要意义。

模式识别受体-Dectin-1的研究进展

Dectin-1是主要表达于髓样细胞中的非Toll样模式识别受体,它能诱导自身胞内信号介导一系列细胞反应,在抗真菌免疫中发挥着重要的作用。该文对Dectin-1介导的信号途径,Dectin-1与其他模式识别受体的相互作用,Dectin-1在适应性免疫、抗微生物免疫中的作用予以综述。

非粒细胞缺乏侵袭性肺曲霉病患者血清IL-17、Dectin-1的变化

目的探讨非粒细胞缺乏侵袭性肺曲霉病(IPA)患者血清中IL-17、Dectin-1水平的变化及其意义。方法分别收集23例确诊及临床诊断为IPA的非粒细胞缺乏患者(IPA组)、31例临床诊断为肺炎患者(肺炎组)和51例健康体检者(对照组)的资料,应用ELISA法测定血清IL-17含量;同时检测IPA组及对照组血清Dectin-1含量,并测定IPA组患者血清G试验、GM试验、外周血白细胞计数和血清CRP的水平,随访患者预后,分析血清IL-17与其相关性。结果 IPA组患者血清IL-17含量明显高于对照组(P<0.05);肺炎组患者血清IL-17水平与对照组差异无统计学意义(P>0.05);IPA组血清Dectin-1含量明显高于对照组(P<0.05);IPA组血清IL-17与Dectin-1水平呈正相关(r=0.81,P<0.05);IPA组血清IL-17、Dectin-1水平与G试验、GM试验、白细胞、CRP及患者的预后无相关性(P>0.05)。结论非粒细胞缺乏宿主曲霉感染时刺激Dectin-1产生,激活Th17细胞免疫反应,且两者间存在相关性。

卡氏肺孢子菌肺炎鼠肺模式识别受体Dectin-1、TLR-2和TLR-4的表达变化

目的:研究卡氏肺孢子菌(Pneumocystis carinii,Pc)肺炎鼠肺Dectin-1、TLR-2和TLR-4的表达,探讨模式识别受体表达改变与PCP疾病发生的相互关系。方法实验分4组:正常对照组、Pc刺激组、PCP模型组以及PCP模型恢复组。地塞米松磷酸钠免疫抑制方法建立PCP动物模型,改良四胺银(GMS)染色检测Pc包囊;肺组织切片HE染色观察肺组织病理变化;实时荧光定量和Western-blot检测Dectin-1、TLR-2和TLR-4的mRNA以及蛋白的表达。结果:Pc刺激组的Dectin-1、TLR-2以及TLR-4的mRNA以及蛋白的表达明显高于正常对照组(P<0.05);Pc刺激组和PCP恢复组Dectin-1的mRNA以及蛋白显著高于PCP组(P<0.05),而肺部Pc载荷量显著低于PCP组(P<0.05)。结论地塞米松抑制了PCP鼠肺Dectin-1、TLR-2和TLR-4受体的表达,这可能与PCP疾病的发生和发展有关。

抗Dectin-1单克隆抗体在白念珠菌刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和NO中的作用

目的探讨抗Dectin-1单克隆抗体在白念珠菌刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化氮(NO)中的作用。方法①体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,设置处理组(抗Dectin-1单克隆抗体组)、阴性对照组与空白对照组,分别给予灭活或活的白念珠菌刺激。②刺激1h,3h,6h,8h后用酶联免疫吸附试验检测各组分泌的TNF-α水平,③刺激6h后Griess法检测各组产生NO的水平。结果①刺激1h后抗体浓度为20μg/mL处理组分泌的TNF-α水平(79.82±11.74pg/mL)低于阴性对照组(105.15±12.36pg/mL)(P<0.05),3h,6h,8h后各浓度处理组TNF-α水平均低于阴性对照组(P均<0.01),且呈浓度依赖性;②6h后各浓度处理组NO水平(61.24±8.85μmol/L,45.36±3.92μmol/L,36.37±2.58μmol/L)均低于阴性对照组(87.65±9.17μmol/L)(P<0.05)。结论抗Dectin-1单克隆抗体在白念珠菌刺激小鼠巨噬细胞释放TNF-α和NO中发挥抑制作用。