脱氢卡维丁对CCl_(4)诱导的肝纤维化大鼠的改善作用

目的探讨脱氢卡维丁对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_(4))诱导的肝纤维化大鼠的改善作用及可能机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、水飞蓟宾组(30 mg/kg)、脱氢卡维丁组(50 mg/kg),每组6只。除正常组外,其他各组采用30%CCl_(4)橄榄油溶液(1 mL/kg)腹腔注射复制肝纤维化模型,每周2次,连续14周。各给药组于造模第13、14周每天按设定剂量灌胃相应药物进行干预。正常组与模型组大鼠灌胃等体积的生理盐水。末次给药12 h后,测定各组大鼠肝脾指数;采用HE染色与Masson染色观察肝组织病理学变化,比色法检测大鼠血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量;采用ELISA检测血清透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前胶原蛋白(typeⅢprocollagen,PCⅢ)及Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ,ColⅣ)的表达水平;Western blot法检测肝组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠肝脾指数显著增加(P<0.001),肝组织纤维化进展明显,胶原容积分数明显增加(P<0.001),血清中ALT、AST、MDA、LN、HA、PCⅢ和ColⅣ水平显著升高(P<0.001),SOD明显下降(P<0.001);肝组织TGF-β1、α-SMA及N-cadherin蛋白表达水平明显上升(P<0.001),E-cadherin蛋白表达明显下降(P<0.001)。与模型组比较,脱氢卡维丁组大鼠肝脾指数明显降低(P<0.001),肝组织病理学损伤和纤维增生有效改善,胶原容积分数明显下降(P<0.001),血清ALT、AST、MDA含量显著降低(P<0.001),血清SOD的表达水平明显升高(P<0.001),LN、HA、PCⅢ、ColⅣ的表达明显下调(P<0.05,P<0.001),肝组织TGF-β1、α-SMA和N-cadherin蛋白表达显著下降(P<0.001),而E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.001)。结论脱氢卡维丁对肝纤维化大鼠具有良好的改善作用,其机制可能与调节氧化应激反应、下调N-cadherin、α-SMA、TGF-β1蛋白表达及上调E-cadherin蛋白表达有关。

岩黄连化学成分

目的：研究岩黄连（Corydalis suxicola Bunting）的化学成分。方法：采用、硅胶低压柱层析、制备性薄层层析和重结晶等方法进行分离纯化，根据化舍物的理化性质和光谱数据鉴定结构。结果：从岩黄连中分离得到14个化舍物，分别为：去氢岩黄连碱（dehydrocavidine，1）、黄连碱（coptisine，2）、齐墩果酸（oleanolic acid，3）、刺檗碱（oxvacanthine，4）、胡萝卜苷（daucosterol，5）、别隐品碱（allocryptopine，6）、β-谷甾醇（β-sitosterol，7）、白桦脂醇（betulin,8）、环桉烯醇（cycloeucalenol，9）、白桦脂酸（betulinic acid，10）、β-香树脂醇乙酸酯（β-amyrinacetate，11）、小檗碱（berberlne，12）、四氢掌叶防己碱（tetrahydropalmatine，13）、巴马汀（palmatine，14）。结论：化合物3—11、14为首次从该植物中分离得到。

岩黄连中生物碱的分离和结构鉴定

目的对中草药岩黄连中的生物碱类成分进行研究。方法运用高效制备液相色谱技术对岩黄连总碱进行分离纯化,通过波谱数据结合理化性质对所得化合物进行结构鉴定。结果从岩黄连总碱中分离得到6个单体生物碱,分别是去氢碎叶紫堇碱(1)、脱氢甲卡维丁(2)、药根碱(3)、脱氢卡维丁(4)、盐酸巴马汀(5)和盐酸小檗碱(6)。结论药根碱为首次从岩黄连中分离得到。

制备色谱系统从岩黄连中分离岩黄连碱

目的采用制备色谱系统从岩黄连中分离纯化其活性单体岩黄连碱,建立其纯化工艺和技术。方法用醇-酸水-氯仿的方法从岩黄连中提取出总生物碱,然后采用制备色谱系统AKTA Exp lorer 100从中分离出岩黄连碱。结果产品经HPLC检测质量分数达99%以上。结论该方法先进,重复性好,可用于分离纯化岩黄连碱。

不同干燥方法对岩黄连中脱氢卡维汀及总生物碱含量的影响

目的:研究探讨不同干燥方法对岩黄连药材不同部位(根、茎、叶、花序)中主要有效成分脱氢卡维汀及其总生物碱含量的影响。方法:对不同干燥方法所得岩黄连药材不同部位中脱氢卡维汀(HPLC法)和总生物碱(紫外分光光度法)的含量进行测定和统计分析。结果:与传统干燥方法(阴干、晒干、60℃烘干)相比,常温真空干燥法和真空冷冻干燥法所得岩黄连药材中脱氢卡维汀含量相对较低,而阴干法所得药材中脱氢卡维汀的含量较高,其中根和花序中脱氢卡维汀含量最高,分别为冻干法所得药材的相应部位中含量的3.4倍和2.2倍。不同干燥方法对药材各部位中总生物碱含量的影响与对脱氢卡维汀含量的影响基本一致。结论:岩黄连采收后,干燥方法对所得干燥药材中脱氢卡维汀及总生物碱的含量有较大影响,以阴干法所得药材中二者的含量最高。

大孔吸附树脂分离岩黄连总生物碱的研究

利用大孔吸附树脂分离岩黄连中的总生物碱,采用静态和动态吸附-解吸附方法,以总生物碱和脱氢卡维丁含量为指标,考察了6种大孔吸附树脂对岩黄连总生物碱的吸附能力,其中D101型大孔吸附树脂的比吸附量和比洗脱量均较高。优化后的提取工艺为:上样药液原药材浓度0.2g/ml,吸附流速为2BV/h,解吸附溶剂为60%乙醇(3BV),所得岩黄连提取物中总生物碱含量大于60%。

不同产地岩黄连中总生物碱和脱氢卡维丁的比较研究

目的建立岩黄连中总生物碱和脱氢卡维丁的含量测定方法,并探讨不同产地岩黄连二者含量。方法以脱氢卡维丁为对照,分光光度法测定总生物碱含量;RP-HPLC法测定脱氢卡维丁含量,以Lichrosopher-C18柱为分析柱,0.01mo1/LKH2PO4水溶液(用磷酸调pH=3)-乙腈(75∶25)为流动相,检测波长347 nm,柱温30℃,流速1.0 ml/min。结果广西和贵州产的岩黄连药材总生物碱和脱氢卡维丁含量较高,且广西产的药材两者含量较稳定。结论所建立的方法操作简便快速,结果准确可靠。测定的不同产地样品中,以广西产的药材质量较好且稳定。

反相高效液相色谱法测定岩黄连药材中脱氢卡维汀的含量

目的:建立反相高效液相色谱法测定岩黄连药材中脱氢卡维汀的含量,并用该方法测定不同采收时间、不同部位岩黄连药材中脱氢卡维汀的含量。方法:采用 Phenomenex Gemini-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.02mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(74:26),二元等度洗脱系统;流速为1.0 mL·min^(-1);检测波长346 nm;柱温为室温。结果:脱氢卡维汀浓度在8.4～84μg·mL^(-1)范围内线性良好,回归方程为 Y=8.550×10~4X-1019(r=0.9998),低、中、高3个加入量的平均回收率分别为101.3%,102.0%,105.3%;RSD 分别为2.8%,2.3%,2.4%;不同采收时间岩黄连全草中脱氢卡维汀的含量为1.72%～2.07%,在根、茎、叶、花中的含量分布为花>根>叶>茎。结论:本方法简便、准确,重复性好,适用于岩黄连药材的质量控制研究。

高效液相色谱法测定岩黄连药材中3种生物碱

目的建立岩黄连药材中脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的测定方法,为完善药材质量评价提供参考依据。方法色谱柱为Agilent XDB C18(150 mm×4.6 mm5,μm),流动相为乙腈-0.01 mol/L磷酸二氢钾水溶液(21:79),柱温30℃,检测波长347 nm,体积流量1.0 mL/min。结果脱氢卡维丁的线性范围为15.015～90.09μg/mL(r=0.999 7),平均回收率为99.01%(RSD=2.97%);盐酸巴马汀的线性范围为14.97～89.82μg/mL(r=0.999 9),平均回收率为100.48%(RSD=2.73%);盐酸小檗碱的线性范围为3.55～28.40μg/mL(r=0.999 7),平均回收率为99.67%(RSD=2.54%)。结论本方法准确、可靠、重现性好,可用于岩黄连药材的质量控制。

岩黄连药材的提取工艺研究

目的正交实验优选岩黄连药材的最佳提取工艺。方法以岩黄连中总生物碱、脱氢卡维丁的含量为指标,比较乙醇和酸水两种不同提取溶媒以及回流、渗漉两种不同提取方法,采用L9(34)正交设计,对影响岩黄连提取工艺中的溶剂浓度、溶剂用量、提取时间、提取次数等4个因素进行优化筛选。结果乙醇提取优于酸水提取,回流法提取效果优于渗漉法。醇提最佳工艺条件为:用75%乙醇提取,每次加醇量10倍,提取3次,每次提取时间2h。结论优选得到的工艺简便、稳定、可行。

高效液相色谱法测定岩黄连药材中脱氢卡维丁的含量

目的:建立高效液相色谱法测定岩黄连药材中脱氧卡维丁含量的方法,为完善质量评价提供依据。方法:Kromasil C_(18)柱(250 mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-0.01 mol·L^(-1)磷酸二氢钾水溶液(调pH至5.0)(25:75)为流动相,流速1.0 ml·min^(-1),检测波长347 nm,柱温30℃。结果:脱氢卡维丁在0.1966～1.1796μg(r=0.999 7)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为99.80%,RSD为1.35%。结论:所建立的方法简便、准确、重复性好。

放大培养对岩黄连细胞悬浮培养的影响

为了优化岩黄连细胞悬浮培养的条件,研究了在放大培养过程中,岩黄连细胞生长与主要营养成分的代谢动力学,以及生物碱的产生情况。结果表明,在不同培养体系下,细胞生长曲线均呈现"S"型。随着培养体积从50、100 mL放大到500 mL和1 L,培养液中碳源、氮源和磷源的消耗减慢,细胞生物量减少,生物碱产量降低。其中100 mL培养体系所获生物量最高,达到15.2 g/L,生物碱产量也最高,脱氢卡维丁为8.35 mg/mL,小檗碱为4.58 mg/mL。根据本文结果,提出了岩黄连细胞培养条件的优化和大规模细胞培养生产岩黄连生物碱应采取的策略。

高效液相色谱法测定不同来源岩黄连中不同部位脱氢卡维丁含量

目的 建立岩黄连中有效成分脱氢卡维丁的高效液相色谱（HPLC）含量测定方法,并对2种不同来源药材的不同部位进行分析,为岩黄连质量标准的制定提供参考.方法 采用SHISEIDO-SPOLAR C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈0.05 moL·L^-1磷酸二氢钠溶液（25∶75）,检测波长347 nm,流速1.0 mL·min^-1,柱温：30℃.结果 脱氢卡维丁进样量在0.024 1～0.482 0 μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9）;平均回收率99.48％（RSD=1.44％,n=6）.不同生长方式的岩黄连脱氢卡维丁的含量差异较大,以野生含量较高;药材不同部位中以根部含量最高.结论 建立的脱氢卡维丁含量测定方法简便,准确,重复性好,可用于岩黄连中类似生物碱成分的质量控制.

岩黄连直肠栓质量标准研究

目的建立岩黄连直肠栓的质量标准。方法采用薄层色谱法对岩黄连直肠栓进行定性鉴别,用高效液相色谱法对岩黄连碱(脱氢卡维丁)进行含量测定。结果岩黄连碱质量浓度在12.5～100.0μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为100.32%RSD=1.46%(n=6)。结论该质量标准准确、可靠,能有效控制岩黄连直肠栓的质量。

反相高效液相色谱法测定岩黄连药材中岩黄连碱的含量

目的建立岩黄连药材中岩黄连碱的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱（RP—HPLC）法，以乙腈：水（50：50，内含0．34％磷酸二氢钾和0．17％十二烷基硫酸钠）为流动相，流速为1m1／min，检测波长为347mm，柱温20℃，进样量为20μl，外标法计算含量。结果岩黄连碱在0．1404～2．808μg内峰面积与对照品的进样量呈良好的线性关系。其回归方程为Y=2×10^6X-5639、1（r=0．99998）。平均回收率分别为98．8％，99．4％。99．3％，RSD分别为1．27％，1．11％，1．06％。结论所建立的RP—HPLC含量测定方法简便、准确、专属性强、重现性好。为控制药材岩黄连质量标准提供了依据。

HPLC法测定岩黄连中不同部位脱氢卡维丁的含量

目的:建立岩黄连中不同部位脱氢卡维丁的高效液相色谱定量测定方法。方法:采用ZorbaxODSC18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(用10%KOH调pH至5.0)(85:15)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长为347nm,柱温为室温。结果:脱氢卡维丁在2.51～75.36μg/mL(r=0.99999,n=7)范围内线性关系良好,平均回收率为99.86%,RSD为0.58%。结论:该法简单、快速、重现性好,适用于岩黄连中脱氢卡维丁的定量分析。

岩黄连离体细胞培养及生物碱成分分析

选取岩黄连不同组织部位作为外植体诱导愈伤组织,调整基本培养基和初始pH值,经多次继代培养,获得稳定生长的岩黄连离体细胞;采用薄层层析(TLC)、紫外扫描(UV)和高效液相色谱(HPLC)等方法对细胞和植株中生物碱成分进行分析测定。结果表明,叶片最适于诱导愈伤组织;最佳基本培养基为B5,初始pH值为6.0;岩黄连离体培养细胞的生长周期为20 d左右,第15天生物量最高,达到15.3 g/L(DW);细胞和植株中生物碱成分有较大差别,但都含有脱氢卡维丁,细胞中脱氢卡维丁的含量为0.58 mg/g。

广西各地岩黄连药材中脱氢卡维丁含量考察

目的考察广西10个县产岩黄连中脱氢卡维丁的含量,为控制岩黄连药材的质量提供参考。方法将岩黄连药材全草粉碎,加入无水乙醇,经索氏提取至无色,取药液过滤、稀释,采用高效液相色谱(HPLC)法测定脱氢卡维丁含量。色谱柱为Platisil-ODS柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾(80∶20,V/V),流速为0.5mL/min,检测波长347nm。结果脱氢卡维丁质量浓度在2.50～20.96μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.99995),最低检测质量浓度为0.25μg/mL(以S/N>4计)。平均加样回收率为98.63%,RSD=0.89%(n=6)。广西各县产的岩黄连药材含脱氢卡维丁有差异,其中乐业、靖西、东兰、都安、环江等县的药材含量较高。结论HPLC法测定脱氢卡维丁含量简便可行,可用于控制岩黄连药材质量。

岩黄连细胞生长与营养物质消耗的动态学研究

在岩黄连细胞悬浮培养过程中,对培养液pH值,碳源、氮源和磷酸盐含量,以及细胞生物量和生物碱含量进行测定,分析其动态变化过程。结果显示培养液pH值在培养初期降低,后逐渐升高;碳源在培养过程中逐渐被利用,磷酸盐和氮源在培养中期几乎耗尽,其中磷酸盐的消耗速率最快;悬浮细胞的生长周期为20 d左右,第18天细胞鲜重和干重达最大,而第21天脱氢卡维丁和小檗碱的含量最高,分别为8.22mg/L和4.31mg/L。结果表明营养物质(碳、氮和磷)的吸收与细胞生长以及生物碱的合成密切相关,营养元素的相对消耗速率为磷>氮>碳,推测氮和磷是影响岩黄连细胞培养的主要因素。

脱氢卡维汀对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究脱氢卡维汀(YHL-DC)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的影响。方法:YHL-DC预防和治疗给药后观察其对CCl4致急性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和总胆红素(TBIL)的影响,并对肝脏进行了病理组织学及电镜观察。结果:YHL-DC预防和治疗给药均能显著降低急性肝损伤小鼠ALT、AST和TBIL的升高,有效减轻CCl4引起的小鼠肝细胞变性、坏死、炎性细胞浸润和肝细胞超微结构的破坏。结论:YHL-DC对四氯化碳致小鼠急性肝损伤具有保护作用。