植物络合素和植物络合素合酶的研究

植物络合素 ( Phytochelatins,PCs)是由于重金属离子诱导而在植物体内合成的一类小分子多肽 ,其结构式为 ( γ- Glu- Cys) n- Gly,( n=2～ 1 1 ) ;PCs能够螯合重金属 ,从而起到对重金属解毒的作用。PCs并非基因的直接产物 ,而是由植物络合素合酶 ( phytochelatin syn-thase,PCS) ,以 GSH为底物催化合成的 ;植物络合素合酶基因的表达是组成型的 ,重金属离子能够活化 PCS,诱导 PCs的合成。 1 989年 ,人们首次报道得到了部分纯化的 PCS,1 0年后 ,3个研究小组分别于 1 999年同时克隆和鉴定了编码 PCS的基因 ;这些结果不仅对于研究PCs的合成途径和模型的建立及植物抗重金属机制的探讨有重要意义 。

慢性不完全性睡眠剥夺对幼鼠学习记忆的影响

目的 :探讨慢性不完全性睡眠剥夺对幼鼠学习记忆能力的影响及其可能机制。方法 :建立慢性不完全性睡眠剥夺动物模型 ,并测定其空间学习记忆能力 ,同时对幼鼠大脑前额皮质及海马神经元性一氧化氮合酶 (nNOS)的表达进行分析。结果 :睡眠剥夺组幼鼠完成预定任务所需的时间及发生错误的次数均超过正常对照组。睡眠剥夺组的nNOS在前额皮质区域阳性、强阳性表达面积及在海马区域强阳性表达面积均大于正常对照组。结论 :慢性不完全性睡眠剥夺会影响幼鼠的学习记忆能力 ,而前额皮质及海马中nNOS表达水平的下降可能是慢性不完全性睡眠剥夺影响未成熟脑学习记忆能力的机制之一。

芍药苷对沙土鼠不全性脑缺血后能量代谢、NO和NOS的影响

目的:观察芍药苷抗不全性脑缺血后脑组织能量代谢、NO和NOS的关系。方法:采用沙土鼠双侧颈总动脉夹闭脑缺血再灌注模型,于再灌注后48 h取前脑皮质测定Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、乳酸、NO和NOS水平。结果:与假手术对照组比较,缺血再灌注后48 h脑组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶及Mg2+-ATP酶活性均降低,NO含量和NOS活性降低,而乳酸含量无明显变化。与模型对照组比较,芍药苷高、中、低剂量均可不同程度地防止缺血再灌注48 h后Na+-K+-ATP酶活性的降低,增加Ca2+-ATP酶和Mg2+-ATP酶活性,增加NO含量,提高NOS活性。结论:芍药苷通过调节脑内能量代谢和NO的生成而发挥抗脑缺血作用。

急性心肌梗死大鼠心脏一氧化氮合酶表达的改变

目的通过建立大鼠心肌梗死模型,观察急性心肌梗死对大鼠心脏内皮型一氧化氮合酶mRNA和诱导型一氧化氮合酶蛋白表达的影响。方法48只健康成年SD大鼠(体重200～250g)随机分为假手术组和缺血组,取1、2、8和24h四个不同时间点观察。采用开胸结扎冠状动脉左前降支建立心肌缺血模型,逆转录聚合酶链反应检测大鼠心肌梗死后1、2及24h三个时段缺血心肌内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达;免疫组织化学染色检测冠状动脉结扎后8h缺血心肌诱导型一氧化氮合酶蛋白的表达。结果冠状动脉结扎后2h,缺血组大鼠缺血心肌组织内皮型一氧化氮合酶mRNA表达下降(P<0.05),并持续至结扎后24h;结扎后24h组内皮型一氧化氮mRNA的表达与结扎后2h组相比无显著性差异(P>0.05)。冠状动脉结扎后8h,梗死区存活心肌组织细胞诱导型一氧化氮合酶蛋白大量表达,而假手术组未见诱导型一氧化氮合酶蛋白表达。结论正常大鼠心肌组织有内皮型一氧化氮合酶基因表达,无诱导型一氧化氮合酶蛋白表达。在心肌梗死早期缺血心肌内皮型一氧化氮合酶mRNA表达减少。心肌急性缺血刺激早期诱导大鼠缺血心肌组织诱导型一氧化氮合酶蛋白大量表达。

补阳还五汤及其有效部位对沙鼠脑缺血后DND脑能量代谢、NO和NOS的影响

目的：比较研究补阳还五汤和其有效部位组方抗脑缺血后ＤＮＤ 作用与脑组织能量代谢、ＮＯ 和ＮＯＳ 的关系。方法：采用沙鼠双侧颈总动脉夹闭脑缺血再灌注模型，于再灌注后４８ 小时取前脑皮质测定Ｎａ ＋Ｋ＋ＡＴＰ 酶、Ｃａ２ ＋ＡＴＰ 酶、Ｍｇ２ ＋ＡＴＰ 酶、乳酸、ＮＯ 和ＮＯＳ。结果：缺血再灌注后４８ 小时脑组织Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶、Ｃａ２ ＋ＡＴＰ 酶及Ｍｇ２ ＋ＡＴＰ 酶活性均降低，ＮＯ 含量和ＮＯＳ 活性降低，而乳酸含量无明显变化。补阳还五汤和有效部位组方ｉｐ 均可防止缺血再灌注４８ 小时后Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ 酶活性的降低，增加ＮＯ 含量，提高ＮＯＳ 活性，而有效部位组方还可增加缺血再灌注后Ｃａ２ ＋ＡＴＰ 酶和 Ｍｇ２ ＋ＡＴＰ 酶活性，且其升高ＮＯ 的作用强于补阳还五汤组。结论：脑缺血后迟发性神经元坏死与脑内能量代谢障碍和ＮＯ 的生成减少有一定的关系，补阳还五汤及其有效部位组方可能通过调节脑内能量代谢和ＮＯ

诱生型一氧化氮合酶调节体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞中MMP的表达

目的 探讨在体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 (SMC)中 ,一氧化氮 (NO)的产生及诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)的表达变化对基质金属蛋白酶MMP 2 ,MMP 9的调节。方法 酶消化法培养大鼠主动脉平滑肌细胞 (SMC) ,α actin及电镜鉴定SMC后 ,取 3～ 5代SMC用IL 1β诱导iNOS表达 ,使用不同浓度的选择性iNOS抑制剂氨基胍 ,通过RT PCR观察NO调节MMP 2 ,MMP 9的表达情况。结果 氨基胍抑制IL 1β诱导的SMC表达iNOS后 ,在一定范围内降低MMP 2mRNA表达 ,但对MMP 9的表达无明显影响。结论 用不同浓度的氨基胍抑制IL 1β诱导体外培养的SMC表达iNOS ,MMP 2mRNA的表达在一定范围内呈浓度依赖性增加 ,提示NO对MMP 2表达的抑制作用可能在NO介导的以血管重构为特征的一系列血管疾病如腹主动脉瘤 ,经皮血管腔内成形术后再狭窄的病理生理机制中有重要作用 ,并可能为这些疾病的治疗提供新思路。

水生栖热菌FL-03海藻糖合酶的分离纯化及特性研究

将从水生栖热菌FL-03中获得的海藻糖合酶粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose CL-6B离子交换层析、Sephaeryl S-200HR凝胶过滤层析后，纯化68．48倍，产率为18．4％。研究表明：该酶分子量约为101kD，最适反应温度为60℃，最适pH为7．0，在40～80℃、pH 6.0～9．0范围内具有较高的反应活性和稳定性。Fe^3＋对该酶具有一定的激活作用，Cu^2＋、Tris、Zn^2＋对该酶具有较强的抑制作用。该酶具有高度的底物特异性，只能专一地将麦芽糖转化为海藻糖。在40℃、48h条件下，麦芽糖转化为海藻糖的转化率最大可达到79％。

电针对局灶性脑缺血大鼠NO、NOS和ET-1的影响

【目的】研究电针时局灶性脑缺血大鼠缺血区脑组织一氧化氮(ＮＯ)、ＮＯ合成酶(ＮＯＳ)和内皮素(ＥＴ－ｌ)的影响。【方法】凝闭大鼠一侧大脑中动脉致局灶性脑缺血模型,选择缺血区脑组织ＮＯ、ＮＯＳ和ＥＴ为指标,观察电针督脉经“大椎”、“百会”２穴对其影响。【结果】缺血组在缺血６０ｍｉｎ后,ＮＯ、ＥＴ－ｌ含量和ＮＯＳ活性均明显升高;缺血加电针组,给予电针“大椎”、“百会”２穴治疗１０ｍｉｎ后,ＮＯ、ＥＴ－１含量和ＮＯＳ活性均显著下降。【结论】提示电针可抑制脑缺血后脑内ＮＯ、ＥＴ－ｌ含量和ＮＯＳ活性,从而保护脑缺血后继发神经元的损伤。

淡豆豉对心肌缺血小鼠心肌一氧化氮合酶表达的影响

目的:观察淡豆豉对心肌缺血小鼠心肌SOD、MDA、NO及iNOS表达的影响,探讨其抗心肌缺血机制。方法:将40只小鼠随机分为4组,分别为空白对照组、模型对照组、淡豆豉提取物小剂量(20 g生药/kg)治疗组及淡豆豉提取物大剂量(40 g生药/kg)治疗组。治疗组灌胃给予不同剂量的淡豆豉提取物,连续7天,7天后腹腔注射脑垂体后叶素20 U/kg,诱发心肌缺血。检测各组小鼠心肌SOD、MDA、NO及iNOS表达的变化。结果:模型对照组小鼠心肌、MDA含量明显较空白对照组升高,SOD、NO水平较空白对照组降低,心肌iNOS表达减弱,淡豆豉治疗组心肌SOD、NO含量显著较模型对照组提高,MDA明显较模型对照组降低,心肌iNOS表达增强。结论:淡豆豉提取物对心肌缺血有一定的保护作用,其机制与调节心肌iNOS表达有关。

表没食子儿茶素没食子酸酯对2型糖尿病大鼠GLUT2/G6PD/GS表达和血糖调节的研究

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是否通过葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)-葡萄糖6-磷酸脱氢酶(G6PD)-糖原合酶(GS)途径改善2型糖尿病大鼠血糖。方法:采用高脂饲养+小剂量链脲佐菌素(STZ)制备2型糖尿病SD大鼠模型,成模后采用数字随机法分为糖尿病模型(M)组、二甲双胍(Met)组、EGCG低剂量(EL)组和EGCG高剂量(EH)组,另设正常对照(Con)组,每组10只,治疗组给予相应药物干预8周,其余2组均灌服生理盐水(0.1 mL/kg),8周后处死大鼠,收集血液和肝脏组织。检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹血清胰岛素(FINS)和糖化血红蛋白;采用PAS染色检查肝糖原含量;real-time PCR检测G6PD mRNA的表达;Western blot和免疫组化检测GS和GLUT2蛋白水平。结果:成功建立2型糖尿病大鼠模型。与Con组比较,M组大鼠FBG、FINS和糖化血红蛋白明显升高(P<0.05),胰岛素敏感指数(ISI)、肝糖原含量、G6PD mRNA表达水平、GS蛋白表达水平和GLUT2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与M组比较,给药组大鼠FBG和糖化血红蛋白水平显著降低(P<0.05),ISI、肝糖原含量、G6PD mRNA表达水平、GS蛋白表达水平和GLUT2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论:EGCG对2型糖尿病大鼠有显著的降血糖作用,其机制可能与GLUT2-G6P-GS信号通路有关。

内皮型一氧化氮合酶基因在大鼠心肌细胞和非心肌细胞中的表达

根据大鼠内应型一氧化氮合酶（eNOS）和3-磷酸甘油醛脱氨酶（GAPDH）的cDNA序列分别设计特异引物，用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测eNOS基因在大鼠心肌细胞和非心肌细胞中的表达，并以GAPDH为内标，用内参比法作RT-PCR定量。结果表明：eNOS基因在新生大鼠心、肾、脑等组织皆有表达，脑中最多、肾脏次之、心脏较少；在培养的新生大鼠心肌细胞和非心肌细胞中，检测到eNOS基因的表达，其中在心肌细胞的表达高于非心肌细胞；培养基中不同的血清浓度对心肌细胞和非心肌细胞的oNOS基因表达无明显影响。

陆地棉棉酚合成关键基因杜松烯合酶基因克隆及序列差异分析

利用同源克隆法克隆获得有酚陆地棉(Gossypium hirsutum)杜松烯合酶(Delta-cadinene sythase)基因。结果表明,该基因长ORF为1 665 bp,编码551个氨基酸,具有类戊二烯的保守结构域,有酚和低酚陆地棉之间,该基因存在序列差异。

对氨基水杨酸（PAS）耐药与结核分枝杆菌thyA基因突变的研究

目的 检测结核分枝杆菌临床分离株对氨基水杨酸（PAS）耐药和胸苷酸合成酶基因（thyA）突变的关系，以探讨结核分枝杆菌PAS耐药的分子机制。方法95株结核分枝杆菌临床分离株中的51株PAS敏感株和44株PAS耐药株的PAS耐药相关基因thyA基因进行PCR扩增，扩增产物纯化后进行序列测定，与结核分枝杆菌标准株H37Rv的野生型岫，A基因序列进行对比，判断这些临床分离株的thyA基因有无突变。结果51株PAS敏感株thyA基因未检出突变。44株PAS耐药株中有16个临床分离株的thyA基因检测到突变，突变检出率为36．4％（16／44）。突变类型包括置换、颠换、插入、缺失，均为单碱基改变或单碱基缺失，其中2株为thyA基因2个位点联合突变。结论结核分枝杆菌tyA基因突变是其产生PAS耐药的重要原因之一。结核分枝杆菌胸苷酸合成酶是PAS作用的重要靶位。

大鼠背侧丘脑一氧化氮合酶阳性神经元的分布

目的 :探讨一氧化氮合酶 (NOS)在大鼠背侧丘脑各核团内的分布特点。方法 :用NADPH d组织化学方法观察一氧化氮合酶阳性神经元及纤维在大鼠背侧丘脑内的分布和形态特征。结果与结论 :在大鼠丘脑前内侧核、丘脑连结核、丘脑中央连结核、丘脑菱形核、丘脑带旁核、丘脑中央内侧核内可见少量淡染 ,小型阳性神经元 ,卵圆形或圆形 ,绝大部分阳性神经元未见突起 ,少数可见短突起。在丘脑室旁核内可见成群的中等或弱阳性神经元 ,突起少见 ,以卵圆形为主。

卡托普利上调缺血性脑卒中患者血小板一氧化氮合酶的实验和临床研究

目的 研究卡托普利对缺血性脑卒中患者血小板一氧化氮合酶 (NOS)的上调及临床应用。方法 测定急性缺血性脑卒中患者及健康体检者的血小板NOS及在体外加氧化低密度脂蛋白 (oxLDL)、卡托普利后血小板NOS的活性 ;检测患者服卡托普利前、服后 1个月及 3个月的血浆oxLDL、NOS、一氧化氮 (NO) ,血小板NOS、NO ,同时检查神经功能。结果 (1)卒中组和对照组血小板加oxLDL后 ,NOS值均明显下降 (P <0 .0 1) ,卒中组下降更明显 ;(2 )两组血小板同时加卡托普利、oxLDL后 ,NOS值均明显升高 (P <0 .0 1) ,卒中组升高更明显 ;(3)两组血小板单纯加卡托普利后 ,其NOS值均明显升高 (P <0 .0 1) ,同样亦是卒中组升高更明显 ;(4 ) 4 0例缺血性脑卒中患者服用卡托普利后血浆oxLDL明显下降 ,血小板NOS、NO ,血浆NOS、NO明显增高 ,神经功能明显改善。结论 卡托普利有直接上调血小板NOS的作用 ,卡托普利通过提高血小板NOS活性的作用 ,可以改善内皮功能 。

美洛昔康对慢性铝过负荷大鼠PGES-PGE2-EPs信号通路的影响

目的观察美洛昔康对慢性铝过负荷大鼠海马PGES-PGE2-EPs信号通路的影响。方法 SpragueDawley大鼠口服给予葡萄糖酸铝(Al3+200 mg·kg-1),每周5 d,1次·d-1,共20周,建立慢性铝过负荷大鼠神经元退变模型。美洛昔康(3 mg·kg-1),在每次给予铝盐后1 h口服给予。Morris水迷宫检测大鼠空间学习与记忆能力,HE染色观察大鼠海马神经元形态变化,生化酶学方法观察大鼠海马超氧歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量变化,酶联吸附法(ELISA)检测大鼠海马前列腺素PGE2含量变化,Real-time PCR与Western blot分别检测大鼠海马m PGES-1、EP2、EP4、EP3 m RNA与蛋白表达。结果慢性铝过负荷大鼠空间与学习记忆能力明显下降,海马神经元明显核固缩;海马SOD活性明显降低、MDA含量明显增加;PGE2含量明显增加;m PGES-1、EP2、EP4 m RNA与蛋白表达明显增加,EP3 m RNA与蛋白表达明显降低。给予美洛昔康能显著改善慢性铝过负荷大鼠空间学习与记忆能力损害,减轻慢性铝过负荷大鼠海马神经元损伤,升高海马SOD活性、降低MDA与PGE2含量,同时能显著降低慢性铝过负荷大鼠海马m PGES-1、EP2、EP4 m RNA与蛋白表达,并增加EP3 m RNA与蛋白表达。结论美洛昔康对慢性铝过负荷神经元退变大鼠具有神经保护作用,其机制可能涉及抗氧化应激反应与重建PGES-PGE2-EPs信号通路平衡。

β连环素在新生儿细支气管的表达与研究

目的研究β-cat在新生儿细支气管中的表达情况,探讨β-cat在新生儿支气管发育中的作用。方法采用免疫组化(SP)法,检测22例尸检新生儿β-cat、GSK-3β在细支气管上皮细胞的表达,以12例儿童为对照。结果β-cat在新生儿组有6例出现细胞膜表达降低、3例出现胞质表达、2例胞核表达;对照组中2例胞膜表达减少,1例胞质表达。β-cat的平均光密度值在新生儿组为0·112±0·024,对照组为0·128±0·037。两组比较P>0·05,无显著性差异;GSK-3β平均光密度值在对照组为0·147±0·037,新生儿组为0·115±0·028,两组比较P<0·05,有显著性差异。结论β-cat在新生儿细支气管的异位表达,提示Wnt信号与支气管的发育成熟有关。

洛伐他汀对肾小球系膜细胞iNOS表达及氧自由基水平的影响

目的观察洛伐他汀对脂多糖(LPS)刺激后大鼠肾小球系膜细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达及细胞培养上清液中羟自由基(·OH),丙二醛(MDA),总超氧化物歧化酶(tSOD)含量的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测LPS作用大鼠系膜细胞后,洛伐他汀在不同时间段对系膜细胞iNOSmRNA表达的影响及分别检测细胞培养上清液中的·OH、MDA、tSOD的含量。结果系膜细胞在正常情况下iNOSmRNA无明显表达,LPS作用24h后能引起iNOSmRNA的显著表达,洛伐他汀可抑制LPS引起的系膜细胞iNOSmRNA的表达。LPS作用于大鼠系膜细胞后,可引起细胞培养上清液中·OH、MDA含量的增加及tSOD含量的减少;加入洛伐他汀后细胞培养上清液中·OH、MDA含量减少,tSOD含量没有明显的变化。结论洛伐他汀能抑制LPS引起的系膜细胞iNOSmRNA表达的增加及下调LPS引起的细胞培养上清液中·OH、MDA含量的增加。

兔内毒素性急性肺损伤肺内NOS阳性细胞数及超微结构的变化

目的 从病理学和组织化学角度观察内毒素性肺损伤时肺组织超微结构和 NOS阳性染色细胞数的变化。方法 采用电镜、还原型辅酶 - -黄递酶 (NADPH- d)组织化学技术观察兔内毒素性急性肺损伤时肺组织超微结构的改变和肺内小血管、细小支气管、肺泡的 NOS阳性染色细胞数目的变化。结果 :内毒素注射后观察 30分钟组 (I3 0′组 )与内毒素注射后观察 1周组 (Iw 组 ) ,肺内小血管、 NOS阳性染色细胞数明显增多 ,细小支气管和肺泡则减少。 I3 0′组与 Iw 组分别与 C组比较 :(小动脉 :I3 0 vs C,P<0 .0 1;Iwvs C,P<0 .0 0 1;小静脉 :I3 0 vs C,P<0 .0 1;Iw vs C,P<0 .0 5 ;细小支气管 :I3 0vs C与 Iwvs C均为 P<0 .0 2 ;肺泡 :I3 0 vs C与 Iwvs C均为 P<0 .0 1)。电镜结果显示 ,I3 0′组部分肺毛细血管内见有大量红细胞集聚 ,毛细血管内皮变薄 ,微细结构不甚清楚 ,Iw组部分毛细血管内皮细胞损伤状况较 I3 0′组更显严重 ,除较多见红细胞渗入肺泡腔外 ,尚见部分肺泡上皮结构不甚完整而呈泡状改变。结论 内毒素性肺损伤 ,肺内 NOS阳性染色细胞数在小血管明显增加 ,在支气管内 ,肺泡内则明显减少。

急性心肌梗死大鼠心脏内生型一氧化氮合酶基因表达减少

目的:探讨急性心肌缺血对大鼠心脏组织内生型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响。方法:26只健康成年SD大鼠随机分为对照组(假手术组)、缺血组两组。缺血组取1 h,2 h,24 h三个不同时间点。采用开胸结扎冠状动脉左前降支的方法建立心肌缺血模型,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠心梗后不同时间eNOS mRNA表达。结果:冠脉结扎后1 h,两组大鼠缺血心肌组织中eNOS mRNA表达无明显变化(P>0.05);结扎2h时则检测到缺血组大鼠梗死及梗死周围区域心肌组织eNOS mRNA表达下降(P<0.05),eNOS mRNA表达降低持续至结扎后24 h;结扎后24 h组eNOS mRNA表达与结扎后2 h组相比差异无显著性(P>0.05)。结论:在心梗早期(缺血后2 h开始)缺血心脏即有eNOs基因表达减少。