大亳菊总黄酮的提取及其颗粒剂制备工艺研究

优选大亳菊总黄酮的提取及其颗粒剂制备工艺。采用正交试验,以总黄酮提取率为判断标准,优选大亳菊总黄酮的提取工艺;以成型率为判断标准,优选大亳菊总黄酮颗粒剂的制备工艺。结果表明,优选的大亳菊总黄酮提取工艺为:液料比为25∶1,乙醇体积分数75%,提取温度85℃,回流时间1.25h;优选的制粒工艺为:可溶性淀粉∶糊精=1∶1,浸膏粉∶辅料=1∶3,干燥温度60℃,干燥时间2h。该工艺简便、稳定,可以用于大亳菊总黄酮的提取及其颗粒剂的制备。

响应面法优化金丝皇菊多酚提取工艺及其抗氧化活性评价

以金丝皇菊为试验对象,采用超声波辅助法提取多酚。在单因素试验的基础上,采用响应面法对金丝皇菊多酚的提取工艺进行优化。通过考察其对ABTS^(+)·、·O_(2)^(-)、·OH和DPPH·的清除作用,评价多酚的体外抗氧化活性。结果表明:提取金丝皇菊多酚的最佳工艺为料液比1:30(g/mL)、乙醇体积分数85%、超声温度54℃,在此条件下多酚得率为9.34mg/g。自由基清除试验表明,金丝皇菊多酚的清除能力与其质量浓度呈正相关,对ABTS^(+)·、·O_(2)^(-)、DPPH·、和·OH的IC_(50)分别为0.796、0.354、0.574、0.768mg/mL。

湖南省双峰县金丝皇菊规范化种植关键技术

近年来,湖南省双峰县加快菊花基地建设和产业发展,做大做强菊花产业,不断完善基础设施建设,打造花海景观,探索休闲、观光旅游农业的发展路径,逐步实现一二三产业融合发展,真正将小菊花打造成乡村振兴大产业。围绕金丝皇菊高产、高效栽培技术,以及深加工技术,分别从种植地块选择、扦插、移栽技术、生长期管理、病虫草害绿色防治及深加工技术等方面进行了论述。

金丝皇菊组培快繁体系建立

金丝皇菊药用价值高,属于重要的茶菊生产品种。为建立苗株快速繁殖体系,以金丝皇菊为研究对象,采用组织培养的方法,研究NAA、6-BA 2种激素对金丝皇菊愈伤组织、茎尖诱导、丛生芽诱导、根系诱导等试验的影响。结果表明:培养基MS+30 g·L^(-1)蔗糖+0.5 mg·L^(-1) NAA+1.0 mg·L^(-1)6-BA最适合诱导叶片形成愈伤组织,30 d后愈伤诱导率达到100%;培养基MS+30 g·L^(-1)蔗糖+0.1 mg·L^(-1)NAA+1.5 mg·L^(-1)6-BA适用于茎尖诱导培养,培养的不定芽活性强,分化率高;不定芽增殖试验中,最佳增殖培养基为MS+30 g·L^(-1)蔗糖+1.0 mg·L^(-1)6-BA+0.1 mg·L^(-1) NAA;不添加任何激素的MS培养基15 d生根率达到100%,且叶绿、茎段粗壮,植株长势好。综上,本研究为金丝皇菊的无毒苗繁育研究奠定基础,对乡村茶用菊花产业可持续发展有重要意义。

自然状态下黄山贡菊植株挥发性化学物质成分及生态功能

对黄山贡菊植株采用动态顶空套袋采集法结合GC-MS分析技术,成功地采集和分析了黄山贡菊在自然状态下挥发性化学物质的成分。共确定了59种有机化学物质,包括30种烷烃类、5种酯类、4种醇类、3种醛类、4种烯烃类、1种醚类及3种酮类等。室内Y型管选择行为测试结果表明,α-蒎烯≥600 ng/μL时,对3龄若蚜具有显著的驱避作用(P<0.05)。研究为基于植物化学物质的黄山贡菊蚜虫综合治理提供了理论基础。

4种药剂浸种处理对金丝皇菊功能成分及抗氧化活性的影响

为探究不同药剂浸种处理金丝皇菊扦插种苗对其功能成分及抗氧化活性的影响,确定最适宜的浸种处理药剂。本研究采集清水(Q_1)、生根粉(Q_2)、百菌清(Q_3)、生根粉+百菌清(Q_4)4种药剂处理后的金丝皇菊头状花序样品,采用福林-酚法、苯酚硫酸法和硝酸铝法测定其功能成分的含量;从DPPH、Fe~(3+)和ABTS等3个方面来评价4种药剂浸种处理金丝皇菊的抗氧化活性。结果表明,不同药剂浸种处理对金丝皇菊多糖、总酚和黄酮含量有显著的影响,多糖含量在Q_3时最高(26.81 mg/g),高于滁菊,低于含量较高的枣;总酚和黄酮含量在Q_2时最高(48.59 mg/g和61.88 mg/g),与滁菊基本一致,高于其他品种菊花和蓝莓、黑莓等小浆果食物。不同药剂浸种处理对金丝皇菊多糖和总酚的Fe~(3+)还原能力有显著的影响,多糖的Fe~(3+)还原能力在Q_2时最高(138.34μmol/g),为滁菊的38.6倍;总酚的Fe~(3+)还原能力在Q_3时最高(86.77μmol/g),约为滁菊的3/8。不同药剂浸种处理对金丝皇菊总酚和多糖的DPPH、ABTS自由基清除能力差异不显著。综合药剂浸种处理与金丝皇菊功能成分和抗氧化能力的差异,最适宜浸种处理药剂应确定为生根粉(Q_2)。

干旱胁迫下叶面喷施褪黑素对滁菊幼苗生理生化特性的影响

以滁菊品种"金玉"幼苗为材料,通过日光温室内盆栽实验,在中度干旱胁迫条件下(土壤田间持水量的40%),研究叶面喷施外源褪黑素(MT,100μmol·L-1)对滁菊幼苗生长及生理生化特性的影响,探讨提高滁菊耐干旱性的新途径。结果表明:(1)与对照相比,干旱胁迫处理降低了滁菊叶片叶绿素含量、净光合速率和水分利用效率,提高了可溶性蛋白质、可溶性糖和脯氨酸含量,而叶片MDA含量和相对电导率显著增加,显著抑制了滁菊幼苗的生长。(2)在干旱胁迫条件下,外源MT可显著提高滁菊幼苗叶片脯氨酸、可溶性蛋白质和可溶性糖的含量,并显著降低了叶片相对电导率和MDA含量,使幼苗保持较高叶绿素含量和净光合速率。(3)与干旱胁迫处理相比,外源MT处理的滁菊地上部和根系干重、鲜重均显著增加。研究发现,外源褪黑素(MT)在一定程度上可通过促进滁菊幼苗渗透调节物质的积累,有效降低干旱胁迫对其细胞膜的伤害,维持其正常的细胞膜功能,保持其较高的光合速率和水分利用效率,从而增加其对干旱环境的适应性。

菊花外植体再生体系的研究

以不同小菊品种的叶片、茎段、花瓣及子房为外植体进行再生培养。实验结果表明 :不同品种、不同外植体对相同激素水平的反应是不同的。以叶片为外植体时 ,品种Rm 2 7 2的分化率高于Rm 6 4 ;Rm 2 7 2最适培养基为MS +BA 0 .5mg/L +NAA 0 .5mg/L和MS +BA 2 .0mg/L +NAA 0 .2mg/L ,而品种Rm 6 4为MS +BA 6 .0mg/L +NAA 0 .4mg/L ;茎段分化率高于叶片 ,叶片基部分化率高于中上部。子房培养较适宜的培养基为MS +BA 1.0mg/L +NAA 1.0mg/L和MS +BA 2 .0mg/L +NAA 2 .0mg/L ;MS +BA 2 .0mg/L +NAA 0 .2mg/L培养基可有效诱导花瓣产生愈伤组织及芽的分化。并对细胞分裂素、生长素在再生中的作用及适宜浓度作了探讨。

三个药用菊品种的细胞学研究

对原产中国的３个药用菊品种——杭白菊、滁菊、怀菊的核型及减数分裂行为进行了研究。结果表明：杭白菊２ｎ＝４ｘ＝３６＝２Ｍ＋１８ｍ＋１６ｓｍ（２ＳＡＴ），减数分裂中期Ⅰ（ＭⅠ）平均每个花粉母细胞（ＰＭＣ）有０．２０Ⅰ＋１７．７０Ⅱ＋０．１０Ⅳ；滁菊２ｎ＝６ｘ＝５４＝２４ｍ（２ＳＡＴ）＋２２ｓｍ＋６ｓｔ＋２ｔ，在ＭⅠ平均每个ＰＭＣ有０．４４Ⅰ＋２６．６６Ⅱ＋０．０６Ⅳ；怀菊２ｎ＝６ｘ＋１＝５５＝６Ｍ＋２６ｍ＋１２ｓｍ＋２ｓｔ＋９ｔ，在ＭⅠ平均每个ＰＭＣ有１．１２Ⅰ＋２６．６７Ⅱ＋０．０９Ⅳ。３个药用菊均为异源多倍体，但某些染色体可能存在易位或倒位等结构变异。

高效液相色谱法测定金菊花中绿原酸的含量

目的 测定金菊花中绿原酸的含量。方法 采用waters 515高效液相色谱仪，色谱栓（4μm，4．6mm×250mm），流动相为0．1mol／L磷酸二氢钠的缓冲溶液（pH2．65）-甲醇（76：24）；流速1．0ml／min；柱温为室温；检测系统waters2487紫外检测器；检测波长为328nm。结果 绿原酸浓度线性范围在0．095-0．475μg内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0．9999。结论 该法操作简便。准确，重复性好，可作为全菊花的定量分析方法。

高效液相色谱法同时测定滁菊样品中的9种酚酸

建立了高效液相色谱同时测定滁菊样品中9种酚酸类化合物(水杨酸、苯乙酸、对羟基苯甲酸、香草醛、对香豆酸、阿魏酸、苯甲酸、丁香酸和肉桂酸)的方法。采用Symmetry C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5!m)分离,流动相为乙腈和0.02 mol/L磷酸盐缓冲溶液,以冰醋酸调至pH 2.8,进样量20!L,采用梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温25℃,检测波长280 nm。各组分的质量浓度与其峰面积具有良好的线性关系,相关系数均大于0.999,且9种酚酸组分在35 min内得到了较好分离。9种酚酸的检出限介于0.01～0.08 mg/L,平均回收率在97.8%～102.5%之间,相对标准偏差为0.2%～3.6%。本方法可用于滁菊样品中酚酸类化合物的快速分析。

杭白菊提取液对抗缺血再灌注引起的离体大鼠心肌收缩功能下降

目的 :观察杭白菊水提取液在缺血再灌注和缺氧 /复氧过程中对离体心脏和心室肌细胞的影响 ,并探讨其作用机制。方法 :采用Langendorff离体灌流心脏模型 ,观察心室收缩功能 ;用视频跟踪系统和细胞内双波长荧光系统分别记录单个心肌细胞收缩和 [Ca2 + ]i;测定心肌丙二醛 (MDA)和超氧化物歧化酶 (SOD)水平。结果 :杭白菊 (0 5g/L)可明显减轻缺血再灌注引起的离体灌流心脏左室发展压、最大收缩 /舒张速率、冠脉流量和左室发展压与心率乘积的抑制作用 ;并明显减弱缺氧 /复氧抑制心室肌细胞收缩幅度、最大收缩 /舒张速度和细胞钙瞬态的作用。杭白菊处理的缺血再灌注组心肌SOD水平明显升高 ,MDA含量显著降低。结论 :杭白菊可能通过对抗自由基的作用 ,从而减轻缺血再灌注和缺氧 /复氧对心肌收缩功能的抑制。

菊花病虫害综合防治研究

系统调查了菊花病毒病、霜霉病、叶斑病、叶面害虫，蚜虫天敌种类及其流行规律，研究了组培脱毒苗，地膜覆盖移栽，与高秆作物套作、摘顶稍、利用昆虫天敌及化学防治等综合治理效果，测定了农药残留量，结果表明，菊花组培苗脱毒率在60％左右，脱毒苗增产50％以上，叶枯病，霜霉病病叶率下降28％－30％，虫口密度下降40％，在收菊花前1个月使用拟菊酯杀虫剂，农药残留量低于允许值，不会对菊花和和环境造成污染。

不同品种菊花中4种黄酮类化合物的含量测定比较研究

目的：建立同时测定菊花中槲皮素、木犀草素、芹菜素、金合欢素含量的UPLC方法并对比其在4个不同品种菊花中的含量差异。方法：采用UPLC法,Waters ACQUITYUPLCBEH C18（50 mm×2.1 mm,1.7μm）色谱柱;流动相：0.1%磷酸溶液（A）-甲醇（B）,梯度洗脱;流速：0.2 m L/min;检测波长：320 nm;柱温：25℃;进样量：1μL。结果：槲皮素、木犀草素、芹菜素、金合欢素分别在0.0027-0.0135 mg/m L（r_1=0.9962）、0.0032-0.0160 mg/m L（r_2=0.9963）、0.0029-0.0145 mg/m L（r_3=0.9963）、0.0029-0.0145 mg/m L（r_4=0.9963）浓度范围内与峰面积具有良好的线性关系。结论：该方法可以测定不同品种菊花中槲皮素、木犀草素、芹菜素、金合欢素的含量。

滁菊叶化学成分及其体外抗氧化活性研究

目的：对滁菊叶的化学成分进行研究。方法：通过硅胶、Sephadex LH-20、制备高效液相等方法,对滁菊叶乙醇提取物进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构;以DPPH·自由基清除能力检测所得化合物的抗氧化能力。结果：从滁菊叶乙醇提取物中分离鉴定了21个化合物,分别为：二十八烷醇（1）、β-谷甾醇（2）、羽扇豆醇（3）、α-香树脂醇（4）、胡萝卜苷（5）、ineupatorolide B（6）、紫丁香苷（7）、绿原酸（8）、petasiphenol（9）、大黄素甲醚（10）、金合欢素（11）、异泽兰黄素（12）、槲皮素（13）、香叶木素（14）、木犀草素（15）、芹菜素（16）、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷（17）、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷（18）、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷（19）、芹菜素-7-O-β-D-新橙皮糖苷（20）、金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷（21）。结果：其中,化合物1~12、18和20为首次从滁菊中分离得到。化合物10、13~16表现出显著的自由基清除能力,活性强于Vit C。

菊花营养性状杂种优势表现与主基因+多基因混合遗传分析

以匍匐性地被菊‘雨花落英’为母本,直立型盆栽菊‘奥运含笑’为父本杂交获得F1杂种,调查该F1群体的株高、冠幅和叶片等8个营养性状在2008—2009年2个年度的表型资料,运用单个分离世代的主基因+多基因混合遗传分析方法,对这8个营养性状分别进行遗传分析。结果表明:8个营养性状在F1群体广泛分离,变异系数为11.54%～41.89%;杂种优势和超亲分离现象普遍存在,除叶宽外,其他7个性状的中亲优势值均达极显著水平。混合遗传分析表明:菊花株高、叶长和叶宽3个性状符合A-0模型,无主基因控制;冠幅符合A-2模型,主基因表现为加性,主基因遗传率为78.61%;株高/冠幅比、叶长/宽比和花颈长度3个性状表现为有2对主基因控制的B-2模型,主基因表现为加性-显性,其遗传率分别为40.33%,45.19%和99.56%;节间长度符合A-4模型,主基因表现为负向完全显性,主基因遗传率为51.46%。这些主基因的存在将为菊花优良营养性状QTL定位和分子标记辅助育种的深入研究奠定理论基础。

滁菊类黄酮3′-羟化酶基因的克隆及分子特性

以安徽滁州地区特有的药食两用植物资源——滁菊(Dendranthema morifolium‘chuju’)为试材,采用同源基因克隆方法克隆滁菊类黄酮3′-羟化酶基因(flavonoid 3′-hydroxylase,f3′h),NCBI注册号HQ256697。结果表明:采自不同地点的滁菊样品均能扩增出一条长381bp的f3′h基因片段,该片段与探针序列GU249553第3外显子对应区域的核苷酸序列同源性达98.69%,同源区域内有5个单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphisms,SNP),其中3个SNPs导致氨基酸编码序列的改变。滁菊与葡萄属(Vitis vinifera)、高粱属(Sorghum bicolor)、芸苔属(Brassica napus)、牵牛属(Ipomoea nil Magenta)、苹果属(Malus×domestica)、番薯属(Ipomoea purpurea)等物种f3′h基因的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在60%～98%和68%～97%之间。不同植物f3′h基因的分类与物种间的亲缘关系存在明显的相关性,菊属植物f3′h基因在系统进化中处于较高位置。

不同加工方法对亳菊黄酮类成分含量影响

目的:通过测定亳菊中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素和金合欢素的含量,考察加工方法对质量的影响。方法:采用phenomenex,synergi Fusion-RP色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm),0.1%磷酸水-甲醇梯度洗脱,检测波长350 nm。结果:不同加工方法对亳菊中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素和金合欢素含量有明显的影响。结论:不同加工方法对亳菊的黄酮类成分有较大影响,产地加工时应注意烘干的温度。

菊花叶盘片转基因再生体系的优化选择

以菊花(Dendranthema morifolium)无菌苗叶片为外植体,在芽诱导培养基上直接诱导植株再生,优化选择菊花转基因再生体系。筛选出了能直接诱导芽再生的培养基(MS+6-BA3 mg.L-1+NAA 1 mg.L-1)。茎段在有IBA和NAA的1/2MS培养基上诱导生根。生根的小苗在温室里生长良好。

菊花黄化突变体初步研究

以菊花‘霞光飞跃’叶色突变体和正常植株为试验材料,对其叶绿素含量进行测定,并进行无参转录组测序分析。结果表明:突变体与正常植株相比,叶绿素含量有较大幅度的下降,仅为正常植株的18%左右,叶绿素a/b比值(Chl a/b)显著升高。利用转录组测序技术分别从突变体与正常植株叶片中获得4.75 Gb和4.96 Gb有效数据(Clean Data),de novo组装后得到105 456条通用基因(Unigenes),其中长度大于1 kb的有15 493条,N50为1 556 bp。对Unigenes表达分析,共获得3 762条差异表达基因(DEGs)。对得到的DEGs进行生物学功能性注释,获得总注释信息为2 741。通过对注释信息进行GO和KEGG富集分析,结合定量PCR验证表明,菊花‘霞光飞跃’叶色突变体形成的原因可能是dm GLK2低水平表达和dm GLK1不表达导致叶绿体合成和分裂受阻,叶片细胞内叶绿体数量大大降低,进而叶绿素含量下降。