叠鞘石斛组织培养及植株再生体系优化

以叠鞘石斛成熟种子为材料,使用IBA、6-BA和NAA共3种生长调节剂与香蕉泥和椰子汁有机物等组合,采用3因素3水平正交设计及单因素设计进行组织培养研究.结果显示,最佳叠鞘石斛原球茎培养基为MS+50 g/L椰子汁+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂,40 d增殖系数为6.75,分化率为84.38%;最佳叠鞘石斛壮苗生根培养基为1/2 MS+0.5 mg/L IBA+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂.通过该技术,可以在较短时间获得大批量优质叠鞘石斛种苗,为大规模叠鞘石斛药材生产提供基础.

迭鞘石斛多糖降血糖作用研究

研究了迭鞘石斛多糖对动物血糖的调节作用.采用尾静脉注射四氧嘧啶造成高血糖动物模型,按高剂量(300mg/kg)、中剂量(100 mg/kg)和低剂量(30 mg/kg)的迭鞘石斛多糖分别灌胃给药,同时设阳性对照组和阴性对照组,测定血糖水平.结果表明,迭鞘石斛多糖能显著降低四氧嘧啶高血糖小鼠空腹血糖,增强四氧嘧啶高血糖大鼠的糖耐量,而对正常小鼠空腹血糖和正常大鼠糖耐量没有明显影响.研究表明,迭鞘石斛多糖具有明显的降血糖作用,是一种值得开发利用的降糖植物多糖.

叠鞘石斛多糖抗氧化作用研究

为观察不同浓度叠鞘石斛多糖提取液的抗氧化活性,采用超声提取法提取叠鞘石斛中的多糖;采用分光光度法测定叠鞘石斛多糖对DPPH自由基、羟基自由的清除率以及对Fe2+螯合率的影响,再观察其对脂质过氧化的抑制作用。结果表明,叠鞘石斛多糖对DPPH自由基、羟基自由基具有较好的清除率,对Fe2+也具有很好的螯合率,对脂质过氧化有明显的抑制作用。叠鞘石斛多糖具有较强的抗氧化能力。

叠鞘石斛化学成分研究

目的研究叠鞘石斛化学成分。方法叠鞘石斛乙酸乙酯部位采用硅胶柱层析、重结晶等方法分离纯化,并通过理化性质和波谱技术鉴定化合物结构。结果从叠鞘石斛中分离得到10个化合物,分别鉴定为松柏醛(1)、香兰素(2)、香草酸(3)、丁香醛(4)、丁香酸(5)、5-乙酰氧甲基糠醛(6)、5-羟甲基糠醛(7)、邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(8)、草木樨苷甲酯(9)、4,5-二羟基-2-甲氧基-9,10-二氢菲(10)。结论所有化合物均为首次从叠鞘石斛中分离得到。

滨蒿内酯鉴别迭鞘石斛可行性的探讨

目的:探讨迭鞘石斛薄层鉴别方法的可行性。方法:以HPLC法DAD扫描确认迭鞘石斛中是否含有滨蒿内酯。结果:在迭鞘石斛薄层鉴别试验中,供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上有斑点,但斑点颜色与滨蒿内酯对照品的颜色有差异;在HPLC鉴别试验中,滨蒿内酯检测限为2.14 ng时,迭鞘石斛供试品中出现与滨蒿内酯相应的色谱峰,但它们色谱峰的光谱图不相同。结论:迭鞘石斛药材标准中以滨蒿内酯为对照品的鉴别方法值得商榷和完善。

迭鞘石斛提取物对四种致病菌的抑制作用

研究迭鞘石斛提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、小肠结肠炎耶尔森菌及沙门菌四种致病菌的抑制作用。采用96孔板微量肉汤稀释法以及平板培养法测定其最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。醇提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑菌和杀菌作用均较佳,MIC和MBC浓度均为12.5mg/mL;而水提取物则对小肠结肠炎耶尔森菌表现出较强的抑制作用,MIC为6.3mg/mL,MBC为50.0mg/mL。迭鞘石斛提取物的抗菌作用值得进一步开发利用。

川产道地药材叠鞘石斛茎叶花脂溶性成分气相色谱-质谱联用分析

目的研究叠鞘石斛茎、叶和花脂溶性成分,为叠鞘石斛的综合开发利用提供科学依据。方法运用GC-MS法对叠鞘石斛不同药用部位脂溶性成分进行分离测定,结合质谱库检索系统对化合物进行结构鉴定,应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。结果叠鞘石斛茎中鉴定出33个化学成分,占总含量的75.84%;叶中鉴定出41种化学成分,占总含量的61.56%;花中鉴定出53种化学成分,占总含量的81.90%。结论首次对川产道地药材叠鞘石斛不同部位脂溶性成分进行定性定量研究,共鉴定出93种成分。不同药用部位脂溶性成分有较大差异,主要成分均为脂肪酸类、酯和烃类。

叠鞘石斛不同炮制方法的比较研究

目的:建立一个简便快捷的叠鞘石斛产地加工方法。方法:以多糖、香豆素、水溶性浸出物、醇溶性浸出物含量为评价指标,对叠鞘石斛的切片阴干法、切片烘干法、燀蒸法、传统产地加工法及清水浸泡法、NaOH浸泡法进行比较研究。结果:综合评分结果由高到低为:切片烘干法>燀蒸法>NaOH浸泡法>清水浸泡法>传统产地加工法>切片阴干法。结论:切片烘干法和燀蒸法可应用在叠鞘石斛的产地加工中。

中心复合设计——效应面法优化叠鞘石斛石斛酚提取工艺

目的:采用中心复合设计—效应面法优化叠鞘石斛中石斛酚的提取工艺。方法:以甲醇体积分数、料液比和超声提取时间为自变量,以石斛酚提取率为因变量,通过对因变量进行多元线性回归拟合,采用效应面法优化最佳提取工艺。结果:确定石斛酚提取工艺为甲醇体积分数50%～61%,料液比1∶19～1∶22,超声提取时间16～21min,工艺验证预测值与实测值的偏差为-1.82%。结论:该方法可用于优化叠鞘石斛石斛酚提取工艺。

叠鞘石斛与石斛药典收载品种脂溶性成分GC-MS对比研究

目的运用气相色谱-质谱联用(GC-MS)法研究叠鞘石斛与石斛药典收载品种的脂溶性成分,为叠鞘石斛的开发利用提供参考。方法采用有机溶剂法提取脂溶性成分,运用GC-MS进行分离测定,结合质谱库检索技术对化合物进行结构鉴定,应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。结果初步鉴定出95种化合物,其中分别从叠鞘石斛、金钗石斛、鼓槌石斛、流苏石斛中分析鉴定出33、55、37、36种化合物,四者脂溶性成分在组成和相对含量上均有一定差异。结论首次采用GC-MS联用技术对叠鞘石斛与药典收载品种金钗石斛、鼓槌石斛、流苏石斛进行对比研究,为叠鞘石斛的进一步开发利用提供了一定的理论基础。

叠鞘石斛多糖含量测定两种方法的比较

目的:通过叠鞘石斛多糖的含量研究,比较改良苯酚硫酸法和传统苯酚硫酸法测定多糖的差异。方法:分别进行两种方法的准确度、重复性、精密度、稳定性等试验及测定6批次叠鞘石斛多糖含量。结果:改良苯酚硫酸法测定叠鞘石斛中多糖含量优于传统苯酚硫酸法。结论:改良苯酚硫酸法操作简便、稳定可靠,可用于叠鞘石斛多糖含量的检测。

川产叠鞘石斛挥发油化学成分的GC-MS分析

目的:采用GC-MS联用法对叠鞘石斛挥发油化学成分进行研究,为叠鞘石斛的综合利用提供参考。方法:采用有机溶剂-水蒸气蒸馏法提取挥发油,并运用GC-MS进行分离测定,结合质谱库检索技术对化合物进行结构鉴定,应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。结果:叠鞘石斛挥发油中分离出115种成分,鉴定出70种化学成分。结论:首次对叠鞘石斛挥发油化学成分进行定性定量研究,主要为烷烃类、醛类和醇类。

叠鞘石斛与药典品种石斛酚含量对比研究

目的:建立叠鞘石斛与药典收载品种金钗石斛,鼓槌石斛中石斛酚的高效液相色谱含量测定方法.方法:Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.5％冰醋酸(35:65)为流动相,检测波长280 nm,流速1 mg· mL-1,柱温30℃.结果:石斛酚在0.01228～0.2456 mg·mL-1 (r=0.9999)范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率为100.39％,RSD为2.17％.结论:本方法操作简单、快捷、重现性好、准确率高,可用于上述三种石斛中石斛酚的含量测定.

川产叠鞘石斛与石斛药典收载品种指纹图谱对比研究

目的:对叠鞘石斛与石斛药典收载品种金钗、鼓槌和流苏石斛HPLC-DAD-ELSD指纹图谱进行对比研究。方法:采用Dikma C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;乙腈-0.5%冰醋酸水溶液梯度洗脱;柱温:30℃;流速:1 mL/min;DAD串联蒸发光散射检测器检测。结果:首次建立了石斛的HPLC-DAD-ELSD指纹图谱鉴别方法,并对9个指纹峰进行了标定。首次对叠鞘石斛和石斛药典收载品种金钗、鼓槌、流苏石斛指纹图谱进行对比研究。结论:建立的方法稳定、可靠、重现性好,可直接了解石斛品种与化学成分变化的关系。叠鞘石斛与石斛药典收载品种有一定相似性,但相似度较低。

两种药用石斛在广元地区的引种适应性研究

目的:对叠鞘石斛和金钗石斛在广元地区引种的适应性进行科学评价,为大面积推广提供理论依据。方法:采用调查、观察记录及测量方法获取地理位置、气象要素、形态性状、抗逆性等数据,同时测定总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物和石斛碱含量。结果:叠鞘石斛和金钗石斛群体平均分蘖指数I分别为1.50和0.71。叠鞘石斛引种后茎显著增粗。金钗石斛引种后单茎鲜重显著下降、叶片显著增宽,其他形态学性状差异则均不显著。叠鞘石斛品质达到省级标准,金钗石斛的石斛碱含量达到了中国药典标准。叠鞘石斛越冬平均存活率和抗病率分别为99.75%和97.75%;大棚金钗石斛分别为97.00%和96.75%。结论:叠鞘石斛耐寒性、抗病性均较强,能适应广元的气候环境。金钗石斛抗病性较强,耐寒性较差,在大棚中栽种,冬季覆盖塑料薄膜,能提高越冬存活率。

光质对叠鞘石斛形态及生理指标的影响

以兰科植物叠鞘石斛为实验材料,通过研究光质对其形态及生理指标的影响,寻找提高叠鞘石斛观赏价值和经济价值的新方法。采用红蓝光搭配光质,处理组分别为T1组(红光:蓝光=3∶1)、T2组(红光:蓝光=1∶1)、T3组(红光:蓝光=1∶3),对照CK组为白光。每天照射2 h,照射7、14、21、28 d时分别取样检测。结果表明:(1)T1光质(红光:蓝光=3∶1)照射7 d时可有效增加叠鞘石斛茎长,照射21 d时可促进茎粗增加;(2)T2光质(红光:蓝光=1∶1)照射7 d时可促进茎长的增加;(3)T3光质(红光:蓝光=1∶3)照射可有效延长叠鞘石斛的花期,照射7 d时会有效增大叶绿素a、b含量,在21 d时会有效增大可溶性蛋白质的含量。采用红蓝光质按照不同配比照射,可有效调控叠鞘石斛的花期和生长,增加其观赏价值。

GC-MS/MS测定迭鞘石斛中3种农药的残留量

为迭鞘石斛农药残留量的检测及综合利用提供参考,以四川夹江迭鞘石斛中药材为材料,用乙腈提取样品液,经Cleanert TPH专用净化柱净化,用GC-MS/MS气质联用仪测定迭鞘石斛中联苯菊酯、甲氰菊酯和溴氰菊酯的农药残留含量。结果表明:当联苯菊酯、甲氰菊酯和溴氰菊酯的进样量为0.01~0.1ng时,色谱峰面积与进样量均有较好的线性关系;联苯聚酯、甲氰聚酯和溴氰聚酯的最低检出限(以进样量计)分别为8.228×10-4 ng、1.875×10-4 ng和6.676×10-4 ng,平均回收率分别为94.7%、94.7%和94.0%,检测结果的稳定性和重复性好,精密度和回收率高。GC-MS/MS检测方法简单快速,定量准确,适用于迭鞘石斛中联苯菊酯、甲氰菊酯和溴氰菊酯农药残留的同时检测。

流苏石斛与其他黄草类石斛HPLC特征图谱的比较研究

目的建立流苏石斛HPLC特征图谱,并初步比较黄草类石斛（金钗石斛、流苏石斛、叠鞘石斛）高效液相（HPLC）特征图谱的差异。方法采用HPLC特征图谱技术,建立流苏石斛及黄草类石斛特征图谱分析方法,采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2004A版）进行相似度分析。结果在流苏石斛的HPLC特征图谱中,标记出9个共有峰,相似度为0.837-0.992。检测发现金钗石斛、流苏石斛、叠鞘石斛3种石斛所含化学成分存在较大差异,但均含有石斛酚。结论建立流苏石斛HPLC特征图谱的方法稳定可靠、重复性好,能在一定程度上能够反映金钗石斛、流苏石斛、叠鞘石斛3种石斛主要化学成分的种类和相对含量差异,并为流苏石斛与另外两种黄草石斛的鉴别提供依据。

响应面法优化叠鞘石斛多糖超声提取工艺

目的优化叠鞘石斛多糖超声提取工艺。方法以3年生叠鞘石斛为材料,采用超声辅助法对新鲜叠鞘石斛茎段中的多糖成分进行提取,苯酚-硫酸法检测多糖含量,在单因素试验基础上,以超声功率、超声温度、提取时间为影响因素,得率为响应值,采用Box-Behnken响应面法,优选叠鞘石斛多糖最佳超声提取工艺技术参数。结果与结论试验结果表明,叠鞘石斛多糖最佳提取工艺条件为:超声功率320W、温度80℃、时间20min,在该条件下,理论多糖提取率为27.53%,经3次重复验证试验得到的多糖提取率平均值为27.05%,与理论值的误差仅为1.74%。

切片与切段对叠鞘石斛多糖、联苄类化合物及石斛酚提取量的影响研究

目的:研究切片、切段对叠鞘石斛中多糖、联苄类化合物及石斛酚提取量的影响,比较叠鞘石斛切片、切段的优劣。方法:将叠鞘石斛燀蒸后切制成长度为10 mm的段及厚度为4mm的片,于60℃烘干,然后将叠鞘石斛片(段)煎煮60、90、120 min及温浸60、90 min;采用紫外-可见分光光度法测定其在煎煮及温浸过程中多糖、联苄类化合物提取量,采用高效液相色谱法测定叠鞘石斛片(段)中石斛酚的提取量;另计算浸出物提取率。结果:在煎煮过程中,叠鞘石斛片较石斛段多糖、联苄类化合物提取量分别增加了0.06～0.17、0.08～0.11mg/g,石斛酚提取率增高了37.5%;在温浸过程中,叠鞘石斛片较石斛段多糖、联苄类化合物提取量分别增加了0.33～0.58、0.17～0.28mg/g;叠鞘石斛片较石斛段的水溶性浸出物及醇溶性浸出物提取率分别增高了2.89%、0.98%。结论:叠鞘石斛切片优于切段,本研究可为《中国药典》中石斛切制时改段为片提供一定的参考。