3种石斛兰以茎段为外植体的离体快繁技术

以肿节石斛(Dendrobium pendulum)、尖刀唇石斛(D.heterocarpum)和报春石斛(D.primulinum)的无菌茎段为外植体,通过正交试验和单因子试验,研究不定芽诱导、生根和炼苗移栽等技术,筛选出各培养阶段的适宜培养基配方和培养条件,建立3种石斛兰离体快繁体系。结果表明:适合肿节石斛和报春石斛不定芽诱导的培养基为1/2MS+6-BA 0.5 mg.L-1+NAA 0.1 mg.L-1+椰乳100 mL.L-1,诱导率分别为93.75%和90.00%;适合尖刀唇石斛不定芽诱导的培养基为1/2MS+6-BA 0.25 mg.L-1+NAA 0.1 mg.L-1+椰乳100 mL.L-1,诱导率达到95.00%。适合肿节石斛和尖刀唇石斛生根的培养基为MS+NAA 0.5 mg.L-1+香蕉泥100 g.L-1,适合报春石斛生根的培养基为MS+NAA 0.75 mg.L-1+土豆泥100 g.L-1,生根诱导率高达100%。

报春石斛组培快繁技术体系的建立

以报春石斛蒴果为外植体,通过对种子无菌萌发和原球茎诱导、原球茎增殖及丛生芽诱导、生根壮苗以及移栽驯化的研究,以期建立报春石斛的组培快繁技术体系。结果表明:培养基MS+6-BA 1.0mg·L^(-1)+NAA 0.1mg·L^(-1)+蔗糖20g·L^(-1)最适报春石斛种子无菌萌发和原球茎的诱导;原球茎增殖及丛生芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA1.0mg·L^(-1)+NAA 0.1mg·L^(-1)+香蕉泥100g·L^(-1)+蔗糖20g·L^(-1),继代培养45d,增殖系数达8.2;最佳生根壮苗培养基为MS+6-BA 1.0mg·L^(-1)+KT 0.5mg·L^(-1)+NAA 0.2mg·L^(-1)+香蕉泥100g·L^(-1)+蔗糖30g·L^(-1)+活性碳1.0g·L^(-1),培养3个月,生根率达100%,根系较长,苗壮;3—4月是桂林地区移栽报春石斛组培苗的最佳季节,生根苗在栽培基质Ⅰ(树皮∶水苔∶珍珠岩∶蛭石=10∶2∶1∶1,体积比)的长势好于栽培基质Ⅱ(树皮∶珍珠岩∶蛭石=10∶1∶1,体积比),成活率为92.3%。

报春石斛再生体系的建立

以茎段为外植体,建立了报春石斛Dendrobium primulinum的离体培养再生体系。结果表明:愈合组织诱导以培养基MS(Murashige and Skoog)+5.0mg·L-16-苄氨基嘌呤(6-BA)+1.5mg·L-12,4-D为最优,诱导率达33.33%;分化和增殖培养基均以MS+1.0mg·L-16-BA+0.1mg·L-1萘乙酸(NAA)+体积分数10%椰子水为佳,分化率最高可达83.20%,增殖倍数达3.82,外源物质椰子水可促进不定芽的形成及增殖。形成的无根苗转移到1/2MS+0.5mg·L-16-BA+1.0mg·L-1NAA+0.5g·L-1活性炭培养基上诱导生根发育形成完整植株。

报春石斛根系对水培的适应性研究

2016年9月,采用Hoagland营养液静止水培和泥炭藓作为基质了对报春石斛Dendrobium primulinum Lindl.试管苗进行了3个月的培养,比较不同基质对报春石斛根系生长的影响。检测结果表明,水培苗根系生长速度慢,但是地上部分茎杆粗壮,能快速生长,适生性较强。光镜观察水培苗和基质苗根尖、成熟区和根毛区,结果显示,水培苗根尖皮层细胞比较规则紧凑,细胞间隔比较小,而基质培养苗根尖细胞排列较松散,排列不规则;基质培养苗根系的中柱部分髓质较水培苗的大,且存在体积较大的淀粉粒。对两种栽培方式的新生根进行Evan blue染色,发现水培根成熟区较基质培养的更具活力。试验表明,报春石斛根系能够很好的适应水生环境。

报春石斛花香气成分及其日变化规律

采用静态顶空气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术研究报春石斛(Dendrobium primulinum)花香气成分及香气释放的日变化规律,检测并分析一天内六个时间点(6:00、9:00、12:00、15:00、18:00、21:00)报春石斛花的香气成分。各时间点占总香气释放量排序为:6时(35.26%)>9时(22.78%)>12时(19.35%)>21时(7.86%)>15时(7.59%)>18时(7.17%)。共检测出202种香气物质,包括酯类、烯萜类、醇类、醛类、烷类等,其中6:00有93种,9:00有87种,12:00有68种,15:00有61种,18:00有63种,21:00有65种。各个时间点共有的化合物21种。报春石斛花香气释放量6:00最高,18:00最低,主要香气成分是醋酸辛酯。

报春石斛种子萌发及原球茎的快繁培养条件研究

以报春石斛种子为实验材料,研究了基本培养基、外源激素的种类和浓度及光照对报春石斛种子非共生萌发及分化的影响。结果表明:报春石斛种子在光照条件下1/2MS培养基中的萌发率最高,达92.44%,且萌发时间最短;在1/2MS+0.5mg/L6-BA+0.2mg/L NAA培养基中,原球茎的分化效果最佳。

报春石斛化学成分研究

采用柱色谱、制备型液相色谱等分离纯化技术,从报春石斛中分离得到13个化合物,根据理化性质以及波谱分析（1H NMR、13C NMR和ESI-MS等）结果,分别鉴定为：（-）-dendroprimine （1）、古豆碱（2）、N-反式阿魏酰酪胺（3）、N-反式香豆酰酪胺（4）、腺苷（5）、鸟苷（6）、corchoionoside C （7）、sasanquin （8）、丁香脂素（9）、橙皮苷（10）、艾纳香素（11）、反式阿魏酸二十二烷基酯（12）和蔗糖（13）.其中,化合物8首次从石斛属植物中分离得到,而化合物3～7以及9～13系首次从该植物中分离得到.