许多过敏原可以介导Ⅰ型超敏反应,通过与IgE特异性结合,引起过敏症状.过敏原与细胞表面的特异性IgE结合的部分叫做表位,其与IgE的结合能力可以表征过敏原致敏性的强弱.Der p 2是一种重要的屋尘螨过敏原,其线性表位中含有的酪氨酸可被空...许多过敏原可以介导Ⅰ型超敏反应,通过与IgE特异性结合,引起过敏症状.过敏原与细胞表面的特异性IgE结合的部分叫做表位,其与IgE的结合能力可以表征过敏原致敏性的强弱.Der p 2是一种重要的屋尘螨过敏原,其线性表位中含有的酪氨酸可被空气中的NO_(2)和O_(3)硝基化,从而影响线性表位与IgE的结合能力.本实验研究了Der p 2的线性表位及其硝基化产物与IgE的结合能力.研究发现,Der p 2的两条表位多肽可以有效地结合IgE,硝基化表位多肽的IgE结合能力显著高于未硝基化的表位多肽,且不同位点的硝基化对于IgE结合能力的增强程度也不同.结果表明,硝基化能够位点特异性地增强Der p 2的致敏性.展开更多
克隆化培养上海地区户尘螨,获得不同编码序列的重组Der p 2变应原进行当地人群血清特异性IgG分析,探讨其应用价值。从过敏性疾病患者床褥采集分离户尘螨,采用封闭式培养系统进行培养,分离培养单个孕螨获得克隆化的螨群。用RT-PCR的方法...克隆化培养上海地区户尘螨,获得不同编码序列的重组Der p 2变应原进行当地人群血清特异性IgG分析,探讨其应用价值。从过敏性疾病患者床褥采集分离户尘螨,采用封闭式培养系统进行培养,分离培养单个孕螨获得克隆化的螨群。用RT-PCR的方法扩增不同螨克隆的Der p 2编码基因,插入原核表达载体pET-19b在大肠杆菌内进行表达,所获得的蛋白经Dot blot和ELISA检测其抗原性及与人群血清IgG的反应水平。结果显示,成功对户尘螨种群进行克隆化培养。获得14个核苷酸多样性位点,对应的两个不同序列的重组Der p 2蛋白与鼠单抗1D8的亲和力不同,但与上海地区人群IgG结合力相似(r=0.864)。检测不同地区尘螨主要变应原的序列多样性,有助于开发更有针对性的疫苗组分,以及特异性保护性IgG的筛选。展开更多
目的 构建并克隆屋尘螨抗原 Der p2基因 ,在大肠杆菌中初步表达 .方法 根据已发表的 Der p2基因 ,人工设计合成一系列基因片段 ,经单链扩增后连接成完整的 Der p2基因 ;将该基因克隆入表达载体 p Pro EX HTb中 ,测序并进行初步表达 ....目的 构建并克隆屋尘螨抗原 Der p2基因 ,在大肠杆菌中初步表达 .方法 根据已发表的 Der p2基因 ,人工设计合成一系列基因片段 ,经单链扩增后连接成完整的 Der p2基因 ;将该基因克隆入表达载体 p Pro EX HTb中 ,测序并进行初步表达 .结果 利用所设计的结构制备了完整的 Der p2基因 ,以大肠杆菌为宿主在 IPTG的诱导下获得初步表达 ,该外源蛋白 Mr约为 17× 10 3,占总蛋白量的 2 0 % .结论 所构建的 Der展开更多
目的比较分析尘螨过敏原蛋白Der p 2和Der f 2的一级、二级结构并预测抗原表位。方法从网上数据库下载Der p 2和Der f 2蛋白的序列,分析比较Der p 2和Der f 2蛋白的一级、二级结构,得出Der p 2和Der f2蛋白中可能的功能位点、信号肽位...目的比较分析尘螨过敏原蛋白Der p 2和Der f 2的一级、二级结构并预测抗原表位。方法从网上数据库下载Der p 2和Der f 2蛋白的序列,分析比较Der p 2和Der f 2蛋白的一级、二级结构,得出Der p 2和Der f2蛋白中可能的功能位点、信号肽位置。结果 Der p 2和Der f 2蛋白都由146个氨基酸组成,含有9个潜在可能的蛋白结合位点,二级结构主要由β-折叠片组成,在其N-末端为第1-17区段为信号肽。Der p 2蛋白含有9个线性B细胞表位、2个构象B细胞表位和6个HLA II的高亲和力区域,而Der f 2蛋白含有9个线性B细胞表位、2个构象B细胞表位和5个HLA II的高亲和力区域。结论应用生物信息学方法预测和比较过敏原蛋白Der p 2和Der f 2的结构与抗原表位信息,可为进一步研究过敏原蛋白Der p 2和Der f 2的生物学功能、疫苗研究奠定基础。展开更多
目的：建立Der p 2（屋尘螨Ⅱ类变应原）杂交瘤细胞株，并对其分泌的Der p 2单克隆抗体进行鉴定．方法：用重组Der p 2蛋白作为免疫原，免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与Sp2／0小鼠骨髓瘤细胞融合，经筛选和3次克隆化，制备出单克隆抗体．...目的：建立Der p 2（屋尘螨Ⅱ类变应原）杂交瘤细胞株，并对其分泌的Der p 2单克隆抗体进行鉴定．方法：用重组Der p 2蛋白作为免疫原，免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与Sp2／0小鼠骨髓瘤细胞融合，经筛选和3次克隆化，制备出单克隆抗体．采用间接ELISA法、Western blot法确定单克隆抗体的免疫球蛋白的类型和亚类、相对亲和力、特异性，对单克隆抗体进行鉴定．结果：获得3株能稳定分泌高效价Der p 2单克隆抗体的杂交瘤细胞株，186为IgG1类，1G11、4B1为IgG2a类．间接ELISA法检测细胞上清效价为10^4～10^5，腹水效价为10^5～10^6．Western blot试验证明3株单抗与Der p 2蛋白均有特异性反应，结论：成功制备了3株抗Der p 2的单克隆抗体，均具有良好的特异性和亲和力，为进一步建立Der p 2蛋白检测和纯化的方法奠定了基础．展开更多
目的原核表达尘螨主要变应原Der p 2。方法分离屋尘螨总RNA,根据GenBank已公布的Der p 2核酸序列设计引物用RT-PCR扩增Der p 2编码基因,克隆至pMD19-T载体、亚克隆至表达载体pET28a(+),将表达质粒转化至Escherichia coli BL21(DE3)并用I...目的原核表达尘螨主要变应原Der p 2。方法分离屋尘螨总RNA,根据GenBank已公布的Der p 2核酸序列设计引物用RT-PCR扩增Der p 2编码基因,克隆至pMD19-T载体、亚克隆至表达载体pET28a(+),将表达质粒转化至Escherichia coli BL21(DE3)并用IPTG诱导表达,并对表达产物进行免疫印迹鉴定。结果成功构建了表达质粒pET28a(+)-Derp2,SDS-PAGE和Western blotting显示原核表达获得成功。序列分析表明所获得的Der p 2编码基因与参考序列同源性达99.54%,推测其编码氨基酸130个,相对分子质量约为14348.5。结论尘螨变应原Der p 2原核表达获得成功,为进一步生产重组变应原奠定了基础。展开更多
背景:树突状细胞是目前已知的最强大的抗原提呈细胞,已经被应用于免疫治疗的研究中。目的:构建Der p 2真核表达载体,并证明能在小鼠骨髓来源的树突状细胞中表达。设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2005-05/12在解放军第三军医大学...背景:树突状细胞是目前已知的最强大的抗原提呈细胞,已经被应用于免疫治疗的研究中。目的:构建Der p 2真核表达载体,并证明能在小鼠骨髓来源的树突状细胞中表达。设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2005-05/12在解放军第三军医大学新桥医院全军呼吸疾病研究所完成。材料:C57BL/6小鼠;plambd-Der p 2购自美国HESKA公司;pCI-neo质粒为解放军第三军医大学新桥医院全军呼吸疾病研究所保存。方法:体外分离,培养小鼠骨髓来源树突状细胞。将原核表达质粒plambdDer p 2携带的Der p 2全长cDNA切下,重组到真核表达质粒pCI-neo中,然后在脂质体介导下,将重组质粒转染到小鼠骨髓来源的树突状细胞,以未转染质粒和转染空白载体pCI-neo的树突状细胞为对照。主要观察指标:①pCI-neoDer p 2重组质粒结构鉴定。②并用反转录-聚合酶链反应、Western Blot检测Der p 2mRNA和蛋白表达。结果:测序证实构建的重组质粒中携带了Der p 2的全长cDNA序列,且与Gene Bank序列完全一致。反转录-聚合酶链反应和Western Blot检测结果提示,重组质粒转染的树突状细胞能表达Der p 2 mRNA和Der p 2蛋白。结论:成功构建重组Der p 2基因真核表达载体,其转染树突状细胞后,能有效地表达于树突状细胞中。展开更多
Intrinsic time quantum geometrodynamics is a formulation of quantum gravity naturally adapted to 3 + 1 dimensions. In this paper we construct its analogous 2 + 1 formulation, taking note of the mathematical structures...Intrinsic time quantum geometrodynamics is a formulation of quantum gravity naturally adapted to 3 + 1 dimensions. In this paper we construct its analogous 2 + 1 formulation, taking note of the mathematical structures which are preserved. We apply the resulting construction to convert the BTZ black hole metric to ITQG framework. We then modify the BTZ black hole in order to investigate the existence of the P-V criticality in ITQG theory.展开更多
目的运用生物信息学方法分析屋尘螨变应原第2组分进行氨基酸序列构成特点。方法使用NCBI数据库(美国国立生物技术信息中心,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)蛋白质数据库下载屋尘螨变应原第2组分各亚型的氨基酸序列。分别使用CLUSTALX 2.1...目的运用生物信息学方法分析屋尘螨变应原第2组分进行氨基酸序列构成特点。方法使用NCBI数据库(美国国立生物技术信息中心,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)蛋白质数据库下载屋尘螨变应原第2组分各亚型的氨基酸序列。分别使用CLUSTALX 2.1、MAGA7进行序列比对和进化树构建。结果获得Der p 2氨基酸序列共13个亚型,对Der p 2氨基酸序列进行对比,有9处氨基酸序列发生变化,构建系统进化树显示进化树中Der p 2亚型聚类成4簇。结论 der p 2氨基酸序列具有多态性,为进一步研究奠定基础。展开更多
In clinical therapy,the amount of antigen administered to achieve oral tolerance for allergic diseases is large,and the cost is a major consideration.In this study,we used tobacco plants to develop a large-scale prote...In clinical therapy,the amount of antigen administered to achieve oral tolerance for allergic diseases is large,and the cost is a major consideration.In this study,we used tobacco plants to develop a large-scale protein production system for allergen-specific immunotherapy,and we investigated the mechanisms of oral tolerance induced by a transgenic plant-derived antigen.We used plants(tobacco leaves)transgenic for the Dermatophagoides pteronyssinus 2(Der p2)antigen to produce Der p2.Mice received total protein extract from Der p2 orally once per day over 6 days(days 0–2 and days 6–8).Mice were also sensitized and challenged with yeast-derived recombinant Der p2(rDer p2),after which the mice were examined for airway hyper-responsiveness and airway inflammation.After sensitization and challenge with rDer p2,mice that were fed with total protein extracted from transgenic plants showed decreases in serum Der p2-specific IgE and IgG1 titers,decreased IL-5 and eotaxin levels in bronchial alveolar lavage fluid,and eosinophil infiltration in the airway.In addition,hyper-responsiveness was also decreased in mice that were fed with total protein extracted from transgenic plants,and CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+) regulatory T cells were significantly increased in mediastinal and mesenteric lymph nodes.Furthermore,splenocytes isolated from transgenic plant protein-fed mice exhibited decreased proliferation and increased IL-10 secretion after stimulation with rDer p2.The data here suggest that allergen-expressing transgenic plants could be used for therapeutic purposes for allergic diseases.展开更多
文摘许多过敏原可以介导Ⅰ型超敏反应,通过与IgE特异性结合,引起过敏症状.过敏原与细胞表面的特异性IgE结合的部分叫做表位,其与IgE的结合能力可以表征过敏原致敏性的强弱.Der p 2是一种重要的屋尘螨过敏原,其线性表位中含有的酪氨酸可被空气中的NO_(2)和O_(3)硝基化,从而影响线性表位与IgE的结合能力.本实验研究了Der p 2的线性表位及其硝基化产物与IgE的结合能力.研究发现,Der p 2的两条表位多肽可以有效地结合IgE,硝基化表位多肽的IgE结合能力显著高于未硝基化的表位多肽,且不同位点的硝基化对于IgE结合能力的增强程度也不同.结果表明,硝基化能够位点特异性地增强Der p 2的致敏性.
文摘克隆化培养上海地区户尘螨,获得不同编码序列的重组Der p 2变应原进行当地人群血清特异性IgG分析,探讨其应用价值。从过敏性疾病患者床褥采集分离户尘螨,采用封闭式培养系统进行培养,分离培养单个孕螨获得克隆化的螨群。用RT-PCR的方法扩增不同螨克隆的Der p 2编码基因,插入原核表达载体pET-19b在大肠杆菌内进行表达,所获得的蛋白经Dot blot和ELISA检测其抗原性及与人群血清IgG的反应水平。结果显示,成功对户尘螨种群进行克隆化培养。获得14个核苷酸多样性位点,对应的两个不同序列的重组Der p 2蛋白与鼠单抗1D8的亲和力不同,但与上海地区人群IgG结合力相似(r=0.864)。检测不同地区尘螨主要变应原的序列多样性,有助于开发更有针对性的疫苗组分,以及特异性保护性IgG的筛选。
文摘目的 构建并克隆屋尘螨抗原 Der p2基因 ,在大肠杆菌中初步表达 .方法 根据已发表的 Der p2基因 ,人工设计合成一系列基因片段 ,经单链扩增后连接成完整的 Der p2基因 ;将该基因克隆入表达载体 p Pro EX HTb中 ,测序并进行初步表达 .结果 利用所设计的结构制备了完整的 Der p2基因 ,以大肠杆菌为宿主在 IPTG的诱导下获得初步表达 ,该外源蛋白 Mr约为 17× 10 3,占总蛋白量的 2 0 % .结论 所构建的 Der
文摘目的比较分析尘螨过敏原蛋白Der p 2和Der f 2的一级、二级结构并预测抗原表位。方法从网上数据库下载Der p 2和Der f 2蛋白的序列,分析比较Der p 2和Der f 2蛋白的一级、二级结构,得出Der p 2和Der f2蛋白中可能的功能位点、信号肽位置。结果 Der p 2和Der f 2蛋白都由146个氨基酸组成,含有9个潜在可能的蛋白结合位点,二级结构主要由β-折叠片组成,在其N-末端为第1-17区段为信号肽。Der p 2蛋白含有9个线性B细胞表位、2个构象B细胞表位和6个HLA II的高亲和力区域,而Der f 2蛋白含有9个线性B细胞表位、2个构象B细胞表位和5个HLA II的高亲和力区域。结论应用生物信息学方法预测和比较过敏原蛋白Der p 2和Der f 2的结构与抗原表位信息,可为进一步研究过敏原蛋白Der p 2和Der f 2的生物学功能、疫苗研究奠定基础。
文摘目的：建立Der p 2（屋尘螨Ⅱ类变应原）杂交瘤细胞株，并对其分泌的Der p 2单克隆抗体进行鉴定．方法：用重组Der p 2蛋白作为免疫原，免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与Sp2／0小鼠骨髓瘤细胞融合，经筛选和3次克隆化，制备出单克隆抗体．采用间接ELISA法、Western blot法确定单克隆抗体的免疫球蛋白的类型和亚类、相对亲和力、特异性，对单克隆抗体进行鉴定．结果：获得3株能稳定分泌高效价Der p 2单克隆抗体的杂交瘤细胞株，186为IgG1类，1G11、4B1为IgG2a类．间接ELISA法检测细胞上清效价为10^4～10^5，腹水效价为10^5～10^6．Western blot试验证明3株单抗与Der p 2蛋白均有特异性反应，结论：成功制备了3株抗Der p 2的单克隆抗体，均具有良好的特异性和亲和力，为进一步建立Der p 2蛋白检测和纯化的方法奠定了基础．
文摘目的原核表达尘螨主要变应原Der p 2。方法分离屋尘螨总RNA,根据GenBank已公布的Der p 2核酸序列设计引物用RT-PCR扩增Der p 2编码基因,克隆至pMD19-T载体、亚克隆至表达载体pET28a(+),将表达质粒转化至Escherichia coli BL21(DE3)并用IPTG诱导表达,并对表达产物进行免疫印迹鉴定。结果成功构建了表达质粒pET28a(+)-Derp2,SDS-PAGE和Western blotting显示原核表达获得成功。序列分析表明所获得的Der p 2编码基因与参考序列同源性达99.54%,推测其编码氨基酸130个,相对分子质量约为14348.5。结论尘螨变应原Der p 2原核表达获得成功,为进一步生产重组变应原奠定了基础。
基金the National Natural Science Foundation of China, No. 30470772~~
文摘背景:树突状细胞是目前已知的最强大的抗原提呈细胞,已经被应用于免疫治疗的研究中。目的:构建Der p 2真核表达载体,并证明能在小鼠骨髓来源的树突状细胞中表达。设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2005-05/12在解放军第三军医大学新桥医院全军呼吸疾病研究所完成。材料:C57BL/6小鼠;plambd-Der p 2购自美国HESKA公司;pCI-neo质粒为解放军第三军医大学新桥医院全军呼吸疾病研究所保存。方法:体外分离,培养小鼠骨髓来源树突状细胞。将原核表达质粒plambdDer p 2携带的Der p 2全长cDNA切下,重组到真核表达质粒pCI-neo中,然后在脂质体介导下,将重组质粒转染到小鼠骨髓来源的树突状细胞,以未转染质粒和转染空白载体pCI-neo的树突状细胞为对照。主要观察指标:①pCI-neoDer p 2重组质粒结构鉴定。②并用反转录-聚合酶链反应、Western Blot检测Der p 2mRNA和蛋白表达。结果:测序证实构建的重组质粒中携带了Der p 2的全长cDNA序列,且与Gene Bank序列完全一致。反转录-聚合酶链反应和Western Blot检测结果提示,重组质粒转染的树突状细胞能表达Der p 2 mRNA和Der p 2蛋白。结论:成功构建重组Der p 2基因真核表达载体,其转染树突状细胞后,能有效地表达于树突状细胞中。
文摘Intrinsic time quantum geometrodynamics is a formulation of quantum gravity naturally adapted to 3 + 1 dimensions. In this paper we construct its analogous 2 + 1 formulation, taking note of the mathematical structures which are preserved. We apply the resulting construction to convert the BTZ black hole metric to ITQG framework. We then modify the BTZ black hole in order to investigate the existence of the P-V criticality in ITQG theory.
文摘目的运用生物信息学方法分析屋尘螨变应原第2组分进行氨基酸序列构成特点。方法使用NCBI数据库(美国国立生物技术信息中心,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)蛋白质数据库下载屋尘螨变应原第2组分各亚型的氨基酸序列。分别使用CLUSTALX 2.1、MAGA7进行序列比对和进化树构建。结果获得Der p 2氨基酸序列共13个亚型,对Der p 2氨基酸序列进行对比,有9处氨基酸序列发生变化,构建系统进化树显示进化树中Der p 2亚型聚类成4簇。结论 der p 2氨基酸序列具有多态性,为进一步研究奠定基础。
文摘In clinical therapy,the amount of antigen administered to achieve oral tolerance for allergic diseases is large,and the cost is a major consideration.In this study,we used tobacco plants to develop a large-scale protein production system for allergen-specific immunotherapy,and we investigated the mechanisms of oral tolerance induced by a transgenic plant-derived antigen.We used plants(tobacco leaves)transgenic for the Dermatophagoides pteronyssinus 2(Der p2)antigen to produce Der p2.Mice received total protein extract from Der p2 orally once per day over 6 days(days 0–2 and days 6–8).Mice were also sensitized and challenged with yeast-derived recombinant Der p2(rDer p2),after which the mice were examined for airway hyper-responsiveness and airway inflammation.After sensitization and challenge with rDer p2,mice that were fed with total protein extracted from transgenic plants showed decreases in serum Der p2-specific IgE and IgG1 titers,decreased IL-5 and eotaxin levels in bronchial alveolar lavage fluid,and eosinophil infiltration in the airway.In addition,hyper-responsiveness was also decreased in mice that were fed with total protein extracted from transgenic plants,and CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+) regulatory T cells were significantly increased in mediastinal and mesenteric lymph nodes.Furthermore,splenocytes isolated from transgenic plant protein-fed mice exhibited decreased proliferation and increased IL-10 secretion after stimulation with rDer p2.The data here suggest that allergen-expressing transgenic plants could be used for therapeutic purposes for allergic diseases.
