DcR3在多种疾病诊治中的研究进展

DcR3(Decoyreceptor 3,诱饵受体3)是肿瘤坏死因子受体超家族中的可溶性糖基化蛋白,在肿瘤和炎症性疾病中发挥着重要的调控作用。DcR3也是一种多效能免疫调节剂,可以通过诱骗作用竞争性结合FasL、LIGHT和TL1A三个配体,阻断下游细胞凋亡和炎症的信号传导通路。越来越多的研究数据表明,DcR3与脓毒症、恶性肿瘤、免疫性疾病等多种疾病的发生和发展均具有相关性,在疾病的诊断、治疗和预后等过程中发挥着重要作用。因此,DcR3被认为是预测炎症性疾病进展和癌症转移的潜在生物标志物。

DcR3、ALT与AFP联合检测对肝细胞癌的诊断价值

探讨血清诱骗受体3(decoy receptor,DcR3)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和甲胎蛋白(alpha fetoprotein ,AFP)联合检测对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的临床诊断价值。 方法 选取127例临床诊断为HCC的患者作为研究对象(HCC组)。采用ELISA检测DcR3,全自动生化分析检测ALT、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST),γ-谷氨酰胺转移酶(γ–glutamyl transpeptidase,γ-GGT)), 总蛋白(Total protein,TP),白蛋白(AlbuminALB)及AFP化学发光法测定的水平。采用受试者工作曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)曲线分析DcR3及相关实验室指标对HCC患者的诊断价值。比较两组间的差异采用t检验,P<0.05认为统计有统计学意义。 结果 HCC 组中的临床指标DcR3、AFP 、ALT、AST、GGT的检测水平明显高于对照组(P < 0.01),而HCC 组的TP、ALB水平较低(P < 0.01)。DcR3、ALT和AFP联合检测对HCC的诊断灵敏度为96.3%,而单项检测的诊断敏感性分别为85.2%、92.6%和81.5%。 结论DcR3、ALT和AFP联合检测提高了HCC的诊断敏感性,升高的DcR3对HCC可能具有很重要的诊断价值。

肝癌发展中FasL及其受体Fas/DcR3的表达分析

目的研究小鼠肿瘤发生早期肿瘤坏死因子超家族成员FasL及其受体的表达特点,及其与免疫调节相关分子表达的时空关系,探讨其在诱导肿瘤免疫耐受中的作用。方法建立小鼠实体瘤模型,采用RT-PCR方法检测肿瘤组织中可溶型FasL、Fas及DcR3、TGF-β、IL-10在肿瘤发生不同时相的表达,同时,应用ELISA方法定量检测血清中TGF-β、IL-10的表达。结果在早期的肿瘤组织中,Fas的表达先于DcR3,其后DcR3大量表达,而Fas的表达则下调直至丢失,DcR3、FasL同时表达并上调,TGF-β和IL-10也随肿瘤的表达而上调。TGF-β同DcR3的表达具有空间位置的一致性。FasL、DcR3、TGF-β和IL-10的表达水平同肿瘤的生长呈正相关。结论随着肿瘤不断的生长,肿瘤局部的免疫应答逐渐趋向于负调节,FasL、DcR3在诱导肿瘤免疫耐受的过程中可能发挥着重要作用。

结肠癌患者外周血DcR3与CEA联合测定的临床价值

目的联合检测结肠癌患者外周血中DcR3与癌胚抗原(CEA)mRNA的水平,建立取材于外周血的早期诊断结肠癌的新方法。方法44例结肠癌患者和30名健康志愿者,各取5 mL静脉血,肝素抗凝,密度梯度离心法分离外周血单核细胞,细胞总RNA TRIzol提取液提取外周血单核细胞总RNA,用半定量RT PCR法检测外周血单核细胞中DcR3与CEA mRNA的水平,并用t检验进行比较。结果结肠癌患者外周血中DcR3基因的相对表达水平为0.415±0.078,与健康对照组(0.235±0.074)比较有显著性差异(P<0.05),但患者之间没有明显差异(P>0.05)。CEA在结肠癌患者外周血中阳性率为36.4%(16/44),表达水平为0.346±0.071。30名健康志愿者均为阴性。结论DcR3基因在结肠癌患者外周血中表达水平明显高于健康人,其表达水平与结肠癌有相关性。在CEA阴性情况下,DcR3可能成为新的肿瘤标志物。

抗人DcR3单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的制备抗DcR3单克隆抗体(mAb),鉴定其生物学特性,并应用于ELISA、Western blot、Flowcytometry(FCM)检测。方法以纯化的可溶性DcR3(sDcR3)免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗DcR3 mAb。用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DcR3mAb的亚类。用ELISA方法测定抗DcR3 mAb与sDcR3结合的特性,SDS-PAGE鉴定抗DcR3 mAb与SW480细胞上清中DcR3结合的特性,以鉴定mAb的特性。用间接ELISA法检测腹水mAb的效价、亲和常数并进行表位分析。Western blot检测mAb的特异性及应用,并用所获抗DcR3单克隆抗体(mAb)通过流式细胞仪检测肿瘤细胞表面DcR3的表达水平。结果获得4株可分泌DcR3 mAb的杂交瘤细胞系ZZ-393、ZZ-394、ZZ-151和ZZ-268。其中DcR3 mAb ZZ-268(下文简称为ZZ-268)的Ig亚类为IgG1(κ型);腹水效价为1×10-5;亲和常数为1.28×109水平;ZZ-268和ZZ-151可识别与其他2种抗体不同的抗原表位;Western blot证实,获得的ZZ-268可特异性地识别DcR3;通过流式细胞术可敏感地检测到不同肿瘤细胞表面DcR3的表达水平。结论获得4株抗DcR3的mAb,其中ZZ-268效价高、特异性强,将此抗体用于膜DcR3与sDcR3的检测分析。

基于miR30的靶向DcR_3慢病毒干扰载体的构建及鉴定

目的构建基于miR30的靶向DcR3慢病毒干扰载体。方法人工设计针对DcR3编码区的干扰序列,使其转录后RNA结构类似于miR30结构,茎杆序列替换成DcR3序列,送上海生物工程技术服务有限公司合成。以该序列为模板,分别利用携带EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物行PCR扩增,通过酶切连接的方式将插入片段连入p201慢病毒载体骨架中。经酶切和测序鉴定后,用包装质粒pMD2G及包膜质粒psAX2共同转染293FT细胞进行病毒包装。病毒包装上清液加入培养的人食管鳞癌细胞系KYSE150细胞中,用FACS分选后进行RT-PCR和Western blot检测DcR3表达情况。结果构建了针对DcR3的3条慢病毒干扰载体,成功包装出病毒,并不同程度地抑制了DcR3蛋白的表达。结论基于miR-30的DcR3能有效抑制DcR3表达,为进一步研究DcR3功能打下了基础。

双燃烧室冲压发动机增强燃烧及发动机性能研究

为深入理解双燃烧室冲压发动机(DCR)增强燃烧机理,以超燃冲压发动机(SCR)为参照,基于CFD数值模拟技术对两类发动机进行了性能对比。燃料选用煤油C12H23,当量比0.8,采用六组分四步化学反应机理。结果表明,DCR能够增强燃烧并提高燃烧效率,且马赫数升高后,其提升效果不降反升。DCR增强燃烧机理在于两点:一是亚燃室的高温高压有效缩短了点火延迟进而促进了燃烧;二是其特殊的“三明治”火焰结构,反应区可同时向内外两个维度传播燃烧,反应面积大幅增大使得燃烧效率更高。DCR也能够提升发动机性能,但当马赫数升高后,由于DCR总压损失明显增大,其性能提升优势有所减弱。

诱骗受体DcR3的基因构建、表达及特异性鉴定

目的:构建适于原核表达的人诱骗受体DcR3基因,并进行重组蛋白的表达纯化及特异性鉴定。方法:查得人DcR3cDNA全序列,将其分段设计引物,通过重叠PCR获得DcR3基因。构建pET-22b(+)/DcR3表达载体,转化大肠杆菌Rosseta-gami,IPTG诱导表达,Ni柱纯化。采用ELISA进行特异性鉴定。结果:通过重叠PCR获得了编码正确氨基酸序列的目的基因。目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,蛋白纯度达95%以上。ELISA结果表明所纯化的蛋白可与抗DcR3抗体发生特异结合。结论:诱骗受体DcR3基因的成功构建、表达及纯化,为进一步的功能研究奠定了基础。

基于DCR标准的数字对讲机系统设计

研究了DCR标准的信源编码算法——AMBE算法和信道编码算法——删除卷积码,采用AMBE3000声码器和数字专网移动通信专用芯片CMX7141设计了一款遵从DCR标准的数字对讲机系统。并对所设计的DCR数字对讲机机系统进行仿真和实验验证。实验结果表明:该系统在保证通信的有效性和可靠性的基础上,具有较高的语音通信质量。

结肠癌中DcR3和livin表达与预后的关系

目的探讨DcR3和livin在结肠癌组织中的表达与预后的关系。方法采用二步法免疫组化技术(Envision),检测62例术前未经化疗的结肠癌组织中DcR3和livin基因的表达情况。结果 62例结肠癌组织中DcR3阳性表达率56.5%(35/62);而livin阳性率48.4%(30/62)。DcR3和livin表达与结肠癌组织学类型、浸润深度、临床分期和淋巴结转移有明显相关性(P<0.05);与患者年龄、性别、肿瘤大小等无关(P>0.05)。DcR3在livin阳性和阴性患者中阳性率分别为68.6%(24/35)和22.2%(6/27),两者差异有统计学意义(P<0.05)。结肠癌DcR3和livin均阴性表达病例的5年生存率高于DcR3和livin均阳性表达者,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DcR3和livin异常表达可促进结肠癌的发生发展,同时两者具有协同作用,其与肿瘤的恶性程度与生存率有关;联合检测DcR3和livin更有助于判断结肠癌的发展趋势,为临床诊治及判断预后提供新的路径。

宫颈癌组织中DCR3表达与外周血T细胞亚群的相关性研究

目的探讨宫颈癌组织中诱骗受体3(DCR3)表达与外周血T细胞亚群之间的相关性。方法免疫组织化学法检测宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈癌(CC)及正常宫颈组织中DCR3表达情况,并检测宫颈癌组织中实质及间质内T细胞表面抗原CD3、CD4、CD8阳性细胞数量;应用流式细胞术分析患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+T数量变化情况,分析研究宫颈癌组织中DCR3表达与患者外周血T细胞亚群之间的相关性。结果 DCR3表达强度与宫颈病变严重程度有关;宫颈癌患者外周血中T细胞数明显降低,且宫颈组织中DCR3表达与患者外周血中CD3+T、CD4+/CD8+呈负相关;宫颈癌变后实质内T细胞数明显减少,T细胞主要聚集于肿瘤间质内。结论 DCR3参与了宫颈癌细胞免疫逃逸,外周血T细胞亚群联合DCR3检测可作为宫颈癌免疫诊断指标,为患者免疫治疗提供基础。

TRAIL及其受体DR4、DcR1在大肠癌及癌旁组织中的表达

目的研究人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)及其受体DR4、DcR1在大肠癌和癌旁组织中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测42例大肠癌及其癌旁5cm组织、25例正常大肠粘膜组织中TRAIL及其受体DR4、DcR1表达水平。结果TRAIL及DR4在大肠癌、癌旁组织及正常大肠粘膜组织中的表达呈递增趋势,而DcR1的表达则与之相反(P<0.05);TRAIL和DR4在中、低分化癌中的表达明显低于高分化癌中的表达,而DcR1的表达则与之相反(P<0.01);TRAIL、DR4、DcR1的表达与肿瘤的病理类型、Duke′s分期及淋巴结转移与否等因素无关(P>0.05)。结论TRAIL、DR4、DcR1可能与大肠癌的发生、发展密切相关;DR4可能在TRAIL诱导的凋亡通路中发挥一定作用,而DcR1的表达与否一定程度上决定了TRAIL能否发挥其生物效应。

血清HIF-1α、DcR3、TSGF在宫颈癌诊断中的作用及其与患者临床病理参数的关系

目的观察血清缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、诱骗受体3(DcR3)、恶性肿瘤特异生长因子(TSGF)在宫颈癌诊断中的作用,并探讨其与患者临床病理参数的关系。方法选取体检女性2 250例,根据体检及病理诊断结果分为健康组1 342例、宫颈良性病变组836例、宫颈癌组72例。采用ELISA法检测三组血清HIF-1α、DcR3、TSGF水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价三者单独及联合诊断宫颈癌的价值,比较不同临床病理参数的宫颈癌患者血清HIF-1α、DcR3、TSGF水平。结果宫颈癌组血清HIF-1α、DcR3、TSGF水平均高于宫颈良性病变组、健康组(P均<0.05)。血清HIF-1α、DcR3、TSGF联合诊断诊断宫颈癌的AUC(0.891)高于三者单独诊断的AUC(0.791、0.812、0.789)。血清HIF-1α、DcR3、TSGF单独诊断宫颈癌的截断值分别为172.38 pg/mL、492.70 pg/mL、65.51 U/mL,灵敏度分别为68.06%、75.00%、69.44%,特异度分别为81.82%、78.61%、80.85%,三者联合诊断宫颈癌的灵敏度、特异度分别为75.00%、86.74%。FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、组织学低分化、宫颈浸润深度≥2/3的宫颈癌患者血清HIF-1α、DcR3、TSGF水平均高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、组织学中高分化、宫颈浸润深度<2/3者(P均<0.05)。不同年龄、肿瘤直径患者血清HIF-1α、DcR3、TSGF比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论宫颈癌患者血清HIF-1α、DcR3、TSGF水平均升高,三者联合检测有助于宫颈癌的诊断及病情评估。

DcR3 mRNA在白血病细胞中的表达及意义

目的:探讨DcR3 mRNA在急性白血病(AL)细胞中的表达及其临床意义。方法:选择AL患者46例,其中急性髓系白血病(AML)28例,急性淋巴细胞白血病(ALL)18例,27例非恶性血液病患者作为对照组,采用RT-PCR方法检测骨髓单个核细胞(BMNC)中DcR3 mRNA的表达水平,并分析其与临床参数的关联性。结果:AL组DcR3 mRNA表达阳性率(67.4%)及表达水平(0.56±0.09)高于对照组(40.7%,0.39±0.19)(P<0.05);AML组DcR3 mRNA表达阳性率(71.4%)及表达水平(0.56±0.09)与ALL组(61.1%,0.53±0.08)比较差异无显著性(P>0.05);AL患者DcR3 mRNA的阳性表达率在白细胞计数≥30×109.L-1时升高。结论:DcR3基因可能通过抑制白血病细胞凋亡途径参与白血病发病过程。

胃癌组织中Survivin和DcR3基因的表达及临床意义

目的探讨胃癌组织中Survivin和DcR3基因的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测50例胃癌组织及其对应的50例正常胃黏膜中Survivin、DcR3 mRNA的表达情况。结果胃癌中Survivin、DcR3 mRNA的阳性表达率均明显高于正常胃黏膜组织(均P<0.01),二者的表达水平在胃癌中呈正相关(P<0.01);Survivin、DcR3 mRNA的表达水平均与胃癌的组织分化程度、淋巴转移、TNM分期有关(均P<0.05)。结论联合检测Survivin和DcR3有助于判断胃癌预后,可能是临床评价胃癌恶性程度的重要指标。

抗人DcR3单克隆抗体的研制及其鉴定

目的：制备抗人DcR3单克隆抗体（mAb），并鉴定其特异性。方法：纯化的His．DcR3融合蛋白免疫小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人DcR3 mAb并进行纯化，纯化后的抗体经Western blot和ELISA方法鉴定其特异性、Ig亚型和效价。结果：获得5株稳定分泌抗DcR3 mAb的杂交瘤细胞，均属IgG1亚型，其腹水抗体效价为1×10^-5～1×10^-7，Western blot显示5株细胞分泌的mAb均可识别DcR3蛋白，其中1株（181）可与SW480细胞成分反应。结论：成功建立稳定分泌抗人DcR3mAb的杂交瘤细胞株，其分泌的抗体特异性强、效价高，为研究DcR3在组织中的表达、分布及研制ELISA试剂盒奠定基础。

PTEN、Fas/FasL和DCR3在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究PTEN、Fas/FasL和DCR3在人胃癌组织中的表达,初步探讨三者与胃癌的发生、癌细胞增殖和侵袭转移的关系及其临床意义。方法:采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接(SP)免疫组织化学方法检测75例胃癌标本黏膜组织中PTEN、Fas/FasL和DCR3蛋白的表达,15例胃溃疡或十二指肠溃疡患者胃黏膜组织作为正常对照组。结果:胃癌组织中DCR3的表达率显著高于正常胃黏膜组织,PTEN及Fas/FasL的表达率则低于正常胃黏膜组织,差异均有统计学意义(P<0.01);DCR3与Fas/FasL、PTEN的表达呈负相关(P<0.001),PTEN与Fas/FasL的表达呈正相关(P<0.001,r=0.401),三者的阳性表达率与肿瘤淋巴转移、临床分期、肿瘤病理分化程度及浸润深度密切相关,与性别、年龄及肿瘤大小无关(P>0.05)。结论:DCR3、PTEN及Fas/FasL在胃癌的发生发展及浸润转移中存在着相互制约的关系。检测三者在胃癌中的表达,有助于从不同角度判断胃癌的恶性生物学行为;DCR3、PTEN及Fas/FasL有可能成为胃癌临床诊断、判断疗效及监测预后的可靠指标。

DcR3对人肺成纤维细胞合成Ⅳ型胶原的作用

目的:探讨诱骗受体3(DcR3)对人肺成纤维细胞(HLF)合成Ⅳ型胶原的作用。方法:Over-PCR方法构建DcR3的真核表达载体,脂质体法转染HLF细胞,Westernblo检测HLF细胞合成Ⅳ型胶原的含量。结果:成功构建了pvax1-DcR3真核表达载体并转染HLF细胞;转染组细胞ColⅣ表达量明显升高,从12h开始持续到72h,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);而转染+抗体组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);转染组不同时间ColⅣ表达量有统计学意义(F=34.25,P<0.05)。结论:DcR3促进HLF细胞合成Ⅳ型胶原的能力,可能是加速肺纤维形成的因素之一。

作为免疫相关性疾病靶点的DcR3的研究进展

诱骗受体3(decoy receptor 3,DeR3)是肿瘤坏死因子受体超家族的新成员。它通过拮抗Fas／FasL系统及LIGHT／ LTβR、LIGHT／HVEM/TR2系统的作用,在肿瘤及免疫性疾病中发挥重要作用。DcR3的基因位于20q13．3,在人肿瘤细胞中会发生基因扩增和重排;在多种肿瘤、自身免疫疾病中高表达;作用机制有LIGHT和配体FasL途径等;促肿瘤发生;可下调宿主免疫功能,能降低T细胞对同种抗原应答,有重大开发潜能。