基于保肝降酶作用的舒肝宁注射液相对生物活性测定法的建立与生物均一性评价

目的考察舒肝宁注射液(SGN)的保肝降酶退黄作用,并基于保肝降酶作用,以谷丙转氨酶(ALT)活性抑制率为指标建立SGN相对生物活性测定法,评价其批内及批间的生物均一性。方法采用120μg·mL^(-1)脂多糖(LPS)刺激人正常肝细胞(L-O2)12 h建立体外急性肝损伤模型,利用微板法考察SGN对谷草转氨酶(AST)、ALT、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、丙二醛(MDA)含量的影响,评价其保肝降酶退黄作用,再通过考察SGN中12个主要成分(黄芩苷、黄芩素、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、次黄嘌呤、L-亮氨酸、栀子苷、鸟苷、尿苷、腺苷、京尼平龙胆双糖苷)对上述指标的影响,筛选具有明显量效关系的成分与指标。通过可靠性检验筛选标准品和检测指标,并标定效价,按照“量反应平行线(3,3)法”计算SGN保肝降酶生物活性相对效价,并评价SGN批内和批间生物均一性。结果与Control组比较,LPS组AST、ALT活性明显增强,TBIL、DBIL、MDA含量明显升高,GSH-Px活性明显减弱;与LPS组比较,SGN-M、SGN-H组AST、ALT活性明显减弱,TBIL、DBIL、MDA含量明显降低,GSH-Px活性明显增强;SGN-L组TBIL、DBIL、MDA含量明显降低。SGN的12个成分中同时具有保肝降酶退黄作用的为黄芩苷和绿原酸,并筛选出呈剂量依赖性的指标和成分。通过可靠性检验结果选择以SGN批次(20210112)为标准品,ALT活性抑制率为检测指标,建立基于保肝降酶作用的SGN生物活性测定法。利用“量反应平行线(3,3)法”计算SGN保肝降酶生物活性相对效价,同一批次10个不同SGN(批次:20210324)保肝降酶生物效价在95.6%~111.9%;不同批次的9个不同SGN保肝降酶生物效价在95.6%~103.8%。结论SGN能减轻LPS诱导的L-O2细胞急性肝损伤,改善肝功能,降低胆红素及氧化应激水平,从而发挥保肝降酶退黄作用。SGN的12个主要成分中黄芩苷和绿原酸可以同时抑制AST、ALT活性,降低TBIL、DBIL、MDA含量,增强GSH-Px活性,是其保肝降酶退黄的主要有效成分。建立的SGN生物活性测定方法精密度高、结果可靠,可用于SGN生物学质量控制。

新型金属卟啉的合成及其仿酶活性研究

合成并表征了一系列水溶性和非水溶性金属卟啉 3a～3e，5a～5f和 8a～8f；测试了这些金属卟啉作为超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的模拟物催化歧化O2-和催化分解H2O2等有毒氧自由基的活性及抗脂质过氧化性质．结果表明，含有吡啶溴化盐的水溶性金属卟啉8a～8f的仿酶活性明显大于含有羟基的非水溶性金属卟啉3a～3e和含有酯基的金属卟啉5a～5f．

4种生物农药对刘氏短须螨的毒力及苦参碱对相关酶活性的影响

刘氏短须螨Brevipalpus lewisi Mcgregor是近年发现危害水杉的害螨。室内条件下采用玻片浸渍法测定了苦参碱、印楝素、阿维菌素和苏云金杆菌(Bt)4种生物药剂对刘氏短须螨成螨的毒力;采用生化方法测定了取食喷施苦参碱的水杉叶片后刘氏短须螨的过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)和乙酰胆碱酯酶(Ach E)的活性。结果显示:4种生物药剂对刘氏短须螨均具毒杀作用,校正死亡率随着浓度的增加而升高。其中,印楝素对刘氏短须螨的毒力最高,LC50达到5.36 mg/L;其次为苦参碱,LC50为7.18mg/L;阿维菌素和Bt相对较低,LC50分别为20.18 mg/L和20.69 mg/L。取食苦参碱处理的叶片,刘氏短须螨成螨体内的过氧化物酶、谷胱甘肽-S-转移酶和乙酰胆碱酯酶活性均产生不同程度的诱导效应。与对照组相比,螨体内乙酰胆碱酯酶和过氧化物酶活性显著增强;谷胱甘肽-S-转移酶活性呈上升趋势,但差异不显著。

薄层生物自显影技术筛选两色金鸡菊中的活性成分

目的:建立薄层生物自显影技术的方法筛选具有抗氧化作用和α-葡萄糖苷酶抑制作用的活性物质。方法:将两色金鸡菊水提物、醇提物和乙酸乙酯提取物在硅胶板上以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶7∶3)为展开剂展开,以1,1-二苯基-2-苦肼基自由基甲醇溶液进行显色,获得具有抗氧化作用物质;将两色金鸡菊3种提取物以上述同样的方法展开后在硅胶板上先喷α-葡萄糖苷酶溶液孵育60 min,再以2-萘基-α-D-葡萄糖苷溶液和固蓝B盐溶液(1∶1)为显色剂,显色后在白光下对比获得具有α-葡糖糖苷酶抑制作用的物质。结果:薄层板上斑点周围可以观察到白色或类白色抑制区,说明两色金鸡菊水提物、醇提物和乙酸乙酯3种提取物中均有抗氧化活性成分和α-葡糖糖苷酶抑制成分。结论:建立的薄层生物自显影技术可以快速筛选具有抗氧化作用和α-葡糖糖苷酶抑制作用的化合物,经指认两色金鸡菊中花色苷-3-葡萄糖苷、马里苷、绿原酸、黄酮奥卡宁、奥卡宁有较强的抗氧化作用,马里苷和奥卡宁具有较强的α-葡糖糖苷酶抑制成分。

注射用特立帕肽体外生物学活性方法研究

目的:按照美国药典(USP)与《中华人民共和国药典》(CHP)生物制品生物活性方法验证指导原则,进行注射用特立帕肽体外生物学活性检测方法研究。方法:基于UMR106细胞生色底物法进行注射用特立帕肽生物学活性检测及方法学验证。结果:优化后的方法简便高效,可准确检测重组特立帕肽生物学活性。该方法专属性较好,2名实验员各进行3次独立日间、日内精密度检测,RSD均<20%。准确度和线性较好,对50%,60%,100%,120%和130%这5个不同浓度稀释组样品各进行3次回收率测定,相对效价平均值分别为(46±2.08)%,(51±6.03)%,(99±12.10)%,(113±3.79)%,(131±6.93)%;对应回收率平均值分别为(91±4.16)%,(86±10.05)%,(99±12.10)%,(94±3.16)%,(101±5.33)%,各组样品RSD均<20%,线性相关系数R~2=0.991 1。该方法具有较好的重复性、耐用性,12次独立重复实验RSD均<10%,对不同型号仪器检测、细胞代次、药物孵育时间等条件的改变均有较好的耐用性。结论:本研究所优化的方法能够满足特立帕肽的工艺控制和放行检验需求。