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PKA在盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)多细胞发育中的作用 被引量:2
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作者 马宁莎 侯连生 韩轶 《生命科学研究》 CAS CSCD 2003年第4期283-288,共6页
在盘基网柄菌(Dictyosteliumdiscoideum)多细胞发育中,蛋白激酶A(proteinkinaseA,PKA)发挥多重作用.细胞聚集阶段,PKA调节腺苷酰环化酶的活性,中转cAMP,诱导dut、pdi等一些发育早期的基因表达;参与启动聚集后的细胞分化和形态构成,增强... 在盘基网柄菌(Dictyosteliumdiscoideum)多细胞发育中,蛋白激酶A(proteinkinaseA,PKA)发挥多重作用.细胞聚集阶段,PKA调节腺苷酰环化酶的活性,中转cAMP,诱导dut、pdi等一些发育早期的基因表达;参与启动聚集后的细胞分化和形态构成,增强GBF活性,激活前孢子细胞特有基因的表达;它还精密调控前柄细胞特有基因ecmB的表达,准确启动拔顶发育,诱导孢柄和孢子的成熟.子实体形成后,PKA又是维持孢子休眠和保证孢子有效萌发的必需因子.在PKA调控下,盘基网柄菌有条不紊地完成整个发育过程. 展开更多
关键词 蛋白激酶A 盘基网柄菌 腺苷酰环化酶 变形虫
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盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)吞噬作用中肌动蛋白多聚化及其调节
2
作者 施佳乐 彭建涛 +3 位作者 谭宁 马宁莎 韩轶 侯连生 《生命科学》 CSCD 2005年第3期246-250,共5页
肌动蛋白是盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)细胞吞噬过程中的关键组分,通过其细胞内的定位和多聚化形式在确定的时间和地点连接特定的分子,使吞噬过程得以完成。profilin是肌动蛋白多聚化的重要调节分子,在磷脂酰肌醇信号转导与... 肌动蛋白是盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)细胞吞噬过程中的关键组分,通过其细胞内的定位和多聚化形式在确定的时间和地点连接特定的分子,使吞噬过程得以完成。profilin是肌动蛋白多聚化的重要调节分子,在磷脂酰肌醇信号转导与细胞骨架相交处起关键作用。许多小分子G蛋白参与细胞骨架调节,CAP蛋白是两者间重要连接分子。所以,吞噬作用是细胞内诸分子协同作用的结果。 展开更多
关键词 盘基网柄菌 吞噬作用 PROFILIN 磷脂酰肌醇 F-肌动蛋白 GTPASE 信号转导
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AMPK Subcellular Localisation in <i>Dictyostelium discoideum</i>
3
作者 Paul B. Bokko Afsar Ahmed Paul R. Fisher 《American Journal of Molecular Biology》 2015年第3期105-116,共12页
The Dictyostelium discoideum AMP-activated protein kinase (AMPK) snfA subcellular localization was studied in AX2 and stable HPF strains by use of AMPK antipeptide antibody and goat anti-rabbit Alexa-Flour 488-conjuga... The Dictyostelium discoideum AMP-activated protein kinase (AMPK) snfA subcellular localization was studied in AX2 and stable HPF strains by use of AMPK antipeptide antibody and goat anti-rabbit Alexa-Flour 488-conjugated IgG antibody. The AMPK exhibited cytosolic localization patterns and uniform focalised concentrations in wild type and the strains alike. Constitutive activation and attenuation of the α subunit expression did not affect subcellular distribution of AMPK. However, snfA expression was more intense in strains in which AMPK was constitutively active compared with the AX2 but lesser in attenuation strains. The localisation of the snfA reinforced the putative standing that it had a plethora of cytoplasmic functions. Moreover, the oxidative cellular function would require a ubiquitous system and might coordinately regulate responses to metabolic requirements. Furthermore, the developmental phases of the life cycle would support the cytosolic localization;and since organelles were potentially reorganized or removed entirely during the transition from vegetative living to fruiting body morphology. This study provided insight into the subcellular distribution of AMPK in Dictyostelium discoideum. We demonstrated that AMPK localization was steady in AX2 and derived strains whether constitutively active or anti-sense inhibited depicting extreme genetic states. 展开更多
关键词 AMPK α Subunit dictyostelium discoideum SUBCELLULAR Localisation AX2 Mitochondrial Assay
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盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)用于本科“细胞膜功能蛋白”探究性实验教学研究 被引量:2
4
作者 王晓燕 蒋锐达 高润池 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2022年第3期443-450,共8页
该研究对细胞生物学经典教学实验“细胞膜渗透性实验”进行重新设计。通过比较兔红细胞和盘基网柄菌细胞的“细胞膜渗透性”实验结果,配合细胞生物学“细胞质膜结构与功能”一章的教学,引导学生初步探究盘基网柄菌水孔蛋白(aquaporins,A... 该研究对细胞生物学经典教学实验“细胞膜渗透性实验”进行重新设计。通过比较兔红细胞和盘基网柄菌细胞的“细胞膜渗透性”实验结果,配合细胞生物学“细胞质膜结构与功能”一章的教学,引导学生初步探究盘基网柄菌水孔蛋白(aquaporins,AQPs)在细胞抗低渗环境中的作用,加深理解细胞质膜中的功能蛋白对于细胞生存的重要意义。 展开更多
关键词 盘基网柄菌 兔红细胞 水孔蛋白 探究性学习
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盘基网柄菌(Distyostelium discoideum)基因芯片研制与基因表达检测
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作者 李晚忱 Kimchi Doquang Adrian Tsang 《四川农业大学学报》 CSCD 2002年第4期305-308,共4页
将56个盘基网柄菌基因的PCR扩增产物制成基因芯片,提取不同发育阶段的总mRNA,逆转录制备cDNA探针,荧光染料标记,通过Southern杂交,检测盘基网柄菌不同发育阶段的基因表达模式。结果表明,在培养8h特异性表达的有actin、calmodulin、cdc2... 将56个盘基网柄菌基因的PCR扩增产物制成基因芯片,提取不同发育阶段的总mRNA,逆转录制备cDNA探针,荧光染料标记,通过Southern杂交,检测盘基网柄菌不同发育阶段的基因表达模式。结果表明,在培养8h特异性表达的有actin、calmodulin、cdc2、Mo15等与孢子萌发和营养生长有关的基因;H2B-2和p24基因在16h时特异表达,说明这两个基因与盘基网柄菌由单细胞营养生长阶段向多细胞发育阶段的发育转化有关。 展开更多
关键词 盘基网柄菌 基因芯片 基因表达 不质纤维素降解菌 生长发育阶段 转化
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磷脂酰肌醇3激酶通过Akt和ERK抑制盘基网柄菌细胞的趋电性
6
作者 葛晓雪 蒋锐达 +2 位作者 王晓燕 高晶 高润池 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第3期685-695,共11页
目的磷脂酰肌醇3激酶(PI3Ks)通过调控肌动蛋白在细胞定向运动中发挥重要作用。然而,PI3Ks的结构和功能很复杂,人们对PI3Ks在细胞趋电性运动中的作用并不完全清楚。因此,本文以模式生物盘基网柄菌细胞为实验材料,探究其中的PI3K1和PI3K2... 目的磷脂酰肌醇3激酶(PI3Ks)通过调控肌动蛋白在细胞定向运动中发挥重要作用。然而,PI3Ks的结构和功能很复杂,人们对PI3Ks在细胞趋电性运动中的作用并不完全清楚。因此,本文以模式生物盘基网柄菌细胞为实验材料,探究其中的PI3K1和PI3K2在细胞趋电性运动中的作用。方法首先利用CRISPR/Cas9系统介导分别构建PI3K1编码基因pikA基因敲除突变株和PI3K2编码基因pikB基因敲除突变株;随后将2个突变株置于强度为12 V/cm的直流电场中,记录并分析两个突变株的趋电性。结果数据分析显示,野生型细胞在直流电场中的方向指数为(0.86±0.03),而pikA-和pikB-突变株在直流电场中的运动方向指数分别为(0.95±0.02)和(0.94±0.03);此外,野生型细胞在电场中的平均轨迹速度(3.34±0.08)μm/min,而pikA-和pikB-突变株的平均轨迹速度分别为(4.85±0.20)μm/min和(5.48±0.15)μm/min,t检验表明突变株和野生型的方向性指数和运动速度都存在极显著的差异。蛋白质印迹实验结果显示,pikA-和pikB-突变株中磷酸化Akt和磷酸化ERK都显著增加。结论PI3K1和PI3K2在盘基网柄菌细胞趋电性运动中可能通过增加Akt和ERK的活性发挥抑制作用。 展开更多
关键词 细胞迁移 CRISPR/Cas9 趋电性 盘基网柄菌
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盘基网柄菌细胞分化和凋亡的形态特征 被引量:7
7
作者 谭宁 施佳乐 +1 位作者 彭建涛 侯连生 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第3期603-611,共9页
本文用透射电镜和DAPI荧光染色法研究了盘基网柄菌(Dictyosteliumdiscoideum)细胞分化和柄细胞的凋亡特征,结果显示:细胞丘中绝大部分细胞的线粒体内出现一小空泡,随着发育进程,空泡逐渐增大,线粒体的嵴随之变少,直至线粒体完全空泡化,... 本文用透射电镜和DAPI荧光染色法研究了盘基网柄菌(Dictyosteliumdiscoideum)细胞分化和柄细胞的凋亡特征,结果显示:细胞丘中绝大部分细胞的线粒体内出现一小空泡,随着发育进程,空泡逐渐增大,线粒体的嵴随之变少,直至线粒体完全空泡化,最后形成单层膜的空泡。据此我们推测前孢子细胞特有的空泡来源于线粒体,并且这种细胞器水平上的内自噬现象与前孢子细胞分化密切相关。在前柄细胞分化阶段,前柄细胞中出现数个自噬泡,最初吞噬的线粒体嵴结构完整;随着前柄细胞进一步分化,部分线粒体内出现类似于前孢子细胞中的内自噬现象,并且自噬泡只吞噬这种线粒体。在凋亡后期,细胞核内核仁消失,染色体固缩形成高电子密度斑块,自噬泡采用与细胞核膜融合的方式来完成核的清除,最后柄细胞完全空泡化且包被一层纤维素壁。作者认为前柄细胞凋亡过程实质上是一种分化过程,所以有其鲜明特点:细胞出现自噬泡,标志着凋亡开始,用自噬而不是凋亡小体来清除胞内各种细胞器,直到分化最后阶段才清除细胞核和形成纤维素壁。这些特点不仅是前柄细胞凋亡的形态学指标,也和细胞发育和分化相关。 展开更多
关键词 盘基网柄菌 凋亡 线粒体 自噬泡
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盘基网柄菌细胞分化和凋亡中酸性磷酸酶的定位 被引量:2
8
作者 张敏 谭宁 侯连生 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第2期278-284,共7页
利用电镜酶细胞化学方法,观察盘基网柄菌细胞分化和凋亡过程中酸性磷酸酶的变化。在细胞丘阶段,酶反应颗粒出现在线粒体内自噬空泡内,随着内自噬空泡的逐渐增大,线粒体内的酶反应颗粒逐渐增多,线粒体内嵴结构不断破坏,直至遍布整个空泡... 利用电镜酶细胞化学方法,观察盘基网柄菌细胞分化和凋亡过程中酸性磷酸酶的变化。在细胞丘阶段,酶反应颗粒出现在线粒体内自噬空泡内,随着内自噬空泡的逐渐增大,线粒体内的酶反应颗粒逐渐增多,线粒体内嵴结构不断破坏,直至遍布整个空泡化的线粒体内;当细胞发育至前孢子细胞时,由于嵴结构被完全破坏,酶反应颗粒主要集中在前孢子细胞空泡的单层膜上,空泡化的线粒体内酶反应颗粒逐渐消失。在凋亡的柄细胞中,自噬泡内酶反应强烈,凋亡中期的前柄细胞的细胞核中出现酶反应颗粒,均匀分布在细胞核中,直至细胞核与自噬泡融合。在孢子细胞外被与质膜间也观察到非溶酶体酸性磷酸酶。所得结果证实:线粒体内自噬小泡具有消化功能;自噬泡内酶活性与细胞器消亡有关;细胞核中的酸性磷酸酶可能作为一种非溶酶体酸性磷酸酶参与细胞核中核蛋白的脱磷酸化过程。 展开更多
关键词 盘基网柄菌 细胞发育 凋亡 线粒体 自噬泡 酸性磷酸酶
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生物模式的元胞自动机模型(I):盘基网柄菌的聚集模式 被引量:3
9
作者 赵峰 陶祖莱 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第2期304-308,共5页
对生物模式的形成机制的探讨一直是生命科学特别是发育生物学的重要课题。目前已经积累了大量的多学科的研究数据并提出了一些的理论,但生物模式形成的真正机制仍然很不清楚而需更深入的探索。本文试图运用元胞自动机方法建立一个从单... 对生物模式的形成机制的探讨一直是生命科学特别是发育生物学的重要课题。目前已经积累了大量的多学科的研究数据并提出了一些的理论,但生物模式形成的真正机制仍然很不清楚而需更深入的探索。本文试图运用元胞自动机方法建立一个从单细胞及其行为到细胞与细胞、细胞与胞外环境相互作用下生物模式形成的模型。并应用此模型,基于“诱导开关”概念,提出一种新的离散模型来模拟盘基网柄菌(D ictyostelium d iscoid eum)的聚集模式。 展开更多
关键词 生物模式 元胞自动机 盘基网柄菌 聚集模式 诱导开关
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发酵罐高密度培养盘基网柄菌 被引量:1
10
作者 陈祥仁 黄霄红 +1 位作者 徐宝多 卢英华 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B05期32-36,共5页
利用SIH合成培养基,在7L发酵罐培养盘基网柄菌.培养147h后,细胞密度达到4.0×10^7mL^-1,为在复杂培养基上所能达到的细胞密度的2~4倍.培养过程中葡萄糖的消耗量为6.7g/L,产氨浓度达0.88g/L.对培养基中的氨基酸分析表... 利用SIH合成培养基,在7L发酵罐培养盘基网柄菌.培养147h后,细胞密度达到4.0×10^7mL^-1,为在复杂培养基上所能达到的细胞密度的2~4倍.培养过程中葡萄糖的消耗量为6.7g/L,产氨浓度达0.88g/L.对培养基中的氨基酸分析表明,赖氨酸、色氨酸、甲硫氨酸和苯丙氨酸消耗较快,显示SIH培养基的氨基酸成分还可进一步优化.采用基于Monod生长动力学的半经验模型可很好模拟细胞生长和底物消耗,并估计出动力学参数μmax=0.115h^-1,Nmax=6.0×10^7mL^-1.本研究为进一步优化合成培养基和为利用这一新型真核表达系统大规模生产重组异源蛋白奠定了基础. 展开更多
关键词 盘基网柄菌 合成培养基 发酵罐 培养
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盘基网柄菌尿囊酸酶基因RNA干扰载体的构建及干扰效果鉴定 被引量:2
11
作者 刘伟 张树任 +1 位作者 陈能星 侯连生 《细胞生物学杂志》 CSCD 2009年第3期395-400,共6页
为探究尿囊酸酶(allantoicase)基因在盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)发育中的作用,依据RNA干扰(RNAi)的原理和盘基网柄菌中构建RNAi载体的基本经验,扩增出尿囊酸酶基因642bp的长片段,397bp的短片段,并反向连接成含有发卡结构的... 为探究尿囊酸酶(allantoicase)基因在盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)发育中的作用,依据RNA干扰(RNAi)的原理和盘基网柄菌中构建RNAi载体的基本经验,扩增出尿囊酸酶基因642bp的长片段,397bp的短片段,并反向连接成含有发卡结构的寡核苷酸片段,克隆至表达载体pAct15Gal,构建了以盘基网柄菌尿囊酸酶基因为靶标的RNAi载体pAct15Gal-allCi。将此载体转染野生型KAx-3细胞,经G418筛选出阳性克隆RNAi-allc。将野生型细胞和RNAi-allc转染细胞发育20h后发现,转染细胞仅能形成类似细胞丘的小突起,不能完成完整的发育,而野生型细胞则能完成完整的发育,形成子实体。Western印迹几乎检测不到转染细胞有尿囊酸酶的免疫条带;流式细胞术检测转染细胞内尿囊酸酶的表达,发现表达率由野生型细胞的72.18%降为转染细胞的0.67%。表明本研究设计的核苷酸序列对靶标基因的表达有较明显的干扰作用,说明尿囊酸酶对盘基网柄菌细胞发育有一定的调控作用。 展开更多
关键词 盘基网柄菌 尿囊酸酶 RNA干扰 载体构建
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盘基网柄菌柄细胞分化过程中gp150分子的作用 被引量:2
12
作者 侯连生 《华东师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期63-67,共5页
饥饿的盘基网柄菌进入多细胞发育期后,在细胞疏松结合阶段,gp150分子分布在多细胞体外周;在蛞蝓体阶段,gp150分子把蛞蝓体分成前孢子细胞区和前柄细胞区两个部分,在分化成柄细胞的区域内gp150分子的量逐渐增多.实验结果表明gp150分子与... 饥饿的盘基网柄菌进入多细胞发育期后,在细胞疏松结合阶段,gp150分子分布在多细胞体外周;在蛞蝓体阶段,gp150分子把蛞蝓体分成前孢子细胞区和前柄细胞区两个部分,在分化成柄细胞的区域内gp150分子的量逐渐增多.实验结果表明gp150分子与柄细胞分化有密切关系. 展开更多
关键词 盘基网柄菌 柄细胞 发育 分化 gp150
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低频变化电场促进细胞定向移动的研究 被引量:2
13
作者 李颖 Bing Song +1 位作者 殷涛 刘志朋 《生物医学工程研究》 2021年第2期105-113,共9页
细胞趋电性在伤口愈合、胚胎形成、神经再生等领域至关重要。前期研究表明,细胞在脉冲电场下也能够定向移动,但目前多种非直流电场也被临床证实能有效地促进伤口愈合,而其机制尚不清楚。本研究设计了能产生连续变化电场的电刺激器,研究... 细胞趋电性在伤口愈合、胚胎形成、神经再生等领域至关重要。前期研究表明,细胞在脉冲电场下也能够定向移动,但目前多种非直流电场也被临床证实能有效地促进伤口愈合,而其机制尚不清楚。本研究设计了能产生连续变化电场的电刺激器,研究分析低频(10、5、1 Hz)正弦波、三角波和斜坡波电场下阿米巴细胞的运动特性,发现在正弦波电场组中,5 Hz电场下细胞比1 Hz导向性更高(P<0.01);在三角波电场组中,5 Hz电场下细胞迁移速率最高(P<0.001,P<0.001);在斜坡波电场组中,10 Hz电场下细胞导向性比5 Hz和1 Hz均低(P<0.001,P<0.001)而5 Hz电场下细胞迁移速率高于1 Hz(P<0.05),综合考虑5 Hz趋电性最好。把上述三组中最优电场与直流电场和脉冲电场对比,发现上述三种电场下细胞运动特性均优于50%占空比脉冲电场,更重要的是,5 Hz斜坡波下细胞导向性与直流电场下无明显差异(ns),而迁移速率优于后者(P<0.001),是本研究中具有最佳趋电性的电场。实验结果表明,低频变化电场也能够引起细胞定向迁移,不同波形电场下细胞趋电性差异明显,而5 Hz斜坡波电场具有基础和临床研究的应用潜力。 展开更多
关键词 盘基网柄菌 细胞迁移 细胞趋向 方向运动 单向变化电场 频率变化
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反相高效液相色谱法分析盘基网柄菌对氨基酸的利用
14
作者 黄霄红 王颖 +3 位作者 叶美玲 罗臻 宋娟 凌雪萍 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期734-739,共6页
为观察盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)在SIH培养基上对氨基酸的利用情况,以2,4-二硝基氯苯为衍生化试剂,研究了用反相高效液相色谱(RP-HPLC)测定氨基酸的方法.在60min内16种氨基酸达到基线分离,峰面积与氨基酸浓度的线性相关系数... 为观察盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)在SIH培养基上对氨基酸的利用情况,以2,4-二硝基氯苯为衍生化试剂,研究了用反相高效液相色谱(RP-HPLC)测定氨基酸的方法.在60min内16种氨基酸达到基线分离,峰面积与氨基酸浓度的线性相关系数为0.992~0.999.对发酵液样品的分析结果表明,盘基网柄菌对赖氨酸的利用最为彻底,发酵后期赖氨酸已被消耗完全.蛋氨酸、色氨酸、精氨酸、组氨酸也较易被盘基网柄菌利用,而对天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、苏氨酸、脯氨酸、缬氨酸的需求不大.这一代谢特点为改进盘基网柄菌培养基组成提供依据. 展开更多
关键词 盘基网柄菌 反相高效液相色谱法 氨基酸 2 4-二硝基氯苯
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gp150蛋白对盘基网柄菌发育阶段膜蛋白的影响
15
作者 韩轶 陈颖盈 侯连生 《华东师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期101-106,共6页
用生化抽提细胞质膜蛋白和SDS-梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法比较gp150突变AK127细胞和野生型KAx-3细胞质膜蛋白的结果显示,各发育时期的AK127细胞和KAx-3细胞在含量方面比较恒定的质膜蛋白组分是68kD,60kD,54kD,50kD,37kD,34kD和31kD条... 用生化抽提细胞质膜蛋白和SDS-梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法比较gp150突变AK127细胞和野生型KAx-3细胞质膜蛋白的结果显示,各发育时期的AK127细胞和KAx-3细胞在含量方面比较恒定的质膜蛋白组分是68kD,60kD,54kD,50kD,37kD,34kD和31kD条带,它们并不因为AK127细胞缺失gp150分子而有所改变.发育12h后,蛋白含量变化最为明显的是45kD,25kD,20kD和17kD蛋白,由于同时期突变细胞的这些蛋白条带含量没什么变化,推测这些条带的变化与gp150分子有密切关系;同时野生型细胞还增加了两条10~12kD蛋白条带,这些蛋白可能与gp150分子一样在发育中有表达的时间性和空间性,且与细胞信号传递有密切关系. 展开更多
关键词 盘基网柄菌 膜蛋白 发育
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KAx-3和AK127细胞发育期间的骨架蛋白组分比较研究
16
作者 侯连生 付卓敏 《华东师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期73-77,共5页
采用生化抽提骨架蛋白和 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法比较盘基网柄菌 AK127细胞和 KAx-3细胞骨架蛋白的结果显示,各发育时期的 KAx-3和 AK127细胞骨架蛋白在含量和组分方面存在一定的差异.在整个发育阶段两种类型细胞共有的蛋白组分... 采用生化抽提骨架蛋白和 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法比较盘基网柄菌 AK127细胞和 KAx-3细胞骨架蛋白的结果显示,各发育时期的 KAx-3和 AK127细胞骨架蛋白在含量和组分方面存在一定的差异.在整个发育阶段两种类型细胞共有的蛋白组分是103.4 kD、49.6 kD、 44.2 kD、30.8 kD、19.8 kD 和13.5 kD 条带,其中44.2 kD 和30.8 kD 是最稳定的细胞骨架成分,并不因 AK127细胞缺失 gp150分子而有所改变.它们与其他骨架蛋白组分一起为细胞提供有力的支持,保证发育的顺利进行.差别最为明显的蛋白条带是87.2 kD、68.2 kD 和40.7 kD 蛋白,由于同时期的突变型细胞不能显示这些蛋白条带;说明这些条带是发育所需的蛋白.值得注意的是突变型细胞也出现一条特征性的21.1 kD 的蛋白条带.分析认为这些变化一方面与盘基网柄菌发育过程有关,另一方面与突变细胞缺乏 gp150分子有密切关系. 展开更多
关键词 盘基网柄菌 细胞骨架 发育
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盘基网柄菌细胞发育中gp150分子与凋亡蛋白作用分析 被引量:2
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作者 张树任 施佳乐 +2 位作者 刘伟 陈能星 侯连生 《华东师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期110-115,共6页
用Percoll密度梯度技术分离和收集盘基网柄菌前柄和前孢子细胞,Western blot分析gp150分子和胱天蛋白酶在前孢子细胞和前柄细胞两种类型细胞中的表达情况.结果显示:只能在前柄细胞中检测到gp150蛋白条带,并随细胞发育蛋白的量逐渐增加,... 用Percoll密度梯度技术分离和收集盘基网柄菌前柄和前孢子细胞,Western blot分析gp150分子和胱天蛋白酶在前孢子细胞和前柄细胞两种类型细胞中的表达情况.结果显示:只能在前柄细胞中检测到gp150蛋白条带,并随细胞发育蛋白的量逐渐增加,提示gp150蛋白的表达量与发育时间,前柄细胞分化有密切关系;在前柄细胞中能检测到31.5kD和37.5kD分子量大小的凋亡蛋白,且蛋白量也是随发育时间有所增加,在两种类型细胞中都可检测38.2kD的凋亡蛋白.这些数据表明盘基网柄菌细胞凋亡过程中有类似Caspase-3的蛋白表达,它们的存在与细胞凋亡存在密切关系;gp150分子的表达与胱天蛋白酶的激活可能存在一定关系. 展开更多
关键词 盘基网柄菌 凋亡 gp150 胱天蛋白酶
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聚氨酯泡沫半固定化培养盘基网柄菌 被引量:3
18
作者 梁兴超 卢英华 +1 位作者 陈杰 徐志南 《生物加工过程》 CAS CSCD 2007年第2期52-56,共5页
研究了聚氨酯泡沫应用于固定化盘基网柄菌的可行性,发现以简单处理过的聚氨酯泡沫为载体,能够高效实现盘基网柄菌的固定化培养。考察了载体粒径大小、载体量和摇床转速等对固定化培养的影响,在优化的培养条件和固定化条件下,盘基网柄菌... 研究了聚氨酯泡沫应用于固定化盘基网柄菌的可行性,发现以简单处理过的聚氨酯泡沫为载体,能够高效实现盘基网柄菌的固定化培养。考察了载体粒径大小、载体量和摇床转速等对固定化培养的影响,在优化的培养条件和固定化条件下,盘基网柄菌的最大细胞密度是悬浮培养的2-4倍。 展开更多
关键词 盘基网柄菌 聚氨酯泡沫 固定化培养
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微胶囊固定化培养重组盘基网柄菌提高人类可溶性Fas配体的表达 被引量:2
19
作者 徐宝多 徐志南 +4 位作者 何宁 王颖 陈杰 李清彪 卢英华 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第6期989-996,共8页
首先研究了应用于液芯羧甲基纤维素钠-海藻酸钙(CMC-ALG)微胶囊制备中的各种化学组分对重组盘基网柄菌生长的影响,然后考察不同组分浓度制备而成的各种CMC-ALG微胶囊内重组盘基网柄菌的生长情况,从而得到较适的微胶囊制备的组分配比(CMC... 首先研究了应用于液芯羧甲基纤维素钠-海藻酸钙(CMC-ALG)微胶囊制备中的各种化学组分对重组盘基网柄菌生长的影响,然后考察不同组分浓度制备而成的各种CMC-ALG微胶囊内重组盘基网柄菌的生长情况,从而得到较适的微胶囊制备的组分配比(CMC12g·L-1,SA8g·L-1,CaCl2100g·L-1)。结果表明,在以上较适条件下制备的微胶囊内重组盘基网柄菌的生长得到了极大的改善,最大的细胞密度比游离培养时提高了4倍,达到了8.0×107mL-1;相应的人类可溶性Fas配体(FasL)的表达水平也提高了1.5倍,达到了315μg·L-1。最后,开展了微胶囊化重组盘基网柄菌的二次重复发酵FasL的研究,结果表明,经过二次重复批次培养,最大细胞密度可达到1.24×108mL-1,为游离培养的8~10倍,而且FasL的表达水平还能维持高水平(280μg·L-1),为游离培养时的2倍。 展开更多
关键词 CMC-ALG微胶囊 微囊化培养 盘基网柄菌 人类可溶性Fas配体
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盘基网柄菌allC的克隆、表达和多克隆抗体的制备 被引量:2
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作者 陈能星 魏晓静 +1 位作者 刘伟 侯连生 《华东师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期77-84,共8页
运用RT-PCR技术从盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)总mRNA中克隆到了尿囊酸酶基因(allC),该基因编码区开放读框长1 100bp,编码的蛋白约42kD.由于是在野生型和突变型细胞中差异表达的片段,表明该基因在盘基网柄菌多细胞发育中起到... 运用RT-PCR技术从盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)总mRNA中克隆到了尿囊酸酶基因(allC),该基因编码区开放读框长1 100bp,编码的蛋白约42kD.由于是在野生型和突变型细胞中差异表达的片段,表明该基因在盘基网柄菌多细胞发育中起到重要作用,因此将allC克隆入融合表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达带有6个组氨酸标签的尿囊酸酶(ALC)融合蛋白,经镍柱亲和层析,获得了电泳纯蛋白.用纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.ELISA测得制备的抗ALC蛋白的多克隆抗体的效价可达1∶64 000,Western Blotting检测证明该抗体有较强的针对ALC蛋白的专一性.这些数据表明重组质粒表达的ALC融合蛋白具有良好的抗原性,制备ALC的多克隆抗体有良好特异性和效价,能够满足针对ALC免疫印迹和细胞内定位检测等实验要求,为深入研究ALC蛋白在盘基网柄菌多细胞发育的功能作用提供了有力工具. 展开更多
关键词 盘基网柄菌 尿囊酸酶 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
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