代谢组学联合网络药理学分析香蜂草苷缓解非酒精性脂肪肝大鼠的作用机制

目的:利用非靶向代谢组学联合网络药理学研究香蜂草苷改善非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)脂代谢的作用机制。方法:将大鼠随机分为正常组、模型组和香蜂草苷组。模型组与香蜂草苷组给予高脂饮食(HFD)8周诱导NAFLD动物模型。灌胃给药,连续8周。采用苏木精—伊红(HE)、油红染色观察细胞形态和脂质堆积情况。用高分辨液相色谱—质谱(UPLCQTOF/MS)对大鼠肝组织进行代谢组学检测,并利用KEGG数据库分析代谢通路。采用网络药理学对香蜂草苷与NAFLD共同作用的靶点进行预测,并联合代谢组学进一步分析潜在的靶点。结果:香蜂草苷明显减轻大鼠肝损伤、抑制肝脏脂质的过度沉积;正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)分析显示组间的代谢物有显著差异,火山图显示正常组与模型组存在404个差异代谢物(上调293个,下调111个),模型组与香蜂草苷组存在147个差异代谢物(上调95个,下调52个);代谢通路分析显示差异代谢物主要富集于鞘脂代谢通路;网络药理学筛选药物与疾病共同靶点共139个,联合代谢组学和网络药理学分析显示,香蜂草苷可通过调节TNF、Bcl2、Mapk8、Pik3ca、Akt1、mTOR、Gsk3β来调控鞘脂代谢通路和胰岛素抵抗。结论:香蜂草苷能够通过鞘脂代谢通路和胰岛素抵抗调节脂质代谢紊乱从而发挥治疗NAFLD的作用。

基于代谢组学分析香蜂草苷抗非酒精性脂肪肝病的作用机制

目的:基于非靶向代谢组学和生物信息学方法研究香蜂草苷抗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的作用机制。方法:将18只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和香蜂草苷组(3 mg/kg),每组6只。使用高脂饲料喂养8周诱导建立NAFLD大鼠模型。香蜂草苷组每天灌胃给予香蜂草苷治疗8周,正常对照组和模型组灌胃给予等量生理盐水。采用苏木精—伊红(HE)染色和油红O染色观察各组大鼠肝组织病理学变化。使用超高效液相—质谱(UPLC-Xevo G2-XS QTof)检测大鼠肝匀浆代谢物,以P<0.05和变化倍数(|FC|)>2为标准筛选差异代谢物,进行代谢物分类富集分析;以总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、游离脂肪酸(FFA)和胰岛素抵抗(IR)等NAFLD相关指标为疾病表型,构建加权代谢共表达网络分析(WMCNA),筛选出与NAFLD相关的核心代谢物。取差异代谢物和核心代谢物交集进行生物标志物分析。结果:与模型组比较,香蜂草苷组大鼠体重降低,肝脏脂质沉积减少,肝脏病理损伤减轻。代谢组学结果表明,共筛选出差异代谢物126个,其中上调50个,下调76个(香蜂草苷组vs.模型组)。WMCNA筛选出核心代谢物189个,主要为磺酸及其衍生物、脂肪酸化合物。取差异代谢物和核心代谢物交集在Metaboanlyst在线数据库分析可得25个潜在生物标志物,其中脂酰类化合物Isopropylmalic acid(P<0.05,FC=-2.81)和脂肪酸生成相关化合物Alpha-Linoleoylcholine(P<0.05,FC=-1.39)、3-trans,5-cis-Octadienoyl-CoA(P<0.05,FC=-1.78)变化差异具有统计学意义。结论:香蜂草苷可能通过调节Isopropylmalic acid、Alpha-Linoleoylcholine和3-trans,5-cis-Octadienoyl-CoA的代谢水平,起到改善NAFLD的作用,为缓解脂质代谢紊乱提供前期实验基础。

Didymin attenuates doxorubicin-induced cardiotoxicity by inhibiting oxidative stress

Objective:This study was designed to investigate the protective effects of didymin(Did)on doxorubicin(DOX)-induced cardiotoxicity.Methods:After pretreatment with Did(2,4,8 mg/kg intraperitoneal i.p.)for 7 d,the male C57 mice were injected with single dose of DOX(20 mg/kg i.p.).The cardioprotective effect of Did was observed on the 7th day after DOX treatment.Results:DOX delayed body growth and caused cardiac tissue injury,oxidative stress,and mitochondrial dysfunction.Similar experiments in H9C2 cardiomyocytes showed that DOX reduced cell viability,increased generation of reactive oxygen species(ROS)and fragmentation of DNA,decreased mitochondrial membrane potential,and induced cardiomyocyte apoptosis.However,all of these adverse effects were suppressed by Did pretreatment.Did increased protein expression of glutamate-L-cysteine ligase catalytic subunit(GCL),heme oxygenase 1(HO-1),and nuclear factor erythroid 2-related factor 2(Nrf2).Besides,Did also induced activation of PI3K/AKT.Conclusion:These findings indicated Did prevented DOX-induced cardiac injury and apoptosis via activating PI3K/AKT/Nrf2 signaling pathway.

青皮的高效液相特征图谱和5个黄酮类成分含量测定

目的采用高效液相色谱法建立青皮的特征图谱,并测定其中芸香柚皮苷、橙皮苷、香蜂草苷、川陈皮素、橘皮素的含量。方法采用Agilent TC-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈为流动相A,0.1%甲酸水溶液为流动相B,梯度洗脱(0~10 min,15%A;10~15 min,15%~20%A;15~20 min,20%~25%A;20~30 min,25%~40%A);流速1.0 mL·min^(-1),特征图谱检测波长为295 nm,含量测定检测波长为283 nm和330nm,柱温30℃。结果建立了青皮特征图谱,35 min内青皮的主要色谱峰能够达到完全分离,同时指认了5个特征峰,均为黄酮类成分。5个黄酮类成分芸香柚皮苷、橙皮苷、香蜂草苷、川陈皮素、橘皮素在0.56~22.4、3.59~143.5、0.21~8.4、0.09~3.62、0.06~2.58μg·mL^(-1)与峰面积线性关系良好,平均回收率(n=6)分别为101.12%(RSD=2.7%)、100.41%(RSD=0.91%)、99.11%(RSD=1.4%)、100.32%(RSD=2.6%)、98.62%(RSD=2.4%)。24批青皮中5个成分含量分别为0.162%~2.44%、9.95%~18.0%、0.130%~0.507%、0.029%~0.884%、0.016%~0.529%。结论该方法操作简单,重复性好,并能同时测定5个黄酮类成分含量,可为青皮的质量标准研究提供参考。

高效液相色谱法测定断血流中香蜂草苷的含量

[目的]建立测定断血流中的香蜂草苷含量的方法,考察不同产地断血流中香蜂草苷的含量。[方法]采用Zorbax Eclipse XDB C-18柱（4.6 mm×150 mm,5.0μm）,柱温25℃,流动相为甲醇-水（48∶52）,流速0.8 ml/min,检测波长285 nm。建立了高效液相色谱法测定断血流中香蜂草苷的含量。[结果]香蜂草苷在20.84~104.20μg/ml的范围内线性关系良好（r=0.999 4）,平均加样回收率（n=9）为98.63%（RSD=2.57%）。[结论]所建方法快捷简便、准确、重复性好,可作为断血流中香蜂草苷含量检测的方法。

粗壮女贞水提物对氧化三甲胺诱导的血管内皮细胞炎症保护作用及机制

目的探究粗壮女贞(Ligustrum robustum,LR)水提物对氧化三甲胺(trimethylamine N-oxide,TMAO)诱导的血管内皮细胞炎症反应的抑制作用及机制。方法采用TMAO诱导EA.hy926细胞炎症反应,设置对照组、TMAO组(800μmol/L TMAO)、LR低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0 mg/m L)、香蜂草苷低、中、高剂量组(20、40、60μmol/L)和芦丁低、中、高剂量组(20、40、60μmol/L)。酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent sorbent assay,ELISA)测定各组细胞培养上清液中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的分泌量。实时荧光定量聚合酶链式反应(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)法和western blot法检测炎症通路相关基因和蛋白质表达水平;间接免疫荧光法观察核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的核定位。结果TMAO诱导后EA.hy926细胞IL-6、IL-8、TNF-α、ICAM-1分泌量增加(P<0.05、P<0.01),相较于TMAO组,除LR水提物低剂量对IL-6、TNF-α及LR水提物高剂量对ICAM-1分泌量无影响外(P>0.05),LR水提物预处理可下调IL-6、IL-8、TNF-α、ICAM-1分泌量(P<0.05、P<0.01),香蜂草苷和芦丁预处理可下调TNF-α、ICAM-1分泌量(P<0.05)。LR水提物、香蜂草苷和芦丁预处理可使p38、Nf-κb mRNA水平降低(P<0.05),p38、NF-κB p65蛋白磷酸化比例降低(P<0.05),NF-κB核定位减少。结论TMAO可诱导血管内皮细胞炎症反应,LR水提物、香蜂草苷和芦丁可以通过抑制EA.hy926细胞p38/NF-κB通路的激活达到抗炎作用。

香蜂草苷诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡及其作用机制

为了研究香蜂草苷对肝癌细胞株HepG2凋亡的影响,并探讨其作用机制,利用MTT法检测香蜂草苷对HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒检测caspase-3和caspase-9活性,Western blot检测Bcl-2、Bax、RKIP、ERK、p-ERK蛋白表达。实验结果表明香蜂草苷可抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与提高caspase-3和caspase-9活性,上调Bax和下调Bcl-2表达有关。此外,我们的研究显示香蜂草苷诱导HepG2细胞凋亡可能还与其增加RKIP表达,抑制ERK/MAPK信号通路有关。

香蜂草苷对脂多糖联合D-氨基半乳糖诱导C57BL/6J小鼠急性肝损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨香蜂草苷对脂多糖(LPS)联合D-氨基半乳糖(D-Gal)致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。方法:将90只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、香蜂草苷(0.8 mg/kg)对照组、模型组、阳性对照(175 mg/kg联苯双酯)组及香蜂草苷低、高剂量(0.4 mg/kg、0.8 mg/kg)组。连续给药14 d后,除正常对照组和香蜂草苷对照组外,其余各组小鼠均腹腔注射LPS和D-Gal建立急性肝损伤模型。检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,苏木精-伊红(HE)染色法观察肝脏病理组织学改变,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blotting法检测NF-κB p65、磷酸化(p-)IKKα/β、IKKα/β蛋白表达。结果:与模型组比较,香蜂草苷低、高剂量组血清ALT、AST活性和MDA含量以及IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著降低,SOD活性显著升高(P<0.05);肝脏体积明显减小,充血明显减轻,肝细胞坏死明显改善。模型组p-IKKα/β、NF-κB p65表达较正常对照组显著上调,香蜂草苷低、高剂量组p-IKKα/β、NF-κB p65蛋白表达较模型组显著下调(P<0.05)。结论:香蜂草苷能显著改善LPS/D-Gal诱导的小鼠急性肝损伤,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。

薄荷茎、叶中黄酮类成分在不同采收期的含量差异性研究

为考察不同采收期薄荷茎、叶中有效成分的动态变化规律,探讨薄荷药材的适宜采收期,该研究以橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷、蒙花苷为黄酮类指标性成分,采用已建立的薄荷中黄酮类成分含量一测多评法,测定了3个产地不同采收期的薄荷中4种黄酮苷类成分分别在茎、叶样品中的含量,并运用统计图和主成分分析法对这些数据进行统计整理和综合评价。这4种成分在3个产地不同采收期的薄荷叶中的含量普遍高于茎,而同一产地不同采收期薄荷中各成分含量呈动态变化;就江苏产区而言,4月中旬、9月中旬以及10月下旬采收的薄荷中4种成分综合评价得分较高。结合药材产量与有效成分含量,江苏产区薄荷最适合的采收期应为9月中旬与10月下旬,与当地传统采收期基本一致。

薄荷酚类对照提取物HPLC含量测定研究及其在薄荷药材质量控制中的应用

目的:制备薄荷酚类对照提取物,探讨选择对照提取物替代单体成分对照品对薄荷药材质量控制的可行性。方法:采用色谱分离技术制备薄荷酚类对照提取物,建立以对照提取物为对照的薄荷药材HPLC含量测定方法,使用C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.5%甲酸水溶液(B),梯度洗脱(0~15 min,10%A→21%A;15~20 min,21%A→24%A;20~23 min,24%A→25%A;23~29 min,25%A→26%A;29~40 min,26%A→28%A;40~50 min,28%A→30%A;50~60 min,30%A),流速1 m L·min^(-1),检测波长296 nm;同时以橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷、蒙花苷及迷迭香酸对照品为对照,对不同批次的酚类对照提取物进行标定,并分别采用对照提取物法和对照品法对薄荷药材进行HPLC含量测定。结果:以对照提取物为对照,橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷、蒙花苷、迷迭香酸的量分别在0.003 45~0.345、0.007 52~0.752、0.001 59~0.159、0.006 74~0.674、0.006 19~0.619μg范围内线性关系良好;10批对照提取物中上述5个指标性成分的含量分别为5.35%~8.84%、17.09%~25.44%、3.23%~5.41%、12.87%~20.31%、10.72%~20.09%,且不同方法的薄荷药材HPLC含量测得结果基本一致。结论:薄荷酚类对照提取物可用于薄荷药材质量控制,替代单体对照品对药材进行质量控制。

不同采收期薄荷中4个黄酮苷的含量测定

目的：建立高效液相色谱同时测定薄荷中橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷、蒙花苷4个黄酮苷类化合物含量的方法，并测定不同采收期4个化合物的含量，观察其动态变化规律。方法：采用Sunfire C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），柱温30 ℃，流动相甲醇（A）-水（B），梯度洗脱（0~10 min，40%A→60%A；10~15 min，60%A→70%A），流速1 mL·min-1，检测波长285 nm。结果：橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷及蒙花苷4个成分均达到基线分离，其分别在0.00788~0.788、0.00884~0.884、0.0064~0.64、0.00736~0.736 μg范围内线性关系良好（r 〉0.9996）；平均加样回收率（n=6）分别为100.1%、99.9%、99.8%、99.7%。橙皮苷、香蜂草苷、蒙花苷的含量在7月下旬、9月中旬较高，香叶木苷则在7月上旬、9月下旬较高。结论：含量测定方法操作简单、快速、重复性好，为薄荷药材的质量控制奠定了基础。4个黄酮苷含量随采收期不同而异，其总量最大值出现在7月上旬和9月中旬。

HPLC-MS/MS法同时测定薄荷药材中4种黄酮苷的含量

目的建立HPLC-MS/MS同时测定薄荷药材中橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷、蒙花苷4种黄酮苷含量的方法。方法采用Inertsil ODS-3色谱柱(4.6×150 mm,5μm),柱温30℃,流动相为甲醇-0.1%甲酸水,以0.5 m L/min的流速梯度洗脱,进样量2μL;质谱条件:采用电喷雾离子源进行正离子模式检测,多反应监测模式(MRM)用于定量测定。结果薄荷药材中4种成分橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷和蒙花苷能完全分离;峰面积与浓度呈良好的线性关系。平均回收率(n=6)分别为99.40%、98.63%、99.08%、98.62%,RSD分别为2.5%、2.7%、2.6%、2.4%。结论该方法简便、快速、准确、专属性高,适用于薄荷药材中橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷、蒙花苷含量的同时测定。