铬对糖尿病大鼠骨骼肌组织基因表达的调控作用

目的 研究铬对糖尿病大鼠代谢相关基因表达的调控作用。方法 雄性Wistar大鼠随机分成 3组 :正常对照组、糖尿病对照组、糖尿病补铬组。糖尿病补铬组每日以 2 0 0 μg kgbw的铬连续灌胃 6 0天。采用mRNA差异显示技术、基因片段的克隆、测序、同源性分析等观察各组大鼠之间骨骼肌中基因表达的变化。结果 分离到糖尿病补铬组与糖尿病对照组之间出现明显差异的 4 0 0bp以上的cDNA片段 11条 ,其中在糖尿病补铬组中高表达的cDNA片段 4条 ;在糖尿病对照组中高表达的cDNA片段 7条。同源性比较结果显示Cr 3与GLUT4 (葡萄糖转运体 4 )的同源性为 98% ;Cr 5与IRS 1(胰岛素受体底物 1)的同源性为 10 0 % ,RT PCR验证结果显示GLUT4表达量在糖尿病补铬组高于糖尿病对照组。结论 铬可诱导糖尿病大鼠骨骼肌中GLUT4mRMA的表达 ,这可能是铬改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。

前脑缺血大鼠肠、肝组织CD14mRNA表达与多器官功能障碍综合征的关系研究

目的 探讨急性前脑缺血后肠、肝组织 CD14 m RNA的表达变化规律 ,分析其与多器官功能障碍综合征 (MODS)的关系。方法 采用阻断双侧颈总动脉 3 0 min的方法建立急性前脑缺血模型 ,54只大鼠随机分为正常对照组、假手术组及缺血后 12 h、2 4h、3 6h、48h、72 h 5个亚组 ,应用原位杂交技术检测组织 CD14的基因表达。结果 (1)大鼠急性前脑缺血后 12 h肠、肝组织 CD14 m RNA表达升高 ,2 4h～ 3 6h达高峰 ,与正常对照组和假手术组比较有显著性差异 (P<0 .0 0 1) ,48h后下降 ;(2 )缺血后各时相点动物肠、肝组织均有不同程度的损害 ,但以 2 4h到48h时脏器病理变化较显著 ,与 CD14的基因表达峰值一致 ;(3 )缺血后全身炎症反应综合征 (SIRS)发生率为10 0 % ,MODS发生率为 53 .1%。结论 通过制作急性前脑缺血大鼠成功建立了 MODS的动物模型 ;缺血后肠道粘膜和肝组织的病理改变 ,可促使肠道内毒素易位和内毒素血症的发生 ;内毒素诱发脑缺血后

HBV pre-X转染HepG2细胞后差异表达基因的筛选

目的:检测HBV pre-X在真核表达载体pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X转染的HepG2细胞中的表达,并筛选其中的代谢相关差异表达基因.方法:将构建的真核表达载体pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X转染HepG2细胞后蛋白免疫印迹检测;将pcDNA3.1-myc-his-HBV pre-X和pcDNA3.1-myc-his载体分别转染HepG2细胞后,提取mRNA后逆转录为cDNA,运用基因表达谱芯片技术分析差异表达基因.结果:构建的真核表达载体经ApaⅠ、BstⅪ双酶切鉴定,转染HepG2细胞后HBV pre-X表达经蛋白免疫印迹证实;经基因表达谱芯片分析发现,其中基因表达水平显著上调和下调的分别是200个和62个.结论:筛选HBV pre-X转染HepG2细胞后的代谢相关差异表达基因,从而为乙型肝炎病毒合并糖尿病、脂肪肝等代谢性疾病的分子生物学机制的研究提供了重要依据.

芯片技术研究1ncRNA在非IgA系膜增生性肾小球肾炎中的表达

目的通过微阵列芯片技术研究非IgA系膜增生肾小球肾炎（non-IgA mesangial proliferative glomerulonephritis，non-IgA MsPGN）组（观察组）及对照组中信使RNA（Message RNA，mRNA）和长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）的差异性表达，从而探索lncRNA在non-IgA MsPGN发病机制中潜在的作用。方法通过单纯随机抽样分别选取4例non-IgAMsPGN患者和2例未患肾病者作为观察组和对照组，分别收集2组的肾皮质组织，提取并鉴定总RNA，然后制备双链cDNA，单色荧光标记后用于芯片杂交。通过Gene Ontology，Pathway分析及mRNA与ln-cRNA基因座位置关联分析，找出与non-IgAMsPGN密切相关的lncRNA。最后，采用半定量逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）对部分基因的芯片检测结果进行检测，验证基因芯片结果的可靠性。结果经过折叠倍率过滤（fold-change filtering），筛选出有统计学差异（P〈O．05）表达的mRNA转录本4317个与lncRNA转录本3502个。经分析，发现了5个在non-IgAMsPGN发病机制中有着重要潜在作用的lncRNA：AF1180924（相邻编码基因FGG），AK092233（相邻编码基因COL18A1），AKl30579（相邻编码基因CREBBP），AK023598（相邻编码基因LEPR），AK055915（相邻编码基因CDC42EP3），为全面揭示nonqgAMsPGN发病机制提供了重要依据。结论某些lncRNA可潜在调控相关基因，在non-IgAMsPGN的发病机制及发展过程中起重要作用。

EXISTENCE OF POSITIVE SOLUTIONS TO BOUNDARY VALUE PROBLEM OF NONLINEAR FRACTIONAL DIFFERENTIAL EQUATION

In this paper, using the property of the corresponding Green’s function and fixed point index theory, some sufficient conditions for the multiplicity and nonexistence of positive solutions to a class of nonlinear fractional boundary value problem are obtained. Three examples are given to show the effectiveness of our results.

Identification of over-expressed genes in human renal cell carcinoma by combining suppression subtractive hybridi-zation and cDNA library array

To isolate the over-expressed genes in human renal cell carcinoma (RCC) and analyze its molecular basis of carcinogenesis, we used the mRNA from human RCC tissues as tester and that from the matched normal kidney tissues as driver to construct the suppression subtractive hybridization library. 379 of the subtracted clones were arrayed onto a nylon mem-brane and the over-expressed genes were then screened by hybridizing the filter with radioac-tively labeled cDNA from RCC and matched normal kidney tissues. 67 clones over-expressed in RCC by a factor of 6 or more were sequenced and its identities were analyzed in GenBank da-tabase. 4 clones were previously unknown fragments and 2 clones represent KIAA genes. The rest clones were the known genes and some of them were RCC-related, including vascular en-dothelial growth factor, vimentin and tissue factor. Most of the known genes were the RCC-related genes previously unknown, including zinc ribbon domain-containing 1 protein (ZNRD1), pituitary tumor transforming gene1 (PTTG1). Northern blot and semi-quantitative RT-PCR confirmed that the mRNA levels of the 3 novel fragments and 1 KIAA and 3 known genes were significantly higher in RCC than in the matched normal kidney tissues. Immunohis-tochemical and Western blot analysis for PTTG1 and ZNRD1 revealed increased protein level in RCC. The over-expressed genes in RCC are the potential molecular targets for diagnosis and therapy and it is very important to understand the molecular mechanism of RCC through the profile of over-expressed genes.

基于 RNA-seq 技术的黄连水煎液对多耐药尿道致病性大肠埃希菌的转录组学研究

目的 探讨中药黄连抑制多耐药尿道致病性大肠埃希菌作用的分子机制. 方法 应用RNA-seq技术分析黄连对尿道致病性大肠埃希菌（ uropathogenic Escherichia coli,UPEC）临床分离株（ NB8株）转录组的影响. 琼脂稀释法测定黄连水煎液对UPEC临床分离株（ NB8株）的最低抑菌浓度（ MIC） ,检测黄连水煎液对病原菌生长曲线的影响;用10倍MIC的黄连水煎液作用于UPEC NB8株菌30 min后,提取UPEC NB8株菌总RNA,去除rRNA,反转录合成cDNA,在HiSeq2000测序平台上进行转录组测序,通过分析软件（tophat＋cufflinks）构建转录本并计算表达量,并将得到的表达谱进行差异表达、GO功能富集以及KEGG代谢通路分析,另使用生理盐水处理UPEC NB8株菌为阴性对照.结果 黄连水煎液对UPEC NB8株的MIC为12.5 mg/ml. UPEC NB8株菌黄连处理组有3665个基因表达,生理盐水对照组有3430个基因表达,差异表达基因共有1428个,其中上调基因921个、下调基因507个,差异基因主要富集在结合与催化模块中,细胞黏附、凋亡及多细胞过程中的基因上调,参与酶活性调节的基因下调;KEGG代谢通路富集分析发现,脂多糖合成通路相关基因呈显著上调、与DNA复制相关的修复聚合酶Ⅲ呈现较显著的上调趋势,脂肪酸代谢、组氨酸代谢、硫胺代谢及叶酸代谢、核糖体合成的铁载体组呈现整体下调趋势. 结论 获得了黄连水煎液作用于UPEC的表达谱,阐述了黄连抑制UPEC生长的分子机制,主要机制在于破坏UPEC的细胞壁、影响DNA的复制以及蛋白质的转录和翻译等,说明黄连水煎液对于UPEC的抑制是多方面多层次的.

广泛性焦虑症外周血单核细胞长链非编码RNA异常表达及抗焦虑治疗对其表达水平的影响

目的 探讨广泛性焦虑症(generalized anxiety disorder,GAD)患者外周血单核细胞长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)差异表达及治疗前后lncRNA表达水平的变化.方法 对GAD患者(患者组,n=80)和正常对照组( n=40)外周血单核细胞基因芯片筛查出的10种差异表达lncRNAs进行qRT-PCR验证;对26例GAD患者治疗前、治疗6周分别检测lncRNA表达水平和施测汉密尔顿焦虑量表(HAMA).结果 芯片筛查发现差异表达的10种 lncRNA经 PCR验证有6种[lncRNA4(7. 44± 2. 26)、lncRNA5 ( 6. 83 ± 2. 28)、 lncRNA6 ( 8. 09 ± 2. 30)、 lncRNA8 ( 9. 10 ± 2. 36)、lncRNA9(7. 66±2. 12)、lncRNA10(7. 34± 2. 12)]显著上调( Z=-3. 022^-1. 996,P<0. 05或0. 01).lncRNA4(9. 73 ± 2. 53)、lncRNA6 ( 9. 91 ± 2. 01)、 lncRNA8 ( 10. 48 ± 1. 68)、 lncRNA9 ( 9. 02 ± 1. 58)、lncRNA10(9. 04±2. 08)在治疗6 周后表达水平显著低于治疗前(Z=-3. 180^-2. 530,P<0. 05 或0. 01).经抗焦虑治疗6周后,GAD患者的焦虑总分[(11. 19±8. 37)分]、躯体性焦虑因子分[(5. 31± 4. 76)分]和精神性焦虑因子分[(5. 88±3. 82)分]均显著低于治疗前(t=5. 502~5. 971,P<0. 01).抗焦虑药治疗前后lncRNA4、lncRNA6、lncRNA8、lncRNA9、lncRNA10表达变化量与HAMA总分、精神性焦虑分值变化量显著正相关(r=0. 39~0. 69,P<0. 05或0. 01);lncRNA6、lncRNA8、lncRNA10表达变化量与躯体性焦虑分值变化量显著正相关(r=0. 44~0. 59,P<0. 01).结论 lncRNA4、lncRNA5、lncRNA6、lncRNA8、lncRNA9、lncRNA10在广泛性焦虑症患者中表达上调,抗焦虑治疗逆转lncRNA的表达水平,并与焦虑症改善程度密切关联.