E-test法和Rosco纸片法检测申克孢子丝菌对伊曲康唑和氟康唑的敏感性试验

目的探讨申克孢子丝菌的体外抗真菌药敏试验E-test法和Rosco纸片法的可比性,观察申克孢子丝菌对伊曲康唑和氟康唑的敏感性。方法采用临床实验室标准化协会(CLSI)颁布的M27-P方案中的E-test法检测和Rosco纸片法检测申克孢子丝菌在菌丝相时对伊曲康唑、氟康唑的MIC值。结果采用E-test法和Rosco纸片法检测20株临床分离株25℃菌丝相时,伊曲康唑的MIC值范围分别为:0.012～2.0μg/mL,14～29mm,氟康唑的MIC值范围分别为:>256μg/mL,0mm。结论体外抗真菌药敏试验E-test法和Rosco纸片法有较好的一致性和重复性。申克孢子丝菌25℃菌丝相时对伊曲康唑、氟康唑的敏感性存在差异,对伊曲康唑的敏感性高于氟康唑。

不同药敏试验方法检测耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌对替加环素敏感性的效能评价

目的 评价4种药敏试验检测耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌对替加环素敏感性的准确性,为临床微生物实验室探寻一种简便易行、结果可靠的替加环素敏感性检测方法。方法 收集2020年8月至2022年3月临床分离的非重复耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌211株(肺炎克雷伯菌96株、大肠埃希菌48株、鲍曼不动杆菌62株和阴沟肠杆菌5株),采用仪器法、E-test法、纸片扩散(KB)1法(加复敏液)和KB2法(不加复敏液)检测细菌对替加环素的敏感性,分析其与肉汤微量稀释法(BMD法,参考方法)结果间的差异。结果 E-test法和KB1法分别检测4种细菌的药敏结果与BMD法比较差异无统计学意义(P>0.05),一致性好,基本一致率(EA)、分类一致率(CA)、微小误差(mE)和重大误差(ME)均在可接受范围,未发现非常重大误差(VME)。仪器法检测大肠埃希菌和阴沟肠杆菌的药敏结果与BMD法一致性较好,而检测肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌的药敏结果则一致性较差,ME超出可接受范围,尤其检测鲍曼不动杆菌的药敏结果还同时存在mE偏高(11.3%)。KB2法除大肠埃希菌外,检测其余菌种的药敏结果与BMD的一致性都不理想。结论 E-test和KB1法能够较可靠地检测所研究细菌对替加环素的敏感性。对于肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌,仪器法检测结果接近折点的菌株可推荐使用E-test法复查,这对于当地细菌感染治疗具有一定参考价值。

麝香草酚对食品常见污染菌的抑菌作用

为阐明麝香草酚的抑菌作用,采用滤纸片法、牛津杯法和扩散法(打孔法)等体外抑菌实验对食品中常见的10种污染菌进行抑菌作用研究,并测定麝香草酚对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热乳酸链球菌、异常汉逊氏酵母、酿酒酵母、黑曲霉、黄曲霉的最低抑菌质量浓度。结果表明:麝香草酚抑菌谱广,对食品中常见污染菌有一定抑制作用,其中对细菌的抑菌效果最好。麝香草酚对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌的最低抑菌质量浓度分别为10、20、20μg/mL。

细菌药物敏感性实验方法研究进展

致病菌的耐药性已成为世界范围内的公共卫生和安全问题,如何对致病菌的耐药性进行准确快速的检测是许多微生物科研人员和医疗工作者共同面临的难题。根据近年国内外有关研究资料与报道,对于细菌耐药性的检测和分析主要通过对细菌进行药物敏感性实验来执行。目前用于细菌药敏性实验的方法主要包括:肉汤稀释法、琼脂稀释法、K-B纸片法和E-test实验等。文中就以上几种细菌药敏性实验方法的原理、步骤及优缺点进行了概述,并对各种实验方法的应用进行了举例分析。

1998-2000年沙门菌属耐药性变迁

目的 :调查 1998— 2 0 0 0年伤寒、副伤寒和非伤寒沙门菌耐药性的变迁。方法 :纸片扩散法 (K B法 ) ,依照美国临床实验室标准化委员会制定的 2 0 0 0年版的标准。结果 :1.1998— 2 0 0 0年伤寒和副伤寒沙门菌 2 37株 (其中伤寒沙门菌 191株 ,甲、乙、丙副伤寒沙门菌 46株 )对临床常用抗菌药的耐药性变化不大 ;而 12 2株非伤寒沙门菌则增长较快 ,其中对氨苄西林的耐药率从 1998年的 2 6 .6 %增加到 2 0 0 0年的 46 .3%,复方磺胺甲唑从 2 0 .0 %到 5 9.3%,环丙沙星从 10 .0 %到 2 9.6 %。2 0 0 0年氯霉素和四环素的耐药率分别为 31.5 %和 5 0 .0 %。 2 .在非伤寒沙门菌分离株中 ,肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为主要血清型。 3.此次分析中发现 3株多重耐药谱为ACTStCp的鼠伤寒沙门菌。 结论 :除复方磺胺甲唑外 ,伤寒、副伤寒沙门菌对临床常用抗菌药仍很敏感。非伤寒沙门菌对临床常用抗菌药耐药率逐渐增加 ,加强其耐药性监测是非常必要的。

头孢西丁扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌异质性耐药菌株的评价

目的:评价头孢西丁扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌异质性耐药菌株的可靠性和临床实用性。方法:将临床分离得到的葡萄球菌310株,按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准操作规程进行苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法实验,并以PCR检测葡萄球菌mecA基因为判断标准,比较4种方法的敏感性及特异性。结果:经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为57.1%(113/198),耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)为62.5%(70/112)。头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%,检测MRCNS敏感性为98.6%,特异性为100%。结论:头孢西丁纸片扩散法操作简便,结果可靠,可作为临床实验室检测耐甲氧西林葡萄球菌的常规方法。

宣木瓜粗提物抑菌作用的研究

为了研究宣木瓜粗提物的抑菌作用以及紫外光和温度对其抑菌作用的影响,以95%乙醇和蒸馏水作为溶剂,采用水浴振荡法对宣木瓜粗提物进行提取。采用平板打孔法测定宣木瓜不同粗提物对荧光假单胞菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和四联球菌的抑菌作用以及最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。结果表明,宣木瓜95%乙醇粗提物和蒸馏水粗提物对5种有害菌都有明显的抑制作用,而且95%乙醇粗提物的抑菌作用优于蒸馏水粗提物,两种粗提物均有较好的紫外光稳定性和热稳定性。

多重耐药鲍曼不动杆菌感染64例病原学特点、耐药情况及危险因素分析

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌感染的病原学特点、耐药性及其感染相关危险因素,为基层医院防控鲍曼不动杆菌的感染提供参考。方法统计分析2016年6月至2018年7月庐江县人民医院64例多重耐药鲍曼不动杆菌和70例一般鲍曼不动杆菌感染病人的基本信息、住院治疗情况、药敏资料等数据。结果 64例多重耐药鲍曼不动杆菌感染病人所患基础疾病主要为颅脑损伤及老年慢性疾病(心、肺、脑血管),恶性肿瘤也占一定比例;标本主要来源为痰液(占96.88%);病人分布科室按构成比从高到低排列依次为ICU、神经外科、呼吸内科;病人病原学标本耐药性监测从低到高依次为头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星,其他药物的耐药率均大于77.19%;危险因素分析显示:侵入性操作是多重耐药鲍曼不动杆菌感染发生的最主要危险因素。结论危重症及老年慢性病并发呼吸系统感染病人是多重耐药鲍曼不动杆菌感染的重点人群;耐药率高;侵袭性操作、昏迷以及广谱抗菌药物应用是多重耐药鲍曼不动杆菌感染的危险因素。

耐头孢西丁肠杆菌科细菌AmpC酶的检测及耐药性分析

目的：通过对耐头孢西丁肠杆菌科细菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检测及其耐药性分析,提示其主要耐药机制,指导临床合理用药.方法：采用氯唑西林增效试验测定AmpC酶,采用双纸片确诊试验测定ESBLs,并采用最小抑菌浓度法（MIC法）检测12种常用抗菌药物对这些菌株的体外抗菌活性.结果：64株受检菌中共检出高产AmpC酶菌29株,产ESBLs菌32株,阳性率分别为45.3%,50%.单产AmpC酶组对氨曲南、头孢曲松、哌拉西林、哌拉西林/三唑巴坦均存在不同程度的耐药（45.2%～68.5%）,其耐药率明显高于非产酶组,两者相比差异具有显著性（P＜0.05）.而单产AmpC酶组和非产酶组对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、环丙沙星、头孢唑林的耐药率均较高（57.7%～94.2%）;对阿米卡星、头孢吡肟、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率均较低（0%～34.6%）,两者相比差异无显著性（P＞0.05）.结论：耐头孢西丁肠杆菌科细菌中AmpC酶的检出率较高,高产AmpC酶细菌多呈多重耐药.临床可采用碳青霉烯类抗菌药物或4代头孢菌素治疗高产AmpC酶菌引起的感染,也可根据药敏试验结果选用头孢哌酮/舒巴坦或阿米卡星等抗菌药物治疗.

检测常见酵母菌耐药性的纸片法和微量稀释法比较

目的用纸片法和微量稀释法检测痰液标本分离酵母菌的耐药性并比较两者符合率,试找出一种适用于临床实验室的简便方法。方法采用丹麦ROSCO公司抗真菌药敏纸片法检测痰液标本分离的86株常见酵母菌对5种抗真菌药物的敏感性,同时用法国生物梅里埃公司ATB FUNGUS 2念珠菌药敏板条测定4种抗真菌药物的最小抑菌浓度,对结果进行分析。结果两性霉素B、氟胞嘧啶、氟康唑2种方法完全符合率分别为95.3%、95.3%和88.4%,未出现一种方法敏感而另一种方法耐药的严重错误现象;对86株痰液标本分离常见酵母菌的耐药性进行分析,两性霉素B、制霉菌素和氟胞嘧啶的敏感率高,分别为95.4%、98.8%、95.3%,伊曲康唑的耐药率最高(15.1%)。结论纸片法和微量稀释法相比有很好的一致性,且抗真菌药敏纸片种类多,便于随时根据临床所需增加单个药敏结果,易于在各临床实验室开展。酵母菌唑类抗真菌药物的耐药现象日益严重,应加强酵母菌的耐药性监测。

常见革兰阴性杆菌高活性β-内酰胺酶的检测

目的 通过对常见革兰阴性杆菌进行ESBLs和高产AmpC酶的检测 ,了解其在临床的检出率 ,以指导临床用药。方法 用改良的酶提取物三维试验方法进行持续高产AmpC酶和ESBLs的检测 ,并用此法与双纸片扩散法进行比较。 结果 在常见革兰阴性杆菌中高产AmpC酶分别为阴沟肠杆菌 2 0 4%,鲍曼不动杆菌 16.7%,弗劳地枸橼酸杆菌 10 0 %,铜绿假单胞菌 8.6%,肺炎克雷伯菌 7 1%,大肠埃希菌4 4%;ESBLs的检出率分别为肺炎克雷伯菌 2 8 6%,大肠埃希菌 2 7 9%,阴沟肠杆菌 18 4%,鲍曼不动杆菌 13 3 %,铜绿假单胞菌 8 6%。对同时产两类酶的菌株双纸片扩散法检测ESBLs可出现假阴性。结论 对革兰阴性杆菌可使用改良的三维法同时进行ESBLs和高产Am pC酶的检测 ,双纸片扩散法检测ESBLs可应用于所有革兰阴性杆菌的检测 ,但应注意有假阴性 。

天津地区志贺菌耐药性及整合子携带调查

目的:了解天津地区志贺菌抗生素耐药性变迁及1、2类整合子携带状况。方法:K-B纸片法测定1981—1983年及2009年天津地区临床分离的57株志贺菌药敏情况。以煮沸法制备细菌总DNA作为PCR扩增模板。PCR方法扩增1、2类整合子整合酶及可变区并测序分析。PCR产物直接测序,结果经BLAST程序与GenBank数据库标准菌株比对分析。结果:1981—1983年组志贺菌对四环素、链霉素、氯霉素及复方新诺明敏感率低,3种及3种以上抗生素多重耐药率为66.67%;2009年组志贺菌对氨苄西林、链霉素、复方新诺明、哌拉西林和四环素敏感率低,3种及3种以上抗生素多重耐药率为83.33%。1981—1983年组1类整合子阳性率为87.88%(29/33),27株可变区含氨基糖苷类药物耐药基因aadA;1株宋内志贺菌可变区含甲氧苄啶耐药基因dfrA17和氨基糖苷类药物耐药基因aadA5;未发现2类整合子阳性株;2009年组1类整合酶阳性率为79.17%(19/24),可变区及3末端扩增均阴性;2类整合子阳性率87.50%(21/24),可变区含dfrA1+sat1+aadA1,介导甲氧苄啶、链丝菌素和链霉素耐药;其中17株1、2类整合酶均阳性。结论:2009年分离的志贺菌抗生素耐药较上世纪80年代分离的志贺菌增强,多重耐药菌株增加。天津地区志贺菌携带1、2类整合子。′

抗真菌药物敏感性试验方法的新进展

真菌感染,尤其是免疫低下患者机会性真菌感染发病率的不断上升使真菌病的治疗面临着严峻的挑战,各种新的抗真菌药物纷纷涌现。临床实践中,人们需要规范快速、易于应用的药敏试验来指导用药和判断预后,抗真菌药物敏感性试验在真菌感染的治疗中起着重要作用。

槲皮素及其水溶性衍生物体外抑菌试验

目的初步探究槲皮素及其水溶性衍生物槲皮素-7-硫酸酯钠、槲皮素-7,4-二硫酸酯二钠的体外抑菌效果。方法以革兰阳性菌:金黄色葡萄球菌,革兰阴性菌:大肠埃希菌、痢疾志贺菌、铜绿假单胞菌为实验菌株,分别采用MH琼脂稀释法和药敏纸片法测定槲皮素及其水溶性衍生物的最小抑菌浓度。结果琼脂稀释法,槲皮素及其水溶性衍生物槲皮素-7-硫酸酯钠和槲皮素-7,4-二硫酸酯二钠梯度浓度0.5～0.0004875mg/mL范围内各种细菌均有生长;药敏纸片法,槲皮素及其水溶性衍生物槲皮素-7-硫酸酯钠和槲皮素-7,4-二硫酸酯二钠对各种细菌无明显抑菌作用。结论槲皮素、槲皮素-7-硫酸酯钠和槲皮素-7,4-二硫酸酯二钠对上述四种细菌均无明显抑菌作用。

耐头孢西丁肠杆菌科细菌AmpC酶的检测及耐药性分析

目的 对耐头孢西丁肠杆菌科细菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）进行检测及其耐药性分析，提示其主要耐药机理，指导临床合理用药。方法：采用氯唑西林增效试验测定AmpC酶，采用双纸片确诊试验测定ES-BLs，并采用最小抑菌浓度法（MIC法）检测12种常用抗生素对这些菌株的体外抗菌活性。结果：320株受检菌中共检出高产AmpC酶菌145株，产ESBLs菌160株，阳性率分别为45．3％、50％。单产AmpC酶菌对氨曲南、头孢曲松、哌拉西林、哌拉西林／三唑巴坦均存在不同程度的耐药（45．2％-68．5％），其耐药率明显高于非产酶菌，两者相比有统计学意义（P〈0．05）。而单产AmpC酶菌和非产酶菌对氨苄西林、氨苄西林／舒巴坦、环丙沙星、头孢唑啉的耐药率均较高（57．7％-94．2％）；对阿米卡星、头孢吡肟、亚胺培南、头孢哌酮／舒巴坦的耐药率均较低（0％-34．6％），两者相比无统计学意义（P〉0．05）。结论：耐头孢西丁肠杆菌科细菌中高产AmpC酶的检出率较高，高产PunpC酶细菌多呈多重耐药。临床可采用碳青霉烯类抗生素或4代头孢菌素作为高产AmpC酶菌感染的经验治疗，也可根据药敏试验选用头孢哌酮／舒巴坦或阿米卡星等抗生素治疗。

Rosco纸片扩散法检测酵母样真菌的药敏试验

目的探讨Rosco纸片扩散法检测酵母样真菌对抗真菌药物的敏感性。方法临床标本分离出酵母样真菌92株,采用VITEK-60YBC卡结合科码嘉念珠菌显色培养基(CHROMager)进行鉴定分型,用Rosco纸片扩散法进行药敏试验。结果92株酵母样真菌中以白色念珠菌为主,占69.6%。分离菌株对氟康唑(FCZ)、酮康唑(KTC)、伊曲康唑(ITC)、两性霉素B(AMB)、5-氟胞嘧啶(5-FC)的敏感率分别为95.7%、96.7%、100%、100%、93.5%。结论广谱抗生素、免疫抑制剂和抗肿瘤药物的广泛应用,增加了酵母菌感染和耐药菌株出现的机会,加强真菌的检测和耐药性监测已具有越来越重要的意义。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌多重耐药研究

目的了解本地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的多重耐药情况。方法收集经头孢西丁纸片扩散试验和青霉素结合蛋白2a胶乳凝集实验分离出的51株MRSA,用β-内酰胺酶实验、D试验、Kirby-Bauer法检测MRSA产β-内酰胺酶以及对红霉素、克林霉素、4种氟喹诺酮类药物(氧氟沙星、诺氟沙星、左旋氧氟沙星、加替沙星)和万古霉素耐药性。结果51株MRSA头孢西丁纸片抑菌圈直径介于6～20mm,产β-内酰胺酶率为84.3%,对红霉素、克林霉素、氟喹诺酮类、万古霉素耐药率分别为98.0%、86.3%、88.2%、0,红霉素诱导克林霉素耐药率为50.0%(3/6)。结论MRSA呈多重耐药,轻度感染可根据药敏结果选万古霉素与氟喹诺酮类?生素联合用药。

头孢西丁纸片法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究

目的:研究头孢西丁纸片法筛选耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法:以PCR方法检测m ecA基因为金标准,采用NCCLS推荐的头孢西丁纸片法和苯唑西林纸片法检测MRSA。结果:共分离出179株金黄色葡萄球菌,其中m ecA基因阳性127株,阴性52株。用头孢西丁纸片法筛查MRSA,敏感性为99.2%,特异性为98.1%;而苯唑西林纸片法检测MRSA敏感性为97.2%,特异性为94.6%。结论:头孢西丁纸片法筛查MRSA与m ecA基因检测具有一致性,其操作简便、敏感性和特异性高,可作为临床实验室检测MRSA的可靠方法。

不同提取方式的五倍子对两种临床分离耐药菌的体外抑制作用研究

目的评价不同提取方式的五倍子对多重耐药鲍曼不动杆菌与金黄色葡萄球菌的抑制效果。方法通过水煎煮、醇提取、超声提取制备五倍子提取物,选择代表性抗生素青霉素G、庆大霉素、磺胺甲恶唑为对照,选择临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌与金黄色葡萄球菌进行常规中药药敏纸片琼脂扩散实验,测定抑菌圈直径,探讨五倍子水煎剂、醇提剂、超声提取剂与抗生素的抑菌效果。结果 3种提取方式的五倍子提取物对2种多重耐药菌均呈现中度以上敏感的抑制作用,但3种提取方式的五倍子提取物之间的抑菌效果差异无统计学意义(P>0.05)。与3种抗生素相比,五倍子提取物对于2种多重耐药菌的抑制效果具有明显优势(P<0.05)。结论五倍子3种提取方式的提取物对多重耐药鲍曼不动杆菌与金黄色葡萄球菌具有良好的抑制作用,且明显优于3种抗生素,提示五倍子具有良好的抑菌作用,有着很好的应用与开发前景。

抗真菌药敏试验ATBFUNGUS2微量稀释法、ROSCO纸片法和NCCLS纸片法的对比研究

目的对比研究白色假丝酵母菌的体外抗真菌药敏试验ATBFUNGUS2微量稀释法、ROSCO纸片法和NCCLS纸片法。方法采用前述3种方法,检测105株白色假丝酵母样真菌对氟康唑、依曲康唑、两性霉素、氟胞嘧啶的敏感性。结果体外抗真菌药敏试验ATBFUNGUS2微量稀释法、ROSCO纸片法和NCCLS纸片法用于检测白色假丝酵母样真菌有较好的一致性、重复性。结论ATBFUNGUS2微量稀释法和ROSCO纸片法可以作为较好的体外抗真菌药敏试验方法在临床实验室推广使用。