体外培养的不同亚型肝癌细胞差异蛋白的初步筛查

目的 分析体外培养的不同亚型肝癌细胞株蛋白质表达差异 ,筛选肝癌的标志蛋白。 方法 采用表面增强激光解吸离子化 (SELDI)蛋白质芯片技术检测了两种肝癌细胞株 (肝细胞癌 ,SMMC 772 1和肝内胆管细胞癌 ,IHCCC 981 0 )以及正常肝细胞 (L1 0 2 )的蛋白质谱。选用阴离子交换柱处理上述细胞总蛋白 ,用 6种不同pH的洗脱液洗脱柱床 ,通过改变洗脱液的pH值将总蛋白分成不同pI范围的 6组。每个组分用WCX2和IMAC3两种芯片检测。采用PBSII C型蛋白质芯片阅读机读取数据 ,获得的数据采用Ciphergen公司的ProteinchipSoftware3.0 .2软件分析。 结果 与L0 2细胞相比 ,有 1 2个蛋白质在两种肝癌细胞株中均出现明显的变化 ,其中 4个差异蛋白在肝癌细胞中高表达 ,8个差异蛋白在肝癌细胞中低表达。在对两种肝癌细胞株的蛋白质谱比较时发现 ,不同亚型的肝癌细胞有其各自的标志蛋白 ,其中 1 1个蛋白分子在SMMC 772 1细胞中高表达 ;在IHCCC 981 0细胞中 7个蛋白分子高表达 ,1 0个蛋白分子低表达。 结论 不同亚型肝癌细胞与正常肝细胞蛋白质谱比较时有共同的差异蛋白 ,同时不同亚型肝癌细胞之间的蛋白质谱表达也有差别。

应用seldi-TOF MS技术分析高低转移肺腺癌细胞株差异表达蛋白

目的分析体外培养的高低转移肺癌细胞株蛋白质表达差异。方法采用表面增强激光解吸离子化(SELDI)蛋白质芯片技术检测了两种肺癌细胞株(肺腺癌细胞高转移株Anip973和肺腺癌细胞低转移株AGZY)的蛋白质谱。分析不同细胞株之间的蛋白质表达差异。每种细胞用WCX2和IMAC3两种芯片检测。采用PBSⅡC型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的数据采用Ciphergen公司的Proteinchip Software 3.2.1软件分析。结果获得WCX2和IMAC3两种蛋白芯片上Anip973和AGZY细胞株蛋白质谱图谱;在对两种肺癌细胞株的蛋白质谱比较时发现,有14个蛋白质在两种肺癌细胞株中出现明显的变化,其中9个差异蛋白在Anip973细胞中高表达,5个差异蛋白在Anip973细胞中低表达。结论高低转移肺腺癌细胞之间蛋白质谱表达比较时有差异蛋向。

体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系差异蛋白的分析

目的分析体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系蛋白质表达差异,筛选卵巢癌的肿瘤标志物。方法提取体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系(OVCAR-3、SKOV-3、3AO和TOV-112D)与原代培养的正常卵巢生发上皮细胞(OGE)的总蛋白,采用表面增强激光解吸离子化(SELDI)蛋白质芯片技术的H4和SAX2两种蛋白芯片检测其蛋白质谱,最后利用蛋白芯片阅读机(PBS-Ⅱ型)读取数据,获得的数据采用Ciphergen Proteinchip 3.0.2版本的软件分析。结果4种亚型的上皮性卵巢癌细胞系与正常卵巢生发上皮细胞比较,有16个蛋白发生明显改变,其中7个蛋白表达降低,9个蛋白表达升高。此外,不同亚型的上皮性卵巢癌细胞之间也有很多差异蛋白,尤其是OVCAR-3、SKOV-3和3AO三者与TOV-112D之间有18个蛋白仅在前3种癌细胞中表达,16个蛋白仅在后者表达。结论不同亚型上皮性卵巢癌细胞与正常卵巢生发上皮细胞的蛋白质谱相比较有共同的差异蛋白,同时不同亚型的上皮性卵巢癌细胞之间的蛋白质谱表达也有差别。

不同侵袭潜能卵巢癌细胞系蛋白质谱的比较

目的探讨与卵巢癌侵袭潜能相关的蛋白质。方法将卵巢癌细胞系SKOV-3在裸鼠体内多次传代,体外培养建系,结合体外黏附、侵袭、移动实验,筛选不同侵袭潜能的细胞亚系,用表面增强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术检测其蛋白质谱。结果SKOV-3F3细胞亚系较其母系SKOV-3侵袭潜能更高。有6个差异蛋白质峰(质荷比M/Z分别为6249、14675、15425、15717、17123和17660)仅在SKOV-3中表达,3个差异蛋白质峰(M/Z分别为4355、4823和5763)仅在SKOV-3F3中表达,2个差异蛋白质峰(M/Z分别为1842和3145)可在SKOV-3的3代亚系中捕获。此外,5个差异蛋白质峰(M/Z分别为1242、5465、6899、6568和14027)和1组蛋白质谱峰簇在SKOV-3和其3代亚系中均可表达,但强度不同。结论体内传代结合体外实验可筛选出不同侵袭潜能的卵巢癌细胞,它们之间的差异蛋白与侵袭潜能密切相关。

小麦T型细胞质雄性不育系和保持系蛋白质的比较研究

以小麦T型雄性不育系及其保持系种子为材料,用双向电泳结合高灵敏度银染技术对其胚乳醇溶蛋白进行分析,发现两系之间有明显差异.不育系14A有两个特异蛋白,分子量分别为36kD和46kD,而缺少45kD的多肽;不育系11A有24kD的特异蛋白,且30kD及28kD的两种多肽,其浓度较保持系明显增加.又用梯度SDS-PAGE方法比较了不同发育时期(苗期、开花期、种子)可溶性蛋白的组分,发现两系之间在种子和花药中有明显差异,而在苗期叶片未发现显著差异,表明T型细胞质雄性不育基因的表达具有时空性.本文还对非平衡pH电泳的应用进行了讨论.

SELDI技术分析体外培养不同肝细胞株差异蛋白的表达

目的：运用表面增强激光解吸／离子似飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术，检测体外培养的肝癌细胞株（HepG2），转染乙肝病毒的肝癌细胞株（HepG2．2．15）与正常肝细胞株（LO2）蛋白质的差异表达，筛选肝细胞癌的标志蛋白，为进一步研究肝癌发病的蛋白质组学机制奠定基础．方法：常规培养上述3种细胞，细胞状态良好时收集细胞，裂解细胞后采用SELDI-TOF-MS技术用WCX2芯片检测HepG2，HepG2．2．15，LO2细胞内蛋白质组学的差异表达．结果：WCX2芯片共捕获91个蛋白，在Mr5000～15000区段，与正常肝细胞株比较，有7个蛋白质在两种肝癌细胞中出现明显变化，其中2个蛋白在肝癌细胞中表达量增高，5个蛋白在肝癌细胞中表达量降低；另外两种肝癌细胞株也有其各自的标志蛋白，9个蛋白分子在HepG2表达量增高，10个蛋白分子在HepG2、2、15表达量增高．结论：SELDI蛋白芯片技术检测可作为检测肝癌早期生物标记的方法，它简便，敏感性高，重复性好，本文发现的这些组织特异性蛋白生物标记对肝癌的早期诊断有潜在的应用价值，对我们从血清或组织标本中筛选和鉴定不同型别肝癌细胞之间的标志蛋白有重要意义，从而为从蛋白质水平研究肝癌的发病机制及新的治疗靶位的寻找奠定了一定的基础．

体外培养的不同亚型肺癌细胞株差异蛋白的初步分析

分析体外培养的不同亚型肺癌细胞株蛋白质表达差异,筛选肺癌细胞的标志蛋白并与肺癌病人血清中的标志蛋白进行对比分析。采用SELDI(Surface Enhanced LaserDesorption/Ionization)蛋白质芯片技术检测了三种肺癌细胞株A549(肺癌)、Calu-6(腺癌)和PG(大细胞癌)以及人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)的蛋白质谱。结果显示与2BS细胞比较,肺癌细胞有24个蛋白质表达发生明显改变。

血清β_2-微球蛋白测定在良恶性肿瘤鉴别中的应用

目的通过检测血清中β2-微球蛋白,评价其在鉴别良恶性肿瘤中的应用价值。方法采用散射比浊法测定33例良性肿瘤患者与38例恶性肿瘤患者血清β2-微球蛋白的含量并与与41例健康对照组比较,对所测得的数据用配对t检验进行统计学处理,计算t值。结果恶性肿瘤患者组血清β2-微球蛋白含量显著高于良性肿瘤组与健康对照组(P<0.01),良性肿瘤组与健康对照组血清β2-微球蛋白含量差异无显著意义(P>0.05)。结论测定患者血清中的β2-微球蛋白对良恶性肿瘤的鉴别诊断有重要临床意义。

结直肠癌Dukes B、C、D期患者血清比较蛋白质组学研究

目的建立用于诊断结直肠癌患者Dukes分期的分类树模型。方法用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测32例Dukes B期、24例Dukes C期和26例Dukes D期结直肠癌患者血清差异蛋白,用BioMaker Pattern软件在学习模式下建立用于判断结直肠癌患者Dukes分期的分类树模型,并用该模型在双盲模式下对随机选取的30例结直肠癌血清标本(Dukes B、C、D期各10例)进行检测以验证其诊断的准确性。结果在捕获的31个差异蛋白中,建立了以14个差异蛋白组成的分类树模型,该模型在学习模式下的诊断准确率为89．0%(73/ 82),在双盲模式下的诊断准确率为76．7%(23/30)。结论该分类树模型对判断结直肠癌患者Dukes分期有一定的诊断价值,可以为结直肠癌患者治疗方案的选择提供依据。

不同侵袭转移潜能浆液性卵巢癌细胞株3AO生物活性及蛋白质质谱研究

目的筛选与卵巢癌侵袭转移特性相关的蛋白质。方法将人类浆液性卵巢癌细胞株3AO在裸鼠体内多次传代，体外培养建系，结合细胞黏附、侵袭及移动实验筛选高、低侵袭潜能细胞亚系。采用表面增强激光解吸电离．飞行时间-质谱（SELDI—TOF-MS）技术检测二者的细胞裂解液，比较其蛋白质指纹图谱。结果通过体内、外实验筛选出细胞亚系3AO3代（F3）、3AO174，与其母系3AO相比具有高侵袭潜能。三者蛋白质指纹图谱比较结果发现9个差异蛋白质峰‘质荷比（m／z）分别为3494、3831、8121、8293、9123、9332、10184、15436和17134]仅在母系3AO细胞株中表达。有1个差异蛋白质峰（m／z为4360）仅在3AOF3、F4中表达，有2个差异蛋白质峰（m／Z分别为1842、3145）在3AOF2-F4中表达。6个差异蛋白质峰（m／z分别为1236、5476、5649、6575、6897和7016）和1组蛋白质谱峰簇在母系3AO细胞株和3AOF1-F4细胞中均可表达，但强度不同。结论通过比较同一遗传背景的高、低侵袭潜能卵巢癌细胞的蛋白质指纹图谱，发现一组与侵袭转移潜能密切相关的差异蛋白质峰。

应用蛋白质指纹图谱技术进行肝纤维化早期诊断的实验研究

目的检测肝纤维化各期的血清蛋白质组图谱,筛选特异的蛋白质标志物,用于肝纤维化的早期诊断。方法 SD大鼠50只,随机分为对照组(n=6)和实验组(n=44)2组,采用表面增强激光电离飞行时间质谱技术检测2组大鼠血清中的差异蛋白;采用放射免疫法检测血清肝纤维化4项,即Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层粘连蛋白(LN)和透明质酸酶(HA)。结果实验组中属肝纤维化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ期者分别有8、5、5及6只〔有20只大鼠未到实验设定的采集标本时间死亡(系注射CCl4所致)〕。发现了质核比为4 203、4 658及7 400的3个差异蛋白标志物,其中质核比为4 658及7 400的2个蛋白质峰在肝纤维化Ⅰ期即明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);而血清肝纤维化4项的水平在肝纤维化Ⅲ期或Ⅳ期才明显高于对照组(P<0.05)。结论蛋白质指纹图谱技术在肝纤维化的早期诊断以及标志物筛选方面有一定的价值,值得进一步深入研究。