DTT在D-二聚体假性增高病例中的应用

目的探讨二硫苏糖醇(DTT)对19例血浆D-二聚体水平>纤维蛋白(原)降解产物(FDP)水平患者D-二聚体异常结果的纠正情况。方法选择2022年1月至2023年3月于该院就诊且首次出现血浆D-二聚体水平>FDP水平的19例患者标本作为试验组,分别采用稀释试验、比对试验确定是否为D-二聚体假性增高。同时随机选取20例FDP与D-二聚体比值为2~5的枸橼酸钠1∶9抗凝血浆作为对照组,将试验组和对照组分别进行DTT纠正试验和盐水处理试验,并对相关数据进行分析。结果随着稀释倍数的增加,19例患者D-二聚体水平呈下降趋势(P<0.05),FDP无显著性变化(P>0.05)。更换系统检测,19例均能纠正为FDP水平>D-二聚体水平。对照组经DTT处理后,与盐水处理比较,D-二聚体水平差异无统计学意义(P>0.05)。试验组的DTT处理和盐水处理结果比较,差异有统计学意义(P<0.05)。15例患者经DTT处理后,可纠正为FDP水平>D-二聚体水平,且DTT纠正后结果和比对系统结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论该研究中大部分D-二聚体假性增高者经DTT预处理后可纠正,且纠正后结果与比对系统结果具有一致性。

改良DTT法用于减少达雷妥尤单抗对血清学检测造成的干扰

目的:改良美国输血协会《AABB技术手册》中经典的二硫苏糖醇(DTT)处理红细胞法,探讨其在使用达雷妥尤单抗(daratumumab)治疗的患者输血前检查中的应用价值。方法:从PBS、DTT浓度、供者红细胞浓度(悬浮/压积)及样本处理时间方面,对经典的0.2 mol/L AABB DTT法进行改良,将改良DTT法和AABB经典DTT方法应用于12例达雷妥尤单抗治疗的多发性骨髓瘤患者的配血试验,并用已知抗体性质的抗血清和抗体试剂评估改良DTT法处理谱红细胞后对其他不规则抗体检出的影响。结果:建立了2种改良DTT法(方法一:将DTT浓度改为0.01 mol/L;方法二:将DTT浓度改为0.02 mol/L,并将压积红细胞改为3%悬浮红细胞)。改良DTT法处理红细胞最佳处理时间为35 min,不仅能够消除达雷妥尤单抗造成的全凝集现象,且不影响抗-E、抗-Jk^(a)、抗-M等抗体的检出,对抗-K抗体的测定效价仅有略微下降。结论:改良DTT法安全有效,能够在消除达雷妥尤单抗干扰的同时保留Kell血型系统活性,可以替代目前AABB经典的DTT配血方法。

磁共振DTI及DTT技术在成人视放射病变中的初步临床应用

目的应用磁共振弥散张量成像(DTI)及弥散张量纤维束成像(DTT)技术评估成人视放射病变的各向异性程度、视放射神经纤维束构象特征及临床价值及探讨视放射病变对外侧膝状体(LGN)形态学的影响。方法收集经磁共振检查、临床资料或手术病理证实累及视放射的脑内病变12例及磁共振检查无异常的健康体检者12例,以上受检者均进行过磁共振DTI及DUALTSE序列扫描。根据是视放射是否受累及,将12对视放射分成病变组、对照组,通过后处理软件分别获得部分各项异性指数(FA)值、表观弥散系数(ADC)值、平均纤维束长度(ML)、单位像素纤维束数目(MF)、LGN的高度与体积及进行纤维束追踪与成像分析,且两两比较进行统计学分析。结果12例病例中有16个视放射纤维束表现为不同程度的纤维束稀疏、移位或破坏,累及视放射的病变可导致LGN大小、形态甚至信号发生一定改变,且病例组与健康组比较具有统计学差异性,其ADC值、ML值及MF值均较健康组有所升高,但差异无统计学意义,病变组与对照组间各指标比较均无统计学意义。累及视放射的病变可导致LGN形态或信号发生一定改变,病例组LGN高度及体积的缩小与健康组比较具有统计学差异性。结论DTI及DTT技术可作为评价颞、枕部病变所致视放射及LGN形态、功能改变的既安全又客观指标;术前运用DTT技术对保护具有重要功能的白质纤维束及了解病变与该纤维束之间的关系具有重要临床意义。

利用PMCA技术实验不同剂量MCT联合DTT对PrP^(sc)转化的抑制效应

蛋白质错误折叠循环扩增(protein misfolding cyclic amplification,PMCA)技术,是一种具有感染性的朊蛋白(PrPsc)体外扩增的技术,可用于抑制细胞型朊蛋白(PrPc)向PrPsc转化药物的筛选.本研究在Saborio等提供的方法基础上,成功优化了最佳扩增时间,利用优化的PMCA技术实验了不同剂量氮芥(mechlorethamine,MCT)联合二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)对PrPsc转化的抑制效应.结果发现,MCT联合DTT能体外抑制PrPc向PrPsc的转化,抑制作用具有明显的量效关系.利用针对人PrPc不同结构域的抗体发现,MCT联用DTT可使抗体6H4的抗原表位隐蔽,该表位位于PrPc第1个α螺旋区内,是构象转化的主要部位.对其机制的深入探讨,将有助于新一类可传播性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathy,TSE)治疗药物的研发.

去除雷达木干扰输血相容性检测的方法及输血疗效评估对比

目的探讨DARA-Fab片段处理经抗CD38单克隆抗体雷达木(daratumumab,DARA)治疗后的多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者输血相容性检测方法的可行性,并通过对比二硫苏糖醇(Dithiothreitol,DTT)方法评估其输血疗效。方法将DARA使用PierceFab制备试剂盒制备成DARA-Fab片段后,确认不同体积(5、10、15、30μL)DARA-Fab片段对于抗筛细胞和抗体鉴定细胞的中和效果;DARA-Fab片段和明确相应抗原的抗筛细胞与对应的单抗试剂为试验组,以添加同体积的生理盐水为对照组孵育后离心;各选取20名经DARA治疗后的MM患者,分别使用DARA-Fab封闭RBC表面抗原和与DTT破坏红细胞表面抗原的方法来进行输血相容性检测,对其输血前后实验室指标进行统计分析,并比较2种配血方法。结果15、30μL DARA-Fab片段与抗筛细胞与混有DARA的血清孵育离心后结果为阴性,5、10μL DARA-Fab结果为阳性,15μL DARA-Fab处理抗体鉴定细胞(2、3、4、5、7、9、11)后为阴性,抗体鉴定细胞(1、6、8、10、12)经30μL DARA-Fab片段处理后,结果为阴性;添加DARA-Fab的实验组对MNS系统、Duffy、Kidd、Kell、Lewis、Rh血型系统和对照组结果一致;DARA-Fab片段这20名患者输注RBC后Hb(hemoglobin,Hb)(73.90±1.90)(g/L)比输血前(63.60±1.58)明显提高,统计学差异明显(P<0.01);患者总胆红素(total bilirubin,TBil)(μmol/L)(16.25±3.54 vs 17.87±3.57)、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)(μmol/L)(6.31±2.32 vs 7.10±2.80)和间接胆红素(Indirect Bilirubin,I-Bil)(9.94±1.38 vs 10.77±1.22)输注前后无明显差异,无统计学差异(P>0.05)。DTT处理方法与DARA-Fab片段封闭方法的输血前后Hb差值(10.75±1.04 vs 10.30±0.98)、TBil差值(3.31±1.47 vs 3.31±0.55)、DBIL差值(2.76±1.24 vs 2.60±0.83)和I-Bil差值(1.97±0.40 vs 2.82±0.53)无明显差异,无统计学差异(P>0.05)。结论DARA-Fab片段可通过封闭RBC表面CD38抗原,来去除DARA对红细胞输血相容性检测的干扰,这种封闭方法对于红细胞临床常见血型系统的抗原无影响,且通过这种配血方法实验室指标输血疗效明显,与DTT方法的输血疗效无差异。

牛精子原位杂交DTT去凝集条件优化

【目的】确定牛精子原位杂交DTT去凝集处理的优化浓度及时间。【方法】牛精子解冻后经密度梯度离心优选并制片,采用05、、10、20、40、80和100 mmol/L六个DTT浓度以及15、304、5和60 min 4个时间段的28个组合进行去凝集处理,Motic Images Advanced 3.2软件测量精子解聚后头部面积。【结果】40 mmol/L DTT处理45 min精子头部面积为(52.32±4.68)μm2,浓度<40 mmol/L的16个处理组及浓度≥40 mmol/L、处理时间<45 min的6个处理组,精子头部面积小于(52.32±4.68)μm2(P<0.01);浓度>40 mmol/L、时间≥45 min的5个处理组,精子头部面积与40 mmol/L DTT 45 min组差异不显著(P>0.05),但精子形态不完整。【结论】40mmol/L DTT 45 min为较优处理组合。

DTT与顺铂诱导对食管癌Eca109细胞磷酸化P38表达的影响

目的:探讨磷酸化P38在顺铂和DTT诱导的食管癌Eca109细胞凋亡中的作用。方法:分别用DTT与顺铂诱导处理食管癌Eca109细胞,未加药组作为对照。采用流式细胞仪技术检测细胞凋亡率;用免疫组化方法检测磷酸化P38的表达情况。结果:与对照组相比,DTT处理组及顺铂处理组细胞凋亡率明显升高。免疫组化结果显示:2处理组磷酸化P38的水平均明显高于对照组(P<0.05);DTT处理组磷酸化P38大部分位于细胞核内,而顺铂组磷酸化P38则主要弥散于细胞浆内。结论:磷酸化P38在DTT和顺铂诱导的食管癌Eca109细胞凋亡时细胞内分布不同,激活的P38可能通过不同途径参与细胞凋亡。

DTT、2-Me对IgM抗体最适中和反应条件及能力的探讨

目的探讨二硫苏糖醇(DTT)与二巯基乙醇(2-Me)对IgM抗体最适中和反应条件及能力。方法对已知效价的IgG抗-D血清(1∶64)和IgM抗-B血清(1∶128)进行效价测定,选择最佳反应温度及时间对临床试验标本处理后,做IgM抗-A(B)残留测定。结果通过对比,选择37℃水浴30 min做为该试验最佳反应条件;2-Me与DTT在常规试验方法与本研究所选试验条件对比,经χ2检验(P>0.05)IgM抗体残留差异无统计学意义。结论分别通过30、60、90 min在37℃水浴及室温对IgM抗体进行中和,认为37℃水浴30 min中和血清IgM抗体效价明显下降,中和效果较为理想。DTT与2-Me中和IgM抗体的效果差异无统计学意义,因此DTT可替代2-Me。

DTT、Tau和Vc对小鼠运动耐力、心肌自由基代谢及血清GOT活性影响的比较研究

本研究以牛磺酸Ｔａｕ和维生素Ｃ作对照，探讨了二硫苏糖醇ＤＴＴ对小鼠运动能力的影响。结果表明：与牛磺酸组和维生素Ｃ组比较，服ＤＴＴ组小鼠的游泳时间明显延长Ｐ＜０．０５；游泳力竭即刻心肌细胞ＭＤＡ含量明显降低Ｐ＜０．０５，血清ＧＯＴ活性下降幅度比牛磺酸组和维生素Ｃ组大；心肌组织ＳＯＤ活性升高幅度高于牛磺酸组，而低于维生素Ｃ组。结果说明含有双羟基双巯基的二硫苏糖醇是一种有效的自由基清除剂，可减轻运动后因脂质过氧化而产生的内源性自由基对机体的损伤，保护细胞膜的完整性，具有增强抗氧化酶活力和提高小鼠运动能力的作用。

自闭症儿童DTT与PRT干预模式的对比研究

应用行为分析(ABA)是公认的干预自闭症儿童行之有效的策略,并在世界范围内广泛应用。以应用行为分析为基础的干预模式有传统的回合教学法((Discrete Trial Teaching,缩写DTT)和关键技能训练法(Pivotal Response Treatment,缩写PRT)。本文系统地分析自闭症儿童DTT与PRT干预模式的共同之处,以及PRT的理论特色以及操作技巧,从而明确PRT与DTT关系,为自闭症儿童教学者及研究者提供借鉴与参考。

DTT早期评价经侧裂-岛叶入路显微手术对高血压脑出血患者术后运动功能恢复的影响

目的采用弥散张量纤维束成像技术(DTT)早期评价经侧裂-岛叶入路显微手术对高血压脑出血(HICH)患者术后运动功能恢复的影响。方法选择经侧裂-岛叶入路显微手术的HICH患者46例,术前均行DTT检查计算基底核区皮质脊髓束(CST)条目数,术后1d均行CT检查,术后2周再行DTT检查计算基底核区CST条目数,6个月后根据Fugl-Meyer(FM)评分评判患者运动功能的恢复情况。结果 46例患者均未发现严重并发症;术后2周基底核区相对剩余CST条目数(73.98±12.71)与术前(72.07±13.35)相比未见统计学差异(t=0.570,P=0.572);术后6个月患者FM评分平均为(84.22±12.81)分;所有患者术后2周的患侧相对剩余CST条目数(73.98±12.71)与6个月后FM评分之间呈正相关(r=0.845,P<0.01)。结论 采用经侧裂-岛叶入路显微手术治疗HICH患者,术中能保留更多的相对CST条目数,这可能是该法治疗的患者术后6个月运动功能恢复更佳的原因之一。DTT用于HICH患者能在术后早期对其肢体运动功能恢复情况作出预后评估,有助于合理制定术后康复方案。

肝癌细胞蛋白质组在DTT诱导内质网应激条件下的表达

目的:研究内质网应激条件下肝癌细胞SMMC-7721蛋白质组的表达,为人类肝细胞癌的诊治提供新的靶点.方法:培养肝癌细胞株SMMC-7721,随机分为两组,即实验组和对照组.实验组加入二硫苏糖醇(DTT,2.5mmol/L),对照组加入等量的培养基,裂解细胞,提取全细胞蛋白.双向电泳(2-DE)分离,Image Master2D Platinum软件进行差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质.结果:实验组肝癌细胞SMMC-7721的2-DE图谱上共检出蛋白质斑点(844±46)个,对照组共检出蛋白质斑点(1015±63)个,对照组与实验组自动匹配配对(593±23)对,匹配率约71%左右,绝大多数蛋白集中于pH5.2-6.5,相对分子质量15000-80000Da;获得组间标准化总灰度值(%Vol)相差2倍及以上的蛋白斑点3个,通过MALDI-TOF-MS分析鉴定了3个差异蛋白质点,分别是:fem-1同源蛋白B、细胞周期素A1、增殖诱导蛋白44.结论:鉴定的3个肝癌细胞株SMMC-7721在内质网应激下表达改变的蛋白质,其功能涉及细胞增殖、细胞凋亡以及细胞周期等,具有潜在的作为肝癌诊断、预后标记物或治疗靶点的意义.

唾液、DTT、2-Me三种物质对IgM抗体中和能力的比较

探索了三种物质对IgM抗体中和能力,选取5例O型孕妇产前检查标本,分别采用唾液、DTT、2-Me三种物质中和IgM抗体,检测IgG抗体效价。5例孕妇血清经唾液中和,测得IgG效价分别为抗A∶0;抗B∶0;抗A:1∶2;抗B∶0;抗A∶0抗B∶0;抗A∶0;抗B∶0;抗A∶0;抗B∶0。采用DTT中和后测得IgG效价分别为抗A∶1∶8;抗B∶1∶16;抗A∶16;抗B∶1∶16;抗A:1∶16;抗B∶1∶8;抗A∶1∶8;抗B∶1∶8;抗A∶1∶16;抗B∶1∶16。采用2-Me中和后测得IgG效价分别为抗A∶1∶2;抗B∶1∶64;抗A∶1∶128;抗B∶1∶4;抗A∶1∶32;抗B∶1∶128;抗A∶1∶16;抗B∶1∶32;抗A∶1∶64;抗B∶1∶32。结果表明唾液型物质不仅中和IgM抗体,而且中和部分IgG抗体,DTT对IgM抗体中和能力较差,2-Me对IgM抗体中和能力较强,而且对IgG抗体破坏小。

探讨抗CD38和CD47单克隆抗体药物对输血前检测的影响

随着单克隆抗体作为治疗药物在临床多学科逐渐开展,患者得到有效救治的同时给输血科带来了挑战,该类药物可导致输血前检测的假阳性,本文就抗CD38和CD47单克隆抗体药物对输血前检测的影响进行探讨,保证患者临床用血安全有效。方法 选择2020年在本院接受单克隆抗体药物治疗,且有输血患者作为研究对象,共20例,其中抗CD38药物达雷妥尤单抗(Daratumumab,DARA)17例、抗CD47单抗(Hu5F9-G4)3例。常规方法鉴定ABO和Rh血型,抗体筛查采用微柱凝胶法进行,盐水法、聚凝胺法和微柱凝胶法进行交叉配血。DARA用药的患者采用0.2M DTT处理抗筛细胞和供者红细胞后进行输血前检测和交叉配血。使用Hu5F9-G4药物的患者采用一种中和液检测抗体筛查。结果 DARA治疗患者的抗体筛查均为阳性,盐水法和聚凝胺法交叉配血相合,微柱凝胶法交叉配血不合;经DTT处理后抗体筛查均为阴性,微柱凝胶法交叉配血相合。Hu5F9-G4治疗的患者抗体筛查为强阳性,交叉配血不合,经中和液处理后检测抗体筛查为阴性。结论 抗CD38单克隆抗体药物采用DTT处理方法和抗CD47单克隆抗体采用中和液处理进行检测,均可有效避免相干药物对患者输血前检测的影响。

不同浓度DTT或GSH预处理猪精子对ICSI效果的影响

试验采用不同浓度的DTT或GSH预处理猪精子,统计ICSI后精核解聚率、雄原核形成率及胚胎发育情况。结果表明,①精核解聚率随DTT浓度的增加而提高,6 mmol/L DTT处理组的2PN+2Pb形成率(P<0.01)和卵裂率(P<0.05)均高于其余各组。随着DTT浓度的增加,囊胚总细胞数呈现下降趋势。表明6 mmol/LDTT预处理精子的ICSI效果较好,但DTT在促进精核解聚的同时所产生的副作用在一定程度上影响了ICSI胚胎的后期发育;②随着GSH浓度的升高,注射卵母细胞的2PN+2Pb形成率、MPN形成率和精核解聚率均呈上升趋势。0.5 mmol/L GSH处理组的卵裂率高于其余处理组(P<0.05)和对照组(P<0.01),囊胚发育率显著高于对照组(P<0.05)。说明0.50 mmol/L GSH处理组的ICSI效果较好;③0.5 mmol/L GSH处理组的2PN+2Pb形成率、卵裂率和囊胚总细胞数极显著高于6 mmol/LDTT处理组(P<0.01),两者MPN形成率差异显著(P<0.05)。表明0.5 mmol/L GSH预处理精子的ICSI效果要好于6 mmol/L DTT。

DTT用于毗邻皮质脊髓束脑胶质瘤手术中的临床效果分析

目的 分析弥散张量纤维束成像（DWT）用于毗邻皮质脊髓束脑胶质瘤手术中的临床效果。方法：选取60例毗邻皮质脊髓束脑胶质瘤未偏瘫患者作为研究对象，随机分为常规组和研究组各30例。常规组采取了常规的磁共振扫描，研究组采取常规的磁共振＋DTT扫描了解皮质脊髓束的状态，2组根据扫描结果而进行手术入路设计以及肿瘤的切除范围；分析2组肿瘤的全切除率和术后致残率。结果：研究组肿瘤全切率优于常规组，术后的致残率明显低于常规组，差异具有统计学意义（P〈0．05）；结论：通过DTT，能够更加清晰的了解到患者的脑深部胶质瘤与毗邻脊髓束的位置，了解患者的皮质脊髓束的推移状态、浸润状态和破坏状态，这样有助于医师设计出适合患者的手术入路和肿瘤切除范围，能够保护患者脑部未受侵害的纤维束，了解肿瘤的大小，最大的程度的全部切除肿瘤，减少术后的致残率。

DTT诱导P38核转位与食管癌Eca109细胞凋亡的研究

目的探讨P38的核转位与DTT诱导的食管癌细胞凋亡的关系。方法采用DTT处理食管癌Eca109细胞,未加药组作为对照。流式细胞仪技术检测细胞凋亡率;免疫组化方法检测P38的磷酸化水平及磷酸化P38的核转位情况。结果与对照组相比,DTT处理组细胞凋亡率明显升高。免疫组化结果显示:处理组P38的磷酸化水平明显高于对照组(P<0.01),且处理组p-P38大部分定位于核内。结论p-P38核转位参与了DTT诱导的食管癌Eca109细胞凋亡。

基于拉曼光谱的羊毛二硫键及构象含量分析

拉曼光谱可提供快速、简单、可重复且无损伤的定性分析。采用激光共聚焦显微拉曼光谱仪对羊毛的二硫键以及构象进行了无损分析。研究激光波长、激光强度、扫描时间、物镜大小、形态结构对羊毛微观结构测量结果的影响,优化了激光拉曼光谱对羊毛的测试条件;分别采用超声波、还原以及氧化等不同方法处理纤维,并对比分析羊毛二硫键以及构象变化。结果表明,羊毛较优的拉曼测量条件为激发波长785 nm、扫描时间20 s、激光强度50 mW和50倍物镜观察。通过对比不同方法处理后纤维的拉曼光谱图可发现:超声波处理羊毛后β折叠构象含量降低;二硫苏糖醇处理羊毛后在2569 cm^(-1)处出现了巯基的吸收峰,羊毛二硫键相对含量降低至28.9%,二硫键由分子内的GGG构型转变为分子间的GGT和TGT构型,蛋白质大分子由α螺旋构象转化为β折叠构象;过氧化氢处理羊毛后在1044 cm^(-1)处产生新的S—O吸收峰,β折叠构象含量降低。

DTI和DTT评估孕产史对女性盆底肌的影响

目的:探讨DTI及DTT评估孕产史对女性盆底肌的影响的可行性。方法:将46名健康女性分为未生育组和已生育组,行磁共振常规序列和DTI成像。调节最小FA阈值进行纤维重建,获得最佳纤维重建参数。测量双侧耻骨直肠肌的表观弥散系数(ADC)、各向异性分数(FA)、容积比各向异性(VRA)和T2加权迹线(T2-WT)。比较未生育组和已生育组的各参数值变化。结果:(1)纤维示踪设置最小FA取值0.18时获得的DTT图像得分最高。(2)未生育组和已生育组的耻骨直肠肌的ADC值分别为(1.24±0.11)×10^(-3)mm^2/S,(1.33±0.11)×10^(-3)mm^2/s(P=0.017);FA、VRA和T2-WT值均差异无统计学意义(P>0.05)。结论:当最小FA设为0.18时,纤维示踪得到的女性盆底肌三维结构显示最佳,DTI和DTT可评估孕产史对女性盆底肌的影响。

DTI和DTT评估脑缺血性卒中所致运动功能损伤康复研究

目的分析缺血性卒中所致运动功能损伤患者采用扩散张量成像（DTI）、扩散张量纤维束成像（DTT）的评估效果.方法以我院收治的 20例患者作为研究对象,采用MRI 分别进行DTI、DTT 检查,对数据进行后期处理.观察检查结果,评估CST损伤程度与患肢肌力的关系.结果患者梗死区域 FA 值（0.30±0.05）低于健侧区域（0.52±0.11）,差异显著（P〈0.05）;CST分级为1级4例（20.0%）、2级5例（25.0%）、3级8例（40.0%）、4级3例（15.0%）;CST 损伤程度与患肢肌力具有负相关关系.结论针对缺血性卒中患者,CST损伤和运动功能康复具有相关性,采用DTI、DTT能够做出科学评估.