广东惠州地区46例血红蛋白J-Bangkok的分子诊断及血液学特征分析

目的分析血红蛋白J-Bangkok(Hb J-Bangkok)患者的血液学特征。方法收集2015年10月至2021年3月于惠州市第一妇幼保健院就诊的患者共86645例,使用全自动毛细管电泳仪检测其外周血样本,对筛查出Hb J条带的样本行血细胞分析和DNA测序。采用悬浮阵列技术检测α和β地中海贫血(简称地贫)基因。结果共检出46例Hb J-Bangkok(HBB:c.170G>A)患者,人群发生率为0.053%。单纯Hb J-Bangkok杂合子患者无血液学表型;Hb J-Bangkok合并SEA杂合子患者表现为轻型α地贫特征。首次报道了两例罕见类型,分别为Hb J-Bangkok合并Hb New York杂合子和Hb J-Bangkok合并SEA及βCD81杂合子。前者患者无明显血液学改变,其Hb J、Hb K和Hb A2分别为59.7%、39.5%和0.8%;后者患者表现为轻型α地贫特征。结论惠州地区人群Hb J-Bangkok发生率高,本研究有助于为疾病筛查提供参考数据以及完善惠州地区的地贫防控工作。

谷子DnaJ蛋白基因的克隆

DnaJ蛋白是近年研究较多的同热激等胁迫反应相关的基因。本研究用0.8%NaCl胁迫下的谷子幼苗提取RNA,用反转录酶M-MLV扩增得到第一链cDNA,再以第一链cDNA为模板进行PCR扩增,克隆获得了完整的谷子DnaJ蛋白基因,该基因cDNA全长1 260 bp,编码419个氨基酸,具有DnaJ蛋白分子伴侣系统的3个保守结构域。将谷子DnaJ蛋白基因构建入表达载体pGFP,获得了谷子DnaJ基因的表达载体。该基因的克隆和表达载体构建,为谷子DnaJ蛋白基因的功能分析以及谷子耐热抗旱机理研究有重要意义。

半滑舌鳎弧菌病病原的分离鉴定

从患病半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)内脏中分离到2株优势菌株,人工感染试验证实菌株150803对半滑舌鳎具有致病性;采用形态学观察、生理生化特性分析、16S r RNA等方法对所分离菌株进行鉴定,结果显示,菌株150803为革兰阴性杆菌,生化特性与溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)较为接近,以hsp60基因为遗传标记构建的系统发育树将菌株150803与溶藻弧菌聚为一支,置信度为99%,采用特异性引物扩增溶藻弧菌dnaJ基因得到预期144 bp的基因片段。综合以上结果判定引起此次半滑舌鳎发病的病原为溶藻弧菌。对22种抗菌药物的敏感性试验表明,菌株150803对恩诺沙星、环丙沙星、庆大霉素、菌必治敏感,对氟苯尼考、呋喃唑酮、苯唑青霉素等具有抗性。

雷蒙德氏棉DnaJ蛋白的生物信息学预测及盐胁迫下的表达分析

Dna J蛋白是一类很大的蛋白家族,是近年来研究较多的与胁迫反应等相关的蛋白。本文利用生物信息学手段,系统研究了雷蒙德氏棉(Gossypium raimondii)Dna J蛋白的数目、分类、染色体定位、亚细胞定位、进化以及在旱地棉(Gossypium aridum)和克劳茨基棉(G.klotzschianum)盐胁迫下的表达模式。结果显示:雷蒙德氏棉基因组有119个Dna J蛋白,长度从73个氨基酸到2574个氨基酸不等;在13条染色体上不均匀分布,且具有不同的亚细胞定位;Dna J结构域大致被分为9个小组,每个小组都有与拟南芥同源的基因;盐胁迫下,鉴定到旱地棉和克劳茨基棉共同差异表达的Dna J基因3个,在旱地棉盐胁迫整个过程中差异表达的基因2个。雷蒙德氏棉Dna J基因家族的鉴定和分析,将为进一步研究Dna J基因家族的功能奠定一定的基础。

五种养殖鲟、鳇鱼DNA含量的比较

采用德国Partec Pas Ⅲ型流式细胞仪,以鸡红细胞为标准DNA(含量为2.3pg/N),测定了俄罗斯鲟(Acipenser gueldenstaedti Brandt)、西伯利亚鲟(Acipenser baerii Brandt)、史氏鲟(Acipenser schrencki Brandt)、小体鲟(Acipenser ruthenus Linnaeus)和达氏鳇(Huso dauricus Ceorgi)的体细胞DNA含量。结果表明,在上述五种鲟鱼类的DNA含量中,俄罗斯鲟、西伯利亚鲟和史氏鲟的DNA含量非常接近,分别为12.24pg/N,11.60ps/N,11.59pg/N,三种鲟鱼相比较差异并不显著。小体鲟和达氏鳇的DNA含量是6.06pg/N和4.77pg/N,两种鱼相比较差异也不显著。但与上述三种鲟鱼相比较DNA含量几乎相差1倍。从测定的结果并结合已发表的有关鲟鱼类资料可以确定俄罗斯鲟,西伯利亚鲟和史氏鲟属于八倍体类型,而小体鲟和达氏鳇则属于四倍体类型。

巨龙竹基因组DNA的提取及RAPD反应条件的优化

用改良CTAB法从巨龙竹硅胶干燥的叶片中提取基因组DNA,成功地进行RAPD扩增。通过正交法对RAPD反应条件优化,6个试验因子的最适条件为:模板DNA1～1.5ng/μl,引物0.8～1.0μmol/L,dNTPs0.1～0.15mmol/L,Mg^(2+) 2.0～2.5mmol/L,Taq酶0.5～1.0U,退火温度35～36℃。

J-聚集态下中位-四(对-磺酸基苯基)卟啉与ct-DNA相互作用的研究

采用紫外可见光谱法研究了中位-四(对-磺酸基苯基)卟啉(TPPS)在高酸度条件下的J-聚集行为,及该J-聚集体与ct-DNA的相互作用特点。TPPS形成J-聚集体不仅需要一定的临界聚集浓度,还需要一定的酸度范围。酸的阴离子种类也对TPPS的聚集有一定程度的影响。一定浓度的ct-DNA对TPPS的J-聚集体产生减色效应,而对TPPS的质子化型体却几乎没有任何影响。说明,在实验条件下,TPPS可以以J-聚集体的形式与ct-DNA发生相互作用。

核桃与铁核桃种间关系的RAPD鉴定

运用RAPD技术对核桃与铁核桃特征性条带进行标记。分别利用8个核桃样品和8个铁核桃样品构建2个物种的基因池,用327个随机引物,选出10个多态性引物,进一步用这10个引物进行单株确认,发现只有引物D6在核桃类群的8个样品中扩增出一条250bp的特异带,而在铁核桃类群的8个样品中无此特异带。初步分析认为,D6-250可能是核桃与铁核桃之间的特异性分子标记,该结果可为核桃和铁核桃种质鉴定提供一定的理论依据。

霍山石斛cpDNA全序列微卫星分布及分子鉴别研究

目的:探讨霍山石斛的叶绿体基因组(chloroplast genomic DNA,cpDNA)中微卫星分布规律并设计引物鉴别霍山石斛及其伪品。方法:利用GenBank上已公布的霍山石斛cpDNA全序列,应用分子生物学软件对霍山石斛cpDNA中的微卫星位点统计分析,并设计筛选特异性引物对霍山石斛进行鉴别。结果:霍山石斛cpDNA中微卫星位点共有52个,以单碱基重复序列为主,共有25个,占总位点48%,其次二碱基重复序列有16个,占总位点30.8%,三碱基及三碱基以上重复序列在cpDNA中分布极少。在通过微卫星位点所设计的4对引物中,有2对引物可对霍山石斛及部分混伪品进行有效的鉴别。结论:所设计的引物可以对霍山石斛及其伪混品进行鉴别,且所得数据为霍山石斛的种群遗传和起源分化的研究提供了支持。

鸡内源性类J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆及分析

为深入探讨J亚群禽白血病病毒(AvianleukosisvirussubgroupJ,ALV J)的亚群特性,利用ALV Jgp85基因两侧的序列片段为引物,从正常SPF蛋鸡、商品肉鸡和DF1细胞基因组中完整地扩增了内源性类ALV Jgp85基因。肉鸡和DF1细胞内源性类ALV Jgp85基因同源性达99 9%;SPF蛋鸡内源性类ALV Jgp85基因与肉鸡和DF1细胞的内源性类ALV Jgp85基因之间同源性达95 6%、95 3%。三种不同来源的内源性类ALV Jgp85基因DNA与IMC10200株ALV J的gp85基因的同源性分别为91 8%、94 1%、94 0%;与ALV J原型株HPRS 103gp85基因的同源性分别为95 6%、98 3%、99 9%。内源性类ALV Jgp85序列与外源性ALV Jgp85基因具有相似或一致的ORF和Jameson Worlf抗原表位优势。

表达J亚群禽白血病病毒gp85蛋白重组表达质粒的免疫原性研究

为评价J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白gp85基因作为ALV-J DNA疫苗的免疫原性,本研究通过PCR扩增ALV-J的gp85基因(930 bp),将其克隆于真核表达载体pVAX1中构建重组真核表达质粒pVAX1-gp85。间接免疫荧光检测结果显示gp85在转染的哺乳动物Hela细胞和鸡成纤维细胞均能够表达。将该重组质粒免疫雏鸡,利用ELISA试剂盒动态检测血清ALV-J抗体,结果显示pVAX1-gp85能够诱导大部分鸡只产生ALV-J抗体,并且抗体效价随加强免疫次数逐渐升高。本研究为开展ALV-J DNA疫苗的研究提供了实验依据。

LTR对J亚群禽白血病病毒感染的影响

为探讨LTR基因在骨髓瘤病变型J亚群禽白血病病毒(ALV-J)NX0101致病中的作用,利用反向遗传将血管瘤病变型ALV-J HN06株中两端LTR元件替换至NX0101株的相应位置,拯救出重组病毒NX-HNLTR株。人工接种7日龄SPF雏鸡,分别检测NX0101株和NX-HNLTR株对鸡体的影响。感染鸡生长都较慢。感染NX0101株的鸡,胸腺指数和腔上囊指数明显比对照组低,脾脏指数与对照组相比波动较大,骨髓和脾脏在攻毒后3周可检测到病毒整合到基因组中,胸腺和腔上囊在攻毒后6周才检测到。感染NX-HNLTR株的鸡脾脏指数明显比对照组低,攻毒后2周可检测到病毒整合到脾脏基因组中,骨髓和胸腺分别在攻毒后3周和6周检测到。结果提示,LTR对NX0101株感染鸡的免疫器官有一定的影响。

DDR相关蛋白缺陷引起的原发性免疫缺陷表型研究进展

在细胞内可变区基因(多样化基因)连接区基因片段重组(variable(diversity)joining recombination,V(D)J)与免疫球蛋白的类别转换重组(class switch recombination,CSR)过程中会产生程序性DNA双链断裂(DNA double strand break,DSB).当检测到DSB发生时DNA损伤反应(DNA damage response,DDR)被启动.DDR缺陷的病人具有原发性免疫缺陷表型(primary immunodeficiency,PID).总结了V(D)J重组与CSR产生DDR的分子机制,综述了V(D)J重组与CSR过程中DDR相关蛋白缺陷引起的原发性免疫缺陷表型.

人鼠嵌合弓形虫免疫球蛋白M重组抗体制备及J链对其聚体形成的影响

目的体外制备人鼠嵌合弓形虫免疫球蛋白M(TOX-IgM)抗体,并验证加入J链对IgM抗体蛋白聚体、效价及稳定性的影响。方法从美国国家生物信息中心数据库获取抗体的重链可变区、轻链可变区以及J链序列,通过DNA重组技术分别将TOX抗体轻重链可变区和人源恒定区进行拼接,构建人鼠嵌合IgM表达载体,转染HEK 293F细胞进行表达。观察J链相关效应。结果J链有利于抗体聚体形成(聚体占比由11.3%提升至75.5%),抗体效价由1∶40提升至1∶160;在37℃热稳定性实验及反复冻融实验中,TOX-IgM(J+)稳定性与TOX-IgM(J-)相当。通过酶联免疫吸附试验鉴定蛋白活性,本实验成功制备人鼠嵌合TOX-IgM抗体,经聚丙烯酰胺凝胶电泳还原显示,重链大小约为75000,轻链大小约为25000,符合预期;效价、稳定性、基质效应均满足需求。结论在连接链J链(15000蛋白)存在下,IgM抗体更易形成五聚体,即5个IgM单体通过二硫键和J链彼此之间相互连接,且经评价效价和稳定性均有了明显提升。

DNA研究的先驱

介绍了J．M．Gulland和D．O．Jordan关于DNA的先驱研究.讨论并分析了他们的贡献对J．D．Watson和F．H．C．Crick提出DNA的双螺旋结构模型以及对L.Pauling关于DNA结构研究的影响。

霍山石斛种内遗传稳定性的RAPD初探

目的 研究霍山石斛荚果内遗传稳定性及荚果间的差异大小。方法 利用从20个随机引物筛选出来的3个稳定性较好的10碱基引物对来自5个不同荚果的霍山石斛种群进行RAPD检测。结果 5个荚果内遗传相似系数较大,在92.5926%-100.00%,其中H1、H9、H10、H14存在一定程度的变异,H23是一个较为稳定的群体;5个荚果间H1、H9、H10、H23的遗传距离较小,H14与其他4个荚果的遗传距离则较大。结论 建立霍山石斛稳定的无性快繁体系是切实可行的,同时说明霍山石斛种内存在一定的变异,H14与其他荚果的差异最大。

染色体转位(Translocation)与癌症

许多种癌症是由染色体转位引起的。这是因为转位使原癌基因活化并过量表达 ,或是转位使基因融合。大部分已确认的转位都与免疫系统 (免疫球蛋白和T细胞受体基因 )本身固有的V(D)J重组有关。此外 ,外界因素 ,如电离辐射和某些化学药物等因素使DNA双链断裂 ,也可能导致染色体转位和癌变。了解染色体转位和癌变机制 。

京海Ⅰ号黄鸡DNA指纹中J带与体重的相关性研究

利用DNA指纹技术,以EAV(禽内源性反转录病毒片段)为探针,EcoR Ⅰ为限制性内切酶,检测京海Ⅰ号黄鸡DNA指纹中J带出现的频率以及与6个周龄体重之间的相关性。结果表明:EAV指纹图谱中,长度为3.5kb的条带J在京海Ⅰ号黄鸡中出现的频率为54.00％;条带J与鸡群8周龄、12周龄、18周龄、43周龄体重均呈显著负相关,无J带的鸡群平均体重高于有J带的鸡群。J带可作为京海Ⅰ号黄鸡增重的遗传标记进行标记辅助选择。

融合表达禽白血病env基因和IgG-Fc基因对鸡免疫效果研究

为研究鸡IgG-Fc作为分子佐剂是否能够增强J亚群白血病病毒env基因核酸疫苗的免疫效果,本研究克隆鸡IgG-Fc、禽白血病病毒-J(ALV-J)env基因,通过overlap-PCR将两个基因串联,构建pcDNA-env-Fc重组质粒,转染HEK293T细胞,48 h后经间接免疫荧光试验证明外源基因能够在细胞内表达。将pcDNA-env-Fc重复免疫SPF鸡3次,记录免疫过程中ALV-J env抗体动态变化,通过ELISA试剂盒检测鸡体内ALV-J env基因特异性抗体含量,结果显示第5周ALV-J抗体水平显著高于对照组(p<0.05),尤其是IgG-Fc片段作为分子佐剂比ALV-J env基因疫苗更能显著刺激机体产生抗体。结果表明IgG-Fc片段可以作为ALV-J env基因疫苗有效的分子佐剂。

急剧弯曲DNA柔韧性的研究进展

基因调控,核小体和病毒的包装行为都会涉及DNA的急剧弯曲成环。DNA分子的环化是研究其本身柔韧性的主要方法。目前已经发展出很多研究DNA环化的模型,其中WLC(worm-likechain)模型较为成熟。近年来,在DNA环化的重要参数、影响因素以及DNA急剧弯曲成环的理论研究等诸多方面都有了新进展。