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甘蔗分子伴侣ShDnaJ基因克隆及在甘蔗线条花叶病毒胁迫下的表达分析
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作者 冯小艳 王文治 +4 位作者 王俊刚 沈林波 赵婷婷 冯翠莲 张树珍 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期2310-2319,共10页
【目的】克隆甘蔗分子伴侣基因Sh DnaJ,并分析其在甘蔗线条花叶病毒(SCSMV)胁迫下的表达模式,为探究ShDnaJ基因在甘蔗应答SCSMV侵染过程中的功能和作用机制提供理论参考。【方法】通过同源克隆技术克隆ShDnaJ基因完整开放阅读框(ORF)序... 【目的】克隆甘蔗分子伴侣基因Sh DnaJ,并分析其在甘蔗线条花叶病毒(SCSMV)胁迫下的表达模式,为探究ShDnaJ基因在甘蔗应答SCSMV侵染过程中的功能和作用机制提供理论参考。【方法】通过同源克隆技术克隆ShDnaJ基因完整开放阅读框(ORF)序列,利用生物信息学软件对其进行分析,再利用绿色荧光蛋白(GFP)融合表达法分析ShDnaJ蛋白的亚细胞定位,采用实时荧光定量PCR检测ShDnaJ基因在甘蔗不同组织及在SCSMV胁迫下的表达水平。【结果】ShDnaJ基因ORF全长1260 bp,编码419个氨基酸残基,蛋白分子量为45682.47 Da,理论等电点(pI)为8.78,属于稳定的亲水蛋白,含有DnaJ结构域,属于DnaJ超家族成员,定位于内质网。ShDnaJ蛋白的二级结构由113个α-螺旋、31个β-转角、78个延伸链和197个无规则卷曲组成。ShDnaJ蛋白与高粱SbDnaJ蛋白的氨基酸序列相似性最高,为96.93%,说明两者亲缘关系最近。ShDnaJ基因在甘蔗根、茎和叶中均有表达,且根和茎中的相对表达量显著高于叶中(P<0.05,下同),但未成熟茎Sh DnaJ基因的相对表达量高于成熟茎;成熟叶ShDnaJ基因的相对表达量高于未成熟叶。随着处理时间的推移,SCSMV胁迫组和对照组(磷酸缓冲液处理)中ShDnaJ基因的相对表达量整体呈下降趋势,但SCSMV接种后不同时间点ShDnaJ基因的相对表达量均显著高于对照组。【结论】ShDnaJ基因具有组织表达特异性,且组织的成熟程度会影响其表达水平。SCSMV胁迫下该基因表达上调,推测该基因参与调控甘蔗植株对SCSMV的抗性。 展开更多
关键词 甘蔗 分子伴侣dnaj 基因克隆 甘蔗线条花叶病毒(SCSMV) 表达分析
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Gene cloning and sequence analysis of the cold-adapted chaperones DnaK and DnaJ from deep-sea psychrotrophic bacterium Pseudoalteromonas sp. SM9913 被引量:1
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作者 ZHAO Dianli CHEN Xiulan HE Hailun SHI Mei ZHANG Yuzhong 《Acta Oceanologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2007年第6期91-100,共10页
Pseudoalteromonas sp. SM9913 is a phychrotmphic bacterium isolated from the deep-sea sediment. The genes encoding chaperones DnaJ and DnaK of P. sp. SM9913 were cloned by normal PCR and TAIL - PCR (GenBank accession ... Pseudoalteromonas sp. SM9913 is a phychrotmphic bacterium isolated from the deep-sea sediment. The genes encoding chaperones DnaJ and DnaK of P. sp. SM9913 were cloned by normal PCR and TAIL - PCR (GenBank accession Nos DQ640312, DQ504163 ). The chaperones DnaJ and DnaK from the strain SM9913 contain such conserved domains as those of many other bacteria, and show some cold-adapted characteristics in their structures when compared with those from psychro-, meso-and themophilic bacteria. It is indicated that chaperones DnaJ and DnaK of P. sp. SM9913 may be adapted to low temperature in deep-sea and function well in assisting folding, assembling and translocation of proteins at low temperature. This research lays a foundation for the further study on the cold-adapted mechanism of chaperones DnaJ and DnaK of cold-adapted microorganisms. 展开更多
关键词 COLD-ADAPTED chaperone dnaj DNAK DEEP-SEA Pseudoalteromonas sp. SM9913 gene cloning sequence analysis
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辣椒锌指蛋白DnaJ-Like基因家族鉴定及对高温胁迫的表达响应 被引量:2
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作者 段敏杰 李怡斐 +4 位作者 杨小苗 王春萍 黄启中 黄任中 张世才 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期187-198,共12页
植物DnaJ-Like锌指蛋白(DNAJE)是近年来发现的一类具有重要功能的蛋白,在光合作用、质体发育与运动和植物抗逆及防御反应中发挥重要作用。基于辣椒全基因组数据,对辣椒DNAJE基因家族(CaDNAJE)进行鉴定,利用生物信息学方法对基因和蛋白... 植物DnaJ-Like锌指蛋白(DNAJE)是近年来发现的一类具有重要功能的蛋白,在光合作用、质体发育与运动和植物抗逆及防御反应中发挥重要作用。基于辣椒全基因组数据,对辣椒DNAJE基因家族(CaDNAJE)进行鉴定,利用生物信息学方法对基因和蛋白特征、比较进化、共线性关系及高温胁迫下基因表达模式等进行分析。结果表明,CaDNAJE基因家族有28个成员,不均匀的分布在10条染色体和3个Scaffold上,氨基酸序列长度为99-470 aa,分子量为10.05-52.26 kD,理论等电点(pI)为4.75-9.64,其编码蛋白主要定位在叶绿体和细胞核中;辣椒、番茄和拟南芥的比较进化分析可将其分为GroupⅠ和GroupⅡ2个亚族,同一亚族具有类似的蛋白保守motif和基因结构;CaDNAJE基因启动子区包含大量光响应、激素响应和胁迫应答元件;辣椒与拟南芥DNAJE之间存在10对共线性基因,辣椒种内仅有1对;辣椒不同组织转录组分析发现,GroupⅠ中多数成员在各组织中均有高表达,而GroupⅡ中除CaDNAJE2、CaDNAJE9等基因存在高表达外,多数基因表达量都很低甚至不表达;高温胁迫下,辣椒叶片过氧化氢含量急速上升后降低,丙二醛含量持续升高,抗氧化物酶活性也有不同程度的提高。同时,高温诱导热激转录因子Hsf和热激蛋白HSP耐热相关基因及CaDNAJE基因高表达,在不同胁迫时期发挥调控作用。推测CaDNAJE基因家族可能参与辣椒响应高温胁迫,提高其耐受力,以降低细胞损伤。 展开更多
关键词 辣椒 dnaj-Like锌指蛋白 全基因组鉴定 高温胁迫 基因表达 调控
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利用花粉管通道转化谷子DNAj基因获得转基因小麦 被引量:8
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作者 王永芳 张军 +4 位作者 崔润丽 李伟 智慧 李海权 刁现民 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第2期17-21,共5页
为提高小麦的抗旱能力,采用花粉管通道法将本实验室克隆的谷子抗逆相关基因DNAj转入小麦中。对授粉方式、柱头处理方式、质粒DNA浓度及DNA稀释试剂等因素对结实率的影响进行了对比,结果只有授粉方式对结实率的影响有显著差异,其他条件... 为提高小麦的抗旱能力,采用花粉管通道法将本实验室克隆的谷子抗逆相关基因DNAj转入小麦中。对授粉方式、柱头处理方式、质粒DNA浓度及DNA稀释试剂等因素对结实率的影响进行了对比,结果只有授粉方式对结实率的影响有显著差异,其他条件下结实率均未显示显著差异。对转化获得的703株T0小麦植株提取DNA进行分子检测,有1株小麦稳定扩增到了预期的1 260 bp的目的基因片段。虽然转化效率偏低(1.42‰),但说明利用花粉管通道法将谷子的抗逆相关基因DNAj导入小麦是可行的,为创造抗逆性改良的小麦新材料奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦 dnaj基因 花粉管通道法 转化
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cDNA文库与RACE方法结合克隆马铃薯DnaJ-like基因全长cDNA 被引量:7
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作者 李广存 金黎平 +3 位作者 王晓武 谢开云 谢丙炎 屈冬玉 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期649-654,共6页
以青枯病菌小种3号(生化变种2)PO41诱导24h和48h的马铃薯抗青枯病基因型ED13叶片为材料,应用SMART技术构建了一个富集青枯病抗性相关基因的cDNA文库。继而利用RACE技术与该cDNA文库相结合克隆了一个马铃薯分子伴侣基因的全长cDNA。该cDN... 以青枯病菌小种3号(生化变种2)PO41诱导24h和48h的马铃薯抗青枯病基因型ED13叶片为材料,应用SMART技术构建了一个富集青枯病抗性相关基因的cDNA文库。继而利用RACE技术与该cDNA文库相结合克隆了一个马铃薯分子伴侣基因的全长cDNA。该cDNA长735bp,5′端有25bp的非翻译区,3′端具有完整的polyA尾,包含一个编码177个氨基酸的完整开放阅读框架(GenBank登录号:DQ885360)。该分子伴侣基因与拟南芥DnaJ-like20的部分核苷酸序列具有84%的一致性,与其编码的氨基酸序列具有59%的一致性,暂命名为StDnaJ。目前在马铃薯中尚未发现与之同源的已知基因。半定量RT-PCR结果表明,该基因同时受青枯病菌的诱导和茉莉酸的调节,可能在青枯病菌和茉莉酸胁迫下具有促使胁迫损害细胞恢复活性的功能。 展开更多
关键词 马铃薯 CDNA文库 RACE dnaj-like基因
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菜豆DnaJ-like基因组DNA片段的克隆及其表达分析 被引量:5
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作者 张玉秀 张延红 +2 位作者 杨水云 柴团耀 赵文明 《西安交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第2期199-203,共5页
以PvSR6cDNA编码一种菜豆DnaJ like蛋白 ,并利用PCR的方法克隆出基因组部分序列 .核苷酸序列分析表明PvSR6基因在这段编码区内无内含子 ;Southernblot分析表明菜豆基因组中存在多个PvSR6基因拷贝 ;Northernblot分析结果表明PvSR6是组成... 以PvSR6cDNA编码一种菜豆DnaJ like蛋白 ,并利用PCR的方法克隆出基因组部分序列 .核苷酸序列分析表明PvSR6基因在这段编码区内无内含子 ;Southernblot分析表明菜豆基因组中存在多个PvSR6基因拷贝 ;Northernblot分析结果表明PvSR6是组成型表达蛋白 ,重金属Hg、Cd和As ,过量的Cu和Zn及受伤、高温、病毒侵染和水杨酸等均能强烈地诱导其基因在叶片中的表达 ,表明DnaJ 展开更多
关键词 基因克隆 菜豆 dnaj-like蛋白 基因表达 PvSR6基因 植物抗逆性 核苷酸序列分析
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无乳链球菌dnaJ基因缺失株的构建及其致病性研究 被引量:3
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作者 郭长明 吴植 +5 位作者 吴双 王永娟 王安平 刘广锦 刘永杰 朱善元 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期2507-2515,共9页
为研究dnaJ基因序列与细菌致病力的关系,本研究构建了dnaJ基因缺失株和互补株,并对其致病性进行验证。参照GenBank中无乳链球菌GD201008-001(登录号:NC_018646)目的基因序列分别设计引物,PCR克隆dnaJ基因上、下游同源臂基因序列,通过融... 为研究dnaJ基因序列与细菌致病力的关系,本研究构建了dnaJ基因缺失株和互补株,并对其致病性进行验证。参照GenBank中无乳链球菌GD201008-001(登录号:NC_018646)目的基因序列分别设计引物,PCR克隆dnaJ基因上、下游同源臂基因序列,通过融合PCR将两个片段连接到一起,构建dnaJ基因上、下游同源臂融合片段,PCR克隆含有启动子序列的dnaJ基因。将dnaJ基因上、下游同源臂融合片段和含有启动子序列的dnaJ基因分别连接链球菌-大肠杆菌穿梭质粒pSET4s和pSET2,电转化GD201008-001感受态细胞,构建dnaJ基因缺失株ΔdnaJ和互补株CΔdnaJ。通过分析ΔdnaJ和CΔdnaJ的遗传稳定性与形态学变化对dnaJ上、下游基因转录的影响,以及生长速率和斑马鱼攻毒试验评价dnaJ基因对无乳链球菌毒力的影响。经PCR鉴定和测序证明,ΔdnaJ和CΔdnaJ构建成功;与野生株GD201008-001相比,ΔdnaJ和CΔdnaJ在细菌染色形态上均无明显差异,但ΔdnaJ在液体培养基中的生长速度明显减缓;dnaJ基因的缺失未对相邻基因的转录造成影响;ΔdnaJ对斑马鱼的毒力明显下降,对斑马鱼的LD 50为5.68×10 4 CFU,约是野生株的241倍。dnaJ基因对无乳链球菌的毒力有显著影响,本试验结果为进一步探究无乳链球菌dnaJ基因的功能提供了参考依据。 展开更多
关键词 无乳链球菌 dnaj基因 基因缺失株 毒力
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海蓬子DnaJ-like基因片段的表达和生物信息学分析 被引量:5
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作者 张大栋 周春霖 +3 位作者 任丽娟 王茂文 汤日圣 马鸿翔 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2006年第3期222-224,共3页
从盐生植物海蓬子的抑制消减杂交文库中克隆了DnaJ-like基因的长609 bp的DNA序列,编码1个202 aa的开放阅读框,Northern B loting显示该基因在检测子(200 mmol/L NaC l)中的表达显著增强。生物信息学分析表明,在蛋白质水平上,该片段与拟... 从盐生植物海蓬子的抑制消减杂交文库中克隆了DnaJ-like基因的长609 bp的DNA序列,编码1个202 aa的开放阅读框,Northern B loting显示该基因在检测子(200 mmol/L NaC l)中的表达显著增强。生物信息学分析表明,在蛋白质水平上,该片段与拟南芥和水稻的同源性分别为6 e-68和1 e-58;在核酸水平上,该片段与拟南芥的同源性为3 e-24。保守区分析显示,该片段含有DnaJ-like基因完整的J功能域(J-Dom ain,66 aa),功能域在蛋白质水平与GenBank两种相关类型的J功能域的同源性分别为1 e-11和9 e-15。这为该基因的克隆及研究其在植物逆境胁迫中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 dnaj-like基因 表达 生物信息学分析 海蓬子
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猪附红细胞体DnaJ基因PCR诊断方法的建立及应用 被引量:2
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作者 张影 贾立军 +2 位作者 薛书江 钱年超 张守发 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第1期24-27,共4页
为建立一种特异、敏感、准确的猪附红细胞体诊断技术,本试验根据GenBank上发表的猪附红细胞体全基因组(NC-015153.1)中的DnaJ基因序列设计合成了一对特异性引物,建立了猪附红细胞体DnaJ基因PCR诊断方法,进行了特异性和敏感性试验,并与... 为建立一种特异、敏感、准确的猪附红细胞体诊断技术,本试验根据GenBank上发表的猪附红细胞体全基因组(NC-015153.1)中的DnaJ基因序列设计合成了一对特异性引物,建立了猪附红细胞体DnaJ基因PCR诊断方法,进行了特异性和敏感性试验,并与姬姆萨染色镜检方法进行了临床应用比较。结果,猪附红细胞体DnaJ基因PCR诊断方法扩增片段大小为868bp(GenBank登录号为:JN247670),与GenBank中(NC_015153.1)同源性为99%,该方法扩增不出犬新孢子虫、牛附红细胞体、犬附红细胞体等基因片段,最低检测猪附红细胞体DNA量为124fg/μL,通过对53份猪血液样本的检测,并与血液涂片姬姆萨染色镜检比较,说明建立的PCR诊断方法具有特异、敏感、准确等优点,完全适用于猪附红细胞体的诊断。 展开更多
关键词 猪附红细胞体 dnaj基因 PCR
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水稻DnaJ蛋白的生物信息学分析 被引量:9
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作者 赵旭 刘向国 王爱荣 《亚热带农业研究》 2011年第3期206-211,共6页
DnaJ蛋白是一类很大的蛋白家族,因含有保守的DnaJ结构域而得名。本文对水稻DnaJ蛋白进行了生物信息学分析表明,水稻中共有101个DnaJ蛋白,分为典型的三大类。通过表达证据搜索发现,除了11个基因没有表达证据外,其他基因在水稻中都有表达... DnaJ蛋白是一类很大的蛋白家族,因含有保守的DnaJ结构域而得名。本文对水稻DnaJ蛋白进行了生物信息学分析表明,水稻中共有101个DnaJ蛋白,分为典型的三大类。通过表达证据搜索发现,除了11个基因没有表达证据外,其他基因在水稻中都有表达。此外,对水稻的DnaJ蛋白家族进行了初步的进化分析。 展开更多
关键词 水稻 dnaj蛋白 基因家族 基因表达 进化分析
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芸芥中DnaJ同源基因的克隆与表达分析 被引量:1
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作者 方彦 杨刚 +4 位作者 孙万仓 曾秀存 武军艳 刘自刚 杨宁宁 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期61-65,共5页
为研究芸芥自交亲和机理,采用mRNA差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)分析技术,从芸芥自交亲和系开花前柱头中获得1条差异片段。测序及DNA序列的生物信息学分析表明,该差异片段与拟南芥DnaJ蛋白同源基因At J3有较高同源性,暂命名为esAtJ3基因... 为研究芸芥自交亲和机理,采用mRNA差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)分析技术,从芸芥自交亲和系开花前柱头中获得1条差异片段。测序及DNA序列的生物信息学分析表明,该差异片段与拟南芥DnaJ蛋白同源基因At J3有较高同源性,暂命名为esAtJ3基因。该序列含有一个长度为297 bp的完整开放阅读框,编码98个氨基酸残基,含有一个DnaJ-C保守结构域,属于植物DnaJ超家族。esAtJ3基因编码的蛋白无信号肽,是一个亲水性蛋白,该蛋白主要由不规则卷曲和α螺旋组成。实时荧光定量PCR分析表明,esAtJ3基因在芸芥SC系开花前柱头中表达量较高,初步推测该基因可能参与芸芥亲和性调控。 展开更多
关键词 芸芥 dnaj同源基因 差异基因 表达分析
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DnaJ类分子伴侣PBP的基因克隆及亚细胞定位研究 被引量:6
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作者 刘缨 朱美财 +2 位作者 王荫静 占志 刘成刚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期531-534,共4页
目的:从人骨骼肌cDNA文库中,分离、鉴定视网膜感光受体外周蛋白的结合蛋白(PBP)-DnaJ(HSP40)类分子伴侣,并初步分析其在转染的哺乳动物细胞中的表达及分布。方法:以33p-dCTP标记探针杂交筛选人骨骼肌cDNA文库,对阳性克隆进行序列分析,... 目的:从人骨骼肌cDNA文库中,分离、鉴定视网膜感光受体外周蛋白的结合蛋白(PBP)-DnaJ(HSP40)类分子伴侣,并初步分析其在转染的哺乳动物细胞中的表达及分布。方法:以33p-dCTP标记探针杂交筛选人骨骼肌cDNA文库,对阳性克隆进行序列分析,并以脂质体介导转染哺乳动物细胞,用免疫印迹及间接免疫荧光染色法检测目的蛋白的表达。结果:筛选出全长pbp基因,经与GenBank中的序列比较分析证实,与DnaJ家族的1个成员-mrj(1.5 kb)的序列相同,且含140 bp左右富含GC的非编码区上游序列。在COS-7细胞 中瞬时表达的PBP,大多呈典型的胞浆分布,而J-domain缺失的pbp片段多为胞核分布。而在CHO细胞中稳定表达的PBP,在处于不同细胞周期时相的细胞中的分布不同。结论:DnaJ除与HSP70(DnaK)协同发挥重要功能外,其本身作为分子伴侣也可能发挥着重要作用,且与细胞周期可能存在某种密切联系。 展开更多
关键词 dnaj分子伴侣蛋白 基因 转染细胞 外周蛋白结合蛋白
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黄瓜DnaJ基因家族鉴定及对高温胁迫的表达响应 被引量:6
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作者 宋蒙飞 王星 +2 位作者 张开京 陈劲枫 娄群峰 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期267-277,共11页
[目的]本文旨在研究黄瓜热激蛋白DnaJ(CsDnaJ)的家族基因鉴定,并分析其在高温胁迫环境下的响应模式。[方法]利用生物信息学软件及黄瓜的全基因组测序数据库、公共数据库对CsDnaJ进行基因家族成员、染色体位置、蛋白特性、结构特征、进... [目的]本文旨在研究黄瓜热激蛋白DnaJ(CsDnaJ)的家族基因鉴定,并分析其在高温胁迫环境下的响应模式。[方法]利用生物信息学软件及黄瓜的全基因组测序数据库、公共数据库对CsDnaJ进行基因家族成员、染色体位置、蛋白特性、结构特征、进化及复制模式和组织表达特性分析,同时通过实时定量PCR技术分析其在高温胁迫环境下的响应模式。[结果]黄瓜CsDnaJ基因家族共存在81个成员基因,其中Chr 3含DnaJ基因最多,为16个,Chr 4、Chr 7最少,均为9个;CsDnaJ基因所编码的蛋白序列长度为113~2551 aa,且至少含有1个完整的J结构域核心区序列;亚细胞位置预测显示大部分蛋白定位于细胞核及叶绿体中。基因结构显示CsDnaJ基因均含有1~22个外显子。通过进化分析发现CsDnaJ蛋白可明显区分为9个亚簇,每个亚簇均存在拟南芥同源蛋白。共线性分析发现,CsDnaJ基因家族共存在17个共线基因,组成10对复制基因对,其中存在5对片段重复事件,3对串联重复事件,2对随机重复事件。组织表达特异性结果显示CsDnaJ基因在叶、茎、子房中的表达量略高于其在雄花、雌花、根及卷须中的表达量。荧光定量PCR结果显示,高温环境(昼/夜温度为42℃/35℃)可以诱导CsDnaJ基因的高表达,从而参与植物响应高温环境胁迫进程。[结论]黄瓜CsDnaJ基因家族核心结构域高度保守,在黄瓜响应高温胁迫中发挥重要作用。 展开更多
关键词 黄瓜 dnaj基因 生物信息学 高温胁迫 表达分析
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过表达dnaJ基因对鲍曼不动杆菌生物膜形成的影响 被引量:3
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作者 赖必鹏 周燕斌 +8 位作者 卓超 刘鲍默 黄丽霞 李少丽 谷金萃 林子盈 汪昕 陈思民 杨锐富 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2020年第5期501-507,共7页
目的研究过表达dnaJ基因对鲍曼不动杆菌生物膜形成的影响。方法以ATCC19606基因组DNA为模板扩增dnaJ基因并与质粒pWH1266双酶切后连接,筛选重组质粒并转化菌株ATCC19606,从而构建dnaJ基因过表达菌株19606-p-dnaJ,类似的办法构建空质粒... 目的研究过表达dnaJ基因对鲍曼不动杆菌生物膜形成的影响。方法以ATCC19606基因组DNA为模板扩增dnaJ基因并与质粒pWH1266双酶切后连接,筛选重组质粒并转化菌株ATCC19606,从而构建dnaJ基因过表达菌株19606-p-dnaJ,类似的办法构建空质粒对照组19606-p,用半定量结晶紫染色法观察生物膜形成的差异。结果dnaJ基因过表达组dnaJ基因相对表达量显著高于空质粒对照组,dnaJ基因过表达组24h生物膜量显著低于空质粒对照组(P<0.001)。结论过表达dnaJ基因对鲍曼不动杆菌生物膜形成能力有显著抑制作用。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 dnaj基因 过表达 生物膜
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家蚕DnaJ5基因的克隆与表达谱分析 被引量:1
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作者 步翠玉 宗志鹏 +2 位作者 李轶女 张志芳 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期282-286,共5页
DnaJ蛋白是一种调节蛋白。从构建的家蚕蛹cDNA文库中检索到一条编码DnaJ蛋白的EST,并克隆获得家蚕DnaJ5基因(Bm-DnaJ5,GenBank登录号为FJ592078)。该基因的开放阅读框长1 056 bp,编码351个氨基酸,分子质量为38.93 kD,等电点为9.25。利... DnaJ蛋白是一种调节蛋白。从构建的家蚕蛹cDNA文库中检索到一条编码DnaJ蛋白的EST,并克隆获得家蚕DnaJ5基因(Bm-DnaJ5,GenBank登录号为FJ592078)。该基因的开放阅读框长1 056 bp,编码351个氨基酸,分子质量为38.93 kD,等电点为9.25。利用实时定量PCR技术对Bm-DnaJ5基因在家蚕不同组织和发育时期的时空表达谱进行定量分析,结果显示:该基因在5龄幼虫时期的各组织中都有表达,在睾丸中的表达量最高,拷贝数达到1.16×108个/μg,其次在头部、中肠、前部丝腺和翅原基中的表达量也较高,在气管丛中的表达量最低,拷贝数仅为1.84×104个/μg;在蛹中期的几个组织中均有表达,其中在眼和睾丸中的表达量较高,拷贝数分别为8.79×107个/μg和1.78×107个/μg,而在卵巢中的表达量最低,拷贝数仅为1.94×105个/μg。 展开更多
关键词 家蚕 dnaj基因 克隆 表达谱 实时荧光定量PCR
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基于dnaJ基因的弧菌PCR检测方法 被引量:3
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作者 陈静 童桂香 +7 位作者 黄鸾玉 黎小正 吴祥庆 黄国秋 谢宗升 熊建华 谭红连 韦信贤 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1228-1234,共7页
【目的】建立一种能扩增dna J基因全长的PCR检测方法,为弧菌的快速筛查及种类鉴定提供技术支持。【方法】以弧菌dna J基因为靶基因,在其首尾的保守区域设计一对简并引物,经优化退火温度和引物浓度,建立能扩增弧菌接近全长dna J基因的PC... 【目的】建立一种能扩增dna J基因全长的PCR检测方法,为弧菌的快速筛查及种类鉴定提供技术支持。【方法】以弧菌dna J基因为靶基因,在其首尾的保守区域设计一对简并引物,经优化退火温度和引物浓度,建立能扩增弧菌接近全长dna J基因的PCR检测方法,并通过特异性试验、灵敏度试验和临床应用评价等验证其适用性。【结果】优化后的PCR反应体系50.0μL:2×F8 Fast Long PCR Master Mix 25.0μL,上、下游引物(20μmol/L)各2.0μL,DNA模板5.0μL,灭菌水补足至50.0μL。扩增程序:94℃预变性3 min;94℃10 s,55℃15 s,72℃15 s,进行35个循环;最后72℃延伸5 min。该PCR检测方法对副溶血弧菌、哈氏弧菌、创伤弧菌、河流弧菌、溶藻弧菌、拟态弧菌、霍乱弧菌和栖黑海弧菌等8种弧菌属细菌具有很强的特异性,对弧菌的最低检出限为102CFU/m L。应用建立的PCR检测方法对51株分离自海水样品的弧菌和32株分离自对虾样品的弧菌进行检测,结果显示全部为阳性,其中,海水样品中包括有副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌、河流弧菌、哈氏弧菌和栖黑海弧菌,对虾样品中包括副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌、河流弧菌和哈氏弧菌;经测序及同源性比对分析发现,种间菌株的dna J基因序列相似度为79.5%~92.8%,种内菌株间的dna J基因序列相似度为98.2%~99.9%。【结论】基于dna J基因建立的弧菌PCR检测方法能扩增出弧菌接近全长dna J基因,具有快速便捷、灵敏准确、适应性好等优点,结合测序技术,可为弧菌快速筛查及种类鉴定提供更全面和更准确的技术手段。 展开更多
关键词 弧菌 dnaj基因 PCR检测 鉴定
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条斑紫菜DnaJ基因家族鉴定及其在环境胁迫下的表达分析
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作者 孙斌 孔凡娜 殷吉强 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期51-61,共11页
针对条斑紫菜(Pyropia yezoensis)DnaJ(PyDnaJ)家族研究相对较少的现状,本研究利用生物信息学方法对PyDnaJ基因家族及其在胁迫条件下的表达模式进行探究,以便为进一步解析条斑紫菜抗逆机制奠定前期工作基础。本研究鉴定出27个DnaJ蛋白(P... 针对条斑紫菜(Pyropia yezoensis)DnaJ(PyDnaJ)家族研究相对较少的现状,本研究利用生物信息学方法对PyDnaJ基因家族及其在胁迫条件下的表达模式进行探究,以便为进一步解析条斑紫菜抗逆机制奠定前期工作基础。本研究鉴定出27个DnaJ蛋白(PyDnaJ01~27),并发现:其编码氨基酸数量范围为191~980;大部分DnaJ定位于高尔基体和细胞核;成员的基因结构简单,内含子较少;根据所含结构域不同可分为A、B、C三类;27个成员散布于3条染色体上。其中:PY_1染色体含DnaJ基因最多(11个);PyDnaJ01和PyDnaJ10为片段重复基因;PY_2和PY_3染色体上各有8个DnaJ基因;DnaJ基因启动子区域含有不同数目的胁迫响应元件和植物激素响应元件。系统发生分析表明PyDnaJ蛋白家族可以分成10个亚群。qRT-PCR结果显示,PyDnaJ家族成员在孢子体世代下的表达水平显著高于配子体世代,PyDnaJ家族成员在失水及温度胁迫下具有不同表达模式。 展开更多
关键词 条斑紫菜 dnaj 基因家族 失水胁迫 温度胁迫
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五家制药企业洁净区微生物群落分析 被引量:17
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作者 刘亚茹 余萌 +2 位作者 肖璜 王似锦 马仕洪 《中国药事》 CAS 2019年第7期796-802,共7页
目的:研究制药企业洁净区微生物群落的组成及分布规律,为制药企业良好的微生物控制提供依据。同时,也为超标调查分析、药品检出菌溯源分析及洁净环境菌数据库的建立与分析提供数据支持。方法:在A、B、C、D、E五家制药企业的生产洁净车... 目的:研究制药企业洁净区微生物群落的组成及分布规律,为制药企业良好的微生物控制提供依据。同时,也为超标调查分析、药品检出菌溯源分析及洁净环境菌数据库的建立与分析提供数据支持。方法:在A、B、C、D、E五家制药企业的生产洁净车间、洁净实验室、操作人员等监控点采集沉降菌,运用16S rRNA序列分析、ITS序列分析、看家基因序列分析,将收集获得的细菌、真菌鉴定到属或种。结果:本研究共收集获得细菌139株,真菌5株。16S rRNA序列分析结果判定葡萄球菌属40株,占比27.8%;微球菌属27株,占比18.8%;芽孢杆菌属16株,占比11.1%;微杆菌属9株,占比6.3%;不动杆菌属8株,占比5.6%;假单胞菌属6株,占比4.2%;真菌5株,占比3.5%;其他分属于10个属的菌株共33株,占比22.9%。结论:制药洁净环境微生物的组成主要为革兰氏阳性球菌包括葡萄球菌、微球菌;革兰氏阳性杆菌包括芽孢杆菌、微杆菌;少量的革兰氏阴性杆菌如假单胞菌、不动杆菌;还包括少量真菌。建议制药企业要控制洁净区人员数量,规范人员更衣进场程序和洁净区行为,制定有效的清洁消毒程序,加强环境监控,定期分析监控数据,研究数据变化趋势,出现异常数据,应及时采取措施,使洁净区处于良好的受控状态。 展开更多
关键词 洁净区 微生物群落 16S rRNA序列分析 dnaj序列分析 ITS序列分析
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猪附红细胞体DnaJ基因的克隆及真核表达 被引量:3
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作者 张影 钱年超 +2 位作者 贾立军 薛书江 张守发 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期65-69,共5页
为研究猪附红细胞体DnaJ基因的功能,根据GenBank中的猪附红细胞体全基因组序列(NC_015153.1),应用DNAStar、DNAMAN和ExPASy网络服务器筛选出1个候选蛋白基因DnaJ,设计合成1对特异性引物,经PCR技术扩增出DnaJ基因片段,克隆至pMD18-T载体... 为研究猪附红细胞体DnaJ基因的功能,根据GenBank中的猪附红细胞体全基因组序列(NC_015153.1),应用DNAStar、DNAMAN和ExPASy网络服务器筛选出1个候选蛋白基因DnaJ,设计合成1对特异性引物,经PCR技术扩增出DnaJ基因片段,克隆至pMD18-T载体上,并亚克隆到真核表达载体pVAX1上,构建了重组真核表达质粒pVAX-DnaJ,脂质体介导转染Vero细胞进行真核表达,RT-PCR和IFAT检测DnaJ基因在Vero细胞中的表达。结果表明,PCR扩增DnaJ基因的片段长度为876bp,编码292个氨基酸,与GenBank中的DnaJ基因同源性为99%;DnaJ基因在Vero细胞中获得瞬时表达。本试验为猪附红细胞体DnaJ基因的生物学特性及核酸疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪附红细胞体 dnaj基因 真核表达
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肺炎链球菌DnaJ蛋白的原核表达及其免疫保护效果 被引量:1
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作者 游文献 曹炬 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第6期754-759,共6页
目的原核表达肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)热休克蛋白40(heat shock protein 40,HSP40,DnaJ),并探讨其免疫保护效果。方法从2、3、6B、14、19F、R6型肺炎链球菌基因组DNA中扩增DnaJ基因,插入原核表达载体pET-32a中,构建重组表... 目的原核表达肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)热休克蛋白40(heat shock protein 40,HSP40,DnaJ),并探讨其免疫保护效果。方法从2、3、6B、14、19F、R6型肺炎链球菌基因组DNA中扩增DnaJ基因,插入原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-32a-DnaJ,转化大肠埃西菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组DnaJ蛋白经Ni-NTA树脂纯化后,分别经腹腔和鼻黏膜免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清和唾液中特异性IgG和IgA抗体滴度;用重组蛋白刺激小鼠脾细胞,ELISA法检测细胞因子水平的变化;流式细胞术检测特异性抗DnaJ血清结合到肺炎链球菌表面的能力;检测抗DnaJ血清抑制R6型肺炎链球菌黏附A549细胞的能力。结果 6株肺炎链球菌的PCR扩增产物均可见1 119 bp的DnaJ基因片段,测序结果与GenBank中登录的序列一致;重组表达质粒经双酶切鉴定构建正确;纯化的重组DnaJ蛋白相对分子质量约为38 000,纯度达90%以上,可与DnaJ小鼠免疫血清发生特异性反应。腹腔免疫DnaJ可使小鼠血清产生高滴度的特异性抗DnaJ抗体,鼻黏膜免疫DnaJ可增加小鼠血清和黏膜中抗DnaJ IgG和IgA抗体水平(P<0.01);鼻黏膜免疫DnaJ可使小鼠脾细胞释放高水平的细胞因子IL-10、IFNγ和IL-17A;抗DnaJ血清对肺炎链球菌具有更强的结合能力,且可抑制肺炎链球菌黏附肺癌上皮细胞A549。结论 DnaJ可诱导小鼠产生保护性免疫应答,提示其具有作为肺炎链球菌蛋白疫苗抗原的潜力。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 dnaj蛋白 原核细胞 基因表达 免疫保护
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