DNMT1通过SOCS1影响高糖诱导足细胞凋亡和炎性细胞因子释放

目的探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)对高糖(HG)诱导足细胞凋亡和炎性细胞因子释放的影响,并分析相关分子机制。方法体外培养足细胞MPC-5细胞,设立Control组和HG组,采用小RNA干扰技术和脂质体转染技术沉默或过表达DNMT1、SOCS1。采用qRT-PCR法检测DNMT1、SOCS1基因表达;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞中炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)]水平;Western blot法检测DNMT1、SOCS1蛋白及酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路蛋白表达。结果HG升高了MPC-5细胞凋亡率、炎症因子水平、DNMT1 mRNA表达以及DNMT1、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达,降低了SOCS1 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。沉默DNMT1表达和过表达SOCS1均降低了MPC-5细胞凋亡率、炎症因子水平及p-JAK2、p-STAT3蛋白表达(P<0.05)。沉默DNMT1表达升高了SOCS1 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。沉默SOCS1表达可逆转沉默DNMT1表达对MPC-5细胞凋亡、炎症以及p-JAK2、p-STAT3蛋白表达的影响。结论沉默DNMT1表达能够减轻HG诱导的足细胞凋亡和炎症反应,其作用机制可能与上调SOCS1表达抑制JAK2/STAT3信号通路活化有关。

新生儿缺氧缺血性脑病患儿血清DNMT1、DNMT3a和BDNF检测对预后评估的临床价值

目的探讨血清DNA甲基化转移酶(DNMT)1、DNMT3a和脑源性神经营养因子(BDNF)检测在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿预后评估中的价值。方法选取2016年1月至2023年1月在我院诊治的84例新生儿HIE患儿为观察组,并选取同期84例于我院出生的健康新生儿为对照组。根据患儿病情程度分为轻度组36例、中度组28例、重度组20例。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清DNMT1、DNMT3a和BDNF水平;多因素Logistic回归分析新生儿HIE患儿预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清DNMT1、DNMT3a和BDNF水平对新生儿HIE患儿预后的预测价值。结果与对照组相比,轻度、中度、重度组新生儿HIE患儿血清DNMT1、DNMT3a水平依次升高(P<0.05),BDNF水平依次降低(P<0.05);与预后良好组相比,预后不良组新生儿HIE患儿血清DNMT1、DNMT3a水平升高(P<0.05),BDNF水平降低(P<0.05);多因素Logistic回归分析发现,病情程度、DNMT1、DNMT3a是影响新生儿HIE患儿预后的危险因素(P<0.05),新生儿Apgar评分、BDNF是影响患儿预后的保护因素(P<0.05);血清DNMT1、DNMT3a、BDNF联合检测预测新生儿HIE患儿预后的ROC曲线下面积(AUC)为0.955,均优于其各自单独预测(Z_(联合检测-DNMT1)=2.046,P=0.020;Z_(联合检测-DNMT3a)=3.046,P=0.001;Z_(联合检测-BDNF)=2.073,P=0.019)。结论新生儿HIE患儿血清DNMT1、DNMT3a水平升高,BDNF水平降低,在新生儿HIE患儿预后评估中具有一定价值。

DNMT1在口腔鳞状细胞癌中的表达及作用机制研究

目的:探讨DNMT1在口腔鳞癌中的表达情况及其对口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:通过GEPIA2数据库分析泛癌中DNMT1表达情况;采用RT-qPCR、Western blot检测人口腔上皮角化细胞HOK及口腔鳞状细胞癌细胞系HSC3、SAS中DNMT1的表达水平;采用shRNA慢病毒敲低HSC3、SAS细胞中DNMT1并用RT-qPCR、Western blot检测sh DNMT1转染效率;采用CCK-8、平板克隆实验检测敲低DNMT1对HSC3、SAS细胞增殖的影响;采用细胞划痕、Transwell实验检测敲低DNMT1对HSC3、SAS细胞迁移、侵袭的影响。结果:与HOK相比,HSC3、SAS细胞中DNMT1的mRNA及蛋白表达量均较高(P<0.05);敲低DNMT1后,HSC3、SAS细胞的增殖、迁移及侵袭能力均降低(P<0.05)。结论:DNMT1在口腔鳞状细胞癌细胞中高表达,且可促进口腔鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

hSOD1-G93A突变的肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠脊髓中5-mC水平以及DNMT1、DNMT3A和DNMT3B表达的变化

目的探讨5-甲基胞嘧啶(5-mC)水平以及DNA甲基转移酶1、3A和3B(DNMT1、DNMT3A和DNMT3B)蛋白表达变化与肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)之间的关系。方法选用发病前期(70 d)、发病早期(95 d)、发病中期(108 d)和发病晚期(122 d)的hSOD1-G93A突变的ALS转基因小鼠,以同窝野生型(wild type,WT)小鼠作为对照,应用ELISA和Dot blot技术检测ALS小鼠脊髓中5-mC水平的变化规律,采用Western blot和免疫荧光双标染色技术检测ALS小鼠不同时期的脊髓中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B的蛋白水平变化以及定位。结果ELISA和Dot blot结果显示,与WT小鼠相比,ALS转基因小鼠脊髓中5-mC水平升高;Western blot分析显示,与WT小鼠相比,ALS转基因小鼠脊髓中DNMT1蛋白水平在70 d无显著性变化,在95 d、108 d和122 d显著升高;DNMT3A蛋白水平在70 d、95 d和108 d升高,在122 d无显著性变化;DNMT3B蛋白水平在70 d无显著性变化,在95 d、108 d和122 d显著升高。结论ALS转基因小鼠脊髓中5-mC水平及关键DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的蛋白水平异常升高与ALS发病密切相关。

沉默dnmt1基因对胃癌细胞株AGS细胞周期、增殖及凋亡的影响

背景与目的:DNA甲基转移酶1(DNAmethyltransferase1,dnmt1)基因在多种肿瘤细胞中表达量相当高,而在正常成人细胞中则低表达,因此dnmt1基因的高表达与肿瘤的发生有密切的关系。本研究观察以dnmt1基因为靶基因的重组质粒对胃癌细胞株AGS细胞周期、增殖及凋亡的影响。方法:设计短发夹状RNA(shorthairpinRNA,shRNA)的寡核苷酸片段,再克隆至载体pTZU6+1中构建重组体pshRNA-dnmt1,转染胃癌细胞株AGS。实验分为空白对照组(仅予脂质体)、pTZU6+1组(予空质粒pTZU6+1)和pshRNA-dnmt1组(予以重组质粒pshRNA-dnmt1)3组。Westernblot检测dnmt1蛋白水平变化;RT-PCR法评估mRNA水平;流式细胞技术分析细胞周期的变化;MTT法检测细胞生长情况;吖啶橙/溴乙锭双染色(AO/EB)法、电镜和TUNEL观察细胞凋亡情况。结果:成功构建重组质粒pshRNA-dnmt1,并经序列分析得到确认。pshRNA-dnmt1转染AGS细胞后24h出现dnmt1蛋白表达量减少,24、48、72h抑制率分别为28.24%、68.54%、81.47%。转染pshRNA-dnmt1后24、48、72h对AGS细胞中dnmt1mRNA的抑制率分别为21.63%、52.97%、72.06%。转染后72hS期细胞由空白对照组的(36.58±1.76)%降至pshRNA-dnmt1组的(18.54±6.59)%;G2/M期细胞由空白对照组的(6.18±0.32)%升至pshRNA-dnmt1组的(18.53±1.42)%,均有显著性差异(P<0.05)。转染后24、48、72h细胞存活率分别为79.49%、51.63%和39.16%。AO/EB法、电镜和TUNEL均可见大量典型的凋亡和坏死细胞。结论:重组质粒pshRNA-dnmt1能特异有效地抑制AGS细胞内dnmt1的表达、抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,为肿瘤的基因治疗提供依据。

DNMT1高表达与beta-catenin蓄积及肺鳞癌、腺癌的恶性表型相关

背景与目的 DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)是调控DNA甲基化的重要分子之一,DNMT1的异常表达与抑癌基因的甲基化、失活和多种肿瘤的发生发展有关。本研究旨在分析阐明DNMT1在正常肺组织和肺癌组织中表达的差异及其与肺鳞癌和腺癌临床病理因素的关系,并探讨DNMT1与β-catenin在肺癌中表达的相关性。方法采用组织芯片和免疫组化方法检测DNMT1和β-catenin在84例肺鳞癌、腺癌和相应癌旁正常肺组织中的表达情况。结果 DNMT1在84例肺癌组织中的平均阳性率为(58.04±35.07)%,显著高于癌旁正常肺组织[(6.88±10.26)%](t=12.835,P<0.001)。DNMT1的高表达与肺癌组织的腺癌组织学分型(r=0.365,P=0.001)、低分化程度(r=0.253,P=0.021)和淋巴结转移(r=0.246,P=0.024)正相关。DNMT1与β-catenin的细胞浆表达显著正相关(r=0.571,P<0.001)。结论 DNMT1的高表达是肺鳞癌和腺癌的普遍现象,DNMT1的高表达与肺癌的腺癌组织学类型和恶性表型有关;DNMT1在肺癌中可能与β-catenin协同表达。

DNMT1靶向RNA干扰重组体的构建及序列分析

目的 :本研究利用RNA干扰 (RNAinterfering ,RNAi)技术 ,以DNMT1(DNAmethyltransferase 1)为靶基因 ,设计构建重组体 ,并进行序列分析 ,为下一步探索肿瘤基因治疗的新途径打好基础。方法 :设计有小发夹结构的两条DNA序列 ,经退火成互补双链 ,再克隆至载体pTZU6 +1中构建重组体 ,转化JM10 9菌株 ,提取质粒行酶切鉴定后 ,进行测序分析。结果 :将合成的DNA序列退火后克隆到载体上 ,经测序鉴定确实为所需序列。结论 :DNMT1靶向RNA干扰重组体的成功构建和序列分析 ,可进一步利用克隆所得的小RNA序列干扰DNMT1的mRNA转录 。

Runx3、Rassf1a基因启动子在胃癌组织中的高甲基化及Dnmt1的表达

目的:探讨人类相关转录因子3(human runt-related transcription factor 3,Runx3)、Ras相关区域家族1A(ras-association domain family 1a,Rassf1a)基因启动子区的甲基化和甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,Dnmt1)基因的表达与胃癌发生的关系及临床意义.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(meth-ylation specific PCR,MSP)检测68例胃癌组织及其相应癌旁正常组织中Runx3、Rassf1a基因启动子区甲基化状态;同时应用实时荧光定量逆转录-多聚合酶链反应(real-time RT-PCR)和免疫组织化学SP法分别检测基因的Runx3、Rassf1a、Dnmt13个基因mRNA和蛋白的表达情况.结果:胃癌组织中Runx3、Rassf1a基因的甲基化阳性率较正常组织明显升高(45.59%vs10.29%;64.70%vs7.35%).胃癌组织中Runx3和Rassf1a mRNA阳性表达率明显低于正常组织(36.76%vs100%;27.94%vs97.06%),而胃癌组织中Dnmt1 mRNA阳性表达率则明显高于正常组织(80.88%vs17.65%),差异均有统计学意义差异.胃癌组织与正常组织RUNX3、RASSF1a、DNMT1蛋白与mRNA表达基本相一致.Runx3 mRNA、Rassf1a mRNA阴性表达的胃癌组织中其基因启动子的甲基化率较阳性表达者明显升高(72.09%vs0;85.71%vs2.94%),差异具有统计学意义.胃癌组织中RUNX3、RASSF1a与DNMT1蛋白的表达均呈负相关(r=-0.627,P<0.0001;r=-0.477,P<0.0001).结论:Runx3、Rassf1a基因启动子区的高甲基化及Dnmt1基因高表达可能与胃癌发生有关.

SLE患者外周血单个核细胞中miR-148b、miR-152和靶基因dnmt1的表达及其临床意义

目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞中miR-148b、miR-152和其靶基因dnmt1的表达水平在发病机制中的作用以及与SLE实验室相关指标、临床疾病活动度的之间的关系。方法采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time,qPCR)方法检测74例SLE患者和44例健康者的PBMCs中miR-148b、miR-152、dnmt1的表达水平,统计学分析其与SLE疾病活动度及SLE相关检验指标的关系。结果 miR-148b、miR-152在SLE患者PBMCs中的表达水平显著高于健康对照(P<0.05),dnmt1在SLE患者PBMCs中的表达水平显著低于健康对照(P<0.05)。除miR-148b在低活动组与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)外,miR-148b、miR-152和dnmt1在其他各组中的表达差异均有统计学意义。miR-152与ESR正相关(r=0.443,P=0.027);dnmt1与ANA抗体(r=-0.576,P=0.001)及SLEDAI评分均为负相关(r=-0.408,P=0.038)。结论 miR-148b、miR-152和dnmt1在SLE的发病机制中扮演着重要角色,可能作为疾病活动的参考指标,有助于指导疾病治疗和预后评估,并为SLE的治疗带来更多靶点。

DNMT1和DNMT3B基因多态性与食管癌发病风险的关联分析

目的探讨DNMTl基因多态性位点（rsl6999593，rs2228611）和DNMT3B基因多态性位点（rs2424908）的基因型与食管癌及其病理参数的关联。方法采用病例对照研究，使用MassARRAY检测技术对258例食管癌患者和260例健康对照的3个多态性位点基因型分布进行分析。采用Logistic回归模型分析各基因型与食管癌发生的关系并比较不同基因型与食管癌病理参数的关系。结果DNMT1基因rs16999593位点TC基因型（OR=0．69，95％CI：0．47—1．00）和rs2228611位点GA基因型（OR=0．67，95％CI：0．46—0．98）与食管癌的低风险相关，rs16999593TC、CC基因型与食管癌分化程度相关（中分化：TCvs.TT：OR=0．53，95％CI：0．33—0．86；低分化：CCVS．1Tr：OR=2．79，95％CI：1．12—6．91），rs2228611GA基因型与高分化食管癌（GAVS．GG：OR=0．47，95％CI：0．25～0．88）和无周围淋巴结转移（GAVS．GG：OR=0．62，95％CI：0．39—0．98）有关，DNMT3B基因rs2424908CC基因型与肿瘤Ⅲ-Ⅳ分期（CCVS．Tr：OR=0．38，95％CI：0．15～0．92）及远端淋巴结转移（CCvs．TT：OR=0．18，95％CI：0．40—0．80）相关。结论本研究发现rs16999593和rs2228611位点与食管癌的发生及分化程度相关，rs2228611和rs2424908位点和淋巴结转移相关，rs2424908位点和肿瘤分期有相关性。

DNMT1基因在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

采用Real-Time PCR检测DNA甲基转移酶-1(DNMT1)mRNA在20例口腔正常黏膜组织及43例口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达,用免疫组织化学法和Western blot分别检测DNMTl蛋白在组织样本中的表达。结果显示DNMTl mRNA在OSCC中高表达(Z=-2.028,P<0.05),43例OSCC组织中,DNMTl蛋白阳性表达率为81%,而在20例口腔正常黏膜组织中的阳性表达率为25%(P<0.05)。DNMTl有可能参与OSCC的发生发展。

利用dCas9-FokⅠ编辑大鼠Dnmt1基因

CRISPR/Cas9的发现为多种生物的基因编辑提供了强有力的工具。然而,该系统在提供靶向性基因修饰的同时,会产生一些不需要的突变,即脱靶现象。为提高CRISPR/Cas9的特异性,我们将野生型Fok I核酸内切酶的功能结构域与催化功能区失活的Cas9蛋白(dCas9)进行融合,形成融合蛋白用于降低脱靶效应。FokⅠ是一种依赖于二聚化才能行使内切酶活性的核酸酶,在本研究中,通过将FokⅠ功能结构融合到dCas9的N端,构建表达质粒p ST1374-dCas9-FokⅠ。我们前期研究中,发现一个sgRNA在介导Cas9编辑Dnmt1基因建立条件敲除大鼠时,存在显著的脱靶现象。以此为基础,我们利用dCas9-FokⅠ/sgRNA系统编辑大鼠Dnmt1基因,研究该系统是否能够进行基因编辑以及是否能够提高基因编辑特异性。将转录好的dCas9-FokⅠmRNA和sgRNA显微注射到SD大鼠的受精卵中,用于产生基因编辑大鼠。通过显微注射以及胚胎移植,最终获得43只F0代大鼠,其中两只在靶点位置包含突变,突变效率达4.5%。对脱靶情况进行分析,结果显示,无脱靶现象存在。综上,表明dCas9-FokⅠ/sgRNA可以应用于编辑大鼠基因,并能显著提高特异性。尽管dCas9-FokⅠ/sgRNA系统相比于Cas9/sgRNA系统,基因编辑效率有所下降,但是该技术的发展为基因治疗提供了可供选择的潜在工具。

DAPK和DNMT1在宫颈癌中的相关性研究

目的探讨宫颈癌中DAPK(Death-associated protein kinase)启动子甲基化与DNMT1 mRNA的表达及两者之间的关系。方法应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术检测52例宫颈癌、60例CIN(cervical intraepithelial neoplasia)和20例正常宫颈组织中DAPK启动子甲基化状况;应用原位杂交方法检测DNMT1 mRNA的表达。结果正常宫颈鳞状上皮不存在DAPK基因启动子CpG岛甲基化,而在CIN和宫颈癌中的甲基化率分别为18.3%(11/60)、65.4%(34/52),差异有统计学意义(χ2=39.639,P<0.001)。正常宫颈鳞状上皮、CIN和宫颈癌DNMT1 mRNA阳性率分别为10%、63.3%和78.8%,差异有统计学意义(χ2=29.057,P<0.001)。DAPK异常甲基化和DNMT1 mRNA表达成正相关,r=0.308,P<0.001。结论DAPK异常甲基化和DNMT1 mRNA过表达参与了宫颈癌的发生;DAPK基因启动子的甲基化过程可能是在DNMT1的催化作用下完成的。

DNA甲基转移酶DNMT1与EZH2在急性髓系白血病中的表达及相关性研究

目的 探讨DNA甲基转移酶DNMT1与EZH2在急性髓系白血病（AML）中的表达及其相关性。方法 采用荧光定量PCR技术检测50例AML患者骨髓细胞中DNMT1与EZH2 mRNA的表达水平,分析DNMT1表达水平与临床特征和预后的关系以及与EZH2的相关性。结果 50例AML患者骨髓细胞中DNMT1 mRNA的表达显著高于30例正常供者的（2.72±0.73 vs 0.89±0.27,P〈0.01）;EZH2的表达水平也显著高于正常供者的（4.39±1.06,1.87±0.33,P〈0.01）;EZH2与DNMT1的表达水平呈显著正相关（r=0.51,P=0.002）; DNMT1表达水平与外周血幼稚细胞比例 ≥ 60%（P〈0.05）、WBC ≥ 50×10^9/L（P〈0.05）显著相关; DNMT1高表达组患者中位生存时间15个月（95% CI：9-19个月）,显著低于DNMT1低表达组患者的32个月（95% CI：27-40个月）（P=0.006）。结论 DNMT1和EZH2在AML患者中均高表达,两者表达水平呈正相关,DNMT1与AML患者预后不良相关。

沉默DNMT1基因对Molt-4细胞增殖、凋亡及组蛋白调控的影响

目的探讨siRNA沉默DNMT1基因对人急性T淋巴细胞性白血病Molt-4细胞增殖、凋亡及组蛋白调控的影响。方法将DNMT1特异性siRNA经LipofectamineTM2000转染Molt-4细胞后,应用RT-PCR检测Molt-4细胞DNMT1 mRNA表达,MTT法绘制细胞生长曲线;流式细胞术分析细胞凋亡。Western blot检测Bcl-2、procaspase-3、P15蛋白表达以及组蛋白甲基化、乙酰化状态的改变。结果 DNMT1 siRNA可沉默DNMT1基因的表达,并呈现浓度依赖性;抑制Molt-4细胞增殖,诱导细胞凋亡。经0、30、60、120 nmol·L-1DNMT1 siRNA作用24h后,细胞凋亡率分别为(4.27±1.42)%,(15.25±1.54)%,(35.63±2.54)%,(66.27±3.02)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。DNMT1 siRNA可上调P15的表达;下调Bcl-2、procaspase-3的表达,下调组蛋白H3K9甲基化水平,上调组蛋白H3K4的甲基化水平,而组蛋白H3乙酰化水平无明显变化。结论 DNMT1 siRNA可以有效地抑制Molt-4细胞中DNMT1的表达,下调组蛋白H3K9甲基化水平,上调组蛋白H3K4的甲基化水平,从而抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。

胃癌组织中PCDH8基因甲基化及Dnmt1表达的关系

目的探讨PCDH8(protocadherin 8)基因在人胃癌组织中的甲基化状态及其与甲基转移酶1(Dnmt1)表达之间的关系,分析其与胃癌发生、发展的关系。方法取60例手术切除的胃癌组织及其相应癌旁正常胃黏膜组织(距癌组织5 cm以上),以甲基化特异性聚合酶链式反应(methylationspecific PCR,MSP)检测60例胃癌组织及其癌旁正常胃黏膜组织中PCDH8基因启动子区甲基化的状态;以免疫组化SP法分别检测PCDH8基因蛋白及Dnmt1蛋白的表达水平。结果胃癌组织中PCDH8甲基化率为55.0%(33/60),癌旁正常胃黏膜组织中PCDH8的甲基化率为3.3%(2/60),两者比较差异有统计学意义(χ2=38.76,P<0.001),PCDH8甲基化的发生率与患者年龄、性别及TNM分期等差异均无统计学意义(P均>0.05),而与有无淋巴结转移的差异有统计学意义(χ2=17.47,P<0.001)。PCDH8蛋白在癌旁正常胃黏膜组织中的表达(90.0%)明显高于胃癌组织(11.7%)(χ2=73.65,P<0.001),Dnmt1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率(73.3%)明显高于癌旁正常胃黏膜组织的表达率(5.0%)(χ2=58.79,P<0.001)。胃癌组织中PCDH8蛋白与Dnmt1蛋白的表达呈负相关(r=-0.544,P<0.001)。结论PCDH8基因甲基化及Dnmt1的高表达可能参与了胃癌的发生和发展。

DNMT1基因与胃癌RASSF1A基因失活的关系

目的研究胃癌组织及癌旁组织中R ASSF1A表达情况,检测沉默DNMT1基因后胃癌SGC-7901细胞系R ASSF1A基因启动子区甲基化状况及R ASSF1A基因表达。方法逆转录-聚合酶链式反应(reversetranscription polymerase chain reaction,R T-PCR)、免疫组织化学方法检测40例胃癌组织和癌旁组织R ASSF1A基因表达情况;R T-PCR、甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)检测5-Aza-CdR、RNA干扰技术沉默DNA甲基转移酶1后SGC-7901细胞后R ASSF1A基因表达及DNA甲基化状态改变。结果胃癌组织RASSF1A基因mRNA及蛋白表达率显著低于癌旁组织,(60%vs100%,P<0.05);不同分化程度、临床分期及有无淋巴结转移的胃癌组织中表达差异有统计学意义(P<0.05);SGC-7901细胞RASSF1A基因表达随5-Aza-CdR浓度和作用时间的增加而增强(P<0.05),沉默DNMT1后R ASSF1A基因重新表达,DNA甲基化状态被逆转。结论 R ASSF1A基因在胃癌组织中存在较高的表达缺失,且与胃癌的临床分期、病理分级及淋巴结转移有关,RASSF1A基因可能在DNMT1基因的调控下发生甲基化,丧失其活性。

DNMT1和p27蛋白在原发性与继发性胶质母细胞瘤中的表达及相关性

目的探讨原发性胶质母细胞瘤和继发性胶质母细胞瘤中DNA甲基转移酶1(DNMT1)蛋白及p27蛋白的表达及相关性。方法收集2000年1月1日至2012年12月31日经手术切除胶质母细胞瘤患者组织蜡块标本64例(原发胶质母细胞瘤32例,继发性胶质母细胞瘤32例)作为研究对象。检测64例胶质母细胞瘤标本和13例正常脑组织中DNMT1蛋白及p27蛋白的表达情况。结果在正常脑组织中,DNMT1蛋白不表达,而在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的阳性表达率分别为59.4%和81.3%。在正常脑组织中,p27蛋白的阳性表达率为100.0%,高于其在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的50.0%和25.0%(P<0.05)。DNMT1蛋白及p27蛋白在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的表达差异存在统计学意义(P<0.05),但两者表达无相关性(r=0.41,P>0.05)。结论 DNMT1蛋白及p27蛋白在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的表达存在差异,联合检测肿瘤标本中两者的表达情况有助于判断不同类型胶质母细胞瘤。

人胃癌组织中RUNX3、DNMT1的表达及其与Hp感染的相关性研究

目的:探讨RUNX3、DNMT1在人胃癌组织中的表达,分析其与胃癌临床病理特征及Hp感染的关系。方法:取70例手术的胃癌及癌旁胃黏膜组织,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测RUNX3及DNMT1基因的mRNA水平,免疫组化分别检测蛋白的表达水平。结果:胃癌组织中RUNX3的表达显著下调,DNMT1表达明显增高,RUNX3表达下调与肿瘤分化程度及淋巴结转移密切相关(P﹤0.05)。RUNX3下调的胃癌组织中DNMT1的表达明显高于RUNX3正常的组织(P<0.05),在Hp阳性的胃癌组织中RUNX3的表达明显低于Hp阴性的胃癌组织(P<0.05)。结论:RUNX3基因和DNMT1基因可能参与胃癌的发生发展,Hp感染在一定程度上参与RUNX3基因失活。

人乳腺癌上皮细胞miR-217对DNMT1调控作用的研究

目的验证在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达,为后期动物实验和临床试验提供实验基础。方法利用瞬时转染技术,在对应细胞系中,过表达、抑制miR-217,Western blot检测各实验组中DNMT1蛋白表达,并用含有miR-217野生型及突变型识别位点的DNMT1 3′UTR载体质粒分别转染293T细胞,检测相对荧光素酶活性改变。结果过表达miR-217,DNMT1表达下降;抑制miR-217,DNMT1表达增高;双荧光素酶检测实验,DNMT1-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著低于DNMT1-UTR-MUT,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217对DNMT1表达具有调控作用,且miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达。