新生儿缺氧缺血性脑病患儿血清DNMT1、DNMT3a和BDNF检测对预后评估的临床价值

目的探讨血清DNA甲基化转移酶(DNMT)1、DNMT3a和脑源性神经营养因子(BDNF)检测在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿预后评估中的价值。方法选取2016年1月至2023年1月在我院诊治的84例新生儿HIE患儿为观察组,并选取同期84例于我院出生的健康新生儿为对照组。根据患儿病情程度分为轻度组36例、中度组28例、重度组20例。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清DNMT1、DNMT3a和BDNF水平;多因素Logistic回归分析新生儿HIE患儿预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清DNMT1、DNMT3a和BDNF水平对新生儿HIE患儿预后的预测价值。结果与对照组相比,轻度、中度、重度组新生儿HIE患儿血清DNMT1、DNMT3a水平依次升高(P<0.05),BDNF水平依次降低(P<0.05);与预后良好组相比,预后不良组新生儿HIE患儿血清DNMT1、DNMT3a水平升高(P<0.05),BDNF水平降低(P<0.05);多因素Logistic回归分析发现,病情程度、DNMT1、DNMT3a是影响新生儿HIE患儿预后的危险因素(P<0.05),新生儿Apgar评分、BDNF是影响患儿预后的保护因素(P<0.05);血清DNMT1、DNMT3a、BDNF联合检测预测新生儿HIE患儿预后的ROC曲线下面积(AUC)为0.955,均优于其各自单独预测(Z_(联合检测-DNMT1)=2.046,P=0.020;Z_(联合检测-DNMT3a)=3.046,P=0.001;Z_(联合检测-BDNF)=2.073,P=0.019)。结论新生儿HIE患儿血清DNMT1、DNMT3a水平升高,BDNF水平降低,在新生儿HIE患儿预后评估中具有一定价值。

hSOD1-G93A突变的肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠脊髓中5-mC水平以及DNMT1、DNMT3A和DNMT3B表达的变化

目的探讨5-甲基胞嘧啶(5-mC)水平以及DNA甲基转移酶1、3A和3B(DNMT1、DNMT3A和DNMT3B)蛋白表达变化与肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)之间的关系。方法选用发病前期(70 d)、发病早期(95 d)、发病中期(108 d)和发病晚期(122 d)的hSOD1-G93A突变的ALS转基因小鼠,以同窝野生型(wild type,WT)小鼠作为对照,应用ELISA和Dot blot技术检测ALS小鼠脊髓中5-mC水平的变化规律,采用Western blot和免疫荧光双标染色技术检测ALS小鼠不同时期的脊髓中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B的蛋白水平变化以及定位。结果ELISA和Dot blot结果显示,与WT小鼠相比,ALS转基因小鼠脊髓中5-mC水平升高;Western blot分析显示,与WT小鼠相比,ALS转基因小鼠脊髓中DNMT1蛋白水平在70 d无显著性变化,在95 d、108 d和122 d显著升高;DNMT3A蛋白水平在70 d、95 d和108 d升高,在122 d无显著性变化;DNMT3B蛋白水平在70 d无显著性变化,在95 d、108 d和122 d显著升高。结论ALS转基因小鼠脊髓中5-mC水平及关键DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的蛋白水平异常升高与ALS发病密切相关。

基于lncGAS5/DNMT3A通路探讨心康冲剂对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的 探讨心康冲剂调控长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(long non-coding RNA growth arrest specific transcript 5,lncGAS5)/DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)通路抗慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的机制。方法 62只SD大鼠,其中随机取6只大鼠为正常组,余56只经腹腔注射阿霉素药物建立慢性心力衰竭模型,将造模成功的52只大鼠随机分为模型组12只(注射PBS+生理盐水灌胃),GAS5沉默组(注射AAV9-GAS5-RNAi病毒+生理盐水灌胃)、阴性对照组(注射AAV NC病毒+生理盐水灌胃)、心康冲剂组(注射AAV9-GAS5-RNAi病毒+心康冲剂溶液灌胃)、缬沙坦组(注射AAV9-GAS5-RNAi病毒+缬沙坦溶液灌胃)各10只。分组处理后,心脏超声检测各组大鼠心功能;Masson染色观察心脏组织形态;免疫荧光染色检测各组大鼠左心室纤维化蛋白α-SMA表达;酶联免疫吸附法检测大鼠血清Col I表达;实时荧光定量PCR法检测各组大鼠心尖组织lncGAS5、DNMT3A mRNA;Western blot法检测DNMT3A、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)、磷酸化蛋白质激酶蛋白B(phosphorylated protein kinase B,AKT)各蛋白表达量。结果 与正常组相比,模型组大鼠左室射血分数(left ventricular ejection fractions, LVEF)、左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening, LVFS)均明显降低(P<0.05);染色结果显示心肌纤维化严重;血液中I型胶原(type I collagen, Col I)明显升高(P<0.05);lncGAS5 mRNA表达降低,DNMT3A mRNA及蛋白表达升高,PTEN蛋白表达降低,AKT蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,GAS5沉默组染色或指标结果进一步降低或升高;与GAS5沉默组相比,染色结果显示心康冲剂、缬沙坦组干预后心肌纤维化减轻,LVEF、LVFS都不同程度地增加(P<0.05);血清中Col I水平降低;lncGAS5mRNA表达升高,DNMT3AmRNA表达降低;DNMT3A、AKT蛋白表达降低,PTEN蛋白表达升高(P<0.05)。结论 心康冲剂可通过调控lncGAS5/DNMT3A/PTEN/AKT通路及下游纤维化因子,从而改善慢性心力衰竭之心肌纤维化。

DNMT3A:A Multifunctional Mediator of Cancer Progression

The advances in the research on the structure and function of DNMT3A and the role of DNMT3A in tumorigenesis and development were reviewed,including gynecologic cancers,hematologic tumors,melanoma,amelanoma,colorectal cancer and other cancers,to provide new ideas for the treatment of cancer.

转位蛋白基因在FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变急性髓系白血病疗效评估中的价值

目的:观察转位蛋白(TSPO)基因在FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变急性髓系白血病(AML)疗效评估中的价值。方法:纳入2018年6月至2020年6月在宁波大学附属人民医院血液科住院治疗的初发AML患者76例,其中伴有FLT3-ITD突变34例,伴有DNMT3A R882突变27例,伴有FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变15例,对照组为同期住院治疗的免疫性血小板减少症(ITP)患者19例。骨髓穿刺留取骨髓3 ml,常规提取RNA,通过转录组测序方法检测TSPO基因的表达量(使用2^(-ΔΔCT)法计算)。结果:FLT3-ITD单突变组和DNMT3A R882单突变组初诊时TSPO基因表达量分别为2.02±1.04、1.85±0.76,均高于对照组的1.00±0.06,但比较差异无统计学意义(P=0.671,P=0.821);双突变组初诊时TSPO基因表达量为3.98±1.07,明显高于FLT3-ITD单突变组和DNMT3A R882单突变组(P=0.032,P=0.021);双突变组化疗后达到完全缓解的患者,达到完全缓解时的TSPO基因表达量为1.19±0.87,明显低于其初诊时的水平(P=0.011)。结论:TSPO基因或许可以作为评估FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变AML治疗疗效的一个指标。

DNMT3A对高糖环境下小鼠心肌成纤维细胞增殖与迁移的影响

目的探讨DNA甲基化转移酶3A(DNA methyltransferases 3A,DNMT3A)在高糖环境下对小鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖与迁移的作用。方法取新生C57乳鼠心脏,剪碎后提取CFs,在显微镜下观察并鉴定形态。细胞贴壁后分别在低糖(5.5 mmol·L^(-1))培养基和高糖(33.0 mmol·L^(-1))培养基下培养,并使用DNMT3A慢病毒(沉默DNMT3A基因)处理。应用qRT-PCR方法检测DNMT3A、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)和Ⅰ型胶原A1(CollagenⅠA1,Col1A1)的mRNA表达变化;应用Western blot方法检测DNMT3A、α-SMA、Col1A1的蛋白表达变化;CCK-8与MTT法检测CFs增殖活性;划痕实验与Transwell迁移实验检测CFs迁移能力。结果与低糖培养的对照组CFs相比,高糖环境诱导了CFs的DNMT3A表达水平升高与胶原纤维沉积,同时CFs的异常活化明显增强。使用慢病毒处理沉默高糖环境下CFs DNMT3A表达后,与空载体组相比,沉默组DNMT3A表达下调,胶原纤维沉积减少,同时CFs的异常增殖与活化明显降低。结论沉默DNMT3A能抑制高糖诱导的胶原沉积与CFs异常活化增殖,DNMT3A通过刺激高糖环境下CFs异常活化与增殖导致糖尿病心肌纤维化和DCM的发生与发展。

伴孤立性i(17)(q10)和FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变急性髓系白血病1例并文献复习

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一组由造血系统中异常分化的髓系细胞恶性克隆增殖导致的高度异质性疾病,越来越多的证据表明,细胞遗传学和分子遗传学特征在AML的发病机制、分类和治疗中起着关键作用[1]。等臂染色体i(17q)是着丝粒断裂或异常分裂的产物,导致17号染色体长臂重复和短臂丢失[2]。i(17q)在血液系统肿瘤中往往同其他染色体异常一起出现,孤立性i(17q)染色体异常在血液系统肿瘤中较为少见。在AML中孤立性i(17q)罕见,截至目前,国内外仅见几十例报道,常提示患者预后极差[3]。

左归降糖清肝方对糖尿病性脂肪肝小鼠PGC-1α和DNMT3A表达的影响

目的探讨左归降糖清肝方对高脂饮食2型糖尿病转基因MKR鼠脂肪肝发生中过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子-1α(peroxisome proliferation-activated receptor-γ-coactivator 1α,PGC-1α)和DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)表达的影响。方法24只MKR鼠随机分为对照组、高脂模型组和左归降糖清肝方(中药方)组;高脂模型组和中药方组均以高脂饲料喂养8周,对照组以基础饲料喂养;中药方组高脂饲料喂养4周后,以中药汤剂灌胃干预治疗4周,其他组灌胃等量的蒸馏水。采用电化学法检测空腹血糖;试剂盒测定肝组织甘油三酯(triglyceride,TG)和游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量;HE染色观察肝组织形态结构及病理变化;qRT-PCR检测小鼠肝组织PGC-1α、线粒体转录因子A(mitochondrial transcriptionfactor A,TFAM)、核呼吸因子-1(nuclear respiratory factor 1,NRF1)和DNMT3A mRNA表达;Western blot和免疫组织化学检测PGC-1α和DNMT3A蛋白表达。结果高脂饮食诱发MKR鼠形成糖尿病性脂肪肝,肝细胞有大小不一的脂滴,呈脂肪性变;与对照组比较,高脂模型组小鼠血糖、肝指数和肝组织TG和FFA含量显著上升(P<0.01),肝脏PGC-1α、NRF1和TFAM的mRNA及PGC-1α蛋白表达显著下降(P<0.01),而DNMT3A mRNA和蛋白表达均显著上升(P<0.01)。与高脂模型组比较,左归降糖清肝方降低了高脂饮食MKR鼠血糖、肝指数和肝组织TG和FFA含量(P<0.01),上调了肝脏PGC-1α、NRF1和TFAM的mRNA表达,以及PGC-1α蛋白表达(P<0.01),下调了DNMT3A的mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结论左归降糖清肝方通过调节肝脏PGC-1α及其通路相关基因表达,缓解糖尿病性脂肪肝小鼠肝脏脂肪性变,其机制可能通过抑制DNA甲基转移酶3A表达,减少PGC-1αDNA的甲基化相关。

DNMT3b在膀胱癌组织中的表达及与经尿道膀胱肿瘤电切术后复发的相关性

目的 探究DNMT3b在膀胱癌组织中的表达及与经尿道膀胱肿瘤电切术后复发的相关性。方法 选取膀胱癌患者82例,并收集患者临床资料。免疫组化法检测DNMT3b水平,并分析其与经尿道膀胱肿瘤电切术后复发的相关性。结果 DNMT3b与TNM分期、T分期、肿瘤最大直径、淋巴结转移有关(P<0.05)。DNMT3b表达阳性、TNM分期越高膀胱癌患者经尿道膀胱肿瘤电切术后复发率均显著升高(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,DNMT3b表达、TNM分期均为影响膀胱癌患者经尿道膀胱肿瘤电切术后复发的独立危险因素(P<0.05)。结论 膀胱癌患者经尿道膀胱肿瘤电切术治疗后存在一定的复发性,DNMT3b表达、TNM分期是膀胱癌患者术后复发的独立危险因素。

海洛因通过下调DNMT3a抑制印记基因H19启动子甲基化促进雄鼠的子代成瘾与复吸的机制

目的探讨F0代雄鼠吸食海洛因对F1代大鼠成瘾与复吸的影响及机制。方法用不同剂量(1、3、9 mg·kg^(-1))海洛因处理F0代雄鼠。Western blot检测F0代雄鼠精子和F1代大鼠背侧海马组织中DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)蛋白表达水平。DNA甲基化免疫共沉淀(MeDIP)-qRT-PCR检测H19启动子甲基化率。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测H19 mRNA表达水平。构建海洛因自身给药模型,检测F1代各组大鼠的成瘾与复吸行为。结果海洛因明显降低F0代雄鼠精子中DNMT3a蛋白表达水平及H19启动子甲基化率,明显提高H19 mRNA表达水平(P<0.05)。F0代雄鼠吸食海洛因明显降低F1代大鼠背侧海马组织中H19启动子甲基化率,明显提高H19 mRNA表达水平(P<0.05)。F0代雄鼠吸食海洛因明显增加F1代大鼠在海洛因自身给药实验和复吸实验中的有效鼻触次数(P<0.05)。结论F0代雄鼠吸食海洛因会促进F1代大鼠对海洛因的成瘾与复吸,其机制可能与海洛因通过下调F0代雄鼠精子中DNMT3a表达抑制印记基因H19启动子甲基化,进而促进F1代大鼠背侧海马组织中H19 mRNA表达有关。

DNMT3A对骨关节炎软骨细胞SOX9基因DNA甲基化修饰的影响

目的探讨DNMT3A对SOX9基因DNA甲基化修饰的影响。方法培养正常软骨细胞和OA软骨细胞,显微镜下观察软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原染色鉴定软骨细胞,qRT-PCR、Western Blot检测DNMT3A、SOX9 mRNA和蛋白表达水平,亚硫酸氢盐测序检测SOX9基因DNA甲基化状态,慢病毒沉默DNMT3A观察SOX9基因DNA甲基化修饰的变化。结果正常软骨细胞形态规则,体积较大,数量较多,OA软骨细胞形态不规则,体积较小,数量较少。与正常软骨细胞比较,OA软骨细胞中DNMT3A mRNA和蛋白表达量增高(P<0.05),SOX9 mRNA和蛋白表达量明显降低(P<0.05),SOX9基因DNA甲基化百分比增高。在OA软骨细胞中沉默DNMT3A后,SOX9基因DNA甲基化百分比明显降低。结论DNMT3A调节SOX9基因DNA甲基化修饰参与OA软骨细胞病变。

散发性乳腺癌中DNMT3a、DNMT3b表达与ERα基因启动子甲基化状态及蛋白表达的关系

目的探讨散发性乳腺癌中DNA甲基转移酶（DNMT）3a、DNMT3b蛋白表达情况及其与雌激素受体（ER）α基因启动子甲基化状态及蛋白表达的关系。方法选取180例散发性乳腺癌与30例乳腺纤维腺瘤组织,采用免疫组化法检测组织中DNMT3a、DNMT3b蛋白的表达情况,甲基化特异性PCR检测97例散发性乳腺癌中ERα基因启动子的甲基化状态。结果乳腺纤维腺瘤与乳腺癌组织中的DNMT3a、DNMT3b蛋白阳性表达率差异无统计学意义;Ⅲ-Ⅳ期乳腺癌组织的DNMT3a、DNMT3b水平高于Ⅰ-Ⅱ期,有淋巴结转移者的DNMT3a表达水平高于无淋巴结转移者（均P〈0.05）;97例乳腺癌中有39例（40.2%）发生ERα基因启动子甲基化,DNMT3a蛋白阳性表达与ERα基因甲基化呈正相关（rs=0.250）;DNMT3a蛋白表达对患者的总体生存期（OS）有显著影响（P=0.035）,对无病生存期（DFS）无明显影响（P=0.064）,DNMT3b蛋白表达对患者的OS和DFS无影响（P分别为0.914、0.961）。结论DNMT3a、DNMT3b阳性表达与乳腺癌侵袭转移、病程进展、预后相关;DNMT3a与ERα基因启动子甲基化状态呈正相关;抑制DNMT3a、DNMT3b蛋白可能有利于散发性乳腺癌的预防和治疗。

年龄因素对小鼠肺纤维化模型中DNMT3a DNMT3b及CDH1表达的影响

特发性肺纤维化（IPF）是一类原因未明的慢性进展性间质性肺疾病。目前,DNA甲基化通过调控IPF中关键基因的表达而对IPF的发生发展起重要作用,已经成为研究IPF的分子机制、临床诊断与治疗的新方向。DNA甲基化通过DNA甲基转移酶（DNMT）催化,DNMT3a和DNMT3b主要催化重新甲基化作用。DNMT3a、DNMT3b也被认为是DNA甲基化的关键限速因子[1]。

人工注射Dnmt3 siRNA对意大利蜜蜂雌蜂发育的影响

为了研究人工注射DNA甲基化转移酶3(DNA methyltransferase3,Dnmt3)siRNA对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica雌蜂的Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量、dynactin p62基因甲基化水平以及蜜蜂形态指标之间的影响和关系,分别给3组3日龄的意大利蜜蜂幼虫人工注射50ng Ringer,uth siRNA和Dnmt3 siRNA溶液。在幼虫的发育过程中,测定每组幼虫头部的Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量、dynactin p62基因甲基化水平以及刚羽化雌性蜜蜂的初生重、体长、前翅长、前翅宽、吻长、第3背板长等形态指标。结果表明:人工注射Dnmt3 siRNA不仅可以显著降低意大利蜜蜂幼虫头部Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量和dynactin p62基因整体甲基化水平,同时显著提高了刚羽化雌性蜜蜂的初生重、体长、第3背板长。结果说明Dnmt3的改变可以影响雌性意蜂幼虫的发育。

急性髓系白血病中DNMT3a基因突变的研究

本研究探讨急性髓系白血病(AML)患者DNMT3a基因突变情况及临床特征。采用PCR扩增产物直接测序法检测77例AML患者DNMT3a基因第882位氨基酸的突变情况,分析突变阳性患者的临床特征。结果表明,59例初诊AML患者中7例(11.9%)具有DNMT3a基因突变,突变类型分别为4例DNMT3a R882C、2例DNMT3aR882H和1例DNMT3a Y874C。7例DNMT3a基因突变患者中2例为M2、1例为M4、4例为M5。27例正常核型中5例(22.7%)发生突变,而21例异常核型中无1例发生突变。CEBPA阳性患者发生DNMT3a突变率明显高于CEBPA阴性患者(p=0.002)。突变患者中有4例(4/7,57.1%)伴有淋系抗原CD4和/或CD7的表达。DNMT3a突变组患者的年龄、性别、骨髓原始细胞数、白细胞数、血小板数、血红蛋白、完全缓解(CR)率、FLT3-ITD、NPM1和c-kit突变与DNMT3a野生型组相比均无统计学意义(p>0.05)。结论:DNMT3a基因突变多见于正常染色体核型AML伴NPM1和/或CEBPA突变阳性患者,其在AML患者预后中的预测价值有待于进一步的深入研究。

急性髓系白血病中DNMT3A p.R882的共存基因突变分析

目的:探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)p.R882的共存基因突变及其与部分临床参数间的相关性。方法:采用高通量DNA测序技术检测49种靶基因;采用基因组DNA-PCR联合Sanger测序法检测患者中DNMT3A p.R882、CALR基因9号外显子、NPM1基因12号外显子、FLT3-ITD,及CEBPA的TAD、BZIP两个功能结构域的突变发生情况。结果:①301例患者中共检出41例携带DNMT3A p.R882突变,最常见为M5亚型;97.6%(40/41)DNMT3A p.R882突变患者同时携带其他基因突变,每例患者平均突变3.17次;其中双基因突变9例,3个基因突变共存12例,≥4个基因突变共存19例。②DNMT3A p.R882伴随基因突变最常见的为NPM1(n=27,65.9%),其他依次为:FLT3-ITD(n=18,43.9%)、IDH1(n=9,22.0%)、TET2(n=8,19.5%)及NRAS(n=6,14.6%)等;③≥4个基因突变患者的白细胞水平虽然高于双基因及3个基因突变者,但差异无统计学意义(P>0.05),同样血红蛋白及血小板水平差异亦无统计学意义(P>0.05),共存基因突变为FLT3-ITD者的外周白细胞水平高于野生型(P=0.034),但在年龄、血红蛋白及血小板水平方面的差异无统计学意义。伴NPM1、IDH1或TET2突变者与野生型相比,在中位年龄、外周血白细胞水平间的差异均无统计学意义。④与野生型相比,伴NPM1突变者具有更高的初次诱导完全缓解(complete remission,CR)率,而伴IDH1突变者CR率较低,差异均有统计学意义(P=0.010,0.025);伴FLT3-ITD与TET2突变者与野生型相比,在CR率方面的差异无统计学意义。结论:95%以上的DNMT3A p.R882突变AML均伴有额外基因突变,共存基因突变种类及个数对患者的临床特征有一定影响。

DNMT3A调控Drp1对肝星状细胞活化增殖和迁移能力的影响

目的探讨DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)调控动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)介导的线粒体裂变对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)活化增殖和迁移能力的影响。方法应用5μg·L^(-1)TGF-β1作用24 h诱导HSC-T6细胞活化,DNMT3A慢病毒感染构建DNMT3A沉默模型;实验分为Control组、TGF-β1组、TGF-β1+LV5-NC组和TGF-β1+LV5-DNMT3A组。分别用RT-qPCR和Western blot检测DNMT3A对相关mRNA和蛋白表达的影响;用CCK-8检测细胞活化增殖的情况;分别用细胞划痕、Transwell迁移实验观察DNMT3A对HSCs细胞迁移能力的影响。结果慢病毒感染成功构建DNMT3A沉默模型。与Control组比较,TGF-β1刺激后DNMT3A水平明显升高,纤维化标志物CollagenⅠ和α-SMA的mRNA和蛋白水平明显升高,线粒体裂变标志物Drp1的mRNA和蛋白水平明显升高,同时HSCs细胞的增殖和迁移能力明显增加;而与NC组比较,DNMT3A沉默组DNMT3A水平明显降低,CollagenⅠ、α-SMA和Drp1表达明显被抑制,HSCs细胞的增殖和迁移能力也明显被抑制。结论沉默DNMT3A可抑制Drp1的水平,同时抑制了HSCs细胞的增殖和迁移能力。提示DNMT3A介导低水平的DNA甲基化修饰可能通过抑制Drp1的水平来抑制线粒体裂变的发生,进而抑制HSCs活化,影响肝纤维化疾病的发生发展。

绵羊卵母细胞体外成熟过程中VEGF对DNMT3a表达的影响

旨在探究血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）在绵羊卵母细胞体外成熟过程中对DNMT3a的影响。本研究采用RNA干扰和显微注射技术将针对VEGF两个受体FLT1和KDR/Flk-1的有效干扰片段导入到绵羊卵丘-卵母细胞复合体（Cumulus-oocytes complexes,COCs）中,检测体外成熟培养各时间卵母细胞和颗粒细胞中DNMT3amRNA和蛋白表达水平的变化。结果表明,COCs体外成熟培养过程中,无论是否添加VEGF,卵母细胞内DNMT3amRNA表达量都随着培养时间延续而降低,培养至8h时DNMT3amRNA表达量急速下降,之后下降速度放缓,至24h后各组趋于一致,且未注射干扰片段对照组的下降速度快于其他干扰组（P〈0.01）。添加VEGF组DNMT3amRNA表达量的下降速度快于未添加组。干扰片段导入后发现,FLT1-siRNA和KDR-siRNA复合干扰组干扰效果优于KDR-siRNA干扰组,FLT1-siRNA干扰组干扰效果最弱（P〈0.01）。无论是否添加VEGF,在COCs体外成熟培养过程中,颗粒细胞DNMT3amRNA表达量都随着培养时间延续而降低,且各组表达量差别不大。其中未注射干扰片段对照组的下降速度在COCs成熟培养中期快于其他干扰组（P〈0.05或P〈0.01）,FLT1-siRNA干扰效果较好。无论是否添加VEGF卵母细胞内DNMT3a蛋白表达量从0～4h上升,之后匀速下降,至16h急速下降,24h为零。未导入干扰片段对照组下降速度最快。其中16h对照组、FLT1-siRNA干扰组、KDR-siRNA干扰组和FLT1-siRNA＆KDR-siRNA复合干扰组DNMT3a蛋白表达量,添加VEGF后,分别下降到培养初期的23.12%、31.07%、41.47%和37.90%,未添加VEGF的组则分别下降到培养初期的37.38%、54.60%、57.58%和82.75%。颗粒细胞中,添加VEGF组DNMT3a蛋白表达量呈现逐渐下降趋势,至20h时,已无DNMT3a蛋白表达;未添加VEGF组从0～4h有略微上升,之后呈现逐渐均速下降趋势,20h时,急速下降,至24h时,无DNMT3a蛋白表达,且干扰片段对DNMT3a蛋白表达影响不大,而本身颗粒细胞中DNMT3a蛋白表达量也不高。结果提示,绵羊COCs体外成熟培养过程中,VEGF加快了卵母细胞中DNMT3a mRNA和蛋白表达量的下降速度。而干扰片段的导入则使DNMT3amRNA和蛋白表达量下降速度放缓;颗粒细胞内VEGF的添加和受体干扰片段的导入,对DNMT3amRNA和蛋白表达影响效果不明显。

DNMT3B基因在肝细胞癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭迁移的影响

目的探讨DNA甲基转移酶3b(DNMT3B)基因在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其对肝癌细胞增殖、侵袭迁移的影响及机制。方法收集46例肝癌患者的癌组织与对应癌旁组织,qRT-PCR法检测DNMT3B在肝癌组织及对应癌旁组织中的表达,并分析其与临床病理特征之间的关系;应用RNA干扰(RNAi)技术合成针对DNMT3B的siRNA并转染MHCC97-H细胞,qRT-PCR和Western blot检测相关基因mRNA和蛋白表达;MTT法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果 46例肝癌患者中,DNMT3B基因在肝癌组织中的表达较对应癌旁组织升高者占73.91%,其高表达与肝癌的病理分化类型和肿瘤大小有关(P均<0.05);在细胞水平,抑制DNMT3B基因表达使MHCC97-H细胞增殖及侵袭迁移能力降低;干扰DNMT3B基因可以增加抑癌相关基因RASSFA1、APC、MTSS1mRNA和蛋白表达水平。结论 DNMT3B与肝癌的进展密切相关,它可能通过调控下游抑癌基因甲基化水平影响其表达,从而抑制肝癌细胞的增殖及侵袭迁移能力。

miR-124通过靶向调控DNMT3B抑制胃癌细胞增殖

目的明确miR-124是否通过靶向调控DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)表达而抑制胃癌细胞增殖能力,从而揭示miR-124的抑瘤分子机制。方法采用MTT检测miR-124对人胃癌MKN-45细胞的增殖能力;构建DNMT3B 3'UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-124对DNMT3B3'UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-124 mimics转染胃癌细胞MKN-45,采用Western blot检测DNMT3B表达水平。结果 MTT结果显示,在转染miR-124 mimics 24、48和72 h后OD值(0.264±0.023、0.377±0.041、0.524±0.029)分别与对照组(0.414±0.051、0.619±0.065、0.898±0.072)比较,差异均有显著性(均P<0.05),且具有时间依赖性;荧光素报告载体系统证实DNMT3B是miR-124直接调控的靶基因。Western blot结果显示,miR-124可抑制DNMT3B蛋白的表达。结论 miR-124通过靶向调控DNMT3B的表达而抑制胃癌细胞增殖能力。