四种丙型肝炎病毒抗体试剂检测方法的性能评估

对血液筛查的四种丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV）抗体试剂检测方法的性能进行评估。方法采用协作标定方式,应用四种检测方法（间接ELISA法、双抗原夹心ELISA法、间接CLIA法、双抗原夹心CLIA法）16种HCV抗体试剂,对经确证筛选出的70份（HCV抗体阳性35份、阴性35份）血浆样本进行检测,通过分析阳性、阴性符合率,评估四种方法 HCV抗体试剂的性能。结果间接ELISA法试剂检测阳性符合率为88.6%（31/35）~94.3%（33/35）,双抗原夹心ELISA法、间接CLIA法、双抗原夹心CLIA法试剂检测阳性符合率为91.4%（32/35）~94.3%（33/35）,四种检测方法 HCV抗体试剂阳性符合率之间的差异无统计学意义（P〉0.05）;间接ELISA法和间接CLIA法试剂弱阳性样本检出率为11.4%（4/35）~31.4%（11/35）,双抗原夹心ELISA法和双抗原夹心CLIA法试剂弱阳性样本检出率为5.7%（2/35）~11.4%（4/35）,四种检测方法 HCV抗体试剂对弱阳性样本的检出率之间的差异有统计学意义（P〈0.05）;间接ELISA法试剂检测阴性符合率分别为94.3%（33/35）~100%（35/35）,间接CLIA法试剂阴性符合率分别为94.3%（33/35）~97.1%（34/35）,双抗原夹心ELISA法和双抗原夹心CLIA法试剂阴性符合率均为97.1%（34/35）,四种检测方法 HCV抗体试剂阴性符合率之间的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论四种检测方法 HCV抗体试剂的性能基本一致,不同方法各有优缺点,建议应用多种检测方法对弱阳性样本进行确认检测。

抗人游离前列腺特异性抗原(f-PSA)单克隆抗体的制备及应用

目的建立产生抗人游离前列腺特异抗原单克隆抗体(f-PSA m Ab)的细胞株,获得抗体后建立抗人f-PSA化学发光免疫分析法(CLIA)并进行应用。方法采用杂交瘤技术获得2株稳定分泌抗f-PSA m Ab的细胞株,将细胞株用转瓶扩大培养并将上清液采用亲和纯化法获得抗体,ELISA测定抗体效价、特异性及表位,表面等离子共振法测抗体亲和力;建立双抗体夹心CLIA,采用标准曲线定量法对该体系进行分析性能评估,同时对426例临床血清样本进行检测[其中130例的总PSA水平在(4～10) ng/mL,为"诊断灰区"],评价该试剂与罗氏试剂的检测一致性。结果获得抗人f-PSA m Ab的杂交瘤细胞株(f-10-1、f-14-1)。用f-10-1和f-14-1建立的CLIA的检测范围为(0. 1～30) ng/mL,灵敏度为0. 05 ng/mL,检测结果的相对偏差均在±5%内,与癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)及结合态PSA(c-PSA)无交叉反应,该试剂与罗氏试剂相关系数达到0. 99,灰区样本阳性符合率、阴性符合率、总符合率均高于90%。结论成功制备了抗人f-PSA m Ab,建立了特异性定量检测人f-PSA的双抗体夹心CLIA。

抗人β-HCG单克隆抗体的制备及化学发光检测方法的建立

目的:制备人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)单克隆抗体,建立人β-HCG双抗体夹心CLIA检测方法。方法:用人β-HCG抗原免疫小鼠,通过细胞融合、筛选后得到杂交瘤细胞株,然后将细胞株扩大培养并纯化上清液获得抗体,测定抗体亲和力、特异性及表位,最后建立双抗体夹心CLIA方法。结果:获得4株抗人β-HCG的杂交瘤细胞株(β-1-1、β-2-1、β-3-1、β-4-1)。用β-1-1和β-2-1建立的双抗体夹心法的检测范围为0.5 mIU/mL-800 mIU/mL,灵敏度0.23 mIU/mL,检测结果的相对偏差均在±10%内,回收率在90%以上。结论:本研究最终成功制备了抗人β-HCG mAb,建立了定量检测人β-HCG的双抗体夹心CLIA方法,为β-HCG检测及疾病的诊断奠定基础。