Development of a New <i>Pseudomonas</i>Agar Medium Containing Benzalkonium Chloride in Cetrimide Agar

Members of the Pseudomonas family are commonly found in nature, some species are pathogenic for humans, as well as being resistant to multiple disinfectants. Various studies have revealed that benzalkonium chloride (BKC) has an inhibitory effect on many bacteria but it has no significant effect on Pseudomonas aeruginosa. Cetrimide agar medium is recommended for the isolation and enumeration of Ps. aeruginosa in food and environmental samples. However, there are claims that for some food factories and in particular the bottled water industry, the selectivity of this medium is not sufficient. The aim of the current research is the creation of a more selective medium for Ps. aeruginosa with BKC. A total of 28 isolates were isolated with Cetrimide agar from raw water samples and identified using biochemical tests and commercial identification kits. All the bacteria were inoculated in Cetrimide agar plates containing 0 - 625 μg/mL BKC. The Petri dishes were incubated at 37°C and 42°C for 24 h. The results showed that 375 μg/mL BKC was sufficient to suppress Burk. pseudomallei at both incubation temperatures. Ps. fluorescens-35 could not grow at 42°C at any concentration, including the control, and was suppressed at 500 μg/mL BKC. All the Ps. aeruginosa isolates and control strain were grown at both incubation temperatures at 375 μg/mL BKC concentration. In conclusion, the analysis of Ps. aeruginosa showed that the growth of accompanying flora may be suppressed by adding 375-μg/mL BKC into Cetrimide agar and incubating at an elevated temperature of 42°C.

CHROM agar培养基鉴定念珠菌的临床评价

目的:评价CHROM agar念珠菌培养基应用于临床标本念珠菌分离和鉴定的效果。方法:取500份临床患者的标本,分别接种至血琼脂、Sabouraud和CHROM agar念珠菌培养基,常规孵育,并进行VITEK-YBC法鉴定和药敏判断。结果:利用血琼脂、Sabouraud和CHROM agar念珠菌培养基各获得200、296和296株念珠菌,其特异性分别为67.6%、78.3%和100%。CHROM agar念珠菌培养基可对占94.26%的白色、热带、克柔和光滑念珠菌做出正确鉴定。结论:CHROM agar念珠菌培养基可用于临床标本念珠菌的初筛及快速做出病原学诊断,为抗念珠菌药物的选择提供依据。

马丁琼脂培养基质量控制标准研究

为建立马丁琼脂培养基质量控制标准,系统评价马丁琼脂培养基适应性和促生长能力,运用多杀性巴氏杆菌、丹毒杆菌和链球菌类活疫苗活菌计数参考品,通过活菌计数统计分析,对新鲜马丁琼脂、干粉马丁琼脂或改良马丁琼脂进行适应性和促生长能力系统测试。结果显示:新鲜马丁琼脂、干粉马丁琼脂和改良马丁琼脂均对多杀性巴氏杆菌、丹毒杆菌、链球菌的适应性和促生长能力差异显著,需同时选择巴氏杆菌类、丹毒杆菌类、链球菌类活疫苗计数参考品评价马丁琼脂培养基的适应性和促生长能力,表明活菌计数参考品用于建立马丁琼脂质量控制标准是可行的。

氧化亚铁硫杆菌的菌落分离研究

以琼脂为凝固剂 ,研究了亚铁含量、磷酸盐含量、p H值、添加硫氰酸钾对氧化亚铁硫杆菌菌落产生的影响和细菌的再培养。结果表明培养基能否有效供给酸耗用酸 ,使凝固剂不被酸降解 (胨化 ) ,使细菌能够稳定固着生长、繁殖是菌落产生的关键条件。控制好这些条件 ,可以使菌落数量比

一种细菌计数培养基的试验研究

目的:营养琼脂培养基是药典规定的细菌计数用培养基,因有反映该培养基质量不稳定,有必要研制一种更好的细菌计数培养基,载入中国药典。方法:通过10株代表菌,对3种培养基的初步筛选,研究出更适合细菌计数的培养基 PYA 后,并进一步优化;以20批样品对本培养基进行了初步考察。结果:PYA 培养基优于营养琼脂培养基。结论:PYA 培养基现在是国内细菌计数的最好培养基,与国产英、美药典的大豆胰酪胨琼脂培养基质量相当。

马铃薯葡萄糖培养基制作方法的改进

对传统马铃薯葡萄糖培养基制作方法进行改良,以期得到一种制作简便、经济节约、对酵母菌检出率较高的马铃薯葡萄糖培养基。将马铃薯葡萄糖培养基制作方法改进为直接打浆、免除过滤的方式,通过对马铃薯浓度筛选实验、酵母菌性能测定实验以及酵母菌检出率实验检验改良马铃薯浓度培养基性能。结果表明最佳的马铃薯浓度为100g/L,与传统马铃薯葡萄糖培养基相比,在该浓度下对酵母菌的性能没有显著影响;改进后的培养基与传统方法制作的培养基相比,能够提高酵母菌检出率67.2%,t检验法分析二者有显著性差异。说明改进后的培养基相比传统的马铃薯葡萄糖培养基可达到节约制作时间、节省材料,并且在提高酵母菌检出率上性能更为优越。

褐口蘑菌丝的培养优化

探讨了不同营养条件对褐口蘑菌丝生长的影响．实验结果表明：褐口蘑菌丝生长的最佳碳源为蔗糖，最佳氮源为蛋白胨；能明显促进菌丝生长的微量元素为硫酸镁，生长调节因子为吲哚乙酸；最适温度为25℃；最佳pH值为7～8．

参菊洗剂体外抑菌作用

目的研究参菊洗剂的体外抑菌作用。方法采用琼脂扩散纸片法测定抑菌圈直径,采用液体培养液连续稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),采用琼脂培养液平板法测定最低杀菌浓度(MBC),并与市售某妇科洗液比较抑菌作用。结果参菊洗剂对5种病原菌株的抑菌作用明显优于相同浓度的市售某妇科洗液,差异有统计学意义(P<0.05);参菊洗剂对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白念珠菌的MIC分别为33.75,67.50,67.50,67.50,33.75 mg·m L-1;参菊洗剂对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白念珠菌的MBC分别为33.75,67.50,67.50,135.00,33.75 mg·m L-1。结论参菊洗剂具有较明显的抑菌和杀菌作用。

双歧杆菌和乳酸菌的一种简便快速计数法

当前,含双歧杆菌和乳酸菌的各种微生态调节剂正在国内外迅速发展。为确保这类制剂的质量,活菌计数极其重要。可是,由于这两类细菌都是厌氧菌,在计数方法上需要特殊的设备和较复杂的操作技术,因此现有方法还很不理想。我们根据高层半固体琼脂培养基具有良好厌氧性能的原理,在必要的条件试验基础上,提出了一种适用于双歧杆菌和乳酸菌等不产气厌氧菌的简便快速活菌计数法(下称“本法”),现简报如下。

琼脂铁氧体水基磁流体的制备

采用化学共沉淀法,选择食用琼脂为稳定剂,NaOH作沉淀剂在水溶液中共沉淀FeCl2和FeCl3得到Fe3O4磁粒子,由此制备具有高度生物亲和性的琼脂水基磁流体。用古埃磁天平法对影响磁流体磁性和稳定性的主要因素进行了研究。结果表明:在FeCl2.7H2O和FeCl3.9H2O的数量比为1∶1.7,pH值为11,反应温度50℃,时间30 min,琼脂和Fe3O4质量比为1∶1.6的条件下,可得到磁粒子粒径约12 nm,饱和磁化强度16 mT,对空气不敏感的高稳定性水基磁流体。该磁流体可用作X射线造影剂。

酪酸梭状芽孢杆菌发酵培养基的优化

验证了高层半固体琼脂试管法比固体琼脂平板法更具有良好的厌氧性能,能准确地对酪酸梭状芽孢杆菌进行活菌计数.通过对发酵培养基中不同碳源、氮源、生长因子进行单因素研究,L9(33)正交实验进一步优化得到最佳培养基组成为(g/L):胰蛋白胨10,葡萄糖8,酵母膏4.用此培养基在37℃培养24 h,活菌数可达4.1×108 mL–1.培养基中添加K2HPO4 5 g/L、MgSO4.7H2O 0.2 g/L、MnSO4.H2O 0.2 g/L、CaCO3 1 g/L培养32 h时,酪酸梭状芽孢杆菌芽孢转化率可达95%.

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌产色培养基临床应用评估

目的通过头孢西丁纸片法、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)产色筛选平板法和聚合酶链反应(PCR)检测MRSA,评估MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。方法收集仁济医院2008年8月至9月临床分离的金黄色葡萄球菌68株,分别采用头孢西丁纸片法、MRSA产色筛选平板法和PCR检测MRSA,以PCR检测femA基因和mecA基因结果为金标准,比较MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。结果甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)除万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺外,对其他11种抗菌药物的敏感率明显高于MRSA。68株金黄色葡萄球菌中,头孢西丁纸片法筛选出50株MRSA,产色平板法筛选出51株MRSA,PCR检测到51株mecA基因阳性,MRSA产色筛选平板结果和mecA基因检测结果符合率为100%。结论MRSA产色筛选平板可用于临床快速检测MRSA。

糖尿病患者龟头念珠菌定植及菌种分析

目的探讨糖尿病患者龟头念珠菌定植及其菌种构成,为预防和治疗念珠菌性包皮龟头炎提供诊治依据。方法对162例糖尿病患者及160例健康体检者行龟头皮屑念珠菌培养,并用科玛嘉显色培养基进行菌种分型。结果糖尿病患者组龟头念珠菌检出率(41.4%)明显高于对照组(15.6%)(P<0.01),且白念珠菌构成比(77.6%)显著高于对照组(56.0%)(P<0.01);糖尿病患者中有症状组念珠菌检出率(67.2%)明显高于无症状组(23.2%)(P<0.01),其白念珠菌构成比(86.7%)也显著高于无症状组(59.1%)(P<0.01)。结论糖尿病可显著增加念珠菌在龟头定植和致病的风险,其主要致病菌种仍为白念珠菌,其次为光滑念珠菌,后者在无症状感染者中占有较高比例。

一株产植酸酶酵母菌株的分类鉴定与诱变育种

根据酵母形态学特征、生理生化特性和ITS区序列的测定结果把产植酸酶酵母RCEF4907菌株分类鉴定为东方伊萨酵母Issatchenkia orientalis。利用亚硝基胍、紫外线、亚硝酸和氯化锂4种诱变剂对酵母RCEF4907菌株进行复合诱变处理,将经过处理的菌悬液用植酸钙琼脂平板进行初筛,然后取发酵上清液在37℃,pH2.5的条件下,利用钒钼酸铵比色法测定植酸酶活力进行复筛。经过多次诱变处理后,最终从大量的突变菌株中筛选出高产植酸酶的G3297突变株,其植酸酶活性达到409 U/mL,是出发菌株RCEF4907的5.76倍。

微菌落观察法快速检测和鉴别结核杆菌培养物的研究

将取自肺结核患者的219例痰标本接种匡氏琼脂平板,共分离到112例结核菌生长物。其中培养法104例(92.8％)阳性,微菌落观察法108例(96.4％)阳性,微菌落法阳性率稍高。培养法和微菌落法阳性标本首次检出时间分别为18.6d和11d,微菌落检出时间更短(P<0.01)。常规菌型鉴别方法与微菌落法对结核杆菌菌型鉴别的符合率为99％。

消毒剂对淋球菌杀灭效果检测方法的研究

为选择消毒剂对淋球菌杀灭效果的较好检测方法,对不同培养基与接种方法进行了试验比较。结果,用平皿倾注(即将菌悬液接种平皿后倾注琼脂并混匀)接种,在培养基上生长的菌落<1 mm或不透明;用平板浸润法(即将菌悬液接种平板后轻轻旋转,让菌悬液均匀浸润平板)接种,在普通营养琼脂、酵母浸膏琼脂上生长的菌落<2 mm,菌落计数<2 515 000 cfu/ml,在酵母浸膏血琼脂、巧克力琼脂上者2～3 mm与>3 320 000 cfu/ml。结果表明,对淋球菌用平板浸润法接种比常用的平皿倾注法好,用酵母浸膏血琼脂培养结果与现用巧克力琼脂者无明显差别。

竹类食用蕈菌——海绵胶煤炱菌子实体的纯培养

探索海绵胶煤炱菌子实体形成的培养条件,研究该菌的子实体发育规律,为规模化生产这种新型食用蕈菌提供技术方案。在浙江、四川、江苏等地共采集到100多份野生子实体标本,经组织分离得到纯培养菌株,在多种琼脂、液体、固体培养基上进行纯培养。在琼脂和固体培养基上,菌丝体直接分泌胶质物质形成胶质的小型子实体;在液体培养基上只形成菌丝和胶质菌丝球,不形成子实体。该菌的形态发育过程:分生孢子萌发→菌丝→胶质组织→子实体分枝→小型子实体→形成分生孢子器和分生孢子→释放孢子。海绵胶煤炱菌在纯培养条件下难以形成大型子实体。

微生态调节剂中益生菌的检测研究

目的〕为研究微生态调节剂中益生菌的检测方法。〔方法〕采用改良MRS、两层双歧琼脂、LBS、EG、改良GAM、普通营养琼脂等 6种培养基 ,使用双层琼脂培养法对 5份微生态调节剂进行双歧杆菌计数培养的比较 ,同时对 11份微生态口服液和 14份酸牛乳采用改良MRS、BS、TJA等 3种培养基 ,使用厌氧培养法 ,进行乳酸杆菌计数培养的比较。〔结果〕经统计学处理 ,显示双歧杆菌的检测以MRS琼脂为最佳。乳酸杆菌检测以TJA琼脂为佳。〔结论〕双歧杆菌、乳酸杆菌在选择较佳培养基的同时 ,以双层琼脂培养法为佳。

不同培养基及B族链球菌增菌肉汤检测B族链球菌效果评价

目的：通过分析B族链球菌（ GBS）检测的阳性检出率和平板选择性能来评价GBS筛查培养基、哥伦比亚血琼脂培养基和GBS增菌肉汤检测结果的可靠性和临床应用的可行性。方法收集妊娠晚期35～37周孕妇阴道下端及肛周样本242例、中段尿样本15例，同时直接接种及经GBS增菌肉汤增菌后接种哥伦比亚血平板和GBS筛查平板，观察各培养基上GBS的生长情况。结果直接接种后分别培养24 h和48 h，哥伦比亚血琼脂培养基GBS的检出率均为7．39％（19／257）；而GBS筛查培养基的检出率为24 h 5．45％（14／257）、48 h 7．39％（19／257）。经GBS增菌肉汤增菌后，无论培养时间是24 h还是48 h，哥伦比亚血琼脂培养基GBS的检出率均为9．73％（25／257）；GBS筛查培养基的检出率均为8．95％（23／257）。与直接接种相比，选择性增菌后GBS的检出率明显升高；2种培养基GBS的检出率差异无统计学意义（P＞0．05）。结论临床样本先经GBS增菌肉汤18～24 h增菌后再接种至GBS筛查培养基或哥伦比亚血琼脂培养基，24 h即可观察生长结果，GBS 菌落易于辨认且提高了阳性检出率。

科玛嘉显色培养基和XLD、SS、HE分离食品中沙门菌效果比较

目的比较沙门菌科玛嘉显色培养基(简称CAS,下同)、XLD、SS和HE培养基在分离食品中沙门菌的效果。方法使用73株沙门菌分别接种CAS、XLD、SS和HE培养基,观察生长和显色情况。同时使用上述4种培养基对153份食品进行沙门菌的分离鉴定,比较其分离效果。结果所有接种的沙门菌在CAS上均生长,并具有典型的菌落特征。从153份食品标本中共分离出26株沙门菌。CAS分离沙门菌的敏感性为84.62%,特异性为94.49%,与SS和HE比较有非常显著性差异(P<0.005)。在CAS上生长的非沙门菌可疑菌落主要有气单胞菌属和变形杆菌。结论CAS分离食品中沙门菌具有高敏感性和特异性,是理想的沙门菌选择性培养基。推荐使用CAS和XLD同时作为食品中沙门菌的分离培养基。