肿节风注射液抗肿瘤及与阿霉素联合用药的实验研究

目的了解肿节风注射液抗肿瘤及与阿霉素联合用药的效果。方法采用四氮唑盐法(MTT法)测定药物的体外抑制作用,用IC50评测直接抗肿瘤效果,用金氏公式进行联合用药分析。结果肿节风注射液能抑制人肝癌细胞Bel7402、人结肠癌细胞HCT-8的增殖,其IC50分别为33.13,52.39mg/mL。3.125,6.25,12.5mg/mL的肿节风注射液与阿霉素联合对HCT-8细胞体外抑制呈相加作用;25,50mg/mL的肿节风注射液与阿霉素联合对HCT-8细胞体外抑制呈协同作用。结论肿节风注射液对Bel7402、HCT-8细胞有一定的抑制肿瘤生长的作用,它与阿霉素联合应用对HCT-8细胞可产生相加或增强的协同抑制效果,尤其是高浓度的肿节风注射液与阿霉素的协同作用更为显著。

多柔比星对肝癌细胞GATA4的表达及细胞凋亡的影响

目的:通过观察多柔比星(别名阿霉素)对肝癌细胞GATA4表达和细胞凋亡的影响,探讨多柔比星抑制肝癌细胞增殖的可能机制。方法:检测不同p53状态肝癌细胞中GATA4的表达。以300 nmol/L多柔比星加入高表达GATA4的小鼠Hepa1-6肝癌细胞培养液中。碘化丙啶染色,以流式细胞术观察用药后不同时间点(0、6、12、18、24、30 h)凋亡细胞比例,MTT法观察细胞生长,半定量RT-PCR比较不同时间点GATA4、bax、bcl-XL、bcl-2 mRNA的表达,Western blot检测GATA4和细胞增殖核抗原(PCNA)的表达。结果:不同p53状态肝癌细胞中均有GATA4的高表达。分别与0 h或6 h相比,多柔比星处理后12、18、243、0 h的肝癌细胞凋亡率显著增加(流式细胞术检测),且肝癌细胞增殖显著减少(MTT法)。0、6、12、18、24和30 h GATA4 mRNA和GATA4蛋白质的表达呈递减趋势,Bcl-XLmRNA、PCNA蛋白质和bcl-2 mRNA/bax mRNA比值在6 h后也相继递减。结论:GATA4和p53在肝癌细胞中的表达可能不相关。多柔比星可抑制GATA4的表达,而Bcl-XLmRNAb、cl-2 mRNA、bcl-2/bax和PCNA表达的减少,以及凋亡细胞的增多则相对滞后。多柔比星可能通过抑制GATA4的表达来抑制肝癌细胞增殖或诱导肝癌细胞凋亡。

外源性Apelin-13对大鼠阿霉素心力衰竭模型的影响与一氧化氮途径的关系

目的研究Apelin 13对大鼠阿霉素心力衰竭的影响与NO途径的关系。方法 SD大鼠70只,随机取10只作为对照组,其余60只采用阿霉素8次隔日腹腔注射法制备大鼠心力衰竭模型。17～20 d将造模成功的55只大鼠随机分为模型组21只,Apelin-13组16只,Apelin-13十一氧化氮合酶抑制剂组(联合组)18只;Apelin-13组给予Apelin 13,联合组预先给予LNAME.然后给予Apelin-13,2组对应的药物连续尾静脉注射1周,对照组给予同等剂量的生理盐水。1周后,左心室插管法测心功能,ELISA法测血浆B型钠尿肽(BNP)、NO浓度;HE染色法观察心脏、肺脏、肝脏的病理学变化,VG染色法观察胶原纤维变化,并计算胶原容积分数(CVF)。结果模型组死亡11只,Apelin-1 3组死亡6只,联合组死亡8只,死亡率分别为52.38%、37.50%、44.44%。与对照组比较,其余3组左心室压力最大上升和下降速率均下降,模型组下降最明显,治疗组下降不明显(P<0.05);与对照组比较,其余3组BNP、NO、CVF均升高,模型组升高最明显,治疗组升高不明显(P<0.05)。结论 Apelin-13对阿霉素心力衰竭有一定的治疗作用,一氧化氮合酶抑制剂部分抵消Apelin-13的治疗作用,可能通过NO途径发挥作用。

心肌特异性高表达热休克蛋白27抑制阿霉素诱导的小鼠心肌凋亡

目的观察小鼠心肌特异性高表达热休克蛋白27(Hsp27)对于阿霉素(Dox)诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法野生型(WT)和心肌特异性高表达Hsp27的转基因(TG)小鼠,实验组和对照组(n=3)分别用Dox25mg/kg和等体积生理盐水进行一次腹腔注射,3d后取心脏,经TUNEL染色和蛋白印记分别观察心肌细胞凋亡及可诱导热休克蛋白(iHsps)的表达情况。结果Hsp27在TG鼠心肌中特异性高表达。Dox处理后WT和TG鼠的心肌细胞凋亡较对照组均显著增加,但TG的凋亡比WT显著减轻[(5.22±0.60)‰和(10.67±2.41)‰,P<0.01];Dox刺激后Hsp70和血红素加氧酶1(HO-1)表达增加,TG鼠表达水平要显著高于WT鼠[Hsp70:(1.793±0.237)和(1.013±0.14),P<0.01;HO-1:(6.884±1.104)和(4.385±0.463),P<0.05],而αB-晶体蛋白(αBC)在各组间没有显著差异。结论Hsp27心肌特异性高表达能够有效抑制Dox诱导的小鼠心肌细胞凋亡。

硼替佐米联合VAD方案治疗多发性骨髓瘤

目的:观察硼替佐米联合VAD方案治疗初治、难治复发多发性骨髓瘤(MM)患者的疗效及安全性。方法:15例初治及难治复发MM患者,硼替佐米1.3mg/m2,d1、4、8、11或d0、3、7、10静脉注射,每28d1个疗程;每个疗程联合VAD方案化疗,每位患者接受2～6个疗程治疗。采用2006年MM国际统一疗效标准观察疗效,并按NCI/PNIH标准判断不良反应。结果:中位随访14个月,治疗总有效率80%,其中8例患者达完全缓解,1例患者达良好的部分缓解,3例患者达部分缓解,2例患者疾病无进展,1例患者治疗过程中疾病进展。最常见的不良反应包括胃肠道症状,不同程度的白细胞、血小板减少,周围神经病和乏力等,经对症治疗及调整用药剂量后均能改善。结论:硼替佐米联合VAD方案可提高MM患者治疗完全缓解率,并未增加周围神经毒性。

多沙唑嗪联合低剂量阿霉素对前列腺癌细胞凋亡的诱导作用

目的观察低剂量阿霉素和多沙唑嗪诱导激素敏感性前列腺癌细胞LNCaP和激素不敏感性前列腺癌细胞PC-3凋亡的效果。方法实验组LNCaP和PC-3细胞先与低剂量阿霉素(0.86μmol/L)作用2 h,再分别与不同浓度多沙唑嗪(25、50和100μmol/L)作用48 h;对照组LNCaP和PC-3细胞直接与不同浓度多沙唑嗪(25、50和100μmol/L)反应。利用流式细胞仪测定细胞在不同浓度多沙唑嗪作用下的凋亡情况。结果对于LNCaP细胞,对照组在25、50和100μmol/L多沙唑嗪作用48 h时,细胞的凋亡率分别为(21.7±11.9)%、(22.4±16.5)%和(33.9±12.5)%;实验组的凋亡率分别为(36.5±11.2)%、(42.3±17.6)%和(48.7±17.2)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。对于PC-3细胞,对照组在25、50和100μmol/L多沙唑嗪作用48 h时,凋亡率分别为(33.5±16.1)%、(38.6±12.6)%和(43.8±17.9)%;而实验组的凋亡率则上升到(48.4±19.2)%、(56.6±18.7)%和(64.3±19.6)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。LNCaP细胞凋亡率低于PC-3细胞凋亡率(P<0.05)。结论低剂量阿霉素能够加强不同浓度多沙唑嗪对LNCaP和PC-3细胞的凋亡诱导作用,多沙唑嗪对细胞凋亡的诱导具有浓度依赖性。阿霉素和多沙唑嗪联合作用下,PC-3细胞的凋亡率明显高于LNCaP细胞。

阿霉素修饰纳米银的制备及其体外抗肿瘤活性研究

目的设计合成一类新型的具有p H响应性的阿霉素-纳米银(DOX-Ag NPs)联合抗肿瘤药物,对其理化性质进行表征,并研究其体外响应性释药行为和抗肿瘤活性。方法通过硫辛酰肼(LA-NHNH2)连接纳米银(AgNPs)和阿霉素(DOX),得到DOX-Ag NPs。利用核磁氢谱(1H NMR)和高分辨质谱(HRMS)对硫辛酰肼-阿霉素(LA-NHN=DOX)进行结构确证;通过动态光散射(DLS)和透射电镜(TEM)分析纳米粒的粒径和形貌;通过紫外-可见吸收光谱和荧光光谱表征纳米粒的光学性质;通过透析法结合荧光光谱检测DOX-Ag NPs在不同p H下的DOX释放行为;采用噻唑蓝比色法研究DOX-Ag NPs对Hep G2肿瘤细胞的增殖抑制效果。结果 LA-NHN=DOX的1H NMR数据及HRMS检测到746.275 6处的分子离子峰均证明LA-NHN=DOX成功合成。DOX-Ag NPs为粒径(40.4±3.8)nm的球形纳米粒;在弱酸性条件下DOX-Ag NPs能够快速响应性释放DOX;DOX-Ag NPs对Hep G2肿瘤细胞增殖抑制呈现浓度依赖性,当DOX浓度为0.5~20 mg/L(Ag浓度为0.45~18 mg/L)时,DOX-Ag NPs组细胞生存率均明显低于DOX组和Ag NPs组(均P<0.05)。结论 DOX-Ag NPs是一种具有p H响应性的联合抗肿瘤纳米制剂,能在肿瘤组织快速释放DOX,并通过与Ag NPs的协同治疗,发挥良好的体外抗肿瘤作用。

pH敏感磁靶向纳米给药系统的构建及其对HepG2肿瘤细胞的作用

目的:构建一种新型的磁性靶向p H敏感控释纳米给药系统并考察其对Hep G2肿瘤细胞的抑制作用。方法:将四氧化三铁(Fe3O4)衍生至碳纳米管(CNTs)表面,使用聚乙烯亚胺/聚乙二醇对载体进行修饰,利用聚乙烯亚胺具有的丰富的氨基末端与阿霉素(DOX)结合,通过具有p H敏感的腙键相连构建CNTs-Fe3O4-PEI/PEG-DOX给药系统;分别使用透射电镜(TEM)、X射线衍射仪(XRD)、傅里叶红外光谱仪(FT-IR)、磁强计(VSM)对给药系统进行相关表征分析,考察给药系统热疗升温、载药及p H敏感释放情况;将培养的Hep G2肿瘤细胞分为空白对照组、CNTs-Fe3O4-PEI/PEG组、PTT热疗组、DOX组、DOX联合PTT热疗组、CNTs-Fe3O4-PEI/PEG-DOX组、CNTs-Fe3O4-PEI/PEG-DOX联合PTT热疗组、CNTs-Fe3O4-PEI/PEG-DOX磁性靶向联合PTT热疗处理组,使用MTT法检测以上8组中Hep G2细胞的抑制率。结果:成功构建CNTs-Fe3O4-PEI/PEG-DOX纳米给药系统,DOX的载药率为65.04%,p H值降低时,DOX的累计释放率明显迅速升高;该给药系统的磁化强度为19.92 emu/g,具有明显的磁性靶向性;CNTs-Fe3O4-PEI/PEG-DOX在近红外光照射下可在5 min内迅速升温至(58.7±2.5)℃,具有明显的热疗升温作用;给药系统联合热疗对肿瘤细胞具有明显的抑制作用。结论:CNTsFe3O4-PEI/PEG-DOX是一种新型的具有磁性靶向、p H敏感控释以及热疗作用的多功能智能化的给药系统,对Hep G2肿瘤细胞有较强的抑制率。

多柔比星葡聚糖纳米粒联合YH-16对SKOV3的杀伤作用

目的初步探讨载多柔比星葡聚糖纳米粒(DOX/DEX-PLA)联合YH-16(重组内皮抑素)对卵巢癌细胞的体内外的杀伤作用。方法以双乳化剂蒸发法制备DOX/DEX-PLA载药纳米粒,透射电镜观察纳米粒形态,分光光度法计算载药率,体外药物释放实验考察纳米粒对DOX的缓释作用。MTT法观察对卵巢癌细胞的体外杀伤作用,动物实验观察其体内抑瘤效应。结果DOX/DEX-g-PLA纳米微粒呈球形,粒径约83nm,药物包封率约67.1%。体外释放实验提示,纳米制剂中约50%的药物持续缓慢释放,可持续达7d;体内抑瘤实验显示,纳米缓释制剂联合YH-16间隔给药疗效优于未包载药物每日给药的疗效。结论DOX/DEX-PLA纳米粒联合YH-16可有效抑制卵巢癌细胞的生长。

多柔比星联合蛋氨酸脑啡肽对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长抑制及Tau蛋白磷酸化的调节作用

目的探讨多柔比星联合蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长抑制及Tau蛋白磷酸化的调节作用。方法阳性对照组SH-SY5Y细胞以1. 25 mg·L^(-1)的多柔比星处理,低、中、高剂量实验组SH-SY5Y细胞分别以1. 25 mg·L^(-1)的多柔比星+10-7、10-5、10-3mol·mL^(-1)Met-ENK处理,阴性对照组细胞以等量生理盐水处理。MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率,流式细胞术和Hoeschest 33258细胞核染色检测各组SH-SY5Y细胞凋亡情况,Western Blot法检测各组SH-SY5Y细胞p-Tau蛋白表达情况。结果与阴性对照组比较,干预24、48、72 h后,阳性对照组和各实验组细胞存活率降低,且实验组低于阳性对照组,实验组细胞存活率随着Met-ENK浓度的增大逐渐降低(P <0. 05)。与阴性对照组比较,阳性对照组和各实验组细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例显著升高,中、高剂量实验组高于阳性对照组(P <0. 05);阳性对照组和各实验组S期细胞比例显著降低,中、高剂量实验组低于阳性对照组(P <0. 05)。与阴性对照组比较,阳性对照组和各实验组细胞p-Tau蛋白相对表达量明显升高,中、高剂量实验组高于阳性对照组(P <0. 05)。结论多柔比星联合Met-ENK可抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞生长,并促进其凋亡,这可能与上调Tau蛋白磷酸化水平有关。

过表达小鼠UNCV蛋白质对HeLa细胞凋亡的影响

目的研究小鼠UNCV蛋白质对HeLa细胞凋亡的影响。方法将BALB/c小鼠Uncv基因重组质粒转染HeLa细胞,筛选出稳定过表达UNCV蛋白质的HeLa细胞株。通过细胞计数法和流式细胞术,检测过表达UNCV蛋白质对血清饥饿和阿霉素诱导的HeLa细胞凋亡的影响。结果获得稳定正确过表达UNCV蛋白质的HeLa细胞株。细胞计数和流式细胞术结果显示过表达UNCV蛋白质对血清饥饿诱导的HeLa细胞凋亡有抑制作用,对于阿霉素诱导的HeLa细胞凋亡没有显著影响。结论过表达UNCV蛋白质对血清饥饿诱导的HeLa细胞凋亡有抑制作用。

Depsipeptide联合阿糖胞苷、多柔比星对人白血病细胞株的抑制效应

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂Depsipeptide联合阿糖胞苷(Ara-c)、多柔比星(DNR)对人白血病细胞株K562、HL-60的抑制效应,并定量分析其协同、相加或拮抗作用。方法:以不同浓度的Depsipeptide、Ara-c、DNR单独或联合处理K562、HL-60细胞株48 h,MTT法测定细胞生长抑制作用,中效原理法判断联合用药的相互作用。结果:①三种药物单用或两药联合作用于两种细胞株,均呈现剂量依赖性抑制效应。②Depsipeptide与Ara-c或DNR联合作用于K562、HL-60细胞株,在低抑制效应时呈现拮抗作用,高抑制效应时呈现协同作用。③改变两药的联合比率影响合用效应。结论:Depsipeptide作为一类新型的抗肿瘤药物,可有效抑制人白血病细胞株K562、HL-60增殖;其与传统化疗药物Ara-c、DNR联合可呈现协同作用;联合用药比率是影响抑制效应的重要因素。

金樱子联合氯沙坦对多柔比星心肌毒性的影响

目的:观察金樱子(Rosa Laevigata Michx,RLM)联合氯沙坦(losartan,LOS)对多柔比星(Doxorubicin,DOX)诱导的心肌损伤的影响。方法:SD大鼠随机分为5组:对照组、模型组、RLM组、LOS组及联合组。除对照组仅给予等体积0.9%氯化钠溶液外,其余4组采用DOX分6次腹腔注射,使其累计剂量达15 mg/kg进行造模。RLM和LOS分别按5 g/kg和0.7 mg/kg剂量单独或联合给予灌胃。测量血清中TNF-α、肌酸激酶(creatine kinase,CK-MB)及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量;同时采用比色法测量过氧化氢酶(hydrogen peroxidase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活力以及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量。结果:与对照组比较,模型组心脏质量指数、血清TNF-α、CK-MB、LDH水平均升高,心肌组织中MDA、NO含量升高,SOD和CAT活性降低(P<0.05)。与模型组比较,给予RLM或/和LOS干预6周后,心脏质量指数、血清TNF-α、CK-MB、LDH水平均下调,心肌组织中MDA、NO含量均降低,SOD和CAT活性均升高(P<0.05),且联合组效应较单独给药组更加明显(P<0.05)。结论:RLM可协同LOS发挥对DOX诱导的心肌毒性的保护作用,其作用可能与其抗氧化和抗炎症特性有关。

动物源性ω-3 PUFAs对耐多柔比星人卵巢癌细胞系A2780逆转耐药性研究

目的:通过人卵巢癌细胞及多柔比星耐药株的体外细胞毒性实验,探讨两种动物源性ω-3多不饱和脂肪酸对耐多柔比星人卵巢癌细胞系A2780逆转耐药性的作用。方法:采用浓度梯度倍增法诱导建立耐药细胞A2780/DXR,并与亲代细胞A2780进行耐药性比较。将耐药细胞A2780/DXR和亲代细胞A2780分别分为空白对照组、VRP逆转对照组(VRP10μmol/ml)、DHA10μmol/ml组、DHA20μmol/ml组、EPA10μmol/ml组、EPA20μmol/ml组,用动物源性ω-3多不饱和脂肪酸对A2780/DXR进行逆转耐药。结果:亲代细胞A2780组,DHA20μmol/ml和EPA20μmol/ml的逆转效果与VRP10μmol/ml的逆转效果具有显著性差异(P<0.05);耐药细胞A2780/DXR组,DHA20μmol/ml的逆转效果与VRP10μmol/ml的逆转效果具有显著性差异(P<0.05)。结论:动物源性ω-3多不饱和脂肪酸DHA、EPA均能有效逆转耐药株对DXR的敏感性,且有明显的剂量依赖性。其中尤以EPA(20μmol/ml)的逆转作用更加明显。

制备叶酸受体靶向载阿霉素/黑色素多功能造影剂及体外超声/光声显像

目的制备叶酸受体靶向载阿霉素/黑色素的多功能造影剂,评估其基本特性、体外细胞靶向能力、超声和光声显像效果以及对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖活力的影响。方法采用单乳化法和冷冻干燥减压充入C3F8气体的方法制备叶酸受体靶向载阿霉素/黑色素多功能造影剂,以马尔文激光仪检测其平均粒径及表面电位,应用紫外-可见光分光光度法测量阿霉素载药量,于凝胶模型中观察其体外超声、光声增强显影能力,以人乳腺癌MDA-MB-231细胞验证其体外细胞靶向能力和细胞增殖活力的影响。结果叶酸受体靶向载阿霉素/黑色素脂质多功能造影剂平均粒径为(659.60±27.56)nm,Zeta电位为(-38.90±4.00)mV,阿霉素载药率为85.72μg/mg。叶酸受体靶向造影剂大量聚集在MDA-MB-231细胞表面,具有较好的体外超声、光声显像能力,对MDA-MB-231细胞增殖有显著抑制作用。结论叶酸受体靶向载阿霉素/黑色素多功能造影剂是集靶向治疗、超声和光声多模态显像于一体的多功能造影剂,有望成为乳腺癌精准显像和治疗的理想分子探针。

酸性丝氨酸蛋白酶ASP_(NJ)对K562白血病细胞的抑制与损伤作用研究

目的研究酸性丝氨酸蛋白酶ASPNJ单独用药及与多柔比星联合用药对体外培养的人慢性髓系白血病细胞株K562的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法应用MTT比色法、台盼蓝拒染法检测细胞增殖和细胞活力,倒置显微镜下观察细胞的动态变化,瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞的形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡。结果沙蚕丝氨酸蛋白酶ASPNJ有效抑制K562细胞的增殖和活力并呈浓度和时间依赖性,联合用药显示ASPNJ显著增加多柔比星的杀伤作用;K562细胞出现凋亡所具有的形态学变化,ASPNJ明显诱导K562细胞的凋亡。结论沙蚕丝氨酸蛋白酶ASPNJ对体外培养的K562细胞具有明显的抑制作用并能增强多柔比星的效应,其作用机制可能与直接的细胞毒性作用及诱导凋亡有关。

罗格列酮对多柔比星所致肾病大鼠的保护作用及其抗氧化机制研究

目的:研究罗格列酮对多柔比星所致肾脏氧化应激损伤大鼠肾脏的保护作用并探讨其作用机制。方法:采用MTT法测定不同浓度的罗格列酮对多柔比星作用下细胞的增殖活性的影响。50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、多柔比星对照组和罗格列酮治疗组,大鼠尾静脉一次性注射多柔比星6.5 mg.kg-1制备多柔比星肾病模型。1周后,空白对照组每天蒸馏水灌胃,治疗组每天分别灌胃给予20、10和5mg.kg-1罗格列酮,持续8周。8周后检测大鼠血清尿素氮(BUN)和肌酐(Scr)水平及肾组织各氧化指标,同时取肾组织标本观察病理学改变。结果:用罗格列酮孵育能够明显提高DOX作用下HEK29细胞存活率;与模型对照组相比,罗格列酮20 mg.kg-1组血清肌酐、尿素氮明显下降(P<0.05),肾组织中NO含量、NOS和SOD活性明显上升、MDA含量明显下降(P<0.05),肾组织病理损伤减轻。结论:罗格列酮能降低多柔比星所致大鼠肾脏氧化应激损伤,具有肾保护作用。

褪黑素通过减轻内质网应激抵抗多柔比星心脏毒性

目的探讨褪黑素(Mel)对多柔比星(DOX)心脏毒性的治疗作用及其对内质网应激的影响。方法 60只雄性C57BL/6小鼠20~25 g,随机分为3组(每组n=20):正常对照(Control)组、DOX组和DOX与Mel共处理(DOX+Mel)组。给予小鼠单次腹腔注射DOX,剂量为15 mg/kg。DOX处理后5天,检测心功能、心率、心脏凋亡比例以及内质网应激水平。结果DOX显著下调左室射血分数(LVEF)与左室短轴缩短率(LVFS),引起心肌损伤,下调心率,增加心肌细胞凋亡比例。Mel可显著改善DOX引起的心脏收缩功能障碍,减轻心肌损伤,上调心率,并降低心肌细胞凋亡比例。此外,Mel治疗可显著抑制DOX诱发的心肌内质网应激,从而缓解心肌损伤(P均<0.05)。结论 Mel共处理可显著抑制DOX诱发的内质网应激过度激活,减轻心肌细胞凋亡,从而抵抗DOX心脏毒性。

川陈皮素对乳腺癌细胞的化疗增敏作用

目的探讨川陈皮素对乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外化疗增敏作用。方法以MDA-MB-231细胞为研究对象,MTT法测定细胞增殖抑制率,DNALadder、核小体双抗体ELISA和流式细胞仪测定MDA-MB-231细胞凋亡情况,凝胶阻滞实验(EMSA)和ELISA检测川陈皮素对核转录因子(NF-κB)的转录激活的影响。结果20μmol/L川陈皮素分别与1nmol/L紫杉醇或50ng/mL阿霉素联合使用肿瘤细胞增殖抑制率为75.1%和82.6%,单独使用1nmol/L紫杉醇或50ng/mL阿霉素肿瘤细胞增殖抑制率为40%和45%;核小体双抗体夹心酶免疫法和DNA凝胶电泳实验表明川陈皮素与紫杉醇或阿霉素联合用药可明显促进MDA-MB-231细胞的凋亡,EMSA和ELISA实验表明川陈皮素与紫杉醇或阿霉素联合用药可明显抑制NF-κB的转录活性。结论川陈皮素可以促进临床化疗药物对乳腺癌细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡作用,其机制可能是通过抑制NF-κB转录作用。

PTEN基因转染的子宫内膜癌细胞对阿霉素诱导凋亡的敏感性

目的探讨PTEN基因是否增强子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞对阿霉素的敏感性。方法将PTEN基因转染前、后的Ishikawa细胞分别暴露于系列浓度的阿霉素,以MTT法测定这些细胞对阿霉素的敏感性,并通过Hoechst33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡情况。同时,以免疫沉淀Westernblot法观察阿霉素对Bad和Akt/PKB蛋白磷酸化的影响。结果阿霉素以剂量依赖方式诱导全部细胞系的细胞凋亡,但对表达PTEN的克隆细胞所诱导的凋亡比对亲本株Ishikawa细胞更明显。低浓度阿霉素(0.1μmol/L)不引起PTEN蛋白缺失的Ishikawa细胞凋亡,但却能诱导表达PTEN蛋白克隆细胞凋亡;高浓度阿霉素(1μmol/L)诱导全部细胞系的细胞凋亡,但凋亡的发生率在表达PTEN的克隆细胞中明显高于亲本株Ishikawa细胞。在表达PTEN的克隆细胞中,磷酸化Akt/PKB和磷酸化Bad(Ser-136)的水平均下降。阿霉素降低了全部细胞系的磷酸化Akt/PKB和磷酸化Bad(Ser-136)水平,但在表达PTEN的克隆细胞中降低最明显。结论PTEN基因转染明显地增强了Ishikawa细胞对阿霉素的化学敏感性,阿霉素可能是通过下调PI3k/Akt/PKB信号途径而与PTEN蛋白共同发挥凋亡诱导作用。