Dynamitin真核表达载体的构建及鉴定

目的构建pRe-dyn真核表达质粒,为研究dynein-dynactin复合体在登革病毒逆行性运输中的作用奠定基础。方法RT-PCR扩增dynamitin基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名为pRe-dyn;重组质粒转染Vero细胞后,间接免疫荧光染色显示胞浆中有dyanimtin蛋白的表达。结论成功构建了真核表达质粒pRe-dyn,为后续研究dynamitin在病毒感染过程中的作用积累了有价值的实验资料。

动力蛋白激活蛋白亚单位Dynamitin具有ATP酶活性的生物化学特征(英文)

动力蛋白激活蛋白(dynactin)是一个与胞浆内动力蛋白的功能相关的多亚基复合物.动力蛋白(dynein)为向微管负端运输的马达蛋白,其多种功能包括细胞核迁移、有丝分裂纺锤体定位以及细胞间期和有丝分裂的细胞骨架再组装.Dynamitin,是一个50 kD的动力蛋白激活蛋白亚单位,对于稳定动力蛋白激活蛋白复合物是非常重要的.为研究这种稳定性机制,分析了dynamitin的序列,并揭示dynamitin的一些DNA序列与ATP酶的Walker A和Walker B序列具有同源性.纯化的谷胱甘肽巯基转移酶标签蛋白dynamitin和无此标签的蛋白dynamitin都特异性显示了ATP酶活性.DNA序列Walker A的失活突变可废除dynamitin蛋白的ATP酶活性,而Walker B序列无此作用.因此,突变实验进一步证实dynamitin蛋白的ATP酶活性.ATP酶活性的动力学研究结果表明Km为125·78μmol/L和kcat为7·4 min-1·

TM型车制乳化炸药在硐室爆破中的试验研究及应用

车制乳化炸药成功应用于硐室爆破在我国尚属首次。试验研究人员通过对炸药稳定性测试分析、爆破能换算、起爆网络1∶1模拟试验及起爆弹的应用,获得了宝贵的工程经验和良好的技术经济效果,可供同类型工程借鉴。