Research progress and quality markers prediction analysis of Dysosma versipellis

Dysosma versipellis is the rhizome of Bajiaolian in Berberaceae.It is a unique medicinal plant in China and it was the first to be recorded in Shennong’s Classic of Materia Medica(unknown author,25–220 C.E.).It has complex chemical components as well as complex,pharmacological and toxicological effects are extensive.Based on the recent research progress,the chemical constituents,pharmacological activities and toxicological effects of Dysosma versipellis were summarized.Combined with the core concept of quality markers of traditional Chinese medicine,the prediction and analysis were carried out from the aspects of phytogenetics and the source pathway of specific chemical constituents,traditional medicinal properties,traditional efficacy,chemical composition measurability,blood components,and pharmacokinetics,in order to provide reference for further study of Dysosma versipellis.

八角莲中两对新的双黄酮对应异构体

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和制备型高效液相色谱法,从八角莲乙醇提取物中分离得到5个双黄酮类化合物。通过波谱数据分析(MS、UV、IR、NMR)与电子圆二色谱(ECD)技术,分别鉴定为(+)-八角莲双黄酮H(1a)、(-)-八角莲双黄酮H(1b)、(+)-八角莲双黄酮I(2a)、(-)-八角莲双黄酮I(2b)、podoverine F(3),其中,1a与1b、2a与2b为2对新的双黄酮对应异构体。DPPH自由基清除实验结果显示,化合物2、2a、2b对DPPH自由基具有较强的清除能力,IC 50值分别为8.87、10.18、11.35μmol/L,且强于阳性药trolox(14.95μmol/L)。化合物2、2a、2b对DPPH自由基的清除能力分别强于化合物1、1a、1b,进一步的构效关系研究表明,B环上邻二酚羟基是黄酮类化合物具有DPPH自由基清除活性的必需结构基团。

八角莲醇提物抑制MAPK信号通路引起肾癌细胞凋亡的作用机制

目的探讨八角莲醇提物对肾透明细胞癌OS-RC-2细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法八角莲给药,CCK-8及克隆形成实验检测给药后OS-RC-2细胞增殖情况;划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移情况;活性氧(Reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测细胞ROS水平。网络药理学进行八角莲及ROS共同靶点的获取,并进行KEGG分析。流式细胞仪检测细胞凋亡及周期水平,Western blot对MAPK信号通路关键蛋白及凋亡相关蛋白进行检测。结果八角莲可明显抑制OS-RC-2细胞增殖、迁移能力,并升高细胞ROS水平。网络药理学分析显示,共得到165个八角莲-ROS的共同靶点,KEGG分析发现,MAPK信号通路变化明显。Western blot结果显示,八角莲给药后,明显降低JNK蛋白水平及p-ERK/ERK比值;降低caspase-9及Bcl-2蛋白水平,而升高cleaved caspase-9及Bax蛋白表达。流式结果显示,八角莲给药可促进细胞凋亡,降低G 1期而升高G 2/M期细胞量。回复实验结果显示,ROS抑制剂NAC与八角莲联合给药可明显逆转八角莲单独给药对OS-RC-2的细胞活力及凋亡作用,以及对细胞凋亡关键蛋白、MAPK信号通路蛋白的表达改变。结论八角莲可能通过影响ROS水平发挥MAPK信号通路抑制作用,并进一步对OS-RC-2细胞产生促凋亡及抑制增殖作用。

八角莲化学成分及其抗癌活性的网络药理学研究

目的研究八角莲Dysosma versipellis根茎的化学成分,并采用网络药理学方法对其抗癌活性进行分析。方法运用硅胶柱层析色谱、凝胶色谱、ODS柱色谱等分离技术,现代波谱技术(NMR、MS、IR、UV)对八角莲的化学成分进行分离纯化及结构鉴定,采用GO、KEGG等方法对分离所得的化学成分可能的作用靶点、通路等信息进行富集分析。结果分离得到了14个化合物,鉴定为:苦鬼臼脂毒酮(1)、异苦鬼臼酮(2)、苦鬼臼素-4-O-β-D-葡萄糖苷(3)、鬼臼毒酮(4)、苦鬼臼毒素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、苦鬼臼毒素(6)、4′-去甲基去氢鬼臼毒素(7)、4′-去甲去氧鬼臼毒素(8)、4′-去甲基鬼臼毒酮(9)、山荷叶素(10)、4′-去甲基鬼臼毒素(11)、山荷叶-4-O-β-D-葡萄糖苷(12)、鬼臼毒素-4-O-β-D-葡萄糖苷(13)、去氢鬼臼毒素(14)。网络药理学研究结果表明上述成分可能通过对激素响应、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号通路、胰岛素样生长因子受体信号通路等生物学过程,作用于AKT1、EGFR、HSP90AA1、MAPK3、MTOR等关键靶点,癌症通路、前列腺癌通路、脂质与动脉粥样硬化通路等发挥抗癌活性。结论其中化合物1、2、5、7~9和14为首次从八角莲中分离得到;八角莲中的多种成分可以通过多个靶点、多个通路发挥抗癌作用。

八角莲的愈伤组织和组培根及野生根状茎的鬼臼毒素含量比较研究

比较研究了峨眉山野生八角莲根、组培愈伤组织及其诱导根的鬼臼毒素含量,为八角莲的快速繁殖和利用生物技术生产鬼臼毒素提供科学依据.高效液相色谱技术(HPLC)显示组织培养的八角莲愈伤组织和诱导根中均含有鬼臼毒素,分别为0.117%和0.148%,野生品的根中其含量为0.600%.通过组织培养可在不破坏自然资源的前提下快速生产鬼臼毒素,从而为开发鬼臼毒素类抗癌药物提供大量原料.

三种江边一碗水的比较鉴别(Ⅰ)

目的:抽样鉴定市场中江边一碗水来源,为拟定质量标准和鉴别真伪提供参考。方法:对市场中6批江边一碗水性状和显微特征进行比较鉴别。结果:江边一碗水分别为小檗科植物南方山荷叶Diphylleia sinensisLi.、八角莲Dysosma versipellis(Hance)M.Cheng及六角莲Dysosma pleiantha(Hance)Woods.的干燥根茎。结论:3种来源的江边一碗水的性状、显微鉴别特征区别明显。

八角莲小孢子发生和雄配子形成

首次报道了八角莲 (Dysosmaversipellis (Hance)M .cheng)小孢子发生和雄配子体形成的过程。主要结果如下 :花药四室 ,药壁发育方式为双子叶型 ;药室内壁有带状加厚现象 ;二层绒毡层细胞 ,多具双核 ,腺质 ;多孢原 ,发生于表皮下 ;小孢子母细胞减数分裂时的胞质分裂为同时型 ,少数小孢子母细胞减数分裂Ⅰ完成后 ,在两子核间形成一异型沟 ,使其具类似二分体的结构 ;四分孢子多为四面体形 ,少数为左右对称形、十字交叉形、直线形及“T”形 ;成熟花粉粒为二细胞 ,呈圆形 ,具三孔沟。

八角莲不同部位鬼臼毒素分布的毛细管区带电泳研究

建立了一个简单灵敏的分离测定鬼臼毒素的高效毛细管区带电泳方法,并用该方法研究了八角莲的不同部位中鬼臼毒素的分布情况.结果表明,在未涂层石英毛细管（57 cm×75 μm i.d.,有效长度50 cm）中,以25 mmol/L的硼砂（pH 10.8）缓冲溶液为电解质,鬼臼毒素可与八角莲不同部位中的其它组分得到有效分离.方法对鬼臼毒素的测定范围为1.5 ～ 171.0 mg/L,相对迁移时间和峰面积的RSD值分别为1.50%和0.82%（n=8）.对八角莲的根、茎、叶、须乙醇提取物进行单独测定,发现鬼臼毒素在八角莲不同部位中的分布是不均匀的,其中根部最多,而叶中最少.

毒性中药鬼臼质量标准研究

目的:建立毒性中药鬼臼的质量标准。方法:采用显微、液质联用方法进行定性鉴别,以液相色谱法进行含量测定。结果:各方法可用于鬼臼的质量鉴定。结论:建立的显微、LC-MS等方法可对其进行定性定量分析。

恩施珍稀濒危药用植物八角莲资源调查报告

通过对恩施土家族苗族自治州珍稀濒危药用植物八角莲[Dysosma versipellis(Hance)M.Cheng exYing]野生资源的分布、生态环境、蕴藏量等方面进行实地调查,并对近年来人类过度采挖野生资源和生态环境被破坏的严重程度进行分析,提出了相应的保护对策与建议,以促进八角莲资源的可持续利用。

六角莲化学成分的研究

目的研究六角莲Dysosmapleiantha的化学成分。方法用1%盐酸沉淀出酸性树脂后再采用反复硅胶柱色谱分离纯化,通过理化常数测定和光谱分析鉴定其化学结构。结果从六角莲的酸性树脂中分离鉴定了10个化合物,其中5个四氢萘类木脂素化合物:鬼臼酮(Ⅰ)、脱氢鬼臼毒素(Ⅱ)、鬼臼毒素(Ⅲ)、4′-去甲基鬼臼毒素(Ⅳ)、4′-去甲基脱氢鬼臼毒素(Ⅴ);两个黄酮类化合物:山柰酚(Ⅵ)、槲皮素(Ⅶ);以及正十六烷酸(Ⅷ)、β-谷甾醇(Ⅸ)和胡萝卜苷(Ⅹ)。结论化合物是新化合物,化合物β为首次从该属植物中分离得到,其他化合物均为首次从该植物中分离得到。

八角莲组织培养研究

以八角莲种子为外植体,MS为基本培养基,通过不同的激素种类和浓度配比,对八角莲进行组织培养研究。结果表明:种子在MS+BA1.0mg/L+IBA0.5mg/L+GA34.0mg/L培养基上容易萌芽,发芽率为72.4 %;培养基MS+BA10.0mg/L+GA30.5 mg/L可诱导种子幼苗形成丛生芽;继代繁殖在MS+BA(8.0～10 .0)mg/L+GA32 .0mg/L与低浓度BA或无BA的培养基上进行循环培养效果较好;MS+NAA1.0 mg/L+AC0.2g/L适宜诱导生根获得再生植株,生根率100%。带叶叶柄在MS+BA1.0mg/L+2-ip(0.5～1.0) mg/L+NAA0.02 mg/L培养基上可诱导愈伤及根,直接形成再生植株。生根苗移栽成活率90 %。

八角莲大孢子发生和雌配子体形成

首次报道了八角莲 (Dysosmaversipellis (Hance)M .cheng)大孢子发生和雌配子体形成的过程。结果 :双珠被 ,多为厚珠心胚珠 ,少数为假厚珠心 ,胚珠多为横生 ,少数为弯生 ;边缘胎座 ,子房一室 ,多胚珠 ,珠孔由两层珠被共同形成 ,呈“之”字形 ;多为单孢原 ,位于珠心表皮下 ;偶见 2～ 3个孢原细胞位于珠心表皮下 ;大孢子母细胞有两种发生方式 ;直线形大孢子四分体 ,合点端的大孢子发育为功能大孢子 ,蓼型胚囊 ;成熟胚囊中 ,二个极核在受精前合并为次生核 ;三个反足细胞不发达 ,较早退化 ;“品”字形卵器极性明显 ,其中卵细胞与助细胞极性相反 ;助细胞发达 ,其丝状器在不同发育时期形态及大小不同 。

八角莲愈伤组织诱导及分化研究

目的探讨了八角莲的愈伤组织诱导及分化技术。方法采用八角莲成熟种子为材料,经过种子消毒诱导出芽,成功培育出无菌幼苗,再用幼叶、叶柄进行试管繁殖。结果种子外植体以70%酒精消毒45 s+3%次氯酸钠消毒5 min组合进行灭菌效果最佳,污染率为0.00%,出芽率为1.9%;种子在MS+6-BA 2.0 mg/L+GA30.5 mg/L激素配比上容易萌芽,出芽率为15.6%;在取材部位筛选中,以幼叶为外植体对诱导出芽效果最佳,最佳诱导愈伤组织激素组合为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L,愈伤组织诱导率为85.7%;结论筛选适合的外植体和激素组合,对八角莲愈伤组织诱导和丛生芽分化具有良好的促进作用。

中国特有的八角莲和六角莲的核型

本文研究了八角莲Dysosma versipellis(Hance)M.Cheng和六角莲Dysomapleiantha((Hance)Woodson的核型。二者的染色体数目均为2n=12,由四对具中部着丝点染色体、一对具近中部着丝点染色体和一对具端部着丝点染色体组成,各有一对染色体具有次缢痕,八角莲的次缢痕在第3对染色体的长臂上,六角莲的次缢痕在第1对染色体的短臂上。二者均属较对称的“2A”核型。但它们在染色体相对长度的变异幅度和差值、臂比的变异幅度和差值以及最长与最短染色体的比值上均有微小的差异。结果表明二者有密切的亲缘关系。演化趋势是八角莲→六角莲。八角莲的核型为首次报道。

大鼠急性八角莲中毒的组织病理学变化

目的观察大鼠急性八角莲中毒后主要器官的病理形态学改变,探讨急性八角莲中毒的作用机制及其对靶器官、靶组织的损伤影响。方法随机将40只SD大鼠,分为3个实验组(0.5、1.0和2.0倍LD50剂量的八角莲水煎剂灌胃)和1个对照组(1.0倍LD50剂量的生理盐水灌胃)。大鼠在八角莲急性染毒后14d处死,解剖取脑、心、肝、肺、肾,样品经组织病理学处理后,光镜和电镜下观察大鼠主要器官病理形态学改变。实验数据采用χ2检验进行统计学分析。结果光镜观察结果:神经元胞质疏松,大部分尼氏小体消失;心肌细胞肿胀,润盘及横纹结构消失;肝细胞水肿、气球样变;肾近曲小管上皮细胞肿胀,管腔内见蛋白质样红色淡染物质。电镜观察结果:神经元细胞膜及核膜结构破坏,胞质明显水肿,细胞器大多已破坏、消失。急性染毒后4组大鼠死亡率随着剂量的增加而增高(P<0.05)。结论急性八角莲中毒可引起多器官病理形态学改变,其毒性作用与剂量呈正相关性,且主要靶组织、靶器官为脑(神经元)、心、肝和肾。

八角莲水溶性有效成分的分离与抗病毒活性的测定

目的研究八角莲Dysosmaverslpellis（Hance）M．Cheng．vartomentosa水溶液中抗病毒的有效成分。方法八角莲水溶液经提取分离，分得单体进行结构鉴定（UV、IR、1HNMR、EI－MS和13CNMR）及体外抗病毒试验。结果分到四个单体：Ⅰ.山奈酚-3-O-β-吡喃葡萄糖甙；Ⅱ.槲皮素-3－O-β-呋喃葡萄糖甙；Ⅲ．山奈酚；Ⅳ.苦鬼臼毒素。晶Ⅱ对HSV－1有效抑制浓度（CPEI50）为0．02μg／ml，晶Ⅲ、Ⅳ对CBV的CPEI50分别为1．90（B1.3）和3.12（B1.5）.6.25（B4）μg／ml；而对HSV－1的CPEI50分别为0．03μg／ml和5．00×10－4μg／ml．结论晶Ⅱ只对HSV－1有抑制作用，而晶Ⅲ.Ⅳ对CBV和HSV－1均有显著抑制作用。

UPLC法测定八角莲药材中鬼臼毒素的含量

目的:建立超高效液相色谱法测定八角莲中鬼臼毒素的含量。方法:WATERS ACQUITY UPLC色谱系统,WatersACQUITY UPLC@BEHC色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为甲醇-0.1 moL.L-1磷酸二氢钾水溶液(50∶50),流速为1.0 ml.min-1,检测波长为290 nm。结果:鬼臼毒素在0.4～8.0μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为100.60%,RSD=1.57%。结论:该方法高效、快速、灵敏,为八角莲的质量控制提供了新方法。

八角莲含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用研究

目的:观察八角莲提取物(DVE)含药血清的体外抗肝癌作用。方法:以Wistar大鼠含药血清为药物,用MTT法观察DVE含药血清对人肝癌细胞(SMMC-7721细胞)增殖的抑制作用。结果:DVE组对SMMC-7721细胞有较强的抑制作用,与索拉菲尼组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:DVE含药血清体外有较强的抑制SMMC-7721细胞增殖作用。

八角莲肉桂醇脱氢酶基因的克隆和表达分析

鬼臼毒素是八角莲的重要药效成分。利用同源克隆和RACE的方法,从八角莲的根中克隆了鬼臼毒素生物合成途径肉桂醇脱氢酶(Cinnamyl alcohol dehydrogenase,CAD)基因,长1 098 bp,编码由365个残基组成的氨基酸序列。八角莲CAD蛋白不含有质体定位的信号序列,与毛白杨(Populus tomentosa)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)等物种中CAD蛋白的一致性为67.25%;系统发育分析表明,它与拟南芥的At CAD7、At CAD8和AtCAD6蛋白亲缘关系较近,聚成一个簇。组织表达分析结果表明,八角莲CAD基因在根和茎中有表达,而叶片中表达不明显。本研究获得的CAD基因,为后续进行详细的功能解析,并进一步应用于鬼臼毒素的遗传调控,奠定了基础。