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调控因子SlyA和RfaH在E.coli K4合成果糖软骨素中的生理作用
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作者 杨爱华 刘佳 +1 位作者 张震宇 刘立明 《生物加工过程》 CAS 2015年第5期14-19,共6页
利用基因工程手段过量表达E.coli K4荚膜多糖(K4CPS)合成途径中相关代谢调控因子Sly A和Rfa H,以构建高效合成K4CPS的菌株。结果发现:sly A和rfa H基因的单独过量表达和共表达重组菌的K4CPS的产量较对照菌分别提高了81.8%、46.5%和153.... 利用基因工程手段过量表达E.coli K4荚膜多糖(K4CPS)合成途径中相关代谢调控因子Sly A和Rfa H,以构建高效合成K4CPS的菌株。结果发现:sly A和rfa H基因的单独过量表达和共表达重组菌的K4CPS的产量较对照菌分别提高了81.8%、46.5%和153.8%;甘油比消耗速率较对照菌降低了12.5%、18.8%和31.3%,而乙酸含量则较对照菌降低了98.6%、39.7%和91.6%。因此,调控蛋白Sly A和Rfa H的过量表达能够大幅度提高E.coli K4的K4CPS合成,并增强菌体对甘油的利用率,而乙酸合成明显降低。而与单独表达策略相比,共表达策略能够更加有效地增强菌体合成K4CPS的能力。 展开更多
关键词 硫酸软骨素 e.coli k4 k4CPS 转录调控蛋白
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Characteristics of β-Lactamase Synthesis in E. coli and K. pneumanie Strains in Nosocomial Infections
2
作者 Saddraddin A. Atakishizadeh Sayyaddin A. Atakishizadeh Mahammad M. Davudov 《Advances in Microbiology》 CAS 2024年第1期25-30,共6页
Background: Recently micro-organisms that synthesize extended-spectrum β-lactamase (ESBLs) were increased. The peculiarities of ESBL synthesis of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae strains that cause nosocomi... Background: Recently micro-organisms that synthesize extended-spectrum β-lactamase (ESBLs) were increased. The peculiarities of ESBL synthesis of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae strains that cause nosocomial urinary tract infections, surgical site infections and pneumonia in surgical clinic were studied. ESBL synthesis were observed 38.9% of E. coli strains obtained from urine, 92.3% of strains obtained from surgical site infections, and 50% of strains obtained from sputum. ESBL synthesis were observed 37.5% of K. pneumoniae strains obtained from urine, 85.7% of strains obtained from surgical site infections, and 60% of strains obtained from sputum. Different levels of ESBL synthesize of E. coli and K. pneumoniae strains isolated from different pattern is discussed. Conclusion. ESBL synthesis is common in E. coli and K. pneumoniae strains, which cause nosocomial infections. The frequency of occurrence of ESBL s synthesis among of these strains depends on clinical forms of nosocomial infections. 展开更多
关键词 Nosocomial Infectious Agents β-Lactamase Synthesis e. coli and K. pneumoniae
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低能离子注入E.coli K12的HRS/IRR效应及recA基因在其诱发中的作用 被引量:4
3
作者 杨天佑 李培睿 +2 位作者 田静 李宗伟 秦广雍 《原子核物理评论》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期397-401,共5页
以MG1655(野生型),LE392(recA-)和DH5α(recA-)3株E.coliK12菌株为材料,研究了30keVN+离子注入E.coliK12时HRS/IRR效应的诱发情况及recA基因在其诱发中的作用。结果显示:小于10×1014ions/cm2低剂量离子注入大肠杆菌可诱发HRS/IRR效... 以MG1655(野生型),LE392(recA-)和DH5α(recA-)3株E.coliK12菌株为材料,研究了30keVN+离子注入E.coliK12时HRS/IRR效应的诱发情况及recA基因在其诱发中的作用。结果显示:小于10×1014ions/cm2低剂量离子注入大肠杆菌可诱发HRS/IRR效应;30keVN+离子注入MG1655,LE392菌株都可诱发HRS/IRR效应,而在DH5α菌株中无法诱导IRR效应。recA-与HRS/IRR效应相斥性表明recA基因在HRS/IRR效应的诱发中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 HRS/IRR N^+ 注入 e.coli K12 ReCA
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Adhesive Patterns of Escherichia coli F4 in Piglets of Three Breeds 被引量:3
4
作者 李玉华 邱小田 +1 位作者 李何君 张勤 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第7期591-599,共9页
Escherichia coli expressing F4 fimbriae is the major pathogenic bacteria that causes diarrhea in piglets before weaning. The adhesion of E. coli to the brush borders of the epithelial cells of piglets is the precondit... Escherichia coli expressing F4 fimbriae is the major pathogenic bacteria that causes diarrhea in piglets before weaning. The adhesion of E. coli to the brush borders of the epithelial cells of piglets is the precondition leading to diarrhea, which in turn is due to the presence of the F4 receptors determined by an autosomal recessive gene on the brush borders of the epithelial cells. In order to clarify the genetic mechanism of the adhesion, an in vitro adhesion experiment was carded out for three variants of E. coli F4 (ab, ac, and ad) in 366 piglets of three pig breeds [Landrace (LR), Large White (LW), and Songliao Black (SB)]. The results showed that there existed significant differences (P〈0.001) in the adhesion percentage among the three breeds. Most SB piglets were nonadhesive for all the three variants, whereas most LR piglets were adhesive. Within each breed except for LR, the proportions of the three F4 variants adhering to the brush borders differed significantly. According to the patterns of the adhesion of the three F4 variants in the three breeds, it is very likely that the three F4 variants F4ab, F4ac, and F4ad have different receptors that are controlled by three different loci. 展开更多
关键词 e. coli F4 PIGLeTS adhesion patterns ReCePTORS
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微量热学方法研究E.coli(T4)生物活性系统 被引量:3
5
作者 刘国生 谢志雄 +1 位作者 刘义 沈萍 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期209-214,共6页
用微量热学方法测定了E.coli(T4)生物活性系统在LBG培养基中37 ℃培养的热谱曲线.根据曲线数据,经过拟合得到噬菌体增殖热动力学方程ln[Pt/(1-0.077 4 Pt)]=(2.258+0.053 81) t/min和宿主细胞裂解动力学方程lnPt=(4.889 2-0.066 21) t/m... 用微量热学方法测定了E.coli(T4)生物活性系统在LBG培养基中37 ℃培养的热谱曲线.根据曲线数据,经过拟合得到噬菌体增殖热动力学方程ln[Pt/(1-0.077 4 Pt)]=(2.258+0.053 81) t/min和宿主细胞裂解动力学方程lnPt=(4.889 2-0.066 21) t/min,并根据方程求出了生长速率常数k、抑制因子S和裂解速率常数kL.用量热学方法观察到了T4噬菌体的LIN现象.讨论了该研究结果在研究、生产和噬菌体治疗等方面的意义,以及量热学方法在病毒学领域的应用前景. 展开更多
关键词 e.coli(T4)生物活性系统 微量热 热动力学
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重组E.coli CCZU-K14高效合成(S)-3-羟基-4-氯丁酸乙酯研究
6
作者 何玉财 张丹平 +2 位作者 王利群 卿青 张跃 《常州大学学报(自然科学版)》 CAS 2016年第6期1-6,共6页
为了避免在反应过程中加入昂贵的辅酶因子NAD+及有效地转化4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)合成(S)-3-羟基-4-氯丁酸乙酯((S)-CHBE),在水相反应体系中加入L-谷氨酰胺(200mmol/L)以提高重组E.coli CCZU-K14细胞内NADH的浓度以及催化活性。当与不... 为了避免在反应过程中加入昂贵的辅酶因子NAD+及有效地转化4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)合成(S)-3-羟基-4-氯丁酸乙酯((S)-CHBE),在水相反应体系中加入L-谷氨酰胺(200mmol/L)以提高重组E.coli CCZU-K14细胞内NADH的浓度以及催化活性。当与不添加L-谷氨酰胺相比,添加L-谷氨酰胺后催化活性提高了1.1倍。进一步,在含L-谷氨酰胺(200mmol/L)反应体系中加入了β-环糊精(n(β-环糊精)∶n(COBE)=0.4∶1)。与不添加β-环糊精相比,添加β-环糊精后E.coli CCZU-K14催化活性提高了1.35倍。在L-谷氨酰胺-β-环糊精-水反应体系中,催化还原3 000mmol/L COBE反应12h,(S)-CHBE(>99%e.e.)的产率达到94.9%。总之,研究结果为生物催化不对称高效合成(S)-CHBE工业化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 e.coli CCZU-K14 4-氯乙酰乙酸乙酯 (S)-3-羟基-4-氯丁酸乙酯 L-谷氨酰胺 Β-环糊精
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中国家蚕抗菌肽ABP-CM4在E.coli中的融合表达及活性分析 被引量:5
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作者 李保存 陈玉清 +1 位作者 刘平 张双全 《分子细胞生物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第2期98-102,共5页
参照天然抗菌肽CM4(ABP-CM4)氨基酸序列和大肠杆菌偏爱密码子,采用rPCR法获得CM4基因后重组到表达载体pET32a上,在E.coli中融合表达。表达产物以可溶性存在,经Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析获得融合蛋白,再经甲酸切割、亲和层析和阳离子交换层... 参照天然抗菌肽CM4(ABP-CM4)氨基酸序列和大肠杆菌偏爱密码子,采用rPCR法获得CM4基因后重组到表达载体pET32a上,在E.coli中融合表达。表达产物以可溶性存在,经Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析获得融合蛋白,再经甲酸切割、亲和层析和阳离子交换层析,得到纯化的重组抗菌肽。琼脂糖扩散法和液相测定法证明了纯化的抗菌肽具有抗菌活性。 展开更多
关键词 抗菌肽CM4 融合表达 e.coli
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用荧光抗体技术和肠细胞粘附试验检测K88^+E.coli对仔猪小肠上皮的粘附作用
8
作者 徐香 黄翠芬 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第S1期108-109,共2页
细菌粘附到宿主粘膜表面是细菌致病的前提,在引起人、畜腹泻的大肠杆菌中已经发现了许多具有粘附作用的蛋白质抗原,例如 K88、K99、987P、F<sub>41</sub>、CFA/I、CFA/Ⅱ等抗原。这些抗原也叫菌毛或粘附素,它们位于菌体表面... 细菌粘附到宿主粘膜表面是细菌致病的前提,在引起人、畜腹泻的大肠杆菌中已经发现了许多具有粘附作用的蛋白质抗原,例如 K88、K99、987P、F<sub>41</sub>、CFA/I、CFA/Ⅱ等抗原。这些抗原也叫菌毛或粘附素,它们位于菌体表面,能特异粘附到宿主小肠上皮细胞上,使细菌克服肠道蠕动的排斥在小肠内定居、繁殖。目前已经用遗传工程技术克隆3菌毛基因,用菌毛蛋白制成的疫苗,预防大肠杆菌腹泻,效果很好。在我国,新生仔猪大肠杆菌腹泻的发病率很高,仔猪腹泻大肠杆菌多数具有K88抗原,本实验建立了荧光抗体染色和肠细胞粘附二种方法,检测了K88<sup>+</sup>E.coli的粘附能力和菌毛的生物活性。 展开更多
关键词 粘附作用 e.coli K88 细胞粘附 小肠上皮 蛋白质抗原 菌毛 仔猪大肠杆菌 荧光抗体染色 粘附能力
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Identification of E. coli K12 chromosomal insertion sites of bacteriophage φ297
9
作者 翟静 曹奇志 常维山 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2005年第4期236-240,共5页
Objective:To identify the specific integration site of prophage φ297 in the host of E. coli K12 chromosome. Methods:Using molecular techniques such as Siebert PCR for walking from the int gene of prophage 297, which ... Objective:To identify the specific integration site of prophage φ297 in the host of E. coli K12 chromosome. Methods:Using molecular techniques such as Siebert PCR for walking from the int gene of prophage 297, which is similar to that of phage 933W to an unknown region in genomic DNA. A special adaptor is ligated to the ends of DNA fragments generated by digestion of genomic DNA with restriction enzymes that generates blunt ended fragments. Clone and subclone of PCR products, DNA sequencing and data analysis were used in this study. Results:The attL, attR and the core sequences were determined. The bacterial attachment site of phage φ297 was located in the yecE gene of E. coli K12. Conclusion:The phage φ297 integrates into the yecE gene of the E. coli K12 genome. 展开更多
关键词 phage φ297 e. coli K12 site-specific recombination Shiga toxin attachment site
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Wild-type MIC Distribution and Epidemiological Cut-off Value and Resistant Characteristics of Colistin Against Escherichia Coli from Chickens
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作者 Liu Yu-hao Hu Wan-jun +5 位作者 Tian Er-jie Muhammad Ishfaq Zhang Xiu-ying Chen Chun-li Li Ji-chang 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2021年第2期88-96,共9页
The aim of the present study was to investigate minimum inhibitory concentration(MIC)distributions by broth microdilution(BMD)method and to determine the preliminary epidemiological cut-off value(ECV)of colistin by ep... The aim of the present study was to investigate minimum inhibitory concentration(MIC)distributions by broth microdilution(BMD)method and to determine the preliminary epidemiological cut-off value(ECV)of colistin by epidemiological cut-off(ECOFF)finder against E.coli from chickens in China.Anal swabs were collected from chicken farms in China.BMD method was used to measure MIC50 and MIC90 of colistin which were 2 and 4μg•mL^(-1),respectively.MIC frequency distributions for colistin were used to estimate preliminary ECV(8μg•mL^(-1)).High percentages of resistance to ampicillin(94.12%),nalidixic acid(94.12%),enrofloxacin(94.12%),tetracycline(94.12%),ciprofloxacin(88.24%),florfenicol(88.24%),neomycin(64.71%),gentamicin(58.82%),levofloxacin(58.82%),doxycycline(88.24%)and cefalexin(76.47%)were found.In addition,low percentages of resistance to amikacin(5.88%),spectinomycin(17.65%)and fosfomycin(41.18%)were noted.Notably,amoxicillin,sulfisoxazole and trimethoprim resulted in a 100%resistance generation efficacy rate.Prevalence of mcr-1 in E.coli(9/17)in chromosomal DNA was higher than mcr-4(2/17)gene,and mcr-1(5/17)was higher than mcr-4(3/17)in plasmid. 展开更多
关键词 e.coli broth microdilution(BMD)method epidemiological cut-off value(eCV) mcr-1 mcr-4 coliSTIN
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19家医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中TEM型β-内酰胺酶的研究 被引量:31
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作者 王瑶 徐英春 +2 位作者 杨启文 谢秀丽 陈民钧 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期85-89,共5页
目的检测全国19家医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的TEM型ESBLs。方法收集2004~2005年全国19家医院对头孢他啶耐药的大肠埃希菌98株和肺炎克雷伯菌109株,琼脂稀释法测定菌株MICs,PCR扩增blaTEM基因。扩增阳性菌株进行接合实验,测定... 目的检测全国19家医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的TEM型ESBLs。方法收集2004~2005年全国19家医院对头孢他啶耐药的大肠埃希菌98株和肺炎克雷伯菌109株,琼脂稀释法测定菌株MICs,PCR扩增blaTEM基因。扩增阳性菌株进行接合实验,测定接合子MICs并PCR扩增blaTEM基因。扩增阳性的菌株和接合子以等电聚焦电泳(IEF)检测其β-内酰胺酶等电点。对具有典型TEM型ESBLs表型的菌株进行测序和变性高效液相色谱(DHPLC)分析。进一步收集检出突变菌株的宿主患者及其所在病房分离的对头孢他啶不敏感的菌株,进行测序、DHPLC分析,以及ERIC—PCR和RAPD分型。结果实验菌株中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBL阳性率分别为84.7%和68.8%,blaTEM基因阳性率分别为67.3%和69.7%。仅1株大肠埃希茵P34表达TEM-12型ESBL,其他均为TEM-1(广谱β-内酰胺酶)。P34宿主患者分离的21株大肠埃希菌中有18株表达TEM-12,且所有菌株均为同一克隆。该患者住院期间所在病房分离的11株对头孢他啶不敏感大肠埃希菌均表达TEM-1,与P34均不是同一克隆,但不同患者间存在菌株的水平传播。结论TEM型ESBLs已在中国出现,但仍罕见,不是导致菌株对头孢他啶耐药的主要原因。本研究在国内首次报道了TEM-12型ESBL,该菌株虽未引起流行,但仍应引起重视。必须加强感染控制,防止TEM型ESBLs在中国的传播。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 肺炎克雷伯菌 TeM型eSBLs
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安徽地区PMQR基因阳性大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs流行特征的研究 被引量:11
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作者 陈聪 叶英 +2 位作者 江洋 许伟伟 董秋萍 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期239-240,I0004,共3页
目的了解安徽地区临床分离含质粒介导的喹诺酮类耐药基因(PMQR)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中编码超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型别,及与PMQR基因在本地区共同传播的流行现状和耐药特征。方法采用琼脂稀释法测定40株临床分离含PMQR基... 目的了解安徽地区临床分离含质粒介导的喹诺酮类耐药基因(PMQR)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中编码超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型别,及与PMQR基因在本地区共同传播的流行现状和耐药特征。方法采用琼脂稀释法测定40株临床分离含PMQR基因的大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌对临床14种抗菌药物的药物敏感性,CLSI表型确证试验进行表型鉴定,PCR检测blaESBLs基因型;接合实验验证PMQR与blaESBLs基因的转移性;ERIC-PCR进行同源性分析。结果 40株PMQR阳性菌株对喹诺酮类药物显示耐药同时对多种β-内酰胺类药物耐药;PCR法检测PMQR阳性菌株中blaESBLs基因携带率达到60%(24/40),最常见的为CTX-M型ESBLs,检出率达到92%(22/24)。结论安徽地区临床存在PMQR与blaESBLs基因的共同传播及流行,包含PMQR基因的菌株多为产ESBLs菌株,同时携带PMQR与blaESBLs基因的菌株常为多药耐药菌。 展开更多
关键词 eSBLS PMQR 大肠埃希菌 肺炎克雷伯菌
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大肠杆菌MG1655菌株ERIC-PCR图谱主带序列组成分析 被引量:30
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作者 陈迎春 曹又方 赵立平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期28-32,共5页
ERIC PCR已经在细菌分类、鉴定及混合菌群分析中得到广泛应用 ,但对其产物形成规律的认识仍存在分歧。以大肠杆菌MG1 655为对象 ,对其ERIC PCR指纹图谱中 1 1kb主带中的DNA片段进行了克隆、测序、基因组定位以及引物匹配分析。结果表... ERIC PCR已经在细菌分类、鉴定及混合菌群分析中得到广泛应用 ,但对其产物形成规律的认识仍存在分歧。以大肠杆菌MG1 655为对象 ,对其ERIC PCR指纹图谱中 1 1kb主带中的DNA片段进行了克隆、测序、基因组定位以及引物匹配分析。结果表明 ,这条1 1kb主带由分布在基因组中不同位置的 3种序列不同的片段组成 ,各片段的丰度差异较大 ,最高为 97 89% ;3种片段中的 2种所在的基因组区域仅一端含有ERIC序列。推测对含有ERIC序列的基因组DNA进行扩增时 ,ERIC PCR是一种非随机扩增。 展开更多
关键词 大肠杆菌 MG1655菌株 eRIC-PCR图谱主带 序列组成分析
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产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性变化 被引量:8
14
作者 陈亚红 姚婉贞 +1 位作者 周庆涛 刘振英 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2007年第2期124-126,共3页
目的分析产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性变化。方法收集我院2004年1月—2005年12月期间临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,对其产ESBLs及耐药情况与2000年1月—2002年10月进行比较研究。结果以头孢噻肟为底物检测ESBLs,2004... 目的分析产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性变化。方法收集我院2004年1月—2005年12月期间临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,对其产ESBLs及耐药情况与2000年1月—2002年10月进行比较研究。结果以头孢噻肟为底物检测ESBLs,2004—2005年产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别为35.4%和21.1%,与2000—2002年度比较显著增加(P<0.01)。2004—2005年产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌占尿标本41.4%(133/321),呼吸道分泌物占29.0%(93/321),血液占5.9%(19/321),伤口分泌物占12.8%(41/321),体液或引流液占8.1%(26/321)。产ESBLs大肠埃希菌对氨曲南敏感性2004—2005年较前有显著下降(P<0.05),对其他抗生素的敏感性差异无统计学意义。产ESBLs肺炎克雷伯菌对抗菌药物的敏感性2004—2005年较2000—2002年除左氧氟沙星外均有下降趋势,并且头孢他啶、头孢哌酮-舒巴坦敏感性显著下降(P<0.05)。结论产ESBLs细菌近2年有增加趋势,并对多种抗生素的敏感性下降。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 肺炎克雷伯菌 超广谱Β内酰胺酶 耐药性
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4E-BP1、p70S6K在RAD001抑制胃癌MKN-28、N-87细胞生长中作用的实验研究 被引量:5
15
作者 刘莹 朱祖安 崔涛 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期504-507,共4页
目的:探讨真核起始因子4E(eIF-4E)结合蛋白1(4E-BP1)、核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶p70S6K在RAD001抑制胃癌MKN-28、N-87细胞生长中的作用。方法:体外培养人胃癌MKN-28、N-87细胞,给予RAD001干预后通过细胞计数、流式细胞术、Western-blo... 目的:探讨真核起始因子4E(eIF-4E)结合蛋白1(4E-BP1)、核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶p70S6K在RAD001抑制胃癌MKN-28、N-87细胞生长中的作用。方法:体外培养人胃癌MKN-28、N-87细胞,给予RAD001干预后通过细胞计数、流式细胞术、Western-blot检测肿瘤细胞生长、细胞周期分布及p70S6k、4E-BP1蛋白表达及磷酸化情况。结果:细胞计数结果显示RAD001作用于胃癌细胞株MKN-28,N-8724h即开始出现对细胞生长的抑制作用,随着作用时间延长至48、72h,抑制作用逐渐增强。流式细胞术结果显示RAD001作用24h后MKN-28、N-87细胞株细胞周期发生改变,停滞在G0~G1期细胞比例增加,在实验中显示细胞系N87对于RAD001作用相对敏感。Western-blot结果显示RAD001作用24h后MKN-28、N-87的4E-BP1和p70S6K表达下降,同时去磷酸化。结论:RAD001是通过抑制mTOR的活性,进而阻断4E-BP1及p70S6K的磷酸化和蛋白质翻译进而调节着细胞周期以发挥抑制胃癌细胞生长的作用。 展开更多
关键词 mTOR MKN-28 N-87 P70S6K p-p70S6k 4e—-BP1 p-4eBP1
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exendin-4表达载体构建及其在大肠杆菌中分泌表达 被引量:2
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作者 张红绪 贾孟 +2 位作者 周庆峰 张怡 李成伟 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期109-112,116,共5页
目的:研究新型抗糖尿病药物exendin-4的分子作用机制,为exendin-4的大规模生产奠定基础.方法:采用重叠PCR法扩增出exendin-4的完整序列,并将其克隆至表达载体pET22b上,得到重组质粒pET-Exn4.重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG... 目的:研究新型抗糖尿病药物exendin-4的分子作用机制,为exendin-4的大规模生产奠定基础.方法:采用重叠PCR法扩增出exendin-4的完整序列,并将其克隆至表达载体pET22b上,得到重组质粒pET-Exn4.重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,超声破碎表达产物,Tricine-SDS-PAGE分析exendin-4表达.结果:PCR、酶切鉴定和测序结果证明成功构建了重组表达载体pET-Exn4,Tricine-SDS-PAGE结果表明ex-endin-4基因在大肠杆菌中获得了分泌表达.结论:成功构建了exendin-4的重组表达载体并在大肠杆菌中实现分泌表达. 展开更多
关键词 eXeNDIN-4 载体构建 分泌表达 大肠杆菌 Ⅱ型糖尿病
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芪玉三龙汤对肺癌p70S6激酶和真核翻译起始因子4E的影响 被引量:5
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作者 李泽庚 张星星 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2018年第5期1035-1038,I0001,共5页
目的:研究芪玉三龙汤对肺癌生长的关键合成蛋白p70S6激酶(p70S6K)和真核翻译起始因子4E(eIF4E)表达的影响。方法:基于前期研究基础,采用LLC细胞培养移植法构建移植肺癌模型,荷瘤成功后随机分为模型组(M),化疗组(C),中药组(... 目的:研究芪玉三龙汤对肺癌生长的关键合成蛋白p70S6激酶(p70S6K)和真核翻译起始因子4E(eIF4E)表达的影响。方法:基于前期研究基础,采用LLC细胞培养移植法构建移植肺癌模型,荷瘤成功后随机分为模型组(M),化疗组(C),中药组(低、中、高剂量组,分别命名为QL、QM、QH),联合组(CQH),低、中、高剂量组小鼠分别按(20.12、40.24、80.48)g/(kg·d)灌胃给药,化疗组以0.4 mL顺铂腹腔注射给药,联合组以中药高剂量灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组以等量生理盐水给药,1次/d,连续给药10 d;称取瘤质量,计算抑瘤率;透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的变化;RT-qPCR法检测Ras mRNA表达水平;Western Blot法检测肿瘤组织eIF4E、p-eIF4E、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达。结果:芪玉三龙汤可抑制肺癌移植瘤生长,电镜下可见凋亡小体,用药各组均可下调Ras转录水平,但中药各组之间无明显差异(P〉0.05),联合组与化疗组之间相比无统计学意义(P〉0.05)。同时,该复方均可降低肿瘤组织eIF4E、p-eIF4E、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达。结论:芪玉三龙汤可抑制肺癌生长,诱导其镜下凋亡,与下调肺癌生长的关键合成蛋白p70S6K和eIF4E表达相关。 展开更多
关键词 芪玉三龙汤 肺癌 P70S6K eIF4e
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用CLSI和EUCAST两种标准判定产ESBLs菌株药敏结果的差异 被引量:1
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作者 邵海枫 潘红 +4 位作者 王卫萍 黄梅 范明 尤金炜 王颖 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期437-439,共3页
目的分析美国CLSI标准和欧洲EUCAST标准判读产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌(E.coli)和肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)对4种常用广谱头孢菌素药敏结果的差异。方法收集按CLSI标准因产ESBLs而将广谱头孢菌素药敏结果由敏感或中介改... 目的分析美国CLSI标准和欧洲EUCAST标准判读产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌(E.coli)和肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)对4种常用广谱头孢菌素药敏结果的差异。方法收集按CLSI标准因产ESBLs而将广谱头孢菌素药敏结果由敏感或中介改为耐药的E coli和K.pneumoniae,用琼脂稀释法检测最低抑菌浓度(MIC),用CLSI标准和EUCAST标准进行敏感性界定。同时用PCR及Hodge-test检测4种ESBLs基因和高活性β-内酰胺酶。结果55株菌中53株扩增出介导ESBLs的相关基因,Hodge-test显示55株菌均产高活性β-内酰胺酶;用EUCAST标准界定,55株菌株对头孢三嗪和头孢噻肟均耐药,对头孢他啶和头孢吡肟敏感的菌株分别有5和7株。结论在目前的耐药现状中,用CLSI规则和用EUCAST折点判读E.coli和K.pneumoniae对4种常用第三代和第四代头孢菌素敏感性,对临床治疗结果进行预测的差异主要出现在产ESBLs且头孢他啶和头孢吡肟MICs值≤1μg/m1的菌株中。 展开更多
关键词 eSBLS 药敏 大肠埃希茵 肺炎克雷伯菌
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慢性粒细胞白血病细胞eIF4E mRNA表达及影响因素 被引量:1
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作者 黄莲芬 罗红伟 +2 位作者 肖青 彭辉 冯文莉 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第18期1667-1671,共5页
目的:初步探索真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)在慢性粒细胞白血病(CML)不同病程,包括慢性期(CP)、加速期(AP)、急变期(BC)、急变治疗后(BC-R)骨髓细胞中mRNA表达及其在K562细胞中的表达影响因素.方法:RT-PCR检测25例骨髓样本[CML急变期(... 目的:初步探索真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)在慢性粒细胞白血病(CML)不同病程,包括慢性期(CP)、加速期(AP)、急变期(BC)、急变治疗后(BC-R)骨髓细胞中mRNA表达及其在K562细胞中的表达影响因素.方法:RT-PCR检测25例骨髓样本[CML急变期(CML-BC)10例,慢性期(CML-CP)8例,加速期(CML-AP)1例,急变期治疗后(CML-BC-R)3例,贫血对照3例]eIF4E mRNA表达,及其中9例CML eIF4E和RNA结合蛋白K(hnRNP K)mRNA表达,并分析两种基因表达相关性.用酪氨酸激酶抑制剂STI571处理K562细胞,并用hnRNP K短发夹RNA(shRNA)逆转录病毒载体感染K562细胞,经G418稳定筛选,分别检测eIF4E mR-NA表达变化.结果:与贫血对照组相比,CML-BC和CML-BC-R eIF4E mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),而与CML-CP无统计学意义,hnRNP K与eIF4E mRNA表达呈线性相关(r=0.79,P<0.01).STI571能轻微下调K562细胞eIF4E mRNA表达.hnRNP K干扰组hnRNP K和eIF4E mRNA表达比空载对照组分别下降55.22%,55.27%.结论:CML急变期eIF4E mRNA表达显著增高,BCR/ABL融合蛋白可能参与调节eIF4E mRNA表达但效应有限,hnRNP K分子在eIF4E mRNA表达调控中可能发挥一定作用. 展开更多
关键词 白血病 髓样 慢性 真核细胞起始因子4e STI571 核糖核蛋白K 核不均一
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Observation of the Immune Effect of Fusion Protein VP4-STI
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作者 武军元 陈创夫 +1 位作者 王智超 李有文 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2007年第3期1-4,37,共5页
The aim of the study was to investigate the immune effect of fusion protein VP4-STI. 40 mouse were randomly divided into 4 groups of test bacterin group (30 μg VP4-STI +0.6 μg LTB), aluminiumhydroxide vaccine gro... The aim of the study was to investigate the immune effect of fusion protein VP4-STI. 40 mouse were randomly divided into 4 groups of test bacterin group (30 μg VP4-STI +0.6 μg LTB), aluminiumhydroxide vaccine group (30 μg VP4-STI +Al(OH)3 gel ) , pure protein VP4- STI vaccine group (30μg VP4-STI ) and PBS control group were immunized by rhinal dripping. And then, the antibody levels of the mouse were determined. The protection effects of mouse in all immune groups were observed after the toxicity test with strong virulent strain C83902 of E. coli. Anti-VP4-STI antibodies were produced in other groups with the highest at the 6th week, except PBS control group. The antibody level in aluminiumhydroxide bactetin group was higher than that in test vaccine group. The antibody level in pure protein VP4-STI bacterin group was lower, being extremely significantly different from that in test vaccine group ( P 〈0. 001 ). Mouse in test vaccine group and aluminium hydroxide bacterin group had better immuno-protection effect on strong virulent strain C83902 of E. coli, obviously different from that in PBS control group. The research provided basis for further improving the immunogeneticity of STI. 展开更多
关键词 e. coli VP4 STI Bacterin
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