重组E.coli. LLO/OVA明显增强小鼠CD11c细胞活性及抗肿瘤免疫

目的探讨重组E.coli.LLO/OVA诱导C57BL/6小鼠机体免疫的途径,观察其免疫后小鼠机体抑制B16-OVA黑色素瘤的效果。方法磁珠分离E.coli.LLO/OVA及E.coli.OVA免疫后小鼠脾脏CD11c、CD4+和CD8+T细胞并检测CD11c细胞诱导同源CD4+和CD8+T增殖水平和细胞因子分泌程度;流式细胞检测小鼠脾脏内肿瘤抗原OVA257-264SIINFEKL特异的细胞毒T细胞含量。比较两种E.coli.免疫后,恶性黑色素瘤B16-OVA在小鼠肺内形成瘤结节的数量。结果与E.coli.OVA相比,E.coli.LLO/OVA免疫后小鼠脾脏CD11c细胞诱导同源CD4+T细胞增殖作用增强、IL-2分泌增高;同时诱导CD8+T细胞增殖和IFN-γ分泌的作用也明显增强;OVA257-264SIINFEKL特异的CD8+T细胞含量也明显增高;小鼠肺内形成B16-OVA瘤结节平均数明显减少。结论E.coli.LLO/OVA有效地诱导小鼠CD11c细胞活化,增强其对CD4+T细胞增殖和IL-2分泌以及对CD8+T细胞增殖、IFN-γ分泌的作用,诱导了更多的OVA特异的CD8+T细胞,使机体产生了更强的抗肿瘤免疫。

鸡源致病性E．COli药物敏感性试验

对2012-2015年分离于陕西榆林地区50株鸡源致病性E．coli进行8种常用喹诺酮类药物药物敏感性试验，为指导临床合理使用喹诺酮类药物提供数据参考。参照CLSI推荐的K—B药敏纸片法对所有菌株进行药物敏感性试验。结果显示50株被测菌株对喹诺酮类药物都产生了耐药性，可能会导致该药物耐药性的水平传播，应加强监控。

金葡菌肠毒素C_2的克隆表达及其生物学活性

目的克隆金葡菌肠毒素C2全长基因,构建SEC2的表达载体,实现其可溶性表达,并对纯化的rSEC2蛋白的生物学活性进行研究。方法通过聚合酶链式反应(polym erase chain reaction,PCR)从金葡菌FR I1230菌株基因中得到肠毒素SEC2的基因,将其克隆至融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌进行表达并对融合蛋白进行亲和色谱纯化。通过考察重组SEC2对淋巴细胞的增殖作用及其对肿瘤细胞杀伤活性的影响,对其超抗原活性和免疫学活性进行研究。结果得到正确的肠毒素SEC2基因序列并得到高效表达的融合蛋白,MTT法结果表明,重组SEC2表现出良好的促淋巴细胞增殖活性,且能够增强淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结论本研究成功克隆了SEC2基因,表达并纯化出具有抗肿瘤生物学活性的重组SEC2蛋白,为进一步对其分子抗肿瘤作用机制进行研究以及构建靶向抗肿瘤融合蛋白奠定了基础。

粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的分离提取

比较研究了几种破碎大肠杆菌细胞的方法,如渗透压法、超声波法、玻珠震碎法、玻珠研磨法、有机溶剂法、冻融法以及盐酸胍/EDTA法等,以确定出一种简单、快速、高效的破碎重组大肠杆菌细胞的方法获得粪产碱杆菌青霉素G酰化酶(AfPGA)用于后续试验。结果表明玻珠震碎法、超声波法和渗透压法是较优的细胞破碎方法,活力回收率分别为99.7%、78.4%、60.7%,其他方法均低于22%。而比活力以渗透压法为最高,达到4.40 U/mg。

PCR快速检测肠毒素大肠杆菌方法的研究

目的利用PCR技术,尝试建立特异性引物PCR快速检测肠毒素大肠杆菌的方法。方法设计肠毒素大肠杆菌LT基因的特异性引物,优化PCR反应条件,对16种样品进行细菌通用引物和特异性引物的PCR扩增,从而鉴定肠毒素大肠杆菌。结果所有样品都出现细菌通用引物的扩增条带,而只有肠毒素大肠杆菌有特异性引物的PCR扩增产物,结果与实际完全一致。结论该方法具有简单、迅速、准确的特点,可应用于对肠毒素大肠杆菌的鉴定。

重组降血压肽在大肠杆菌中的高效表达

目的获得具有高活性的重组降血压多肽。方法人工合成高活性降血压肽单体,经酶切位点串联,克隆至表达载体,并转化宿主菌BL21进行诱导表达。结果经酶切、PCR和测序均证明,串联的基因ACEIP已成功克隆至pGEX-4T-2表达载体中,融合蛋白GST-ACEIP的表达水平达24·6%,表达产物的融合蛋白和多肽含量分别为1·1g/L和0·14g/L,其抑制活性达85%。结论已成功制备出高活性的重组降血压多肽,为进一步开发降血压药物奠定基础。

癃闭欣通颗粒治疗大鼠急性细菌性前列腺炎的实验研究

目的观察癃闭欣通颗粒对大鼠急性细菌性前列腺炎模型的影响。方法采用向大鼠前列腺内注射大肠杆菌造成急性细菌性前列腺炎模型,观察大鼠排尿量、前列腺液细菌数、前列腺液白细胞数、卵磷质小体密度及前列腺的病理学改变。结果癃闭欣通颗粒治疗后的模型大鼠排尿量增加,可以抑制其前列腺液内细菌增长,显著抑制前列腺液白细胞升高和卵磷质小体密度降低,同时也有一定的抑制前列腺组织间质性炎细胞浸润病理改变作用。结论癃闭欣通颗粒对大鼠急性细菌性前列腺炎模型具有一定的治疗作用。

利用重组大肠杆菌产聚-4-羟基丁酸的研究

重组大肠杆菌 E.coli XL-1 Blue（pKSSE5.3）携带Ralstonia eutropha H16的 PHA聚合酶基因（phaC）和Clostridium kluyveri的4-羟基丁酸:CoA转移酶基因（orfZ）,可以利用葡萄糖和4-羟基丁酸为碳源合成均聚的聚-4-羟基丁酸[P（4HB）]。优化培养基和培养条件后,进行了补料分批培养。结果表明,经68h左右培养,E.coli XL-1 Blue（pKSSE5.3）的发酵液中菌体干重达13g/L,P（4HB）的密度达5g/L,P（4HB）百分含量为36％。从收获的冻干细胞中提纯得到40g均聚的P（4HB）,为进一步分析检测P（4HB）生物、理化、加工特性及其应用价值成为可能。

电子化政府采购下高校设备管理新探

全面提高对电子化政府采购的认识，规范制度建设，建设高素质的设备管理队伍，更重要的是要适时开发、建设电子化高校综合设备管理平台、一站式登录设备采购系统、仪器设备系统、家具系统、低值耐用品系统，建立入库、变动、对账、查询和报表等模块，为高校设备管理信息提供全过程的电子化服务。

LB膜法制备氧化石墨烯-银微米线复合透明抗菌性薄膜（英文）

采用聚乙烯吡咯烷酮和十六烷硫醇对银微米线进行双亲性处理,得到具有双亲性能的银微米线,并采用LB膜法将氧化石墨烯和改性后的银微米线依次沉积在石英基底上,制备氧化石墨烯-银微米线复合薄膜。氧化石墨烯提高了银纳米线的粘附性能,并为银微米线释放具有抗菌性能的银离子提供了弱酸性环境,在两种材料的协同作用下,复合薄膜表现出透明度高、抗大肠杆菌性能好的特点。该工作将为新一代多功能透明、抗菌性薄膜的制备提供新思路。

人白细胞介素6在大肠杆菌中的高效表达

应用PCR和重组DNA技术,结合人工合成寡核苷酸引物,成功地构建成人白细胞介素6高效表达克隆,命名为pBMhIL6,使人rIL-6编码基因受控于P_RP_L串联启动子和人工合成SD序列,且以TAA终止密码子代替原人IL-6的TAG,在E.coli中获得人rIL-6的高效表达。SDS-PAGE和凝胶密度扫描分析证明表达的人rIL-6蛋白占E.coli总菌体蛋白的28%,分子量为21KDa,Western Blot证明其能特异地与抗IL-6 McAb结合。人rIL-6诱导表达动力学研究表明在42℃条件下诱导6小时,表达达峰值。不同菌株表达人rIL-6及其生长状态影响研究提示以E.coli DH5a生长菌密度至0.7时,人rIL-6诱导表达产率较高。以7TD1细胞株~3HTdR法测定表达的人rIL-6的HPGF活性为5×10~6u/L菌液。

中药连翘对大肠杆菌R质粒消除作用的研究

目的:探讨中药连翘对大肠杆菌R质粒的消除作用,使其重新恢复对抗生素的敏感性。方法:将大肠杆菌DH5α制备成感受态后,导入含有Ampr基因的质粒,再用连翘作用转化后的大肠杆菌,经培养12h后,挑出亚抑菌浓度的菌落涂于含有Amp的平板上培养24h,观察有无细菌生长,并通过电泳检测是否消除质粒。结果:在含有Amp平板上无大肠杆菌生长,在不含Amp的平板上细菌生长良好,质粒DNA电泳检测结果经中药作用过的大肠杆菌无质粒带,表明连翘对质粒具有消除作用。