黑曲霉MAN1基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质分析

为了通过基因工程的方法在大肠杆菌中生产β-甘露聚糖酶。以β-甘露聚糖酶生产菌黑曲霉为材料,通过RT-PCR扩增获得β-甘露聚糖酶基因MAN1的cDNA片段,将该片段克隆连至pMD18-T并测序。Blast比对结果表明,该序列与GenBank中编号XM001400053的序列相似性为100%,将pMD18-MAN1与PET-32b进行双酶切后连接,构建原核表达载体pET-MAN1。酶切鉴定正确后,将该载体导入大肠杆菌BL21。重组菌株经IPTG诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE,并用DNS法的测定不同温度、不同pH下该融合蛋白的甘露聚糖酶活性。结果表明,经IPTG诱导,转化得到约62 ku的融合蛋白条带,IPTG最佳诱导表达时间是6 h,融合蛋白质以可溶组分形式存在。经DNS测定,重组甘露聚糖酶的最适温度为55℃,最适pH为5.5,在此条件下,甘露聚糖酶活力为48 IU.mL-1。研究结果以期为甘露聚糖酶的工业化生产探索新的途径。