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细菌的β-1,4一内切葡聚糖酶基因在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中的表达 被引量:2
1
作者 任健 杨艳 +1 位作者 谢明杰 曹文伟 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1997年第3期30-36,共7页
将大肠杆菌质粒pA2含气单孢菌(Aromonds.sp.212)的β-1,4-内切葡聚糖酶基因直接连干大肠杆菌/酵母菌穿梭载体pVC727组建成重组质粒,质粒PVC含强启动子。首先,通过菌落染色方法和Congo-Red染色方法筛选到大肠杆菌DH5α转化子,然... 将大肠杆菌质粒pA2含气单孢菌(Aromonds.sp.212)的β-1,4-内切葡聚糖酶基因直接连干大肠杆菌/酵母菌穿梭载体pVC727组建成重组质粒,质粒PVC含强启动子。首先,通过菌落染色方法和Congo-Red染色方法筛选到大肠杆菌DH5α转化子,然后以重组质粒转化酿酒酵母BJ1991并得到表达。最后,对酶反应的最适pH和适宜温度进行了测定。 展开更多
关键词 酿酒酵母 内切葡聚糖酶 基因表达
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枯草杆菌-大肠杆菌多功能穿梭载体的构建 被引量:21
2
作者 郭兴华 熊占 +2 位作者 周民 贾士芳 许怡 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第3期224-229,共6页
由枯草杆菌载体pUB110和大肠杆菌载体pGEM3构建了两个新的多功能穿梭载体pBE2和pBE3,它们具有强启动子和多酶切位点区。这两个载体能在枯草杆菌和大肠杆菌中复制和表达,是比较理想的载体。
关键词 穿梭载体 枯草杆菌 大肠杆菌
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以绿色荧光蛋白为报告基因的原核启动子检测体系构建 被引量:4
3
作者 陈坤 黎明 +1 位作者 高伟 路福平 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第2期184-187,共4页
以质粒pMUTIN-GFP+扩增获得的gfp+基因为报告基因,将其克隆到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pBE2,构建成一个具有启动子活性检测功能的重组质粒pBE2-GFP+。将组成型启动子P43和诱导型启动子Pspac克隆入pBE2-GFP+,得到重组表达载体pBE-GF... 以质粒pMUTIN-GFP+扩增获得的gfp+基因为报告基因,将其克隆到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pBE2,构建成一个具有启动子活性检测功能的重组质粒pBE2-GFP+。将组成型启动子P43和诱导型启动子Pspac克隆入pBE2-GFP+,得到重组表达载体pBE-GFP-P43和pBE-GFP-Pspac,转化至大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。荧光显微镜检测GFP+蛋白的表达情况。结果表明,2种不同类型的启动子均能在大肠杆菌BL21和枯草芽孢杆菌1A751中启动gfp+基因的表达。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白(GFP+) 启动子活性检测 大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体
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链霉菌和大肠杆菌穿梭质粒载体的构建 被引量:1
4
作者 谭华荣 何松 +1 位作者 庄增辉 薛禹谷 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1990年第4期327-334,共8页
本文报道了链霉菌和大肠杆菌穿梭质粒载体pSE-3的构建;把具有双启动子的大肠杆菌的质粒pGEM-3与新霉素抗性基因启动子缺失的链霉菌的探针质粒pIJ486分别用BamHI和BglⅡ酶切,T4 DNA连接酶连接后转化到E.coli HB101(Amp(?),Neo(?)),所得... 本文报道了链霉菌和大肠杆菌穿梭质粒载体pSE-3的构建;把具有双启动子的大肠杆菌的质粒pGEM-3与新霉素抗性基因启动子缺失的链霉菌的探针质粒pIJ486分别用BamHI和BglⅡ酶切,T4 DNA连接酶连接后转化到E.coli HB101(Amp(?),Neo(?)),所得重组质粒能强启动pIJ486质粒上的氨基糖苷磷酸转移酶基因(aph),并使新霉素抗性基因在大肠杆菌中得到强表达。此重组质粒被命名为pSE-3,当其转化到变青链霉菌TK54(Tsr(?),Neo(?))的原生质体前,新霉素抗性基因亦能得到强表达。酶切结果表明,构建的具有两个启动子的穿梭质粒载体pSE-3上有HindⅢ和EcoRI的单酶位点,拷贝数约为39。经再转化和传代50代等研究表明,穿梭质粒载体pSE-3在链霉菌和大肠杆菌中均是稳定的。为某些有应用价值的目的基因在大肠杆菌和链霉菌中的克隆与表达提供了一个有价值的穿梭质粒载体。 展开更多
关键词 穿梭质粒载体 链霉菌 大肠杆菌
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以β-半乳糖苷酶为报告基因的原核启动子检测体系构建 被引量:2
5
作者 陈坤 黎明 +1 位作者 樊欣迎 路福平 《生物技术》 CAS CSCD 2008年第1期13-16,共4页
目的:以β-半乳糖苷酶为报告基因构建原核启动子检测体系。方法:以由质粒pDL扩增获得的bgaB基因为报告基因,将其克隆到大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE2,构建成一个具有启动子活性检测功能的重组质粒pBEB。将组成型启动子P43和诱导型启动... 目的:以β-半乳糖苷酶为报告基因构建原核启动子检测体系。方法:以由质粒pDL扩增获得的bgaB基因为报告基因,将其克隆到大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE2,构建成一个具有启动子活性检测功能的重组质粒pBEB。将组成型启动子P43和诱导型启动子Pspac克隆入pBEB,得到重组表达载体pBEBP43和pBEBPspac,转化至大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。结果:两种不同类型的启动子均能在大肠杆菌BL21和枯草芽孢杆菌1A751中启动bgaB基因的表达。结论:成功构建具有较为广泛适用性的原核启动子检测体系。 展开更多
关键词 Β-半乳糖苷酶 启动子活性检测 大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体
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大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体的构建及应用
6
作者 白晓婷 张爱玲 +2 位作者 曹要玲 杨明明 龚月生 《畜牧与兽医》 北大核心 2006年第9期8-11,共4页
以大肠杆菌pMB1复制类型质粒pUC18为模板,PCR扩增了700bp的含质粒复制起始点和复制蛋白序列的DNA片段,克隆到质粒pBluskm的多克隆位点,得到含大肠杆菌质粒复制基因的中间载体pE3;以革兰氏阳性菌质粒pGDV1为模板,PCR扩增了含革兰氏阳性... 以大肠杆菌pMB1复制类型质粒pUC18为模板,PCR扩增了700bp的含质粒复制起始点和复制蛋白序列的DNA片段,克隆到质粒pBluskm的多克隆位点,得到含大肠杆菌质粒复制基因的中间载体pE3;以革兰氏阳性菌质粒pGDV1为模板,PCR扩增了含革兰氏阳性菌质粒正负链复制区域的2·5kb片段,并与pE3载体上的大肠杆菌复制子和复制蛋白连接构建了3·2kb的大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pGJ103。电转化pGJ103质粒至枯草杆菌DB104和1A747,均能稳定地复制。以pGJ103为骨架,克隆了不同大小的生物素基因片段,均能正确稳定地复制,证明载体有良好的承载能力。将2kb的热稳定性β-半乳糖苷酶基因(bga)克隆至pGJ103构建了载体启动子检测载体pGJ199。用pGJ199质粒载体作为启动子检测载体,对革兰氏阳性菌启动子片段P59进行了转录活性检测。并以该载体为启动子探测工具,通过鸟枪法得到了大量启动子片段。 展开更多
关键词 穿梭载体 枯草杆菌 启动子
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鲑鱼生长激素基因酵母分泌表达质粒构建
7
作者 李新辉 白俊杰 +2 位作者 罗建仁 马进 简清 《中山大学学报论丛》 1998年第6期61-64,共4页
用PCR方法改造鲑鱼生长激素(GH)cDNA,在成熟蛋白编码序列5′端前加入EcoRⅠ位点,改造后的cDNA通过平端连接插入质粒YEPM04,使鲑鱼GH基因置于酵母MFα1因子分泌肽前导序列后、并在MFα启动子调... 用PCR方法改造鲑鱼生长激素(GH)cDNA,在成熟蛋白编码序列5′端前加入EcoRⅠ位点,改造后的cDNA通过平端连接插入质粒YEPM04,使鲑鱼GH基因置于酵母MFα1因子分泌肽前导序列后、并在MFα启动子调控之下,成为大肠杆菌酵母穿梭质粒YEPM04fGH.重组子酶切分析表明。 展开更多
关键词 鲑鱼生长激素基因 穿梭质粒 分泌
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枯草杆菌-大肠杆菌多功能穿梭载体的构建
8
作者 熊占 郭兴华 《江西科学》 1990年第1期17-23,共7页
本文简要地报道了由枯草杆菌运载体pUB_(110)和大肠杆菌运载体pGEM_3构建的一个多功能穿梭载体pBE_2.该载体能在枯草杆菌和大肠杆菌中复制和表达,并具有一个强启动子和一个多酶切位点区可供广泛利用,是一个比较理想的运载体.
关键词 枯草杆菌 大肠杆菌 穿梭载体 构建
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一个从顶头孢霉中筛选具有启动子功能的DNA片段的简便方法 被引量:2
9
作者 张丕燕 朱春宝 +1 位作者 朱宝泉 赵文杰 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期97-100,共4页
利用大肠杆菌-酵母穿梭质粒pGBT9构建了一个真菌启动子捕获载体pGBT14,用这个捕获载体构建了含顶头孢霉的0.5-2.0kb片段的染色体DNA文库,并从中筛选到顶头孢霉的24个DNA片段,这些片段能够在啤酒酵母中启动Trp1基因的表达。
关键词 大肠杆菌-酵母穿梭质粒 启动子捕获载体 顶头孢霉 DNA文库 真菌
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Construction of Yeast Vectors with Resistance to Geneticin 被引量:3
10
作者 林会兰 张广 +1 位作者 周全 陈国强 《Tsinghua Science and Technology》 SCIE EI CAS 2002年第4期384-386,392,共4页
Two Escherichia coli Saccharomyces cerevisiae shuttle vectors containing a resistance marker to geneticin (G418) are constructed. Both vectors contain a kanamycin resistant marker (KanMX4) module coding aminoglyc... Two Escherichia coli Saccharomyces cerevisiae shuttle vectors containing a resistance marker to geneticin (G418) are constructed. Both vectors contain a kanamycin resistant marker (KanMX4) module coding aminoglycoside 3' phosphotransferase (APH) that renders E. coli resistant to kanamycin and S. cerevisiae to geneticin. These vectors overcome the shortage of the conventional yeast vectors bearing HIS3, TRP1, LEU2, and URA3 modules as selection markers, which require hosts to be auxotrophic. Green fluorescent protein (GFP) is used as the reporter to examine the functions of the vectors. The vectors are powerful tools for the convenient cloning and controlled expression of genes in most S. cerevisiae strains. 展开更多
关键词 geneticin (G418) shuttle vector green fluorescent protein (GFP) escherichia coli (e. coli) Saccharomyces cerevisiae
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致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影的制备及其裂解效率的测定
11
作者 赵星 程伊洛 +3 位作者 卢琴 邵华斌 杨玉莹 罗青平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期186-190,共5页
为制备高裂解效率的致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影,本研究通过编码15个柔性氨基酸linker采用融合PCR法将噬菌体中Φ174的裂解蛋白E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A基因(SN)串联(E-15L-SN),插入温控表达质粒pBV220,构建重组温控双裂解表... 为制备高裂解效率的致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影,本研究通过编码15个柔性氨基酸linker采用融合PCR法将噬菌体中Φ174的裂解蛋白E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A基因(SN)串联(E-15L-SN),插入温控表达质粒pBV220,构建重组温控双裂解表达质粒(pBV-ES),采用PCR扩增其温控双基因裂解表达盒(DLS-ES)插入E.coli-Pasteurella(大肠杆菌和巴氏杆菌)穿梭质粒pBA1100,构建重组温控双基因裂解穿梭质粒pBA1100-DLS-ES。该质粒可以通过温控制备高裂解率的E.coli和Pasteurella两种菌的菌影。本实验将构建的pBA1100-DLS-ES电转化至致禽肾脏、肠道病变E.coli中,28℃集菌,42℃温控诱导裂解蛋白E和核酸酶A表达。OD_(600nm)值及电镜结果表明,双基因裂解率高于单基因,同时收集菌影时间也比单基因裂解短,42℃诱导2 h含双裂解基因的菌液处理菌体裂解率达到99.9999%,本实验利用菌影形成机制将含青霉素抗性的致禽肾脏、肠道病变E.coli制备成菌影,为新型菌影疫苗的制备提供实验依据。 展开更多
关键词 裂解基因e 核酸酶A 致禽肾脏 肠道病变大肠杆菌菌影 穿梭质粒
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利用E.coli-App穿梭载体构建温控双基因裂解载体pMC-WK 被引量:3
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作者 孙颖 金天明 +1 位作者 冯立文 袁洁 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1304-1308,共5页
采用PCR方法从噬菌体PhiX174基因组中扩增出裂解蛋白E基因,从金黄色葡萄球菌基因组中扩增出核酸酶A基因(SN),通过15个柔性氨基酸linker将双基因串联,插入PBV220表达载体,构建温控双基因裂解系统(DLS)。PCR扩增DLS,将其与E.coli-App穿梭... 采用PCR方法从噬菌体PhiX174基因组中扩增出裂解蛋白E基因,从金黄色葡萄球菌基因组中扩增出核酸酶A基因(SN),通过15个柔性氨基酸linker将双基因串联,插入PBV220表达载体,构建温控双基因裂解系统(DLS)。PCR扩增DLS,将其与E.coli-App穿梭载体pMC-Express相连,构建重组穿梭载体pMC-WK。裂解试验表明,E-15aalinker-SN裂解较E裂解迅速而彻底,菌体裂解率达到99.999 4%;经PCR扩增出的DLS具有裂解活性。本试验成功构建了温控双基因裂解载体pMC-WK,为App菌影疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 裂解蛋白e 核酸酶A App菌影 穿梭载体
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