e1a3型BCR-ABL伴IKZF1基因突变的成人急性淋巴细胞白血病一例

急性淋巴细胞白血病是一种恶性克隆性肿瘤性疾病,在各种亚型、基因突变体中存在不同的生物学特征及预后,疗效差别很大。本文通过分析1例具有BCR-ABL融合基因e1a3罕见亚型并伴IKZF1基因突变的成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的诊疗过程,并复习相关文献,为临床诊断、治疗提供参考。

E1A激活基因阻遏子蛋白过表达可抑制人血管平滑肌细胞的迁移

背景:成熟动脉中膜血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)分化稳态的丧失是血管老化的一个重要原因。目的:观察E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)抑制人血管平滑肌细胞迁移的分子机制。方法:应用已建立的稳定转染CREG过表达细胞hVSMCs-CREG和CREG表达沉默的hVSMCs-siCREG细胞株通过刮伤实验和Transwell小室细胞移行实验检测细胞迁移能力,通过Western blot检测转染前后细胞中CREG蛋白、基质金属蛋白酶和JNK表达及活化情况,应用JNK和基质金属蛋白酶9抑制剂阻断研究分析上述信号分子表达变化在细胞迁移中的作用。结果与结论:Western blot结果证实,CREG蛋白表达在hVSMCs-CREG组中增加(P<0.05),而在hVSMCs-siCREG组中减少(P<0.05)。刮伤实验和Transwell实验分析结果证实hVSMCs-CREG组细胞较正常对照组细胞迁移能力受抑。相反,hVSMCs-siCREG组细胞迁移能力显著增加(P<0.05)。Western blot和明胶酶谱分析证实hVSMCs-siCREG组细胞中MMP9活性明显增加(P<0.05),同时JNK蛋白活化。进一步应用JNK抑制剂阻断研究证实,CREG蛋白表达抑制引起的血管平滑肌细胞迁移能力增加与细胞中基质金属蛋白酶9活性均受到剂量依赖性抑制。结果证实,CREG蛋白表达可抑制JNK-基质金属蛋白酶9信号通路的活化,以此抑制体外培养的人血管平滑肌细胞迁移。

E1A激活基因阻遏子促进人血管平滑肌细胞分化和迁移

为探讨E1A激活基因阻遏子(cellularrepressorofE1A-stimulatedgenes,CREG)蛋白在人血管平滑肌细胞株HITASY分化和迁移中的调控作用,构建了重组逆转录病毒载体pLNCX2(+)/CREG和pLXSN(-)/CREG.以带绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)的空载体pLNCX(+)/GFP和正常HITASY为对照,用磷酸钙共沉淀法将重组逆转录病毒载体转染293细胞,包装出完整的逆转录病毒后,感染HITASY.经G418筛选,获得稳定感染的细胞克隆.应用免疫荧光染色、蛋白质印迹等方法检测CREG和平滑肌分化标志蛋白α-肌动蛋白(SMα-actin)表达,同时通过刮伤实验、慢速显微摄像技术检测细胞迁移能力以及用明胶酶谱方法分析细胞基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMPs)的活性.结果表明:pLNCX2(+)/CREG稳定感染的HITASY中CREG和SMα-actin蛋白表达上调,MMP-2和MMP-9活性升高,细胞迁移速度加快;pLXSN(-)/CREG稳定感染的HITASY中CREG和SMα-actin蛋白表达下调,MMP-2和MMP-9活性降低,细胞迁移速度减慢.上述研究提示CREG在诱导血管平滑肌细胞分化的同时促进细胞迁移.

RhoA和血清反应因子(SRF)介导E1A激活基因阻遏子诱导人血管平滑肌细胞分化

为探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的调控机制,应用重组逆转录病毒表达载体pLNCX2(+)/CREG及pLXSN(-)/CREG制备稳定感染HITASY细胞模型,观察CREG蛋白过表达及表达抑制对人VSMCs分化的影响并探讨其调控机制.结果显示:pLNCX2(+)/CREG稳定感染细胞呈分化表型,细胞细长变成组织样聚集生长趋势,细胞中CREG蛋白和平滑肌分化标志蛋白平滑肌α-肌动蛋白(SMα-actin)表达显著增加,同时SMα-actin相关调控因子——血清反应因子(SRF)入核转位,RhoA总蛋白表达上调,以Rho激酶特异性抑制剂Y-27632作用后,CREG诱导的SMα-actin表达下调的同时SRF出核转位;pLXSN(-)/CREG稳定感染的细胞体积变大,细胞极性消失,呈无序生长,细胞中CREG和SMα-actin蛋白表达显著降低,同时伴有SRF出核转位及RhoA总蛋白表达下调.免疫共沉淀分析发现,CREG蛋白能被分泌到VSMCs培养基中表达,并可与细胞膜受体6-磷酸甘露糖/胰岛素样生长因子Ⅱ型受体(M6P/IGF2R)发生直接相互作用.用蛋白磷酸酶PP2A特异性抑制剂okadaicacid减少M6P/IGF2R在细胞膜表面分布,可明显抑制CREG过表达引起的RhoA、SRF和SMα-actin表达.上述结果提示,在体外培养的人VSMCs中,CREG可能作为一种分泌型蛋白质通过与细胞膜受体M6P/IGF2R相互作用,依次激活SMα-actin蛋白相关调控因子RhoA和SRF引起SMα-actin表达增加,促进VSMCs向分化表型转换.

E1A激活基因阻遏子过表达抑制体外人血管平滑肌细胞凋亡

为探讨EIA激活基因阻遏子(cellular repressor of EIA-stimulated genes,CREG)对人血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡的影响及调控机制,应用正、反义重组逆转录病毒表达载体pLNCX_2(+)/CREG及pLXSN(-)/CREG制备稳定感染人胸廓内动脉平滑肌细胞克隆株(human internal thoracic artery-Shenyang,HITASY)细胞模型．观察CREG蛋白过表达及表达抑制对平滑肌细胞凋亡的影响。荧光显微镜下观察DAPI染色后凋亡细胞核形态,Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR技术分析凋亡相关基因caspase-9mRNA的表达,蛋白质印迹法分析p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38 MAPK)的表达变化。研究结果显示,CREG蛋白过表达明显抑制血清饥饿诱导的HITASY细胞凋亡的发生；同时细胞中p38 MAPK、p-p38 MAPK的表达增加。相反,抑制CREG蛋白表达则引起正常血清培养状态下VSMCs的自发凋亡明显增加,同时细胞内p38 MAPK、p-p38 MAPK表达显著下降。进一步研究发现,预先应用特异性抑制剂SB203580阻断p38 MAPK信号转导通路后,CREG蛋白过表达引起的细胞凋亡抑制作用被明显减弱,血清饥饿后CREG蛋白过表达引起的HITASY细胞凋亡现象明显增加。上述结果提示,CREG蛋白过表达可以抑制体外培养的VSMCs凋亡．p38 MAPK信号转导通路可能介导CREG蛋白对VSMCs凋亡的抑制作用。

E1A基因对头颈部淋巴结转移鳞癌细胞体外生长的抑制和化放疗增敏的作用

背景与目的:腺病毒5型早期区1A基因(early region 1A,E1A)是新近发现的一个具有抑癌作用的基因,E1A蛋白能够从正、负两种途径调控多种基因的表 达,具有诱导肿瘤细胞分化、逆转其恶性表型、降低其体内致瘤性和抗转移等活性,但E1A基因在头颈淋巴结转移鳞癌治疗中的作用尚少见报道。本研究的目的是探讨E1A基因对头颈淋巴结转移鳞癌细胞体外生长的抑制作用和化、放疗增敏作用及其初步的作用机理。方法:经脂质体介导,将真核细胞高效表达E1A基因的重组质粒peDNA3-E1A导入人舌鳞癌的淋巴结转移癌细胞系686LN-1。通过测绘生长曲线和计算倍增时间,观察E1A基因对该细胞系生长的抑制作用。用MTT法测定转染E1A基因前后,癌细胞对顺铂、泰素、5-氟尿嘧啶和博来霉素等化疗药物以及放疗敏感性的改变。流式细胞术和免疫细胞化学染色检测转染前后的细胞周期分布以及p53和HER-2/neu表达情况。结果:转染E1A基因细胞群体生长缓慢,倍增时间延长(是转染空载体细胞的1.48倍)。与686LN-1-vect比较,686LN-1-E1A细胞对顺铂、博来霉素、泰素和射线的敏感性(IC_(50))分别提高了8倍、20倍、10倍和1倍。细胞周期出现G_2/M期阻滞;免疫细胞化学染色显示E1A基因能抑制HER-2/neu的表达。

人E1A激活基因阻遏子的表达、抗体制备及生物学活性分析

目的:构建人E1A激活基因阻遏子(humancellularrepressorofE1A-stimulatedgene,hCREG)基因的原核表达载体,纯化重组的hCREG融合蛋白并制备兔抗hCREG抗体。探讨hCREG蛋白在人血管平滑肌细胞克隆株(HITASY)中的表达、定位。方法:用PCR技术,扩增hCREG并构建pGEX-4T-1/hCREG原核表达载体。诱导表达重组谷胱甘肽巯基转移酶(glutathioneS-transferase,GST)-hCREG融合蛋白。以GST-hCREG为抗原,制备兔抗人GST-hCREG的抗血清,并通过蛋白A和GST亲和层析纯化。用ELISA和Westernblot法检测抗体的效价和特异性;用免疫荧光染色法检查去血清培养前后HITASY细胞中hCREG蛋白的表达及定位;用BrdU染色观察分泌型hCREG蛋白对HITASY细胞增殖的影响。结果:经鉴定证实构建的重组质粒正确。诱导后pGEX-4T-1/hCREG菌株可表达大量的GST-hCREG融合蛋白,层析纯化后其纯度达90%。Westernblot检测表明,纯化的兔抗hCREG抗体可与hCREG蛋白特异性结合。ELISA测得该抗体的效价>1∶105。免疫荧光染色检测显示,去血清培养诱导的HITA-SY细胞中hCREG蛋白的表达增加且定位在核周围。BrdU染色表明,hCREG可明显抑制HITASY细胞增殖。结论:成功地获得兔抗hCREG抗体。证实去血清培养的血管平滑肌细胞中CREG蛋白的表达上调。表达的hCREG蛋白可抑制HI-TASY细胞增殖,提示hCREG可能参与调控血管平滑肌细胞的增殖与分化。

E1A激活基因阻遏子(CREG)过表达通过抑制p38/JNK信号分子活化对抗人血管平滑肌细胞凋亡

血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡参与了动脉粥样硬化(AS)及冠状动脉介入治疗(PCI)术后再狭窄(RS)等心血管疾病的发生发展过程.E1A激活基因阻遏子(CREG)是新近发现的一种分泌型糖蛋白,在维持细胞和组织稳态方面发挥重要作用.前期研究发现CREG蛋白过表达能够对抗血清饥饿诱导的人血管平滑肌细胞(hVSMCs)凋亡,进一步探讨CREG对hVSMCs凋亡的调控作用及相关的分子机制.以逆转录病毒稳定转染的CREG过表达及表达抑制的hVSMCs为模型,应用两种药物Staurosporine(STS)和Etoposide(VP-16)诱导细胞发生凋亡,检测细胞凋亡和相关信号通路变化.结果显示,在药物干预后,CREG表达抑制时细胞凋亡明显增多,而CREG过表达明显抑制hVSMCs凋亡.同时也发现,CREG表达抑制时p38及JNK活性明显增强,而CREG过表达时p38和JNK活性被抑制.经腺病毒转染和药物干预抑制p38表达后,细胞凋亡均受到抑制,而且在p38活性被抑制的同时,JNK活化也受到抑制.说明p38和JNK表现为协同作用.结果也显示,VSMCs分化指标SMα-actin和SM MHC与CREG表达呈一致趋势,而细胞外基质蛋白Fibronection与CREG表达呈负相关.以上结果提示,CREG在维持VSMCs表型转换方面发挥重要作用,并且通过p38和JNK信号转导通路对hVSMCs凋亡进行调控.CREG可能对于AS和PCI术后RS的防治具有重要价值.

E1A基因对裸鼠移植瘤生长抑制及其初步作用机制的实验研究

目的:探讨E1A基因对人宫颈癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其相关作用机制。方法:通过裸鼠移植瘤实验,观察E1A基因对人宫颈癌细胞裸鼠移植瘤生长的的抑制作用。采用免疫组织化学染色检测E1A基因对肿瘤细胞凋亡及Survivin基因和Caspase-3基因表达的影响。结果:裸鼠移植瘤实验结果显示:Hela-E1A细胞形成的肿瘤较Hela和Hela-vect的出瘤时间晚,生长慢,瘤重小,抑瘤率分别为83.42%和84.74%。免疫组织化学染色显示:E1A基因组细胞凋亡数量较Hela和Hela-vect组明显增多,Caspase-3基因(凋亡促进因子)呈高表达,Survivin基因(调亡抑制因子)的表达明显降低。结论:E1A基因能够明显抑制人宫颈癌细胞裸鼠移植瘤的生长,该作用可能与E1A基因激活Caspase-3基因和降低Survivin基因的表达有关。

E1A抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖及其分子机制

目的:本研究将E1A基因转染HER-2表达阳性的乳腺癌细胞系MCF-7,并研究E1A对MCF-7细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法:利用基因转染技术检测MCF-7细胞中E1A的表达,RT-PCR和Western杂交检测E1A基因对HER-2mRNA和蛋白表达水平的调控,MTT法检测E1A对MCF-7细胞增殖的抑制作用,软琼脂集落法检测E1A对MCF-7细胞集落形成的影响,并利用流式细胞术检测E1A对MCF-7细胞凋亡的调控。结果:MCF-7细胞无内源性的E1A表达,E1A在MCF-7细胞内的表达显著性地降低了细胞中HER-2mRNA和蛋白表达水平,诱导MCF-7细胞发生凋亡。细胞增殖曲线显示E1A基因显著性抑制MCF-7细胞增殖和细胞集落形成能力。结论:E1A基因能降低人乳腺癌细胞MCF-7的HER-2表达,诱导细胞发生凋亡,从而抑制细胞的增殖和细胞集落形成能力。

E1A基因对人肺腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的：探讨Ｅ１Ａ基因对人肺腺癌细胞的化疗增敏作用。方法：通过脂质体介导将Ｅ１Ａ基因导入人肺腺癌细胞系Ａ－ｎｉｐ９７３，经Ｇ４１８筛选获得稳定表达Ｅ１Ａ的转染细胞（Ａｎｉｐ９７３－Ｅ１Ａ）。用不同浓度顺铂、泰素及ＶＰ１６等化疗药物处理细胞，观察Ｅ１Ａ基因对人肺腺癌细胞的化疗增敏作用。结果：Ａｎｉｐ９７３－Ｅ１Ａ细胞对顺铂、泰素的敏感性显著增加，顺铂的ＩＣ５０值减少了７倍，并且敏感性随时间的延长而增加。但对ＶＰ１６，Ｅ１Ａ基因的稳定表达在该细胞系未显示增敏作用。免疫细胞化学染色显示，Ｅ１Ａ基因抑制了ＨＥＲ－２／ｎｅｕ的表达。结论：Ｅ１Ａ基因能增加人肺腺癌细胞对顺铂、泰素等化疗药物的敏感性。该作用可能与Ｅ１Ａ基因抑制ＨＥＲ－２／ｎｅｕ的表达有关。为在恶性肿瘤治疗上化疗和基因治疗联合应用的可能性提供了实验依据。

E1A基因对人鼻咽癌动物模型放射增敏的实验研究

目的:探讨腺病毒E1A基因对人鼻咽癌动物模型放射增敏的实验研究。方法:取对数生长期的CNE-2Z细胞5×105/0.2 mL,接种于4周龄左右裸鼠右前肢腋部皮下致瘤,第7天裸鼠皮下肿瘤长至直径0.6～0.8 cm时,随机分为6组(n=10):PBS组,Ad-β-gal组,放射组,Ad-β-gal+放射组,Ad-E1A组,Ad-E1A+放射组。Ad-β-gal组/Ad-E1A组在第2周开始给予荷瘤裸鼠皮下肿瘤内滴度为5×109PFU/50μL的Ad-E1A/Ad-β-gal注射,每周2次,连续2周,放射组在第3周给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。Ad-β-gal+放射组/Ad-E1A+放射组在第2周开始,给予荷瘤裸鼠皮下肿瘤内滴度为5×109PFU/50μL的Ad-E1A/Ad-β-gal注射,每周2次,连续2周,在第3周给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。第1次治疗后,每隔4天用卡尺测量1次肿瘤的体积,记录其直径,裸鼠的生存时间。当肿瘤的直径超过2 cm时,处死裸鼠,分离肿瘤组织,采用免疫组织化学方法分析血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和CD34表达,TUNEL分析细胞凋亡。结果:Ad-E1A+放射组较其他组能明显延缓移植瘤生长时间,Ad-E1A+放射组裸鼠的肿瘤平均体积比单独放射组小4.7倍,比单独用Ad-E1A组的小5.3倍。Ad-E1A+放射组的裸鼠生存率显著高于其他治疗组。Ad-E1A+放射组的VEGF蛋白表达和微血管密度较其他各组明显下降(P<0.01)。TUNEL分析结果显示Ad-E1A组和Ad-E1A+放射组及放射组的肿瘤组织内均可明显观察到凋亡细胞。并且Ad-E1A+放射组肿瘤细胞凋亡数目明显高于Ad-E1A组或者放射组。结论:E1A基因通过抑制肿瘤血管的形成和诱导肿瘤细胞的凋亡来提高人鼻咽癌细胞对放射的敏感性。

E1A基因对人宫颈癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的探讨E1A基因对人宫颈细胞化疗药物的增敏作用及其相关机制。方法E1A基因经PEI-Fe3O4纳米粒介导转染人宫颈癌细胞系,用不同浓度的顺铂、5-氟尿嘧啶和紫杉醇处理细胞,通过MTT法测绘细胞存活曲线,观察E1A基因对顺铂、5-氟尿嘧啶和紫杉醇等化疗药物敏感性的影响;用同一浓度的顺铂、5-氟尿嘧啶和紫杉醇处理细胞,观察E1A基因在不同时间对癌细胞存活率的影响。结果转染E1A基因的人宫颈癌细胞(Hela-E1A)对顺铂和紫杉醇的敏感性显著增加,与Hela和Hela-vect细胞系比较,Hela-E1A细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性分别提高了10倍和15倍;对5-氟尿嘧啶的增敏作用不明显。结论E1A基因能显著提高人宫颈癌细胞对顺铂和紫杉醇等化疗药物的敏感性。其作用机制可能是E1A基因抑制了该细胞的HER-2/neu基因的表达,使该细胞周期再分布,出现S期抑制和G2/M期阻滞。

E1A激活基因阻遏子促进人血管内皮细胞VEGF分泌和单层通透性增加

目的:探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)诱导的人血管内皮细胞(ECs)单层通透性改变中的作用及机制。方法:用CREG过表达及CREG表达下调的ECs为模型,Transwell chamber弥散模型观察ECs单层通透性的改变;荧光倒置显微镜观察细胞骨架肌动蛋白F-actin及黏附连接蛋白VE-cadherin在ECs中的分布和形态学改变;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测ECs血管内皮生长因子(VEGF)分泌。结果:CREG过表达的ECs(EO组)较EN组单层通透性明显增高(P<0.05);CREG表达下调的ECs(ES组)较EN组单层通透性有所下降(P<0.05)。与EN组相比较,EO组细胞中F-actin排列紊乱,形成大量应力纤维;ES组F-actin则主要呈细丝状分布于细胞周边,中央分布较少。同时,EO组VE-cadherin在细胞周边的正常拉链状结构减少或缺失,细胞间隙增宽;而ES组VE-cadherin在细胞周边呈正常拉链状分布,细胞之间连接紧密。ELISA检测显示EO组细胞上清中VEGF分泌较EN组明显增加(P<0.05);ES组VEGF分泌较EN组减少(P<0.05)。应用VEGF中和抗体阻断后,CREG过表达引起的EO通透性增加的现象明显受到抑制。结论:CREG过表达可能通过VEGF介导的信号途径引起F-actin重构及VE-cadherin减少,使血管内皮细胞单层通透性增加。

E1A激活基因阻遏子过表达诱导体外培养大鼠平滑肌细胞分化

为探讨E1A激活基因阻遏子蛋白 (CREG)对血管平滑肌细胞表型转换的调控机制 ,应用pRC/CMV hCREG真核表达载体转染体外培养的大鼠血管平滑肌细胞 (VSMCs) ,观察了转染前后细胞的表型改变 .结果发现 ,pRC/CMV hCREG质粒转染后 ,大鼠平滑肌细胞增殖受抑 ,细胞分化标志蛋白SMα actin表达显著增加 .免疫共沉淀分析发现 ,CREG与血清反应因子 (SRF)发生相互作用形成复合体 ,在CREG基因过表达时 ,与CREG结合的SRF蛋白增加 .凝胶迁移阻滞分析 (GSMA)和抗体凝胶迁移阻滞分析 (supershift)显示 ,过表达的CREG蛋白与SRF蛋白共同结合到SMα actin基因启动子区CArG位点上 ,可能参与SMα actin表达的调控 .构建SMα actinpromoter pCAT 3报告基因载体并与pRC/CMV hCREG质粒共转染VSMCs也证实 ,CREG蛋白过表达可增强SMα actin基因表达 .上述研究提示 。

PEI-Fe_3O_4纳米粒E1A基因对人宫颈癌细胞周期的影响

目的探讨PEI-Fe3O4纳米粒E1A基因对人宫颈癌细胞周期的影响,为进一步研究E1A基因对宫颈癌放、化疗增敏提供实验依据。方法取对数生长的人宫颈癌细胞(Hela)、对照空载体细胞(Hela-vect)、转染E1A基因的人宫颈癌细胞(Hela-E1A),使用流式细胞仪(Coulter-profiloⅡ型)测定DNA含量,计算机分析细胞周期。结果Hela-E1A组与Hela及Hela-vect组比较,S期细胞比例明显下降,G2/M期细胞比例明显增多,G1期无明显变化。结论PEI-Fe3O4纳米粒E1A基因能改变人宫颈癌细胞周期的分布,使该细胞周期出现S期抑制和G2/M期阻滞,为进一步研究E1A基因对宫颈癌放、化疗增敏提供了实验依据。

E1A抑制鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的生长并增强其对放疗的敏感性

目的:探讨E1A基因对人鼻咽癌CNE2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用和对放疗的增敏作用及其相关机制。方法:以腺病毒为载体,将E1A基因导入CNE2细胞,获得含E1A的阳性克隆。通过裸鼠致瘤实验,观察E1A基因的抑瘤作用。观察E1A基因疗法及其与放疗联合应用对CNE2细胞裸鼠移植瘤的疗效。RT-PCR法检测E1A基因治疗对P53基因表达的影响。结果:建立稳定转染Ad-E1A的CNE2阳性细胞克隆(CNE2-Ad-E1A),CNE2-Ad-E1A组小鼠细胞移植瘤较CNE2组和CNE2-Ad-β-gal组(稳定转染Ad-β-gal对照质粒的CNE2细胞)成瘤时间晚、肿瘤小。单纯放疗、单纯Ad-E1A基因治疗及Ad-E1A+放疗3种治疗方法均可抑制CNE2裸鼠移植瘤的生长,抑瘤率分别为(60.32±5.34)%、(70.53±6.12)%和(97.15±4.87)%。E1A基因治疗能上调鼻咽癌组织中P53的表达。结论:E1A可抑制人鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的生长并增加其对放疗的敏感性,该作用可能与E1A上调P53基因的表达有关。

单重靶向条件复制型腺病毒穿梭载体pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K的构建及鉴定

目的:构建并鉴定一种新型E1A基因CR2区选择性缺失的腺病毒穿梭载体pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K,为包装单重靶向条件复制型腺病毒进行肿瘤基因治疗奠定基础。方法:采用RT-PCR法从人胚肾细胞(293T)中扩增条件复制型腺病毒必需的E1区基因,包括E1A、E1Bp及E1B55K基因片段;重叠PCR法扩增CR2区缺失的E1A基因;采用基因重组技术构建pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K重组质粒,并进行PCR及酶切鉴定。结果:经测序证实获得的E1B55K及CR2区缺失的E1A基因与GenBank公布的完全一致,E1A基因CR2区缺失的pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K质粒经分别经XbaⅠ与KpnⅠ单酶切,得到大小约为817和1244bp的酶切片段,PCR鉴定得到约250及1148bp的基因片段,鉴定结果与预期结果完全一致。结论:E1A基因CR2区选择性缺失的单重靶向条件复制型腺穿梭载体pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K构建成功。

E1A对转染了Ras的原代人皮肤成纤维细胞生长调控的研究

目的癌基因ras的单独激活可导致细胞早期衰老,这被认为是一种抑制肿瘤形成的细胞防御机制,我们在人类成纤维细胞研究了病毒癌基因E1A对Ras激活的调控作用。方法在人成纤维细胞转染E1A、E1A1-143、或空载体(BP)和Ha-RasV12或其空载体(WH),确定其转染细胞的生长曲线和细胞凋亡比例。结果单独表达E1A或Ha-RasV12可显著抑制人成纤维细胞的生长,当E1A或E1A1-143与Ha-RasV12联合转染人成纤维细胞后,细胞增殖活跃。结论E1A可保护人类成纤维细胞免于Ras诱导的细胞早期衰老,其生物学活性位于E1A的氨基端。