E1B-55KD基因缺陷腺病毒联合热疗对肿瘤的治疗作用

目的:通过基因治疗与温热治疗方法相结合,观测两者治疗手段是否有协同作用。方法:将40只荷瘤小鼠随机分为4组,A组:E1B-55KD基因缺陷腺病毒感染组;B组:温热治疗组;C组:E1B-55KD基因缺陷腺病毒感染+温热治疗组;D组:空白对照组。治疗前后测量瘤体直径,实验前后取瘤体称重;Western蛋白分析对HSP进行定位、定量检测;流式细胞仪进行T细胞亚群检测,计算CD3+、CD4+、CD8+细胞含量,CD4+/CD8+值。结果:(1)A、B、C组肿瘤体积较D组均有减少,提示与对照组相比,各治疗组均有不同程度的肿瘤抑制作用,而C组小鼠肿瘤生长受抑最为明显。(2)A、B、C组瘤重分别与D组比较,结果均有减少,其中C组减少最为明显。(3)B、C两组小鼠肿瘤组织经加热后,细胞浆内的热休克蛋白较未加热的A、D两组明显增加。(4)A、B、C组与D组相比较CD8(CTL)均有提高,而以C组t最为显著,提示联合治疗组对CTL增殖的刺激作用更加显著。结论:E1B-55KD基因缺陷腺病毒联合热疗对肿瘤的治疗有协同作用。

癌特异性双靶向载体的安全性及其携带基因的杀伤性

背景与目的:我们创导的“癌症的靶向双基因-病毒治疗”策略可消灭移植性肿瘤,目前最重要的是要提高其安全性,使其只靶向肿瘤细胞,而在正常细胞内不复制或者很少复制。本研究旨在构建肿瘤特异性的双靶向腺病毒TD55,并研究其安全性;在TD55中插入凋亡基因TRAIL,构建成TD55-TRAIL,研究其杀伤性。方法:用hTERT启动子控制腺病毒复制必需的E1A基因,并将E1B55KD基因删除,构建肿瘤特异性的双靶向腺病毒TD55,使其只靶向p53功能缺乏的肿瘤。在TD55中插入凋亡基因TRAIL,构建成TD55-TRAIL,通过分子克隆构建质粒pTD55和pTD55-TRAIL,并与包装腺病毒的大质粒pBHGE3在293细胞中同源重组,得到腺病毒TD55和TD55-TRAIL。构建好的病毒体外感染人胚肺细胞MRC5、WI38,人结肠癌细胞SW620、HCT116、人肺癌细胞A549,分别用结晶紫染色法和MTT法检测其对细胞生长的影响。用流式细胞仪测定肿瘤细胞的凋亡率。结果:结晶紫染色结果和MTT结果表明,双靶向腺病毒TD55-TRAIL对正常细胞MRC5和WI38的杀伤作用比ZD55-TRAIL小很多。病毒复制能力分析表明,单靶向腺病毒在正常细胞中的复制倍数是双靶向腺病毒的3～5倍。TD55和TD55-TRAIL均能引起SW620细胞的凋亡,后者是前者的3.3倍。结论:双靶向腺病毒TD55-TRAIL对正常细胞的安全性比以往所构建的单靶向腺病毒ZD55-TRAIL更好,说明双靶向载体TD55比单靶向载体ZD55靶向性更高,如做为治疗药物可增加安全性,在治疗中可大大增加药物的安全性。携带的TRAIL基因能引起肿瘤细胞的凋亡,杀伤力较TD55增加数倍。