KATP通道Kir6.2亚基E23K多态性对阿霉素损伤大鼠心肌细胞结构及自噬的影响

目的构建携带KATP通道Kir6.2亚基E23K多态性的大鼠模型,给予阿霉素损伤,探讨KATP通道Kir6.2亚基E23K多态性对于阿霉素损伤的心肌,心肌结构、功能及细胞自噬的影响。方法利用定点突变的方法获得含有Kir6.2 KK基因型的大鼠并进行基因鉴定。将大鼠随机分为4组,即A组(WT+Saline组,SD大鼠+生理盐水)、B组(E23K+Saline组,Kir6.2KK大鼠+生理盐水)、C组(WT+DOX组,SD大鼠+阿霉素)、D组(E23K+DOX组,Kir6.2 KK大鼠+阿霉素)。采用腹腔注射阿霉素的方法构建阿霉素损伤大鼠模型,对照组腹腔注射等体积的生理盐水。应用心脏彩超进行阿霉素损伤心肌病模型的鉴定及心脏结构和功能的评价(每组8只)。分别通过HE染色及天狼星红染色心肌组织切片,测量心肌细胞面积及心肌纤维化比例,并通过PCR方法检测纤维化相关标志物CTGF、TGF-β mRNA的表达。通过Western blot法技术测定心肌细胞自噬水平。结果超声结果显示,阿霉素损伤的大鼠相比于盐水组存在明显的心肌重构及功能损伤(P<0.01),且E23K组变化较WT组更明显(P<0.01)。病理及纤维化相关标志物mRNA表达显示,阿霉素损伤的大鼠心肌纤维化程度明显加重(P<0.01),且E23K组纤维化程度较WT组更严重(P<0.01);自噬相关蛋白表达量检测显示,阿霉素损伤的大鼠,自噬相关蛋白表达量显著增加(P<0.01),且E23K组明显高于WT组(P<0.01)。结论在阿霉素损伤模型中,Kir6.2亚基E23K多态性对大鼠心脏结构、功能、纤维化程度及自噬表达均有显著影响。

Kir6.2基因E23K位点多态性与耐力训练后血糖、胰岛素和VO_2max改变的关系

目的:探讨Kir6.2基因E23K位点多态性与耐力训练所致的血糖、胰岛素和VO2max改变间的关系。方法:采用PCR-RFLP技术对214例美国各种族50至75岁男女受试者的Kir6.2位点E23K多态性进行基因型分析。受试者在专人监控下进行24周的耐力训练后,观察其E23K与血糖、胰岛素和VO2max之间的关系。结果:(1)三种基因型受试者的空腹血糖、胰岛素和VO2max的基础值无显著差异;(2)24周耐力训练后,三种基因型受试者的VO2max均显著升高(P<0.05),体重和体脂则显著下降(P<0.05),身高体重指数(BMI)和呼吸商(RER)则在男性各基因型中显著下降(P<0.05);(3)24周耐力训练后,三种基因型受试者的空腹胰岛素水平和曲线下面积(AUC)均显著下降(P<0.05),但训练并未引起空腹血糖及其AUC显著变化。(4)男性EK基因型RER显著低于EE和KK基因型,女性则表现为KK基因型显著高于EE基因型。结论:(1)无论E23K位点的基因型为EE、EK或KK,24周的耐力训练均可提高受试者的VO2max并降低体重、体脂、空腹胰岛素水平和AUC;(2)耐力训练对男性BMI和RER降低的影响更显著;(3)E23K多态性与RER的关系较VO2max和血糖水平更密切。

KATP通道E23K突变对阿霉素诱导的细胞凋亡的影响

目的研究ATP敏感性钾通道Kir6.2亚基E23K突变对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 (1)在心肌组织中提取总RNA,RT-PCR法获取c DNA,合成特异性引物,用PCR法获得kir6.2、SUR2A的ORF片段,用T4DNA连接酶将上述片段与线性化的p EGFP-C1连接,重组的p EGFP-C1/kir6.2用PCR法进行E23K定点突变,获得真核表达质粒p EGFP C1/kir6.2,p EGFP C1/kir6.2(E23K)及p EGFP C1/SUR2A。(2)重组质粒采用脂质体法瞬时共转染H9C2细胞,使其在H9C2细胞中表达。(3)生理盐水与1mg/L阿霉素(Adriamycin,ADR)分别处理转染后细胞,分为4组:A组为野生型重组质粒+生理盐水处理组(WT+NS);B组为含E23K突变重组质粒+生理盐水处理组(E23K+NS);C组为野生型重组质粒+阿霉素损伤组(WT+ADR);D组为含E23K突变重组质粒+阿霉素损伤组(E23K+ADR)。(4)采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数(AI)。(5)Western blot法测定caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。Alpha Ease FC软件取值读取各样品条带灰度值。结果 (1)TUNEL结果示,应用ADR后凋亡比例升高,与WT+ADR组相比,E23K+ADR组凋亡比例更高(P<0.05)。(2)阿霉素处理后,所有组促凋亡相关蛋白(caspase-3、Bax)表达均增高,抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达降低,且E23K+ADR组caspase-3与Bax蛋白表达均大于WT+ADR组,Bcl-2蛋白表达低于WT+ADR组(P<0.05)。结论 K_(ATP)通道kir6.2亚基E23K突变加重阿霉素诱导的细胞凋亡。

扩张型心肌病患者Kir6.2基因中E23K和I337V多态性与室性心律失常的关系

目的研究扩张型心肌病(DCM)患者三磷酸腺苷敏感性钾通道(KATP)上两个多态性位点(E23K和I337V)与室性心律失常之间的关系。方法选取DCM患者41例,常规12导联心电图及24h动态心电图记录心电资料,并按照室性心律失常评分法进行评分;同时采用聚合酶链反应(PCR)等分子生物学技术,对41例患者KATP上的亚单位Kir6.2进行扩增测序。结果发现E23K突变组和无突变组室性心律失常评分分别是2.71±0.272,1.82±0.431(P<0.05);I337V突变组和无突变组室性心律失常评分分别是2.58±0.273,1.93±0.473(P>0.05)。结论在DCM患者中,E23K多态性与室性心律失常相关,I337V多态性与室性心律失常无明显的相关性。

KCNJ11基因E23K多态性与2型糖尿病的关联研究

目的探讨青岛地区汉族人群KCNJ11基因E23K位点多态性与2型糖尿病的关系。方法利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RLFP)技术,对青岛地区188例2型糖尿病病人和170例正常对照者的KCNJ11基因E23K位点多态性进行基因型分析,比较两组基因型频率和等位基因频率。测定2型糖尿病病人身高、体质量、腰围、臀围、血压、空腹血糖等生理生化指标,采用Logistic回归分析2型糖尿病的危险因素。结果 2型糖尿病组KCNJ11基因E23K位点的EE、EK、KK等3种基因型频率分别为38.8%、44.7%和16.5%,对照组分别为34.1%、51.8%和14.1%,两组间比较差异无显著性(2χ=1.801,P>0.05);K等位基因频率两组比较,差异无显著性(χ2=0.102,P>0.05)。多因素非条件Logistic回归分析显示,KCNJ11基因E23K位点基因型、性别、血压、体质量指数和腰围与2型糖尿病无相关性;年龄、总胆固醇、腰臀比是2型糖尿病发生的危险因素,高密度脂蛋白胆固醇水平与2型糖尿病的发病呈负相关关系。结论青岛地区汉族人群中未发现KCNJ11基因E23K位点的多态性与2型糖尿病关联。

亚洲地区KCNJ11 E23K基因多态性与2型糖尿病关系的Meta分析

目的探讨在亚洲地区内向整流钾通道亚家族成员11（KCNJ11）E23K基因多态性与2型糖尿病（T2DM）的相关性。方法以PubMed、中国知网、维普等为搜索数据库,全面检索关于亚洲人群KCNJ11E23K基因多态性与T2DM相关性的随机病例对照研究,并用Stata12.0软件进行统计分析。结果共10篇符合条件的文献被纳入,经随机效应模型（D-L法）合并数据,结果显示,病例组K等位基因频率较对照组高,OR=1.16,95%CI=1.08-1.25,P=0.00。结论亚洲地区KCNJ11E23K基因多态性与T2DM发病风险增高相关。

KCNJ11基因单核苷酸多态性E23K突变与2型糖尿病(T2DM)遗传易感性的实验研究

目的探讨KCNJ11基因单核苷酸多态性E23K与2型糖尿病(T2DM)遗传易感性的关系。方法从2型糖尿病患者外周血有核细胞中提取基因组DNA,运用聚合酶链式反应扩增KCNJ11基因包含E23K多态性的DNA片断。将其扩增产物进行电泳分析,在紫外分析仪下观察结果并与正常人对照。结果2型糖尿病患者KCNJ11基因E23K的K等位基因频率(73.5%)显著高于对照组(6.7%)。KK基因型频率(72%)也显著高于对照组(2%)。K等位基因和KK基因型在两组中差异具有统计学意义(P<0.01)。结论提示KCNJ11基因单核苷酸多态性KK直接或间接与2型糖尿病遗传易感性相关。

利拉鲁肽对Kir6.2基因E23K位点突变β细胞胰岛素分泌功能的影响

目的Kir6.2编码基因多态与糖尿病、胰岛素抵抗相关,本研究旨在探讨高糖环境下,利拉鲁肽对Kir6.2基因E23K位点突变的胰岛β细胞胰岛素分泌功能的影响及机制。方法以NIT-1细胞为研究对象,构建Kir6.2基因过表达野生型和E23K突变型NIT-1细胞,并用利拉鲁肽在高糖环境下进行24 h干预。采用流式细胞仪检测NIT-1细胞凋亡率、细胞膜电位及钙离子浓度,Western blotting和免疫荧光检测细胞内胰岛素含量,ELISA检测培养液中胰岛素含量,并以此间接研究胰岛素的分泌情况。结果NIT-1细胞最适高糖培养浓度为60 mmol/L,在此浓度下胰岛素合成量最高,利拉鲁肽体外干预浓度选择10 mmol/L。过表达野生型Kir6.2基因NIT-1细胞的胰岛素分泌高于Kir6.2基因E23K突变型NIT-1细胞。过表达野生型Kir6.2基因NIT-1细胞在高糖环境中细胞膜电位进一步降低,细胞内Ca^(2+)含量增加,而Kir6.2基因E23K突变型NIT-1细胞与单纯高糖培养相比无显著改变。利拉鲁肽在高糖环境中可有效减少野生型和突变型NIT-1细胞的凋亡,降低膜电位,增加细胞内Ca^(2+)含量,促进胰岛素分泌。另外利拉鲁肽对维持突变型NIT-1细胞存活作用更显著。结论在高糖环境中,利拉鲁肽能改善Kir6.2基因E23K位点多态型胰岛β细胞的胰岛素分泌功能,该研究为利拉鲁肽的临床应用提供基础研究证据。

扩张型心肌病患者E23K多态性与心功能的关系

目的:研究扩张型心肌病(DCM)患者KATP通道亚单位Kir6.2上E23K多态性与心功能的关系。方法:选取DCM患者89例,采用心脏多普勒超声二维成像技术,检测左室舒张末期内径(LVEDD)和左房内径(LAD),并运用PCR等分子生物学技术,对KATP通道上的亚单位Kir6.2进行扩增测序。结果:89例DCM患者中,E23K突变55例,E23K无突变34例。在E23K突变组和E23K无突变组中LVEDD分别为(65.52±1.27)mm和(61.31±1.02)mm(P=0.017);LAD分别为(46.24±1.39)mm和(42.54±1.18)mm(P=0.044)。结论:E23K突变组LVEDD和LAD较无突变组显著扩大。

三磷酸腺苷敏感性钾通道Kir6.2 E23K多态性对大鼠心脏结构及功能的影响

目的初步探讨在扩张型心肌病中E23K多态性对心脏结构及功能的影响。方法构建携带人心肌特异性启动子的α-MHC-Kir6．2KKDNA表达载体，运用显微注射法获得Kir6．2E23K多态性的大鼠模型（F0代），F0代大鼠与SD大鼠杂交，产出F1代大鼠并进行基因鉴定。将F1代雄性大鼠分为WT（WildType：不含有Kir6．2E23K多态性）组，E23K（含有Kir6．2E23K多态性）组，WT—DCM（wildType—Dilated Cardiomyopathy）组和E23K—DCM（E23K—Dilated Cardiomyopathy）组，每组10只。于8～12周时腹腔注射阿霉素构建扩张型心肌病（DCM）模型，对照组腹腔注射等量生理盐水。于模型构建完成后2周分别记录并分析4组大鼠心脏超声数据，并用天狼星红染色法检测其心肌胶原容积。结果成功构建携带人Kir6．2E23K多态性的载体α—MHC—KK并获得转基因大鼠。超声结果显示，经阿霉素诱导的大鼠（WT～DCM组和E23K—DCM组）与对照组（WT组和E23K组）相比心腔明显扩大，心功能显著降低，且E23K—DCM组大鼠较WT-DCM组大鼠心脏损伤更为明显（P〈0．05）；与WT—DCM组相比，E23K—DCM组大鼠心肌纤维化程度更为严重（P〈0．05）。结论在DCM中Kir6．2E23K多态性对大鼠心脏结构和功能均有显著影响。

东莞地区汉族人群KCNJ11基因E23K位点多态性与2型糖尿病关系

目的 探讨东莞地区汉族人群KCNJ11基因E23K位点多态性与2型糖尿病（type 2diabetes mellitus,T2DM）的关系。方法 T2DM患者50例为观察组,体检健康者50例为对照组,检测2组KCNJ11基因E23K位点多态性,比较2组空腹血糖（fasting plasma glucose,FPG）、体质量指数、空腹胰岛素（fasting insulin,FIns）和胰岛素抵抗指数（homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR）。结果 观察组FPG、体质量指数、FIns和HOMA-IR明显高于对照组（P〈0.05）;观察组E23K位点EE、EK、KK基因型频率分别为32.0%、48.0%和20.0%,E、K等位基因频率分别为56.0%和44.0%,对照组EE、EK、KK基因型频率分别为26.0%、56.0%、18.0%,E、K等位基因频率分别为54.0%、46.0%,2组比较差异无统计学意义（P〈0.05）;非条件logistic回归分析显示,FPG（OR=1.942,95%CI：1.013-2.283,P=0.000）、体质量指数（OR=1.122,95%CI：1.086-1.514,P=0.034）、FIns（OR=1.442,95%CI：1.213-1.701,P=0.013）和HOMA-IR（OR=1.763,95%CI：1.201-2.011,P=0.009）是影响T2DM发生的独立危险因素;FPG（OR=1.033,95%CI：1.012-1.832,P=0.032）、KK基因型（OR=1.482,95%CI：1.121-1.905,P=0.010）是肥胖的独立影响因素。结论 未发现东莞地区汉族人群KCNJ11基因E23K位点多态性与T2DM发生有关,但KCNJ11基因E23K位点KK基因型可能是肥胖的危险因素。

KCNJ11基因单核苷酸多态性E23K与2型糖尿病遗传易感性相关性分析

目的探讨钾离子内向整流通道蛋白亚单位11（potassium ion inward rectifying channel protein subunit 11,KCNJ11）基因E23K多态性与2型糖尿病（type 2 diabetes，T2DM）遗传易感性的关系。方法100例确诊T2DM患者为观察组，体检健康者100例为对照组，采用PCR-限制性片段长度多态性检测2组外周血有核细胞基因组DNA中KCNJ11基因E23K位点多态性，比较2组KCNJ11基因频率和等位基因频率，分析T2DM的相关危险因素。结果观察组体质量指数、腰臀比、三酰甘油、总胆固醇、空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数和非酯化游离脂肪酸高于对照组，高密度脂蛋白胆固醇、胰岛0细胞功能指数低于对照组（P〈0．05）；观察组KCNJ11基因E23K位点EE、EK、KK3种基因频率（38％、44％、18％）和E、K等位基因频率（60％、40％）与对照组（EE为33％、EK为52％、KK为15％，E为59％、K为41％）比较差异均无统计学意义（P〉0．05）；胰岛β细胞功能指数（OR=0．096，95％CI：0．316～0．441，P=0．000）、高密度脂蛋白胆固醇（OR=0．084，95％CI：0．039～0．268，P=0．000）是T2DM的保护因素，三酰甘油（OR=1．382，95％CI：1．082～1．964，P=0．041）、腰臀比（OR：2．765，95％CI：1．182～7．562，P=0．040）是T2DM的危险因素。结论KCNJ11基因E23K多态性与T2DM遗传易感性关系无明显相关性，胰岛β细胞功能指数和高密度脂蛋白胆固醇是T2DM的保护因素，三酰甘油和腰臀比是T2DM的危险因素。

Kir．2基因E23K多态性与冠心病的相关研究

武汉大学中南医院检验科郑芳教授等在中国汉族人群Kir6．2基因E23K多态性与冠心病的相关性研究中发现Kir．2基因的变异与冠心病之间存在一定的相关性，影响冠心病的早期诊断和治疗。

Kir6.2基因两位点多态性与胰岛B细胞功能指数和胰岛素敏感性指数的相关研究

钾离子内向整流器(Kir6.2)和磺脲类受体(SUR)共同组成ATP敏感的钾通道复合体.在胰岛素分泌和作用过程中,ATP敏感钾通道均发挥着十分重要的作用[1,2].Kir6.2和SUR编码基因同位于11q15,1,Kir 6.2位于SUR下游4.5 Kb,仅有一个外显子,无内含子,全长1173 bp.在Caucasian人群中研究发现的错义突变位点有E10K、E23K、L270V和I337V,此外,还发现两个寂静突变[3].本研究即观察Kir6.2基因上E23K和I337V两位点的多态性是否对正常糖耐量人群空腹胰岛素水平,胰岛B细胞分泌功能以及胰岛素敏感性构成影响.

ATP敏感性钾通道与2型糖尿病

ATP敏感性钾通道(KATP)是调节葡萄糖代谢平衡的关键因子。KATP通道的遗传变异可改变β-细胞电活性、葡萄糖代谢平衡,增加2型糖尿病易感性,因此,编码该通道的基因可作为2型糖尿病的易感标记。K ir6.2的E23K多态性在高加索人群中与2型糖尿病易感性增加和肥胖相关。E23K多态性在高加索人群中较常见,提示其可能具有进化优势。