HPV16 E6、E7多表位DNA疫苗的构建及免疫效果评估

目的构建和评价HPV16 E6、E7多表位DNA疫苗诱导的特异性CTL细胞应答及其对肿瘤生长的干预作用,从而揭示其作为候选HPV治疗性疫苗的潜能。方法首先通过IEDB网站中的MHC I Processing Predictions和MHC I Binding Predictions方法,分别预测人类HLA-A^(*)02:01、HLA-A^(*)11:01、HLA-A^(*)24:02和C57BL/6小鼠H-2b的限制性CTL表位,然后根据评分以及ELISPOT实验筛选出二者共同呈递的CTL表位,并将其构建成多表位DNA疫苗(pVAX1-10P)。从预防性和治疗性二个方面研究pVAX1-10P对小鼠移植TC-1异位癌的免疫干预作用,流式细胞术检测特异性CTL应答。结果获得10条可被人与鼠MHC分子共呈递的CTL表位,ELISPOT结果表明这10条CTL表位均能诱导小鼠淋巴细胞产生特异性免疫应答;由此构建的多表位DNA疫苗pVAX1-10P无论在预防性实验还是治疗性实验中,均能诱导特异性的细胞免疫并抑制肿瘤的生长。结论构建的HPV16 E6、E7多表位DNA疫苗pVAX1-10P能够诱导特异性CTL应答,显著抑制肿瘤生长,有望作为候选HPV治疗性DNA疫苗。

HPV DNA、HPV E6/E7蛋白和TCT在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌筛查中的价值

目的 探讨人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)DNA、HPV E6/E7蛋白和液基薄层细胞学检查(thin-prep cytology test,TCT)在宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈癌筛查中的价值。方法 选取2021年7月至2022年6月于诸暨市人民医院妇科接受早期宫颈癌筛查的成年女性190例为研究对象,分别进行HPV DNA、HPVE6/E7蛋白及TCT检测,并进一步行阴道镜活检检查。比较不同病变患者的HPVDNA、HPVE6/E7蛋白和TCT对高级别病变的诊断效能。结果 CIN3及宫颈癌患者的HPV DNA、HPV E6/E7蛋白、TCT检查及三者联合检测的阳性率均显著高于宫颈炎患者(P<0.05),宫颈癌患者的HPV DNA、HPV E6/E7蛋白、TCT检查及三者联合检测的阳性率均显著高于CIN1患者(P<0.05)。CIN2+患者的HPV DNA、HPV E6/E7蛋白、TCT及三者联合检测的阳性率显著高于CIN1-患者。HPVDNA、HPVE6/E7蛋白、TCT三者联合诊断高级别病变的敏感度、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为90.80%、30.10%、52.32%、79.48%。结论 HPV DNA、HPV E6/E7蛋白及TCT可作为筛查宫颈癌和癌前病变的手段,且三者联合检测的敏感度最高。

FIS1 mRNA、HPV E6/E7 mRNA表达水平与宫颈病变严重程度的关系研究

目的 研究线粒体分裂蛋白1(FIS1)mRNA、人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA表达水平与宫颈病变严重程度的关系。方法 收集张家口市妇幼保健院2021年1月-2021年7月行宫颈癌筛查的5666例标本,经宫颈液基薄层细胞学检查(TCT)诊断285例不典型鳞状细胞(ASC)、183例鳞状上皮内低度病变(LSIL)、98例鳞状上皮内高度病变(HSIL)、10例宫颈癌;经病理活检诊断356例未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS)、218例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅰ级、42例CINⅡ级、24例CINⅢ级、15例宫颈鳞状细胞癌。分别参考TCT、病理活检诊断结果分析不同宫颈病变程度的FIS1 mRNA、HPV E6/E7 mRNA阳性检出率与表达量。通过Pearson分析FIS1 mRNA与HPV E6/E7 mRNA阳性表达与宫颈病变严重程度的相关性。结果 以TCT不同诊断级别为参考,FIS1 mRNA、HPV E6/E7 mRNA表达对LSIL、HSIL、宫颈鳞状细胞癌的阳性检出率高于ASC(P<0.05)。FIS1 mRNA、HPV E6/E7 mRNA表达对宫颈鳞状细胞癌的阳性检出率高于LSIL(P<0.05)。FIS1 mRNA拷贝数:宫颈癌、HSIL<LSIL<ASC(P<0.05);HPV E6/E7 mRNA拷贝数:宫颈癌>HSIL>LSIL>ASC(P<0.05)。以病理活检结果为诊断标准,FIS1 mRNA、HPV E6/E7 mRNA表达对CINⅡ级、CINⅢ级、宫颈鳞状细胞癌的阳性检出率高于ASCUS、CINⅠ级(P<0.05);FIS1 mRNA拷贝数:宫颈鳞状细胞癌、CINⅢ级<CINⅡ级<CINⅠ级<ASCUS(P<0.05);HPV E6/E7 mRNA拷贝数:宫颈鳞状细胞癌>CINⅢ级>CINⅡ级>CINⅠ级、ASCUS(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,宫颈病变严重程度与FIS1 mRNA表达量呈显著负相关性(r=-0.881,P<0.05),与HPV E6/E7 mRNA表达量呈显著正相关性(r=0.903,P<0.05)。结论 FIS1 mRNA、HPV E6/E7 mRNA表达水平与宫颈病变程度存在显著相关性,宫颈病变程度越严重,FIS1mRNA表达量呈降低趋势,而HPV E6/E7 mRNA表达量呈上升趋势。

HPV16型E6、E7变异与宫颈癌发生发展的研究进展

宫颈癌是全球15~44岁女性中第二常见的恶性肿瘤,每年的死亡人数约为265 653人,在中国,宫颈癌的发生率及死亡率仍较高。高危型人乳头状瘤病毒(HPV)持续感染是宫颈癌前病变及宫颈癌发生的必要条件,HPV16是最常见的高危人乳头瘤病毒。HPV16编码的E6和E7蛋白在HPV相关的肿瘤中起关键作用。近年来的研究揭示了HPV16 E6、E7基因的变异引起氨基酸变化可影响E6、E7蛋白与p53、pRb的结合,进而与宿主细胞恶性转化相关。本文将对近年来HPV16 E6、E7变异在宫颈癌发生发展中的作用作一综述。

HPV16型E7重组蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后表达重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定;纯化的HPV16 E7重组蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA检测多克隆抗体的效价,并用Western blot法及免疫荧光技术分析多克隆抗体的特异性。结果 HPV16 E7重组蛋白可通过原核表达系统进行表达和纯化;通过兔免疫后可制备特异性的多克隆IgG抗体,效价达1∶30 000;经Western blot法和免疫荧光染色结果证实兔多克隆抗体可特异性识别HPV16 E7蛋白。结论成功进行了HPV16 E7原核表达并制备了HPV16 E7兔多克隆抗体。

人乳头状瘤病毒E6、E7蛋白在维吾尔族及汉族宫颈癌发展中的表达及意义

目的 分析维吾尔族及汉族宫颈癌患者中人乳头状瘤病毒（HPV）E6、E7蛋白表达与宫颈癌癌前病变恶性进展的关系,进一步了解其在维吾尔族及汉族宫颈癌患者间是否存在差异。方法 选取2013年4月~2014年4月在新疆维吾尔自治区人民医院妇科门诊行第二代杂交捕技术HPV DNA检测结果为阳性的133例维吾尔族（n=75）和汉族（n=58）患者宫颈不同病变程度的石蜡包埋宫颈组织。采用免疫组化法分别检测各组织中HPV E6、E7蛋白表达,使用Spearman等级相关分析HPV E6、E7蛋白表达与病变程度的相关性,并采用χ2检测比较维吾尔族及汉族宫颈癌患者HPV E6、E7蛋白表达的差异。结果 维吾尔族和汉族慢性宫颈炎、CIN 1、CIN 2~3、宫颈鳞癌组织中HPV E6的阳性率,随着病情的进展呈逐渐增高趋势,差异均有统计学意义（χ2=39.61,P=0.001;χ2=19.77,P=0.001）;Spearman等级相关分析发现,维吾尔族及汉族宫颈癌患者HPV E6蛋白的表达与宫颈病变级别均呈显著正相关（r=0.708,P=0.001;r=0.729,P=0.001）、HPV E7在维吾尔族和汉族慢性宫颈炎、CIN 1、CIN 2~3、宫颈鳞癌组织中的阳性表达率,随着病情的进展呈逐渐增高,多组比较差异有统计学意义（χ2=32.48,P=0.001;χ2=24.16,P=0.001）;Spearman等级相关分析发现,维吾尔族及汉族宫颈癌患者E6蛋白表达与宫颈病变级别均呈显著正相关（r=0.649,P=0.001;r=0.759,P=0.001）;慢性宫颈炎、CIN 1、CIN 2~3维吾尔族患者HPV E6、E7蛋白的阳性表达率高于汉族,维吾尔族宫颈癌患者HPV E6、E7蛋白表达率低于汉族,但差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 HPV E6、E7蛋白是维吾尔族和汉族宫颈癌发展的重要因素,HPV E6、E7蛋白可能具有预测宫颈病变进展的价值。

宫颈癌组织HPV16 E7蛋白表达水平与患者预后的关系研究

目的探讨宫颈癌组织HPV16 E7蛋白表达水平与患者预后的关系。方法以购自上海芯超生物科技有限公司的宫颈癌及癌旁正常宫颈黏膜组织芯片为研究材料。该芯片收集了117例2010至2011年间宫颈癌患者的癌组织样本(其中配对的癌组织和癌旁正常宫颈黏膜组织样本35例,单独癌组织样本82例)。采用免疫组化染色法检测宫颈癌及癌旁正常宫颈黏膜组织HPV16 E7蛋白表达水平,并比较HPV16 E7蛋白高表达与低表达患者的预后情况。结果HPV16 E7蛋白表达于细胞质及细胞核。宫颈癌组织HPV16 E7蛋白表达水平高于癌旁正常宫颈黏膜组织(P<0.05)。细胞质HPV16 E7蛋白低表达患者5年生存率高于高表达患者(81.4%比66.2%),但差异无统计学意义(P>0.05);低表达患者5年无复发生存率高于高表达患者(79.1%比60.8%,P<0.05)。细胞核HPV16 E7蛋白高表达与低表达患者5年生存率、5年无复发生存率比较差异均无统计学意义(70.8%比75.0%、68.5%比64.3%,均P>0.05)。结论宫颈癌组织HPV16 E7蛋白表达水平与患者无复发生存期密切相关,高表达者预后不良。

11型HPVE7蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

目的构建人11型乳头瘤病毒(HPV 11)E7蛋白的原核表达载体,表达纯化后制备抗HPV11E7蛋白的多克隆抗体。方法构建pGEX-4T2-HPV11E7原核表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导大肠杆菌表达可溶性融合蛋白GST-HPV11E7,纯化获取11型HPVE7蛋白。将HPV11E7蛋白免疫新西兰大白兔获得抗HPV11E7的多克隆抗体,用蛋白G琼脂糖纯化获得IgG型多克隆抗体。Western blot法及免疫荧光染色检测该抗体的效价及特异性。结果 SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导6 h后可表达出高水平可溶性GST-HPV11E7融合蛋白。纯化后免疫新西兰大白兔获得抗HPV11E7的血清,纯化获得了IgG型多克隆抗体。Western blot及免疫荧光染色结果显示,兔抗HPV11E7 IgG具有效价高和特异性强的特点。结论成功表达了HPV11E7蛋白并制备了效价较高、特异性较好的IgG型兔抗HPV11E7蛋白多克隆抗体。

浸润性宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中HPV16-E7蛋白和端粒酶的表达及意义

目的探讨16型人乳头瘤病毒E7(HPV16-E7)蛋白和端粒酶在浸润性宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中的表达以及在宫颈癌发生、发展过程中的作用。方法30例浸润性宫颈癌(ICC组);90例宫颈上皮内瘤变(CIN),其中CINⅠ(CINⅠ组)30例,CINⅡ(CINⅡ组)30例,CINⅢ(CINⅢ组)30例。采用免疫组化Elivision二步法检测各组组织标本中HPV16-E7蛋白和端粒酶的表达。另设10例正常宫颈组织标本作为对照组。结果对照组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组和ICC组中的HPV16-E7蛋白阳性表达率分别为30.0%、63.3%、63.3%、76.7%和96.7%,ICC组和CINⅢ组显著高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);而ICC组与CINⅢ组比较,CINⅢ组与CINⅡ组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。对照组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组和ICC组的端粒酶阳性表达率分别为30.0%、40.0%、43.3%、70.0%和93.3%,ICC组显著高于CINⅢ组,CINⅢ显著高于CINⅡ组,差异均有统计学意义(均P<0.05);而CINⅡ组与CINⅠ组比较,CINⅠ组与对照组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。浸润性宫颈癌及宫颈上皮内瘤变患者的HPV16-E7蛋白与端粒酶的表达呈正相关(r=0.376,P<0.01)。结论HPV16-E7蛋白和端粒酶的表达与宫颈癌的发生、发展有关。

人乳头瘤病毒6b型E7基因的克隆和表达

目的 克隆人乳头瘤病毒 6b型E7(humanpapillomavirus 6bE7)基因 ,构建原核表达载体 ,并进行蛋白表达和纯化。方法 将HPV 6bE7基因经PCR扩增和亚克隆 ,与GST原核表达载体pGEX 4T 2重组 ,转化E .coliP2 3 92 菌表达蛋白 ,经GlutathioneSepharose 4B亲和层析纯化GST HPV 6bE7融合蛋白。结果 限制性酶切和DNA测序表明 ,HPV 6bE7DNA正确克隆于 pGEX 4T 2多克隆位点。经IPTG诱导表达的GST HPV 6bE7融合蛋白主要存在于可溶性上清。经亲和层析 ,每升诱导菌回收 8.4mg融合蛋白 ,10 %SDS PAGE分析融合蛋白表观分子量约 3 7kDa。结论 成功构建了HPV 6bE7基因原核表达载体 ,并大量表达和纯化了GST HPV

人乳头瘤病毒6型E7与结核杆菌热休克蛋白70融合基因的构建及原核表达

目的:构建结核杆菌热休克蛋白(HSP)70与人乳头瘤病毒(HPV)6型E7抗原的融合基因,在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法:利用PCR方法扩增结核杆菌HSP70基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1;经测序后,再通过PCR方法扩增HPV6型E7基因片段,测序后插入HSP70基因的5'端,构建HPV6E7与结核杆菌HSP70的N端融合基因原核表达质粒pGEX-E7-HSP70;在含有该质粒的大肠杆菌DH5α中,进行诱导表达和分离纯化。结果:成功地构建了pGEX-E7-HSP70原核表达质粒;在含有该质粒的大肠杆菌DH5α中,经异丙醇-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达相对分子质量约为108000的蛋白;经谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达系统纯化,得到E7与结核杆菌HSP70的可溶性融合蛋白。结论:成功获得HPV6型E7与结核杆菌HSP70的融合蛋白,为研究该融合蛋白疫苗在尖锐湿疣治疗中的作用奠定了基础。

人乳头瘤病毒16型L1-E7c嵌合基因的构建表达及免疫学效应的研究

目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16) L1-E7c嵌合基因并表达融合蛋白,以期获得防治HPV16感染及相关肿瘤的疫苗。方法以HPV16型的中国人野毒株为模板,利用PCR克隆技术制备HPV16 L1-E7c嵌合基因,并转入原核表达载体pET28a(+),获得pET28a(+)-L1-E7c表达质粒。以Western blot方法鉴定融合蛋白与HPV16L1和E7抗体的特异性结合。应用蛋白纯化仪纯化HPV16 L1-E7c融合蛋白,经过复性后,电镜观察病毒样颗粒(cVLP)的形态结构。纯化的蛋白免疫动物,测定疫苗抗肿瘤的细胞免疫及抗体产生情况。结果经过序列分析和酶切鉴定表明成功构建了HPV16 L1-E7c嵌合基因,并在大肠杆菌中可高效表达L1-E7c融合蛋白。此融合蛋白具有HPV16 L1和E7的抗原性,纯化的蛋白复性后可形成嵌合病毒样颗粒(cVLP),纯化的蛋白免疫动物后,产生特异性细胞和体液免疫反应,具有抗肿瘤活性。结论构建的嵌合基因HPV16 L1-E7c可有效表达HPV16 L1-E7c重组蛋白并形成cVLP。此蛋白在动物实验中具有疫苗的免疫保护作用,为HPV16疫苗的研究奠定了实验基础。

16型人乳头瘤病毒E6、E7蛋白和端粒酶在宫颈上皮内瘤变发展中的表达及意义

目的研究16型人乳头瘤病毒(HPV16)E6、E7蛋白和端粒酶在宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌组织的表达,探讨其与宫颈癌前病变恶性进展间的关系,为寻找预测宫颈癌前病变转归方向的分子指标做一探索。方法采用免疫组织化学EnVision二步法检测30例原发性浸润性宫颈癌(ICC组,n=30)、CIN[CINⅠ-Ⅱ组,n=60;CINⅢ(含原位癌)组,n=30]、正常宫颈组织标本(正常组,n=10)中HPV16E6、E7蛋白和端粒酶的表达。结果 HPV16E6、E7蛋白和端粒酶在正常组、CINⅠ-Ⅱ组、CINⅢ组和ICC组中的阳性表达均呈逐级增高趋势。HPV16E6蛋白的表达:ICC组高于正常组,CINⅢ组高于正常组、CINⅠ-Ⅱ组,差异均有统计学意义(P<0.05);HPV16E7蛋白的表达:ICC组、CINⅢ组高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);端粒酶的表达:ICC组高于CINⅢ组,CINⅢ组高于CINⅠ-Ⅱ组,差异均有统计学意义(P<0.05)。HPV16E6与HPV16E7蛋白、HPV16E6蛋白与端粒酶、HPV16E7蛋白与端粒酶的表达呈正相关(r=0.272,P<0.05;r=0.279,P<0.05;r=0.376,P<0.01)。结论 HPV16E6、E7蛋白和端粒酶随宫颈病变CIN的升级其阳性表达率、表达强度呈逐渐递增趋势。在宫颈癌变过程中HPV16E6、E7蛋白和端粒酶的阳性表达均呈正相关。HPV16E6、E7蛋白和端粒酶作为CIN的预后因子还尚待进一步研究。

干扰素诱导蛋白IFI16与HPV16E6、E7蛋白相互作用的研究

目的:研究人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus熏HPV)16型E6、E7蛋白与干扰素诱导蛋白IFI16的相互作用,初步揭示IFI16拮抗HPV16E6、E7致瘤活性的分子机制。方法:(1)体外GST阻滞分析:克隆、表达及纯化GST鄄HPV16E6和GST鄄HPV16E7融合蛋白,将含有IFI16蛋白的EB病毒阴性伯基特淋巴瘤穴BJAB雪细胞提取物与上述纯化蛋白孵育,通过WesternBlotting分析蛋白质的体外相互作用;(2)免疫共沉淀分析:构建表达His鄄HPV16E6蛋白的真核表达载体,将表达有IFI16和His鄄HPV16E6蛋白的293T细胞裂解物与抗His抗体孵育,用IFI16抗体检测共沉淀蛋白复合物中IFI16蛋白的存在;将表达有IFI16和HPV16E7蛋白的CaSki和SiHa细胞裂解物与HPV16E7抗体孵育,检测共沉淀蛋白复合物中E7与IFI16是否结合。结果:成功构建了原核表达质粒pGEX鄄4T/HPV16E6及pGEX鄄4T/HPV16E7,并表达、纯化获得GST鄄HPV16E6及GST鄄HPV16E7融合蛋白。体外GST阻滞分析结果表明,用IFI16单抗做WesternBlotting分析可检测到复合物中IFI16蛋白,表明GST鄄HPV16E6和GST鄄HPV16E7均可与IFI16蛋白结合。免疫共沉淀分析进一步证实,共沉淀蛋白复合物中也可检测到IFI16蛋白,证明在细胞中HPV16E6和E7蛋白也能与IFI16蛋白结合。结论:无论在体外还是在细胞中,抑瘤因子IFI16蛋白均能特?

HPV16感染及其E7蛋白表达与宫颈癌关系的研究

目的:探讨人乳头状瘤病毒16型(HPV16)及其E7蛋白表达与宫颈癌的关系。方法:运用PCR技术探查67例宫颈癌组织中HPV16感染率,并运用免疫组化ABC法检测HPV16感染对宫颈癌中E7蛋白表达情况。结果:HPV16在宫颈癌中的检出率为50.75%(34/67),HPV16感染与宫颈癌临床分期和病理组织分级无关(P>0.05);在HPV16感染的宫颈癌中,其E7蛋白阳性表达率为85.30%(29/34),E7蛋白在宫颈癌临床Ⅰ～Ⅱ期表达率高于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05);但E7蛋白的表达与宫颈癌病理组织分级无关(P>0.05)。结论:宫颈癌的发生与HPV16感染关系密切,其E7蛋白的转化作用与宫颈癌的早期发生有关。

癌胚抗原、鳞状细胞癌抗原、HPV-E7蛋白检测对宫颈癌诊断的价值

目的探讨癌胚抗原（carcino embryonic antigen,CEA）、鳞状细胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen,SCC）、HPV-E7蛋白检测对宫颈癌诊断的价值。方法将2013年7月～2015年7月浙江省台州市中医院收治的107例妇女患者按照病理检查结果分为宫颈癌组60例和宫颈上皮内瘤变（CIN组）47例,另选择同期在医院体检的健康人群50例作为对照组,采用酶联免疫吸附试验检测3组血清HPV-E7、CEA、SCC表达水平,并以血清HPV-E7、CEA、SCC水平绘制ROC曲线以分析3个指标的诊断价值。结果宫颈癌组血清HPV-E7、CEA、SCC均显著高于CIN组和对照组（P〈0.05）,CIN组与对照组血清HPV-E7、CEA、SCC比较差异无统计学意义;Ⅰ～Ⅱ期宫颈癌患者血清HPV-E7、CEA、SCC水平显著低于Ⅲ～Ⅳ期患者,2者比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。HPV-E7的ROC曲线下面积显著高于CEA和SCC（Z=2.914,2.951,P〈0.05）,CEA、SCC的ROC曲线下面积比较差异无统计学意义（Z=1.580,P=0.057）。结论宫颈癌患者血清HPV-E7、CEA、SCC均显著升高,HPV-E7对宫颈癌早期诊断的价值更高,有望成为宫颈癌及时诊断的有效指标之一。

新疆哈萨克族食管癌组织中HPV16E6、E7基因的检测与p53的关系

目的 探讨人乳头状瘤病毒(HPV)16型感染在新疆哈萨克族(哈族)食管癌发病中的作用,并分析HPV16感染与p53过表达之间的关系。方法 采用聚合酶链(PCR)技术.检测41例食管鳞状细胞癌组织中HPV16 E6与E7基因表达差异;用LSAB免疫组织化学方法分析p53蛋白的表达。结果 癌组织中HPV16 E6与E7基因阳性检出率分别为34.15％(14／41)和63.41％(26／41);用免疫组化检出p53蛋白阳性率分别在HPV16 E6阳性组(57.1％)与HPV16 E6阴性组(14.8％)间、HPV16 E7阳性组(42.3％)与HPV16 E7阴性组(6.7％)间均存在显著性差异(P<0.05);用PCR检出HPV16 E6、E7基因在食管癌的高分化组、中低分化组中的检出率分别为7.69％(1／13)、46.43％(13／28)和38.46％(5／13)、75.00％(21／28),差别均有统计学意义(P<0.05)。结论 提示p53基因突变与HPV16感染在哈族食管癌的发病过程中存在相互促进作用;另外,HPV16 E6与E7基因和哈萨克族食管癌病理组织学分级的生物学行为密切相关。

维吾尔族、汉族宫颈病变组织中HPV16E6、E7蛋白表达研究

目的:探讨维、汉族宫颈组织中HPV16E6、E7蛋白表达差异以及引起宫颈病变中的作用机制。方法:收集宫颈组织123例,检测HPV-DNA、E6、E7蛋白。结果:维吾尔族、汉族E6、E7蛋白在不同等级宫颈病变中表达率差异具有统计学意义(P<0.005)。维吾尔族不同等级宫颈病变组织HPV阳性率比较差异具有统计学意义(P<0.005)。结论:维、汉族宫颈病变组织中HPV16E6、E7蛋白阳性表达率差异有统计学意义,维吾尔族中随着宫颈病变级别增加,HPV阳性率增加,E6、E7蛋白检测可预测宫颈病变进展及预后。

结直肠癌组织HPV16 E7 DNA及蛋白表达的研究

目的 分析不同部位、分期的结直肠癌及正常黏膜组织中人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16型E7的表达状况。方法 应用PCR及免疫组化方法检测82例手术切除的结直肠癌新鲜标本及距肿瘤近端10 cm以远的正常黏膜组织中HPV16 E7 DNA及蛋白的表达。结果 结直肠癌组织HPV16 E7 DNA表达阳性率为51.22%(42/82),明显高于正常黏膜组织的4.88%(4/82),P<0.01; 直肠癌组织中HPV16 E7 DNA表达阳性率为64.10%(25/39),明显高于升结肠癌的18. 18%(2/11), P<0. 05; HPV16 E7 DNA表达阳性率与Dukes分期有关(P<0.01),与癌组织分化程度无关。免疫组化染色显示,HPV16 E7蛋白主要为细胞核表达,胞浆也可见少量表达,进一步确认了HPV16的感染,且HPV16 E7蛋白与HPV16 E7 基因的表达具有相关性,免疫组化敏感性较PCR方法为低。结论 结直肠癌组织HPV16 E7 DNA及蛋白的表达阳性率明显高于正常黏膜组织,提示部分结直肠癌存在HPV16感染。癌灶部位距肛门越近,感染率越高; Dukes分期越晚感染率越高。

人乳头瘤病毒16型E7蛋白和TGF-β1/Smads信号传导通路在宫颈病变中的表达及其意义

目的:检测宫颈病变组织中人乳头瘤病毒16型(HPV-16)E7蛋白以及转化生长因子β1(TGF-β1)介导的细胞信号传导通路中TGF-β1及其Ⅱ型受体(TβRⅡ)和Smad4蛋白的表达,探讨人乳头瘤病毒感染和TGF-β1/Smads信号传导通路在肿瘤形成及演进过程中可能的作用机制。方法:免疫组织化学SP法检测141例石蜡包埋的不同病变宫颈组织中E7,TGF-β1,TβRⅡ和Smad4的表达,通过计算机图片摄像分析系统统计其在各种病变中表达水平的差异。结果:病变由良性到恶性的发展过程中,TGF-β1和Smad4的表达水平逐渐增高(P<0·001,P<0·05);肿瘤分化程度降低,TGF-β1的表达水平增高(P<0·001)。TβRⅡ表达在不同阶段和组织学类型的宫颈病变中无显著差异(P>0·05)。E7蛋白阳性者TGF-β1的表达水平较阴性者高(P<0·05),而TβRⅡ和Smad4的表达则无显著差异(P>0·05)。结论:TGF-β1在宫颈病变中的表达与病变良恶性和肿瘤分化程度有关,TGF-β1高表达是宫颈恶性肿瘤的表现之一;HPV-16感染可能影响到TGF-β1/Smads信号传导通路的功能。