miR-375靶向IGF-1对子宫内膜癌细胞增殖的调控作用

目的:探讨微小RNA-375(miR-375)靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对子宫内膜癌细胞增殖的调控作用。方法:人子宫内膜癌Ishikawa细胞分为miR-375 inhibitor组、miR-375 inhibitor NC组、miR-375 mimic组、miR-375 mimic NC组、blank组,采用脂质体细胞转染法进行转染。利用qRT-PCR技术验证miR-375的表达;利用CCK8及凋亡实验检测过表达或抑制表达miR-375对Ishikawa细胞增殖及凋亡等生物学行为的影响;利用Western Blot技术检测Ishikawa细胞转染后下游靶基因IGF-1表达水平。结果:转染后48小时与96小时,mimic组比mimic NC组细胞的增殖能力下降,inhibitor组比inhibitor NC组细胞的增殖能力增强,差异有统计学意义(P<0.05)。转染48小时后,mimic组、miR-375 NC组、inhibitor组、inhibitor NC组、空白组凋亡率分别为(40.00±3.18)%、(18.19±2.01)%、(7.44±1.11)%、(18.11±1.86)%、(17.22±3.84)%,差异有统计学意义(P <0.05)。转染48小时后,IGF-1蛋白在mimic组、miR-375 NC组、inhibitor组、inhibitor NC组、空白组中的相对表达水平分别为0.45±0.22、1.45±0.14、3.89±0.11、1.66±0.33、1.74±0.32,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:过表达miR-375能抑制子宫内膜癌细胞增殖与促进细胞凋亡,其具体机制可能是miR-375通过负向调控IGF-1的表达而实现。

miR-375在子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的生物学功能

目的:探讨miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌中的表达及对HEC-1-B细胞增殖、凋亡的影响。方法:miRNA芯片分析Ⅱ型子宫内膜癌miRNA表达谱。利用lipofectamine 2000转染HEC-1-B细胞。实时荧光定量PCR检测转染后miR-375的表达。CCK-8检测转染后细胞增殖能力的改变。流式细胞仪检测细胞转染效率及转染后细胞凋亡情况。结果:miR-375在Ⅱ型子宫内膜癌组织中低表达。转染效率达73.43%。转染后实验组miR-375表达量较NC组和对照组明显增加(P<0.05)。实验组较NC组生长明显受抑(P<0.05)。实验组较NC组、对照组凋亡明显增加(P<0.05)。结论:初步证明miR-375抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞增殖并促进凋亡,可能成为Ⅱ型子宫内膜癌基因治疗的靶点。

miR-375靶向IGF-1对子宫内膜癌细胞增殖的调控作用

目的探讨miR-375靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对子宫内膜癌细胞增殖的调控作用。方法选择对数生长期的人子宫内膜癌Ishikawa细胞,随机分为5组,模拟剂组转染miR-375模拟剂,模拟剂NC组转染miR-375模拟剂NC,抑制剂组转染miR-375抑制剂,抑制剂NC组miR-375抑制剂NC,对照组为未转染的Ishikawa细胞。利用qRT-PCR技术验证miR-375的表达;利用CCK8及凋亡实验检测Ishikawa细胞增殖及凋亡情况;利用Western blot技术检测IGF-1表达水平。结果转染后48 h与96 h,模拟剂组比模拟剂NC组细胞的增殖能力下降,抑制剂组比抑制剂NC组细胞的增殖能力增强(P<0.05)。转染48 h后,模拟剂组、miR-375 NC组、抑制剂组、抑制剂NC组、对照组凋亡率分别为(40.00±3.18)%、(18.19±2.01)%、(7.44±1.11)%、(18.11±1.86)%、(17.22±3.84)%,miR-375 NC组显著低于模拟剂组,抑制剂NC组显著高于抑制剂组(P<0.05)。转染48 h后,IGF-1蛋白在模拟剂组、miR-375 NC组、抑制剂组、抑制剂NC组、对照组中的相对表达水平分别为0.45±0.22,1.45±0.14,3.89±0.11,1.66±0.33,1.74±0.32,miR-375 NC组显著高于模拟剂组,抑制剂NC组显著低于抑制剂组(P<0.05)。结论过表达的miR-375能抑制子宫内膜癌细胞增殖与促进细胞凋亡,其具体机制可能是miR-375通过负向调控IGF-1的表达而实现。

Apoptotic effect and mechanisms of AHPN on human skin malignant melanoma cell A375

Objective： To study apoptotic effects of synthetic retinoic acid 6-[3-（1-adamantyl）-4-hydroxyphenyl]-2-naphthalene carboxylic acid（AHPN） on human skin malignant melanoma A375 cells in comparison with the natural ligand all-trans-retinoic acid（ATRA） in vitro and the mechanisms related to the actions of AHPN. Methods：MTT assay was used to determine the anti-proliferative effects of AHPN and ATRA on A375 cells. Flow cytometry was performed to investigate the influence of AHPN and ATRA on cell cycle and cell apoptosis. In addition, transfection and luciferase activity assays were employed to explore the mechanisms of how AHPN executes its proapoptotic function. Results：Firstly, AHPN promoted apoptosis and GI arrest in A375 cells compared with ATRA. Secondly, the activity of NF-K B in A375 cells treated with AHPN increased 2-3 times compared with solvent DMSO treatment. Conclusion：AHPN, in comparison with ATRA, is a more effective alternative for therapy of malignant melanoma. The potentially proapoptotic function of AHPN requires activation of NF-K B.

Hsp90抑制剂FS-108抑制癌基因依赖肿瘤细胞增殖及运动的机制研究

目的探讨Hsp90抑制剂FS-108抑制癌基因依赖的肿瘤细胞EBC-1和A375的增殖及运动能力的作用机制。方法采用磺酰罗丹明B法检测FS-108对细胞增殖的影响;采用蛋白免疫印迹法检测FS-108对Hsp90客户蛋白、周期调控蛋白及凋亡调控蛋白的变化;采用流式细胞术检测FS-108作用后细胞周期分布及凋亡情况;采用Transwell小室方法检测FS-108对细胞运动能力的影响。结果 FS-108对EBC-1和A375均有明显的增殖抑制作用,IC_(50)分别为25.53 nmol·L^(-1)和30.02 nmol·L^(-1)。FS-108能有效降解肿瘤细胞中的客户蛋白c-Met和B-Raf并进而抑制下游AKT及ERK信号通路。FS-108能诱导细胞产生G_2/M期阻滞及凋亡。同时,FS-108还能明显抑制EBC-1和A375细胞的运动能力。结论 Hsp90抑制剂FS-108主要通过诱导肿瘤细胞产生G_2/M期阻滞和细胞凋亡,发挥其抑制增殖的细胞生物学效应,同时,FS-108也具有一定抗转移潜能。

miR-375靶向SP1通过HK2调控肝癌细胞增殖和糖酵解的作用机制研究

目的探讨肝癌中己糖激酶2(HK2)异常表达以及肝癌细胞增殖和糖酵解的调控机制。方法收集2017年1月—2019年12月41例在武汉市中心医院手术切除的肝癌及癌旁组织病理样本。利用免疫组化法(IHC)评估HK2和特异性蛋白1(SP1)的表达。在肝癌细胞系HepG2中敲低HK2和SP1、过表达miR-375,使用CCK-8、葡萄糖、乳酸浓度测定检测细胞增殖和糖酵解能力,利用实时荧光定量PCR和Western blotting实验验证三者之间的调控关系。利用基因表达数据库(GEO)中的肝癌数据集分析三者之间的相关性。应用荧光素酶报告基因实验验证miR-375和SP1之间的直接相互作用。结果IHC显示,SP1和HK2在癌旁组织中的高表达比例分别为39.0%(16/41)和26.8%(11/41),而在肝癌组织中则升至58.5%(24/41)和53.7%(22/41)。SP1和HK2的表达评分呈正相关关系(r=0.611,P<0.001)。下调HK2和SP1以及上调miR-375表达抑制肝癌细胞的增殖和糖酵解能力,而上调miR-375和下调SP1抑制HK2的表达。生物信息学分析显示,HK2表达与miR-375呈负相关关系(r=-0.584,P<0.001),与SP1呈正相关关系(r=0.297,P=0.005)。miR-375可直接靶向抑制SP1在mRNA和蛋白质的表达。荧光素酶报告基因证实miR-375与SP1存在直接相互作用。结论miR-375通过靶向SP1调控HK2影响肝癌的增殖和糖酵解。

miR-375下调YAP1对结直肠癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨miR-375靶向调控Yes相关蛋白(YAP)的表达对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法选取2018年1月至2019年6月间兰州市第一人民医院收治的行手术切除的37例结直肠癌患者的癌组织及对应的癌旁组织标本、人结直肠癌细胞系HCT116、NCI-H716、HRC-99和正常结直肠上皮细胞系FHC,采用RT-qPCR分析比较结直肠癌组织与对应癌旁组织及结直肠癌细胞系与FHC细胞中miR-375的表达水平。在细胞系水平,应用CCK-8实验、Transwell迁移实验检测过表达miR-375对结直肠癌细胞增殖及迁移能力的影响,应用Western blot检测过表达miR-375的HCT116细胞中YAP1的表达变化。结果在结直肠癌组织中,miR-375的相对表达量低于癌旁组织,YAP1的相对表达量高于癌旁组织。在所有检测结直肠癌细胞系中,HCT116细胞中miR-375的表达水平最低,过表达miR-375后,HCT116细胞的增殖、迁移能力减弱,YAP1表达水平降低。数据库分析显示,YAP1可能是miR-375下游调控的靶基因,且二者在结直肠癌中的表达呈负相关。结论miR-375可能通过抑制YAP1的表达在结直肠癌中发挥抑癌作用。