杂交前3%过氧化氢预处理增强EBER原位杂交特异性阳性信号

目的优化EBER原位杂交检测方法,增强特异性阳性信号,降低背景染色。方法选取30例EBV阳性的组织切片,在杂交前处理时加入3%过氧化氢,再通过EBER探针进行原位杂交,比较不同过氧化氢孵育时间对杂交反应阳性信号和背景的影响。结果用3%过氧化氢处理鼻咽癌组织10 min、处理淋巴瘤组织15 min,EBER原位杂交阳性信号强,背景干净。结论EBER原位杂交过程中,在杂交前处理时用3%过氧化氢短暂孵育可以增强特异性阳性信号,降低非特异性背景染色。

EBER原位杂交手工检测常见问题与对策

EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)属于疱疹病毒,在人群中普遍存在感染,一旦原发感染康复后会转变为终身潜伏状态。随着对EBV的深入研究,我们发现它与许多肿瘤的发生有关[1]。原位杂交检测可在分子层面上确认EBV与肿瘤之间的关联,是检测EBV相关肿瘤的金标准。目前,多数大型医院EBER原位杂交检测已使用全自动免疫组化染色仪,鉴于中小型医院受场所、资金、人员等因素的限制,手工操作方法依然是首选。

鼻咽癌癌变过程中EBERs表达状况的研究

本文采用重组质粒ｐＳＰ６５（带有ＥＢＥＲｓ的基因）体外转录合成的地高辛标记的单链反义ＲＮＡ探针，用原位杂交方法检测处于癌变不同阶段的鼻咽活检组织中ＥＢＥＲｓ的表达状况。ＥＢＥＲｓ检出率为：鼻咽癌（２３／２４），正常鼻咽组织，慢性炎症增生及单纯性增生和化生（０／３０），异型增生和化生（５／８），头颈部其它肿瘤（０／５），鼻咽癌颈淋巴结转移灶（１／１）。进一步证明：（１）ＥＢＶ与ＮＰＣ密切相关；（２）ＥＢＶ在ＮＰＣ转移过程中并不丢失；（３）ＥＢＶ可能并不感染正常鼻咽上皮。

mic2/CD99在经典型霍奇金淋巴瘤H/RS细胞中的表达及与Eber-1/LMP-1相关性的研究

目的:检测mic2基因与CD99蛋白和Eber-1基因与潜伏膜蛋白-1(LMP1)在经典型霍奇金淋巴瘤(cHL)H/RS细胞中的表达,探讨mic2/CD99表达与Eber-1/LMP-1的相关性。方法:采用分子原位杂交和免疫组化技术并结合组织芯片技术检测59例石蜡包埋淋巴瘤组织标本[43例cHL,16例非霍奇金淋巴瘤(NHL)]mic2/CD99和Eber-1/LMP-1的表达,比较分析mic2/CD99在两组中的表达及与Eber-1/LMP-1的关系。结果:cHL组CD99蛋白表达阳性率为2·3%,mic2基因表达为55·8%,LMP1表达为58·1%,Eber-1表达为53·5%;NHL组CD99蛋白与mic2基因表达高于cHL组(P<0·05);LMP1和Eber-1的表达低于cHL组(P<0·05);mic2基因的表达高于CD99蛋白的表达(P<0·05);Eber-1与LMP1的表达无统计学意义(P>0·05)。CD99蛋白与LMP1的表达呈负相关(P<0·05),各项指标的表达与性别无关。CD99蛋白与LMP1的表达与年龄呈负相关(P<0·05),mic2与Eber-1的表达与年龄无关(P>0·05)。结论:CD99蛋白在cHL H/RS细胞中低表达,并与LMP1的表达呈负相关。

应用EBER原位杂交检测EB病毒的体会

EB病毒（EBV）与许多肿瘤和非肿瘤性疾病有关,临床主要检测方法有免疫组化、原位杂交和电镜。近年来,EBER原位杂交已成为EB病毒常用的检测手段,该技术具有较高的灵敏度及特异性,但也易受多种因素的影响。现将我们的体会报道如下,供大家参考。

儿童Sturge-Weber综合征影像学诊断

目的:探讨Sturge-Weber综合征(SWS)的临床特点及CT、MRI等影像诊断价值,总结SWS最适当的影像诊断方法。方法:回顾性分析及总结44例SWS患儿的临床及影像学特点。结果:44例SWS中临床表现为癫痫发作35例,33例有颜面部血管瘤,均位于三叉神经分布区;4例伴有头痛,4例伴有一侧肢体乏力。30例SWS患儿行CT检查;38例行MRI检查(增强34例),1例行磁共振波谱(MRS).5例行磁敏感序列(SW1)扫描;14例行DSA检查。经各项影像诊断结合临床表现,44例均有脑内软脑膜血管瘤(12例累及双侧)。头颅CT可清晰显示脑回样钙化(25例)。MRI增强软脑膜强化伴静脉畸形(34例),脉络膜丛增大强化(21例),病侧不同程度脑萎缩(34例)。10例眼环增厚,提示青光眼(1例双侧青光眼术后)。2例伴额面部皮肤增厚。结论:SWS是一种少见疾病,在儿童临床表现怀疑sws病例,建议行CT平扫、MRI增强及SWI序列进行早期诊断及随访复查。

细胞蜡块在淋巴结细针针吸标本免疫组化和EBER检测中的应用

细针吸取细胞学（ fine needle aspiration cytology, FNAC）是一种简便快速、创伤性小并较为准确的细胞病理学诊断方法。该方法通过细针吸取采集标本，对人体实质性器官的肿瘤及非肿瘤性病变的诊断及筛查有极大的临床意义。由于其具有诊断准确、快速、简单易行、创伤性小等特点，很容易被广大患者接受。传统做法通过离心、涂片、染色的切片进行基本初筛，目前应用很广泛，但仍存在诸多不足之处，尤其在免疫细胞化学和原位杂交检测中，如EB病毒检测（EBER检测）应用中，传统涂片的细胞有时较少，易出现假阴性；涂片厚薄不均而致阳性物质定位不清出现假阳性；

HE切片褪色后行EBER原位杂交检测方法的探讨

目的探讨将HE切片褪色后行EB病毒编码的小RNA(EBER)原位杂交检测的方法。方法收集40例EBER原位杂交检测阳性病例的HE切片作为实验组,相同蜡块的连续切片作为对照组,分别进行EBER原位杂交检测。结果实验组中,38张切片的组织结构全部完整,2张骨髓穿刺切片中的骨小梁脱片,但剩余组织组织结构保持完整。所有40张切片均杂交阳性,阳性信号位于细胞核,呈棕黄色,定位准确、清晰可读,杂交背景干净。阳性细胞数目及强度与对照组无差别。结论将HE切片褪色后行EBER原位杂交检测,方法简单、可靠,在病理诊断中有一定的应用价值。

非特指性外周T细胞淋巴瘤中EBER、LMP1的表达及与预后的关系

目的 探讨非特指性外周T细胞淋巴瘤（peripheral T-cell lymphoma,not otherwise specified,PTCL-NOS）中EBER、LMP1的表达及与患者预后的关系。方法 采用原位分子杂交（in situ hybridization,ISH）技术和免疫组化法分别检测81例PTCL-NOS及59例对照组[48例血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤（angioimmunoblastic T-cell lymphoma,AITL）和11例结外NK/T细胞淋巴瘤（extranodal NK/T cell lymphoma,ENK/TCL）]中EBER和LMP1的表达,并分析EBER表达与PTCL-NOS患者临床病理特征及预后的关系。结果 （1）81例PTCL-NOS中,EBER阳性率为43.2%（35/81）;35例EBER阳性的PTCL-NOS病例中免疫组化得分1分＋2分者共29例,占EBER阳性病例的82.9%（29/35）,3分＋4分者共6例,占17.1%（6/35）。EBER表达与PTCL-NOS患者年龄、性别、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）水平及临床分期均无明显相关性（P〉0.05）。（2）81例PTCL-NOS组织中,LMP1蛋白阳性率为22.2%（18/81）。LMP1蛋白表达与EBER表达具有一致性,但EBER阳性率明显高于LMP1（P〈0.05）。（3）33例PTCL-NOS获得临床随访资料,随访时间1～63个月,中位生存期为23个月,总生存率为33.3%（11/33）。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,EBER阳性组的生存率明显低于EBER阴性组（P〈0.05）。结论 EB病毒（EBV）感染可能是PTCL-NOS发生、发展中重要但非根本性的因素。EBER-ISH检测EBV感染具有较高的敏感性和特异性。EBV感染对PTCL-NOS患者的预后判断具有重要意义。

微电流检测和EBER原位杂交联合应用在鼻咽癌病理诊断中的意义

目的研究微电流值在鼻咽癌组织中的变化特点及EBER在鼻咽癌的表达情况。探索微电流检测和EBER原位杂交联合应用在鼻咽癌病理诊断中的意义。方法应用微电流检测和EBER分子原位杂交方法检测48例鼻咽癌、19例鼻咽黏膜慢性炎症,分析微电流值在鼻咽癌组织中的变化特点及EBER在鼻咽癌的表达情况。结果微电流检测的48例鼻咽癌中40例阳性(微电流值>0μA),阳性率为83.3%,19例鼻咽黏膜慢性炎症组织中3例阳性(微电流值>0μA),假阳性率15.8%;EBER原位杂交检测的48例鼻咽癌中38例呈阳性反应,阳性率为79.2%,19例鼻咽黏膜慢性炎症组织均阴性;微电流检测和EBER原位杂交联合检测48例鼻咽癌中44例阳性,阳性率为91.7%,差异有统计学意义。结论 1微电流检测和EBER原位杂交检测方法是较好的鼻咽癌病理诊断方法。2微电流检测和EBER原位杂交在鼻咽癌病理诊断中有相互补充作用,联合应用两种方法,可以提高鼻咽癌诊断正确率,减少假阴性率。

头颈部淋巴结转移性癌中EBER1的原位杂交检测

本研究对包括鼻咽癌７例，涎腺恶性淋巴上皮病４例和口腔各部位不同分化的鳞状细胞癌５例在内的１６例肿瘤的原发灶和其淋巴结转移灶中的ＥＢＥＲ１进行了原位杂交检测，旨在揭示头颈部转移性癌中ＥＢＶ阳性表达在判断其原发肿瘤来源中的意义。结果表明：在头颈部淋巴结转移性癌中发现非角化型的癌并伴有ＥＢＥＲ１阳性者，可提示其原发灶可能来自于鼻咽癌和涎腺恶性淋巴上皮病。

细胞DNA倍体分析和EBERs原位检测在鼻咽癌早期诊断中的应用

目的 探讨鼻咽脱落细胞进行DNA倍体和EB病毒编码RNA (EBERs)检测在鼻咽癌诊断中的应用。方法 对 38例经细胞学诊断为鼻咽癌和 8例为正常的鼻咽细胞涂片分别进行图像分析测定细胞DNA含量和EB病毒EBERs原位杂交检测。结果 与病理细胞学诊断相比 ,DNA异倍体分析和EBERs检测诊断癌的敏感性分别为 5 0 %和 92 %,其特异性均为 10 0 %;其阴性预测值分别为 30 %和 72 %。结论 与EBERs检测相比 ,DNA异倍体分析的诊断敏感性和阴性预测值较低 ,差异具有显著性 (分别为P <0 0 0 1和P <0 0 5 )。证明在鼻咽细胞学涂片应用EB病毒原位杂交检测诊断鼻咽癌优于应用DNA异倍体分析诊断。与细胞DNA图像分析相比 ,EB病毒原位杂交检测具有客观、实验条件简单等优点 ,在鼻咽癌可疑病人的早期诊断和鉴别诊断上具有重要的实用价值。

原位杂交检测HPV与EBER中常见问题与对策

原位杂交检测与免疫组化相比，有自己独特的优势，其可提供分子水平的诊断结果，具有高度的特异性，成为病理辅助诊断的重要依据之一。在病毒感染、肿瘤异常基因等鉴别，特别在诊断某些人类疾病，无法得到可靠抗体时，不失为一种较好的检测方法，现已被有效地应用到现代病理学研究及诊断中。原位杂交操作步骤多，存在不稳定因素和人为差异，可出现不同类型的假阳性与假阴性。如何提高制片质量，正确发挥原位杂交优势，笔者现将目前病理科常用的石蜡原位杂交（HPV、EBER试剂盒购自福建泰普生物公司）检测过程中总结的几点经验建议介绍如下。

EBER原位杂交试剂盒的性能验证及条件优化

EBER是EB病毒编码的小RNA,是EB病毒的表达产物,受EB病毒感染的细胞核中以高拷贝数存在。目前EBER原位杂交已成为组织和细胞中EB病毒检测的金标准[2],检测方法有手工操作、半自动和全自动免疫组化染色仪操作法。本科室刚引进新的EBER检测试剂盒并运用Ventana BenchMark ULTRAL全自动免疫组化仪进行EBER原位杂交检测,为了使检测结果更加准确,我们对产品说明书推荐的EBER原位杂交法进行性能验证及条件优化。

EBER原位杂交检测中手工与BenchMark ULTRA自动化染色差异

与EBV感染相关的疾病有鼻咽癌、NK/T细胞淋巴瘤、EBV相关性胃癌、淋巴上皮瘤样癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤等。原位杂交是检测组织EBV感染的金标准,与PCR和免疫组化相比,原位杂交具有高度灵敏性和特异性,组织定位明确。目前最常用的EBER原位杂交试剂分别有适用于手工和全自动免疫组化染色仪两种类型的试剂盒。本实验使用北京中杉金桥公司的手工检测试剂盒和罗氏EBER全自动检测试剂盒同时对淋巴瘤、EBV相关性胃癌、鼻咽癌几种不同类型标本进行检测,现将检测结果报告如下。

显色原位杂交技术在石蜡切片EBER检测中的应用

目的探讨显色原位杂交技术在石蜡切片中检测EBER的操作与常见问题分析。方法采用显色原位杂交技术,选取15例鼻咽黏膜慢性炎病理活检组织,25例鼻咽非角化鳞状细胞癌病理活检组织行EBER检测。结果 15例鼻咽黏膜慢性炎中有2例EBER呈点状阳性(阳性率13.3%),25例鼻咽非角化鳞状细胞癌全部阳性(阳性率100%)。结论采用显色原位杂交技术检测EBER,阳性信号定位准确,染色效果良好,无背景染色。杂交时间缩短,提高了检测效率,为EB病毒感染相关疾病的病理诊断及鉴别提供有效的依据。

CK免疫组化联合EBER原位杂交在鼻咽癌诊断中的作用分析

目的CK免疫组化联合EBER原位杂交在鼻咽癌诊断中的作用。方法选取2016年1月—2019年12月在惠州市第三人民医院确诊为鼻咽癌的112例患者作为研究组,并选取同期于该院进行鼻咽活检诊断为鼻咽黏膜慢性炎症患者30例作为对照组,收集受试者的鼻咽活检组织,进行CK免疫组化及EBER原位杂交;比较两组患者鼻咽组织中CK免疫组化及EBER原位杂交阳性细胞出现的比例;观察鼻咽癌患者CK免疫组化及EBER原位杂交阳性细胞的状态;计算CK免疫组化及EBER原位杂交诊断鼻咽癌的临床效能。结果112例非角化型未分化癌患者的组织切片中,99例EBER原位杂交结果呈现阳性,诊断阳性率为88.39%;CK免疫组化结果显示,96例患者呈现阳性,诊断阳性率为85.71%,两组鼻咽活检组织中EBER及CK诊断阳性率比较,差异有统计学意义(χ^(2)=87.571、79.379,P<0.05);CK与EBER联合检测诊断鼻咽癌的灵敏度、特异性、准确性、阳性预测率及阴性预测率分别为97.32%、100.00%、97.89%、100.00%及90.91%,高于两种指标单独检测的灵敏度、准确率及阴性预测率,具有较高的临床效能。结论鼻咽癌患者的鼻咽活检组织中EBER原位杂交的染色程度较高,CK含量较高,能够通过两种检测指标的联合诊断对鼻咽癌进行诊断,发挥临床诊断作用。

全自动免疫组化仪在EBER原位杂交中的应用

EB病毒（EBV）的潜伏感染与许多疾病相关,检测组织和细胞中的EBV对疾病的诊断和鉴别诊断具有重要的辅助价值。目前,EBER原位杂交已成为组织和细胞中EBV检测的标准方法[1],被广泛使用。近年来,国内文献报道的EBER原位杂交方法主要有手工操作和半自动免疫组化仪操作两种方法.

133例霍奇金淋巴瘤中EBERs表达与临床分期、疗效相关性分析

目的探讨霍奇金淋巴瘤中EBV感染情况,通过EBERs原位杂交,分析其表达与HL临床分期之间的关系;此外,进一步探讨EBV的感染对于HL化疗疗效的影响。方法收集了133例霍奇金淋巴瘤患者的石蜡标本、以及查阅详细的临床资料,进行EBERs原位杂交染色,统计分析EBERs的表达与临床分期之间的关系;统计EBV阳性与阴性例数,分组分析EBV对化疗总有效率的影响。结果 Pearson相关分析显示,EBERs的表达与临床分期呈正相关;单因素统计显示,EBV阳性组化疗有效率低于EBV阴性组。结论EBERs的表达率高的HL患者其临床分期较晚,EBV阳性患者化疗有效率欠佳,提示EBERs可作为HL的独立预后因素。

EBER显色原位杂交技术在口腔颌面部淋巴上皮癌中的应用体会

目的探讨EBER显色原位杂交技术(CISH)在口腔颌面部淋巴上皮癌中特有的操作与改进方法。方法应用CISH技术,荧光素标记的寡核苷酸探针EBER原位杂交检测试剂盒对40例疑为口腔颌面部淋巴上皮癌的病例进行EBER检测。结果 EBER阳性率为95%;阳性信号主要定位在肿瘤上皮细胞巢的细胞核上,呈棕黄色,周围淋巴细胞及正常组织未见明显着色;信号定位准确,染色结果清晰易辨,无背景干扰。结论简化操作EBER原位杂交检测试剂盒能够节省时间、增强信号强度和提高工作效率等。