三氧化二砷对人食管癌细胞株EC-1的放射增敏作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对食管癌离体肿瘤细胞EC-1的放射增敏作用,并探讨其机制。方法利用多靶单击数学模型拟合放射剂量-细胞存活曲线,观察As2O3对食管癌细胞株EC-1的放射增敏作用。流式细胞法观察As2O3对细胞周期分布及细胞凋亡的影响。结果 As2O3对食管癌细胞株EC-1有明显的放射增敏效应,3μmol/L As2O3作用48 h的放射增敏比为1.285。药物作用后G2/M期细胞比例增加,G0/G1期和S期细胞比例减少;细胞凋亡指数增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 As2O3对食管癌细胞株EC-1有明显的放射增敏效应。放射增敏的机制可能与As2O3抑制EC-1细胞的修复能力、使细胞周期阻滞在G2/M期、G0/G1期和S期细胞减少以及凋亡增加有关。

热疗对食管癌细胞株EC-1放疗的增敏作用

目的初步探讨热疗对食管癌细胞株EC-1放射增敏作用及其可能机制,为热疗与放疗联合治疗食管癌提供理论依据。方法采用平板克隆形成分析法计算各组细胞存活分数SF,"多靶单击数学模型"拟合细胞存活曲线。流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化。结果热疗对食管癌细胞株EC-1放疗有显著的增敏作用,热疗30 min的放射增敏比为1.060。热疗可使细胞阻滞在G2/M期,使G0/G1期、S期细胞比例减少,增加细胞凋亡,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论热疗对食管癌EC-l细胞具有增敏作用,热疗可通过影响食管癌EC-l细胞周期,诱导细胞凋亡,增强放射线对细胞的杀伤作用。

真核起始因子4E反义寡核苷酸对人食管癌EC-1细胞中真核起始因子4E表达的影响

目的:探讨真核起始因子4E(eIF4E)反义寡核酸(ASODN)对人食管癌EC-1细胞中eIF4E表达的影响。方法:将针对eIF4E不同基因位点的2条反义寡核苷酸(ASODN1、2)和1条无义寡核苷酸(N-ODN)转染EC-1细胞(设5、10、15μmol/L3个转染浓度),分别培养24、48、72h,并设空脂质体转染作为空白对照,采用免疫细胞化学和原位杂交方法检测转染后细胞中eIF4E蛋白和mRNA表达的变化。结果:ASODN1、2转染EC-1细胞培养24、48、72h后,各组中eIF4E蛋白和mRNA的表达均降低,2者分别与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);ASODN1、2组每个时间段内随浓度增加ASODN抑制效应增强,差异具有统计学意义(F=9.423、10.284、10.496、7.621、8.420和9.089,P<0.05),组间相同时间点、相同浓度的抑制效应比较差异无统计学意义(P>0.05);NODN组和空白对照组对eIF4E的表达均无抑制效应。结论:特异性的ASODN能有效抑制人食管癌EC-1细胞中eIF4E的表达。

Indirubin-3’-monoxime对人食管癌EC-1细胞Survivin表达的影响

目的:研究靛玉红衍生物Indirubin-3’-monoxime(IRO)对人食管癌EC-1细胞增殖、细胞周期和Survivin蛋白表达的影响。方法:分别采用1、5、10μmol/L的IRO处理培养的食管癌EC-1细胞后,采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期的变化情况,采用Western blotting检测Survivin蛋白水平表达。结果:IRO对EC-1细胞生长具有明显的抑制作用,且表现为剂量依赖性和时间依赖性(F=12.39,P<0.05);以5μmol/L的IRO作用EC-1细胞24、48和72h后,G0/G1期细胞比例逐渐下降(P<0.05),S期细胞比例未见明显改变(P>0.05),G2/M期细胞比例逐渐上升(P<0.05),细胞周期向G2/M期阻滞,呈时间依赖性;IRO作用24h后EC-1细胞内Sur-vivin蛋白的表达开始下调,在48h和72h时进一步下降。结论:IRO可抑制食管癌EC-1细胞增殖,诱导EC-1细胞阻滞于G2/M期,下调EC-1细胞中Survivin蛋白表达。

RNA干扰Stat3基因对EC-1细胞侵袭转移和增殖能力的影响

目的:构建针对信号转导子和转录激活子3(Stat3)基因的siRNA表达载体,研究Stat3基因沉默对人食管鳞癌EC-1细胞侵袭转移及增殖的影响.方法:构建pSUPER-EG-FP-Stat3siRNA表达载体,转染EC-1细胞,RT-PCR,Western Blot检测Stat3的表达;Boyden-chamber体外侵袭实验检测siRNA对细胞侵袭转移能力的影响,MTT法检测siRNA对细胞增殖能力的作用.结果:酶切和测序证实pSUPER-EGFP-Stat3siRNA表达载体构建成功;RT-PCR,Western Blot结果表明,siRNA能有效地降解EC-1细胞中Stat3基因的mRNA,下调Stat3蛋白的表达;转染siRNA后,与对照组相比,EC-1细胞侵袭转移和增殖能力明显下降.结论:成功构建针对Stat3基因的siRNA表达载体,可有效沉默Stat3基因在食管鳞癌EC-1细胞中的表达,抑制EC-1细胞的侵袭转移及增殖能力,可为食管癌的基因治疗提供理论依据.

稳定表达磷酸化Stat3蛋白的EC-1细胞株的获取

目的:建立稳定表达磷酸化Stat3(p-Stat3)蛋白的EC-1细胞株。方法:应用脂质体Lipofectamine2000将pXJ40-Stat3质粒转染入EC-1细胞中,G418筛选得稳定转染pXJ40-Stat3的EC-1细胞株,IL-6处理20min以获得稳定表达p-Stat3蛋白的EC-1细胞株(转染pXJ40-Stat3+IL-6处理组)。同时以稳定转染pXJ40-Stat3(转染pXJ40-Stat3组)、IL-6处理组(不转染)、空载体组和空白组细胞作为对照。分别用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中Stat3 mRNA和p-Stat3蛋白的表达。结果:5组细胞中Stat3 mRNA和p-Stat3表达差异有统计学意义(FStat3 mRNA=5.971,P=0.010;Fp-Stat3=7.334,P=0.005)。转染pXJ40-Stat3+IL-6处理组EC-1细胞中Stat3 mRNA表达最高(0.72±0.01),其次是转染pXJ40-Stat3组(0.65±0.01),均高于其他3组。转染pXJ40-Stat3+IL-6处理组EC-1细胞中p-Stat3蛋白表达最高(0.72±0.03),其次为IL-6处理组(0.65±0.01),均高于其他3组。结论:成功建立稳定表达p-Stat3蛋白的EC-1细胞株。

三氧化二砷对食管癌细胞株EC-1的生长抑制作用

目的:探讨三氧化二砷((Arsenic trioxide,As2O3)对食管癌细胞株EC-1生长抑制作用及机制。方法:采用MTT法检测不同浓度As2O3(0.5、1、2、4、8、16、32、64μmol/L)在不同时间段(24、48、72 h)对EC-1细胞增殖的抑制率,计算半数抑制率(IC50)值。流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期变化。结果:三氧化二砷对食管癌EC-1细胞具有增殖抑制作用,呈剂量-效应和时间-效应关系(P<0.05)。IC50约为18.74μmol/L。As2O3可使细胞阻滞在G2/M期,使G0/G1期、S期细胞比例减少,增加细胞凋亡,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:As2O3能抑制食管癌EC-l细胞株的增殖,具有明显的量效和时效关系。其机制可能与改变周期,增加其细胞凋亡有关。

EC-1清洗剂对某微矩形电连接器壳体的影响

某型微矩形电连接器在测试过程中多次出现壳体开裂现象。通过对正常清洗处理、加严清洗处理和未经清洗处理3组样件的外观、硬度、插拔力及破坏力的对比分析测试,发现3组样件的性能没有明显差异,样件在低温存储和正常操作下经反复插拔均未开裂,但3组壳体薄壁在较小外力作用下均易发生开裂,由此确定EC-1清洗剂对该电连接器壳体性能没有影响。

中药“龙泉复方”的不同配伍对肿瘤细胞系HepG-2和EC-1增殖的影响

通过MTT（四甲基偶氮唑盐）法绘制细胞增殖曲线观察药物对肝癌细胞系HepG-2和食管鳞癌细胞系EC-1细胞增殖的影响,用荧光染色法进一步确定＂龙泉复方＂有效成分诱导细胞凋亡的较佳配伍及其有效作用浓度范围.结果表明：对抑制HepG-2细胞增殖有效作用的浓度：七味单方（马钱子、山慈菇、喜树果、龙葵、石上柏、青黛、紫菀）浸膏混合物和龙葵单方浸膏均〈125μg/mL,七味药物复方总浸膏为250~1000μg/mL;对抑制EC-1细胞增殖有效作用的浓度：三味药物混合浸膏（马钱子,喜树果、青黛提取的浸膏的混合物）〈50μg/mL和150~400μg/mL,七味单方混合浸膏〈25μg/mL和50~400μg/mL,喜树果单方浸膏为25μg/mL和50~200μg/mL;3种浸膏促进EC-1细胞增殖的浓度依次为：50~100、25~50、25~50μg/mL.通过对EC-1荧光染色观察发现诱导细胞凋亡的有效作用浓度：七位单方浸膏混合物为5~10μg/mL,三味药复方混合浸膏为10~25μg/mL,喜树果约为50μg/mL.研究结果提示,药物浓度范围和细胞系的不同导致其效果也不尽相同,临床应据具体情况调整,使之用药少效果佳.

PTEN反义寡核苷酸对食管癌EC-1细胞4EBP1、S6K1表达的影响

目的探讨PTEN ASODN抑制PTEN后对食管癌EC-1细胞4EBP1、S6K1表达的影响。方法利用阳离子脂质体介导PTEN ASODN转染食管癌EC-1细胞,终浓度为3μmol/L、6μmol/L、12μmol/L的ASODN为实验组,不进行转染的为对照组。采用免疫细胞化学技术检测4EBP1、S6K1蛋白的表达。结果PTEN ASODN转染食管癌EC-1细胞后随浓度和时间增加4EBP1蛋白表达降低而S6K1蛋白表达增强,在同一时间不同浓度和同一浓度不同时间差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),12μmol/L的ASODN作用72h效应最强。结论PTEN ASODN抑制PTEN后下调4EBP1蛋白的表达,上调S6K1蛋白的表达。

食管癌细胞系EC-1和EC-109染色体核型分析

比较人类正常体细胞染色体核型和食管癌细胞系EC-1和EC-109染色体核型,了解食管癌细胞系EC-1和EC-109的细胞遗传特征,为研究食管癌的癌变机理提供了方向.利用秋水仙素、KCl低渗液处理细胞,经卡诺氏固定液固定制备染色体,滴片,进行Giemsa染色、镜检、选取染色体长度适中且分散程度好的染色体拍照,采用Adobe Photoshop软件进行染色体核型分析.结果表明:与正常人类细胞比较,食管癌鳞状上皮细胞系EC-1和EC-109的染色体核型出现明显异常,染色体核型分析为亚三倍体,众数为46～68条.食管癌鳞状上皮细胞系EC-1和EC-109的细胞遗传特征有显著的异常改变,细胞恶性转化特质明显.它们是研究癌变机理的良好细胞模型,可用于研究CNV与癌变的关系等.

精维EC-1石棉绒在我公司的应用

通过改用精维EC - 1石棉绒 ,不仅获得了可观的经济效益 ,而且获得了成功的经验。

Epstein-Barr病毒基因组编码的BARF-1和EC-LF4蛋白质与免疫球蛋白结构同源

将EB病毒蛋白质BARF-1和EC-LF4与NBRF蛋白质库的序列进行局部同源性检索以及与已知的Ig V或C功能区相关分子进行对准比较,检查了同源性积分的统计学意义,并进行了二级结构预测和疏水性分析,确定了BARF-1的第13-124位和第126-221位残基片段分别与V和C样功能区类似,EC-LF4的第20-135位残基片段与V样功能区相似,BARF-1是非膜蛋白,EC-LF4是膜整合蛋白,其胞外部分近膜侧有一个类似于Ig绞链区的序列。因此,BARF-1与Ig轻链结构相似,EC-LF4与CD8抗原的第一条链相似。根据Ig超族分子的一般功能(即介导细胞粘附和细胞识别),推测EC-LF4可能作为一种粘附分子与淋巴细胞表面的Ig相关分子结合而促进EB病毒对淋巴细胞的感染。BARF-1因已知与病毒复制有关,与Ig超族的一般功能无关。EC-LF4和BARF-1的Ig样功能区可能来源于EB病毒对宿主细胞Ig基因的整合。

转染KISS-1对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长的影响

目的探讨KISS-1基因对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长的影响。方法通过脂质体介导将pcD-NA3.1-KISS-1转染人食管鳞癌细胞EC-1,用Western blot法检测转染前、后KISS-1蛋白的表达。将单纯EC-1细胞、稳定转染空质粒的EC-1细胞、稳定转染pcDNA3.1-KISS-1的EC-1分别接种于BALB/c-nude裸鼠,构建裸鼠食管鳞癌移植瘤模型,观察肿瘤生长情况,测量肿瘤体积和瘤质量并绘制肿瘤生长曲线;免疫组织化学和半定量RT-PCR技术检测肿瘤组织中KISS-1蛋白和mRNA的表达。结果KISS-1基因转入食管鳞癌EC-1细胞,KISS-1蛋白的表达(1.143±0.218)较空质粒转染组(0.745±0.130)和对照组(0.855±0.184)明显增加(P<0.05),转染KISS-1基因组裸鼠较空质粒转染组和对照组肿瘤生长速度慢,体积(949.42±102.26)mm3与空质粒转染组(1339.82±72.23)mm3和对照组(1384.04±97.07)mm3相比明显减小(P<0.05),瘤体重量(0.498±0.654)g与空质粒转染组(0.638±0.066)g和对照组(0.676±0.108)g相比明显减轻(P<0.05)。结论通过基因转染的方法能表达有活性的KISS-1,并能抑制裸鼠食管癌移植瘤的生长。

沉默STAT3基因对人食管癌EC1细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的构建STAT3靶向短发夹RNA(shRNA)质粒,研究其对人食管癌EC1细胞裸鼠皮下移植瘤的作用,探讨其在食管癌基因治疗中的可行性和特异性。方法构建STAT3的siRNA真核表达载体pSUPER-EGFP-STAT3,稳定表达该质粒的细胞为实验组,转染空质粒细胞及未处理细胞为对照组,建立裸鼠荷瘤模型;监测肿瘤生长变化,HE染色观察肿瘤病理学变化,RT-PCR、免疫组化方法检测STAT3mRNA和蛋白变化。结果裸鼠体内实验显示,实验组肿瘤增长受到明显抑制;HE染色显示对照组肿瘤体积大、异形明显;RT-PCR、免疫组化结果表明实验组STAT3mRNA和蛋白表达下调。结论shRNA沉默STAT3基因能抑制人食管癌EC1细胞裸鼠皮下移植瘤的形成,且能在体内有效下调STAT3mRNA和蛋白的表达,为食管癌的基因治疗提供了新的靶点,开辟了新的思路。

HP根治前后胃粘膜Gas、SS、SP变化及G、D、EC_1细胞图像定量研究

该研究旨在探讨HP感染的慢性胃炎和消化性溃疡患者HP根治前后胃粘膜中胃肠激素Gas、SS、SP及G、D、EC1细胞变化和其相关性。方法 :1997年 3月～ 1999年 12月对 10 2例HP感染的病人 ,HP根治前后分别用放射免疫法及免疫组化染色图像定量分析Gas、SS、SP含量和G、D、EC1细胞密度、灰度。结果 :HP阳性的三组病人经药物治疗根治后胃粘膜Gas含量均较治疗前明显降低 (P <0 .0 1) ,SS、SP含量较治疗前升高 (P<0 .0 1,P <0 .0 5 )。图像定量分析示HP根治前后胃粘膜G、D、EC1细胞密度显著降低 (P <0 .0 5 ) ,D、EC1细胞灰度增加 (P <0 .0 5 )。结论 :三组病人HP根除后胃粘膜Gas减少 ,G细胞灰度降低 ,SS、SP升高 ,D、EC1细胞灰度增加 ,细胞分泌颗粒变化与粘膜相应激素变化呈正相关。提示HP感染干扰了这些激素分泌释放的调控 ,可能是HP相关性胃炎和消化性溃疡的发病机制之一。根除HP后SS、SP升高 ,Gas降低纠正HP感染所致的这些激素分泌释放紊乱 ,可能是HP根除后溃疡复发率降低的原因之一。在HP根除前SP ,EC1细胞灰度降低 ,根除后升高 ,提示SP抑制胃泌素分泌释放 ,而对生长抑素无抑制作用 ,具有胃粘膜保护功能。

电穿孔法转化大肠杆菌TG1的条件优化

研究了质粒pFab74X经电穿孔转化大肠杆菌TG1菌株的影响因素 ,并优化其转化条件。电场强度和脉冲时间的影响较为复杂 ,两者适当组合才可获得高转化效率。此外 ,采用对数生长早期的细菌 。

ISO 362—1:2007与ECE R51/03系列差异及发展动向分析

阐述了国际标准化组织制定加速行驶车外噪声标准ISO 362—1:2007与联合国欧洲经济委员会制定的加速行驶车外噪声法规ECE R51/03系列在车辆条件、参考点定义及数据处理方面的具体差异,并利用M2≤3.5 t类车辆进行了试验数据验证。分析了2个标准体系差异产生的背景,并结合ISO与ECE提交的最新修订草稿,介绍了2个标准体系的发展动向。

小麦叶片内1,5二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶大亚基由53000到50000裂解反应的定位研究

研究了小麦叶片内1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rub isco,EC 4.1.1.39)大亚基(LSU)由53 000裂解为50 000的反应。结果显示,成熟叶片的粗提液在pH 5.5的条件下反应后能检测到50 000的裂解产物,而暗诱导衰老叶片的粗提液在pH 7.5的条件下也能发现LSU的这一降解。分别从成熟叶片和衰老叶片中提取叶绿体,以其裂解液为反应体系研究LSU由53 000裂解为50 000这步反应的细胞器定位。结果显示,衰老叶片中的叶绿体裂解液在pH 7.5时反应1 h后能检测到50 000降解产物,而成熟叶片叶绿体裂解液在pH 5.5和pH 7.5的条件下反应后均未检测到LSU的50 000裂解产物。上述结果表明:衰老叶片中LSU由53 000部分裂解为50 000的反应定位于叶绿体内,而成熟叶片中LSU由53 000裂解为50 000的反应可能定位于叶绿体外。