蝮蛇毒抗凝蛋白组分对人血管内皮细胞EC-304作用的实验研究

目的从皖南尖吻蝮蛇毒中分离纯化出抗凝蛋白组分,观察其对人血管内皮细胞的抑制作用。方法体外培养人血管内皮细胞EC-304,CCK-8比色法测定蝮蛇毒抗凝蛋白组分对体外培养的EC-304细胞的细胞毒作用,相差显微镜观察EC-304细胞经蝮蛇毒抗凝蛋白组分处理后,细胞形态学、生物化学等方面的变化。结果蝮蛇毒抗凝蛋白组分对EC-304细胞具有明显的生长抑制作用（P〈0.05）,浓度为1μg/mL的蝮蛇毒抗凝蛋白组分对EC-304细胞即有很强的抑制作用,随着剂量的加大,其抑制率不断上升;经蝮蛇毒抗凝蛋白组分处理后的EC-304细胞发生形态学变化,显微镜下观察到细胞圆缩,悬浮细胞增多,细胞分裂相减少,培养液内细胞碎片明显增多。结论皖南尖吻蝮蛇毒抗凝蛋白组分对EC-304细胞具有很强的抑制作用,诱导EC-304细胞发生凋亡可能是其机制之一。

红细胞生成素3'-增强子调节缺氧时内皮细胞血栓素合酶基因表达

目的：研究缺氧对人脐静脉内皮细胞珠ＥＣ－３０４ＴＸＳ基因的影响及ＥＰＯ３′增强子在其中的作用。方法：将红细胞生成素（ＥＰＯ）３′－增强子野生片断及点突变片断，借脂质体转入人脐静脉内皮细胞株ＥＣ－３０４，用半定量ＲＴ－ＰＣＲ测定常氧与缺氧条件下培养６小时的细胞血栓素合酶（ＴＸＳ）ｍＲＮＡ。结果：ＥＣ－３０４常氧培养有ＴＸＳ基因表达缺氧６小时ＴＸＳ基因表达明显增强；而细胞导入野生ＥＰＯ３′－增强子片断可阻断缺氧诱导ＴＸＳ基因表达增强，而点突变片断无此作用。结论：在ＴＸＳ基因序列中，可能存在类似ＥＰＯ３′－增强子片断，缺氧诱导ＴＸＳ基因表达增强可能主要通过缺氧诱导因子－１与ＴＸＳ基因序列中类似ＥＰＯ３′－增强子片断结合。