ECHS1和PKM2蛋白在胆管癌中的表达及临床意义

目的探讨ECHS1和PKM2蛋白在胆管癌中的表达特点与预后的关系。方法采用免疫组化方法检测17例胆管癌及其癌旁正常胆管组织中ECHS1和PKM2蛋白的表达情况,并分析两种蛋白表达与胆管癌临床病理特征及预后的关系。结果ECHS1和PKM2蛋白在胆管癌组织中的阳性率分别为58.8%和64.7%,高于癌旁组织中的阳性率17.9%和21.4%,差异有统计学意义(P<0.05);ECHS1和PKM2蛋白与胆管癌患者性别、年龄及肿瘤直径无相关性,而与胆管癌分化程度、TNM分期及生存时间有相关性。结论 ECHS1和PKM2蛋白表达水平与胆管癌发生、发展及转移关系密切。

siRNA沉默ECHS1基因对大肠癌细胞增殖和迁移的抑制作用

目的探讨ECHS1基因在人大肠癌细胞系HCT-8细胞中的表达及其功能。方法构建p U6-si ECHS1重组质粒,稳定转染HCT-8细胞,采用Western blotting检测转染后细胞中ECHS1蛋白的表达及Akt、糖原合成酶激酶GSK3β蛋白磷酸化情况,CCK-8法和Transwell实验检测转染后细胞的增殖与迁移情况。结果采用siRNA沉默ECHS1基因的表达后,HCT-8细胞中ECHS1蛋白表达水平降低约40%,细胞增殖水平和迁移能力亦明显下降,且与亲本细胞或转染空载体细胞比较,Akt和GSK3β磷酸化水平明显下降。结论 ECHS1在大肠癌细胞的增殖和迁移过程中具有重要作用,其机制可能与Akt和GSK3β相关信号通路的活化有关。

ECHS1介导TAKl-AMPK通路诱导结肠癌细胞自噬的实验研究

目的探讨沉默烯酰辅酶A水合酶短链1(ECHS1)表达对结肠癌HT-29细胞自噬的影响及可能作用机制。方法将ECHS1 shRNA质粒及阴性质粒转染入HT-29细胞为shECHS1组和NC组,另设空白对照组,实时荧光定量PCR(QPCR)检测各组ECHS1表达。采用MTT法和流式细胞术检测3组细胞增殖和凋亡的情况。Western blotting法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ)和Beclin 1以及相关信号通路蛋白:转化生长因子活化激酶1(TAK1)、腺氨酸活化蛋白激酶α1(AMPKα1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的水平。采用免疫荧光技术观察细胞自噬情况。结果shECHS1组HT-29细胞ECHS1表达量为0.23±0.05,明显低于空白对照组的0.78±0.09和NC组的0.76±0.09,差异有统计学意义(P<0.05)。shECHS1组48、72、96 h吸光值分别为0.62±0.10、0.75±0.11、0.81±0.08,均明显低于空白对照组和NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。shECHS1组48 h细胞凋亡率为(59.86±3.10)%,高于空白对照组的(27.48±2.25)%和NC组的(27.62±2.59)%,差异有统计学意义(P<0.05)。shECHS1组细胞Beclin 1、LC3-Ⅱ、TAK1、AMPKα1、PPARγ蛋白表达分别为0.76±0.12、0.49±0.07、0.93±0.15、0.57±0.08、0.46±0.09,高于空白对照组和NC组(P<0.05)。加入AMPK特异性抑制剂SZ4003作用48 h后,shECHS1组细胞Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白的表达量分别为0.50±0.10、0.35±0.06,较处理前明显降低(P<0.05)。结论沉默ECHS1表达可显著抑制结肠癌HT-29细胞的增殖活性,并促进其凋亡,其具体机制可能与激活TAK1-AMPK信号通路诱发结肠癌细胞HT-29自噬有关。

荷斯坦奶牛β-氧化关键酶ECHS1基因甲基化分析

为了检测烯脂酰辅酶A水合酶短链1(ECHS1)的甲基化状态,以同源比对克隆的方法获得荷斯坦奶牛ECHS1部分片段的序列,首先预测甲基化数目,然后采用重亚硫酸盐转化测序(BS-Seq)的方法检测了所获得片段的甲基化状态。结果表明,该试验成功获得了ECHS1 459 bp的序列,其C+G含量为53.88%,含有28个Cp G岛,其中1号、2号、9号、11号、13号、14号、17号、22号、24号、27号位点所有个体都发生了甲基化。

ECHS1基因在肝癌细胞迁移、侵袭及预后中的作用

目的探讨烯脂酰辅酶A水合酶短链1(Enoyl coenzyme A hydratase short chain 1,ECHS1)基因在肝癌细胞迁移及侵袭中的作用。方法利用基因芯片技术筛选并分析肝癌差异表达基因;构建ECHS1干扰及过表达质粒检测对肝癌细胞迁移和侵袭的影响。利用TCGA数据库分析肝癌组织中ECHS1基因表达及其对预后影响。结果肝癌显著差异表达基因214条,其中ECHS1表达最为显著;干扰ECHS1基因表达对肝癌细胞迁移、侵袭有显著抑制作用,ECHS1基因过表达后增强肝癌细胞迁移能力和侵袭能力;TCGA数据库分析显示较癌旁组织而言,肝癌组织中ECHS1高表达,且表达水平与肝癌预后相关。结论ECHS1基因促进肝癌迁移和侵袭并可作为预后标志物。

ECHS1经线粒体途径调控HepG2细胞凋亡

目的:观察烯脂酰辅酶A水合酶短链1(enoyl-CoA hydratase short chain 1,ECHS1)对HepG2细胞凋亡的影响。方法:构建ECHS1基因的干扰质粒,转染HepG2细胞后通过嘌呤霉素筛选稳定干扰ECHS1的细胞株(HepG2-siECHS1),利用Western blot验证其干扰效率;利用流式细胞仪及TUNEL方法检测ECHS1干扰后HepG2细胞凋亡情况,再采用Western blot检测凋亡相关蛋白表达水平。结果:成功构建了ECHS1的干扰质粒;Western blot验证了ECHS1干扰后HepG2细胞株中ECHS1表达低于空白对照组(未转染HepG2细胞)及阴性对照组(空载体pU6转染HepG2细胞)(P<0.05);流式细胞仪术显示HepG2-siECHS1组细胞株凋亡率(14.98±1.07)%,阴性对照组(10.55±0.19)%,两者差异有统计学意义(P<0.05);TUNEL实验显示HepG2-siECHS1组细胞株凋亡率(6.13±0.12)%,阴性对照组(2.89±0.21)%,两者差异有统计学意义(P<0.05);与阴性对照组比较,ECHS1干扰后p53、促凋亡蛋白Bax及Bid均表达增加。结论:ECHS1通过线粒体途径拮抗HepG2细胞凋亡。

ECHS1的表达异常与临床的关系

烯脂酰辅酶A水合酶短链1（ECHS1）是催化脂肪陵分解代谢β氧化第二步的关键酶，主要位于线粘体胞质内。研究发现其表达异常与代谢性疾病有关，其至与炎症性肠病及恶性肿瘤的发生、发展父系密切，现对其生物学特性及功能作一综述。

车叶草苷对少弱精症大鼠抗氧化应激及抗细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨车叶草苷(ASP)对少弱精症大鼠抗氧化应激及抗细胞凋亡的作用机制。方法:通过灌胃奥硝唑建立少弱精症大鼠模型,将SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、车叶草苷组(60 mg/kg)和通路抑制剂(第3周腹腔注射2 mg/kg)+车叶草苷组,每组10只。检测大鼠精子参数;酶联免疫吸附试验法检测血清丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;实时萤光定量聚合酶链式反应法检测睾丸组织B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(Bax)和核因子E2相关因子2(Nrf2)基因水平;蛋白质免疫印迹法检测睾丸组织Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、Nrf2和血红素加氧酶1(HO-1)水平。结果:与对照组比较,模型组精子活力、精子浓度、GSH-Px、GSH、SOD、Bcl-2、Keap1、Nrf2、HO-1水平下降(P<0.05),MDA和Bax水平上升(P<0.05);与模型组比较,车叶草苷组精子活力、精子浓度、GSH-Px、GSH、SOD、Bcl-2、Keap1、Nrf2、HO-1水平上升(P<0.05),MDA和Bax水平下降(P<0.05)。结论:ASP能有效改善少弱精症大鼠精子活力、精子浓度,减少睾丸组织细胞的凋亡,改善氧化应激损伤,Keap1/Nrf2信号通路的激活可能是其作用机制。

ECHS1基因突变相关线粒体病研究进展

线粒体短链烯酰辅酶A水合酶1是由核基因编码,其编码基因烯酰CoA水合酶(ECHS1)突变会导致短链烯酰辅酶A水合酶-1缺乏症(mitochondrial short-chain enoyl-CoA hydratase-1 deficiency,ECHS1D,OMIM:616277),从而导致缬氨酸和脂肪酸的代谢障碍。该病通常在新生儿或婴儿期起病,多在儿童期死亡。其主要临床表现为严重精神运动发育迟缓、癫痫、神经退行性病变、肌张力障碍、呼吸功能不全、代谢性酸中毒、喂养困难等。头颅磁共振成像(MRI)具有与Leigh综合征类似的影像学特点。

ECHS1基因突变致线粒体短链烯酰CoA水合酶1缺乏症1例

对重庆医科大学附属儿童医院诊治的1例ECHS1基因突变致线粒体短链烯酰CoA水合酶1缺乏症患儿的临床资料及相关文献进行回顾性分析。患儿,男,3个月28 d,病史特点:哭吵、惊厥发作;查体:竖颈不稳,双侧巴氏征引出。血乳酸增高。头颅核磁共振提示双侧基底核区对称性病变。基因检查示患儿ECHS1基因复合杂合突变:c.796A>G(p.T266A)和c.463G>A(pG155S),结合患儿病史推测此为致病基因。故幼儿期有肌张力异常、运动发育迟缓或倒退、痉挛、乳酸增高、头颅磁共振成像示基底核区异常低密度影,病因未明时,应考虑到线粒体方面的疾病。

血清Nrf2、Keap1水平变化与糖尿病视网膜病变分期间关系

目的探讨血清单核细胞核因子E2相关因子(Nrf2)、Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)水平变化与糖尿病视网膜病变(DR)分期间关系。方法选取2020年4月—2023年2月如皋市中医院DR患者147例作为观察组,并根据DR分期分为非增生型糖尿病视网膜病变(NPDR)、增生型糖尿病视网膜病变(PDR);另选取同期糖尿病无视网膜病变患者49例作为对照Ⅰ组,健康体检者49例作为对照Ⅱ组。对比3组及观察组不同DR分期患者血清Nrf2、Keap1水平,Spearman秩相关系数分析血清Nrf2、Keap1水平与DR分期间关系;多因素logistic回归分析血清Nrf2、Keap1水平对DR分期的影响;限制性立方样条图分析血清Nrf2、Keap1水平与DR分期的剂量-效应关系。结果观察组血清Nrf2水平低于对照Ⅰ组、对照Ⅱ组,Keap1水平高于对照Ⅰ组、对照Ⅱ组,对照Ⅰ组血清Nrf2水平低于对照Ⅱ组,Keap1水平高于对照Ⅱ组(P<0.05);随DR分期增加,血清Nrf2水平呈降低趋势,血清Keap1水平呈升高趋势(P<0.05);血清Nrf2水平与DR分期呈负相关(r=-0.806,P<0.001),血清Keap1水平与DR分期呈正相关(r=0.854,P<0.001);经多因素logistic回归分析,高血压、糖尿病发病年龄、总胆固醇对DR分期无显著影响(P>0.05),血清Nrf2水平是DR分期的独立保护因素,高脂血症、糖尿病病程、空腹血糖、糖化血红蛋白、血清Keap1水平是DR分期的独立危险因素(P<0.05);限制性立方样条图分析显示,血清Nrf2(χ^(2)=11.800,P<0.001)、Keap1(χ^(2)=8.401,P=0.015)水平与DR分期间存在非线性关系,控制其他病变为固定变量,血清Nrf2水平<1.70μg/L、血清Keap1水平>3.00μg/L时,PDR风险显著增加。结论血清Nrf2、Keap1水平变化与DR分期关系密切,血清Nrf2水平<1.70μg/L、血清Keap1水平>3.00μg/L时提示DR进展至PDR的风险显著增加。

胺碘酮通过激活Keap1/Nrf2通路减轻大鼠心脏缺血再灌注损伤

目的探讨胺碘酮对心肌缺血大鼠的治疗作用及机制。方法SD大鼠被随机分为对照组、缺血再灌注(ischemia-reperfusion,IR)组、胺碘酮+IR组,每组8只,采用左冠状动脉前降支夹闭构建心肌IR损伤模型。TTC染色检测梗死心肌面积、苏木素伊红(hematoxylin eosin,HE)染色检测心肌组织病理变化;测定大鼠心脏功能;测定大鼠血清心肌损伤标志物[肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)、乳酸脱氢酶(lactate dehy⁃drogenase,LDH)、肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponinⅠ,cTnI)]及氧化应激指标[丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)];蛋白免疫印迹(Western blot,WB)测定Kelch样ECH关联蛋白1(Kelch like ECH associated protein 1,Keap1)、核因子E2相关因子2(nuclear factor ery⁃throid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、SOD、醌氧化还原酶[NAD(P)H:quinine oxidoreductase 1,NQO1]的蛋白表达浓度;实时聚合酶链反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)测定HO-1、SOD、NQO1的mRNA表达水平。结果与对照组比较,IR组大鼠心肌出现明显梗死、心肌组织呈明显病理损伤,胺碘酮+IR组心肌梗死面积明显减少、心肌损伤明显改善;胺碘酮+IR组大鼠心功能、血清CK-MB、LDH、cTnI浓度明显低于IR组,差异有统计学意义(P<0.05);胺碘酮+IR组大鼠心肌细胞活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)、血清MDA浓度明显低于IR组,而血清GSH、SOD浓度明显高于IR组,差异均有统计学意义(P<0.05);与IR组相比较,胺碘酮+IR组大鼠Nrf2明显升高、Keap1明显下降;胺碘酮+IR组大鼠HO-1、SOD2、NQO1的mRNA、蛋白表达均明显高于IR组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论胺碘酮对心肌IR损伤大鼠具有保护作用,其机制可能与激活Keap1/Nrf2通路抑制氧化应激反应相关。

苦参总黄酮对醋酸铅诱导小鼠睾丸间质细胞氧化应激的改善作用及对Keap1/Nrf2信号通路的影响

目的:观察苦参总黄酮(SF)对醋酸铅(LA)诱导的小鼠睾丸间质细胞TM3氧化应激的改善作用及其对KELCH状ECH相关蛋白1(Keap1)/细胞中核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响,探讨SF改善由LA诱导的TM3细胞氧化应激的相关作用机制。方法:利用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度(0、10、20、50和80µmol·L^(-1))LA和不同浓度(0、12.5、25.0、50.0和80.0 mg·L^(-1))SF分别干预24 h后的TM3细胞存活率;将TM3细胞随机分为空白对照组、LA组、LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组。除空白对照组外,其他各组均采用50µmol·L^(-1)LA诱导TM3细胞24 h建立TM3细胞氧化应激模型,其中LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组TM3细胞再分别给予12.5、25.0和50.0 mg·L^(-1)SF。利用MTT法检测TM3细胞存活率;WST-1法和硫代巴比妥酸(TBA)法检测TM3细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;Western blotting法检测Nrf2、Keap1和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)蛋白表达水平。结果:MTT法检测,与0µmol·L^(-1)LA组比较,10、20、50和80µmol·L^(-1)LA组TM3细胞存活率明显降低(P<0.01);与0 mg·L^(-1)SF组比较,12.5、25.0、50.0和80.0 mg·L^(-1)SF组TM3细胞存活率明显降低(P<0.05或P<0.01);与LA组比较,LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组TM3细胞存活率明显升高(P<0.01);WST-1法和TBA法检测,与LA组比较,LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组TM3细胞中SOD活性明显升高(P<0.01),MDA水平明显降低(P<0.01);Western blotting法检测,与LA组比较,LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组TM3细胞中Nrf2蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Keap1和Caspase-9蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:SF对LA诱导TM3细胞氧化应激具有一定改善作用,并可降低TM3细胞中Keap1蛋白表达水平,升高TM3细胞中Nrf2蛋白表达水平。

葡萄籽原花青素提取物预灌胃对造影剂诱导糖尿病大鼠急性肾损伤的预防作用观察

目的观察葡萄籽原花青素提取物预灌胃对造影剂诱导糖尿病大鼠急性肾损伤的预防作用,并探讨可能作用机制。方法50只SD肥胖大鼠,腹腔注射1%链脲佐菌素(40 mg/kg),41只成功建成糖尿病大鼠模型,随机分为DM组8只、CM组9只、葡萄籽原花青素提取物低剂量组8只、中剂量组8只、高剂量组8只,另取10只肥胖大鼠为空白对照组(NC组),1 mL/kg腹腔注射柠檬酸缓冲液;低、中、高剂量组大鼠每日分别用50、250、500 mg/kg的葡萄籽原花青素提取物灌胃1次,连续3天,第3天灌胃24 h时尾静脉注射碘海醇(1.8 g I/kg);NC组、DM组、CM组大鼠每日用10 mL/kg生理盐水灌胃1次,第3天灌胃24 h时,NC组、DM组尾静脉注射5 ml/kg生理盐水;CM组尾静脉注射碘海醇(1.8 g I/kg)。末次给药48 h时各组大鼠断尾采血,检测血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN),采血后处死各组大鼠,取肾组织检测肾组织氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),采用原位缺口末端标记法测算各组大鼠肾小管上皮细胞凋亡指数,采用Western Blotting法检测各组大鼠肾组织核因子E2相关因子2(Nrf2)-Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)通路相关醌氧化还原酶1(NQO1)、血红素单加氧酶-1(HO-1)、Nrf2、Keap1蛋白。结果与NC组比较,CM组及低剂量组血清SCr、BUN水平高(P均<0.05)。与CM组比较,NC组、DM组、低中高剂量组血清SCr、BUN水平低(P均<0.05);与低剂量组比较,中、高剂量组大鼠血清SCr、BUN水平低(P均<0.05)。与NC组比较,DM组、CM组、低中剂量组肾组织匀浆SOD水平低,DM组、CM组及低剂量组肾组织匀浆MDA水平高(P均<0.05)。与CM组比较,DM组、低中高剂量组肾组织匀浆组SOD水平高、MDA水平低(P均<0.05)。与CM组比较,中、高剂量组大鼠肾小管上皮细胞凋亡指数小(P均<0.05)。与NC组比较,CM组大鼠肾组织Nrf2、HO-1及NQO1蛋白相对表达量低,中高剂量组大鼠肾组织Nrf2、HO-1及NQO1蛋白相对表达量高(P均<0.05);与CM组比较,低中高剂量组大鼠肾组织Nrf2、HO-1及NQO1蛋白相对表达量高(P均<0.05);与中剂量组比较,低剂量组大鼠肾组织Nrf2、HO-1及NQO1蛋白相对表达量低(P均<0.05)。结论葡萄籽原花青素提取物可改善尾静脉注射造影剂糖尿病大鼠的肾损伤程度,且500 mg/kg时效果最好。葡萄籽原花青素提取物可能通过激活Nrf2—Keap1信号通路,预防造影剂诱导的糖尿病大鼠的急性肾损伤。

嗅三针对血管性痴呆大鼠海马CA1区损伤及Keap1/Nrf2/ARE信号通路关键蛋白的影响

目的:观察嗅三针对血管性痴呆(VD)大鼠行为学、海马组织病理形态、Keap1/Nrf2/ARE信号通路关键蛋白的影响。方法:60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、嗅三针组、抑制剂组,每组15只。采用双侧颈总动脉结扎术建立VD模型。嗅三针给予带电干预。采用Morris水迷宫检测大鼠行为学变化,HE染色检测海马CA1区组织形态变化,免疫荧光法检测海马CA1区Nrf2蛋白表达情况,Western blotting检测HO-1、NQO1蛋白表达情况。结果:模型组、抑制剂组大鼠寻找目标平台游泳的距离明显大于假手术组、嗅三针组。空间探索试验结果中,假手术组、嗅三针组穿越平台区次数、平台区游泳距离明显多于模型组、抑制剂组。模型组病理形态中细胞排列紊乱,坏死数量多于假手术组。嗅三针组海马区病理形态的细胞形态清晰、排列整齐,优于模型组。抑制剂组海马区细胞排列不齐,数目少于嗅三针组;嗅三针组Nrf2蛋白表达高于模型组、抑制剂组。嗅三针组大鼠海马组织HO-1、NQO1表达高于模型组、抑制剂组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:嗅三针能够改善VD大鼠认知障碍,减少海马损伤,通过激活Nrf2,调节HO-1、NQO1蛋白表达,发挥对抗氧化应激作用。

Keap1/Nrf2/ARE信号通路调控脑出血后氧化应激的研究进展

脑出血是一种常见的、严重的脑卒中亚型,具有较高的发病率和死亡率,多数患者伴有不同程度的神经功能障碍,给全球带来了重大的健康和社会经济问题。脑出血急性期所诱发的氧化应激可引起机体发生氧化应激损伤,是引起继发性脑损伤的关键因素。研究表明,Keap1/Nrf2/ARE通路是最重要的抗氧化应激通路,该通路被激活后,可促进抗氧化应激酶的表达,从而减轻氧化应激损伤。现就Keap1/Nrf2/ARE通路改善脑出血后氧化应激损伤的研究进展进行综述,旨在为临床治疗脑出血患者提供新的治疗思路和客观依据。

基于Keap1/Nrf2信号通路探讨丹葛解酲汤对酒精性肝病大鼠模型的作用机制

目的 观察丹葛解酲汤对酒精性肝病(ALD)大鼠模型的治疗作用,探讨丹葛解酲汤抗氧化应激的作用机制。方法 将96只SD大鼠随机分为空白组(n=13)和ALD组(n=83),ALD组采用白酒灌胃法建立ALD模型。随后将存活ALD组大鼠随机分为模型组、丹葛解酲汤高剂量组(24 g/kg)、丹葛解酲汤低剂量组(6 g/kg)及益肝灵片组(21 mg/kg),每组各17只,空白组和模型组给予生理盐水灌胃,其余组分别灌胃给予相应的药物,共干预4周。采用HE染色法观察大鼠肝组织的病理变化;Western Blot法检测肝脏组织Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)的蛋白含量;实时荧光定量PCR检测肝组织Keap1、HO-1 mRNA表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与空白组相比,模型组肝细胞排列紊乱,出现肝细胞坏死,有大量炎性细胞浸润,并伴有大量的脂滴空泡;Keap1蛋白、Keap1 mRNA表达水平均明显上升(P值均<0.05),Nrf2蛋白、HO-1蛋白、HO-1 mRNA表达水平均明显下降(P值均<0.05)。与模型组相比,丹葛解酲汤高剂量组、丹葛解酲汤低剂量组及益肝灵片组肝细胞排列变整齐,坏死及炎性细胞减少,偶见或无脂滴空泡;Keap1蛋白、Keap1 mRNA表达水平显著降低(P值均<0.05),Nrf2蛋白、HO-1蛋白、HO-1 mRNA表达水平显著上升(P值均<0.05)。结论 丹葛解酲汤可能通过调节Keap1/Nrf2信号通路,促使Nrf2入核,上调HO-1的表达,减轻氧化应激反应,进而对ALD大鼠发挥保护作用。

CircECH1通过充当miR-365-5p海绵抑制猪前体脂肪细胞增殖

环状RNA(circRNA)是一种共价封闭RNA,在脂肪发育过程中具有重要作用。本研究旨在探讨猪环状RNA ECH1(circECH1)对前体脂肪细胞增殖的调控机制。本研究通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析、Sanger测序和RNase R酶消化法成功鉴定circECH1的稳定环状结构,其在马身猪各个组织中均有表达,并且其在脂肪组织中的表达量随日龄增加呈上升趋势。功能研究证明,干扰circECH1后,增殖相关基因PCNA、CDK1和MKi67极显著升高(P<0.01),增殖细胞数量极显著增加(P<0.01)。为进一步探究其分子机制,使用miRDB、miRWalk和RNAhybrid预测circECH1的下游靶基因。通过双荧光素酶报告基因分析和RNA结合蛋白免疫沉淀技术,验证circECH1能靶向结合miR-365-5p。在猪前体脂肪细胞中过表达miR-365-5p会增殖相关基因PCNA和CDK1的表达量极显著升高(P<0.01),增殖细胞数量极显著增加(P<0.01);干扰miR-365-5p后增殖相关基因PCNA、CDK1和MKi67的表达量极显著降低(P<0.01),增殖细胞数量极显著增加(P<0.01)。挽救实验结果显示,共转染si-circECH1和miR-365-5p inhibitor与单独转染miR-365-5p inhibitor相比,增殖相关基因PCNA、CDK1和MKi67的表达量显著升高(P<0.01),增殖细胞数量显著升高。本研究结果证明,circECH1存在于马身猪的脂肪组织中,并且通过海绵吸附miR-365-5p调控猪前体脂肪细胞增殖,为进一步了解调控猪前体脂肪细胞的分子机制提供理论依据。

基于Nrf2/Keap1通路探讨柴贝止痫汤对海人酸致痫大鼠的神经保护作用机制

目的探讨柴贝止痫汤对海人酸致痫大鼠氧化应激反应及核因子E2相关因子2(Nrf2)/Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)信号通路的影响。方法雄性Wistar大鼠30只,随机取10只作为假手术组,余20只采用海人酸侧脑室注射方法建立慢性复发性癫痫模型。将造模成功的大鼠随机分为癫痫组及柴贝止痫汤组各8只,柴贝止痫汤组大鼠给予柴贝止痫汤8.48 g/kg灌胃,假手术组和癫痫组大鼠给予生理盐水灌胃,均1次/d,连续8周。采用Morris水迷宫行为学实验评估大鼠空间学习及记忆能力,试剂盒检测血清丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,HE染色观察海马组织病理形态,Western blot法检测海马组织中Nrf2及Keap1蛋白表达情况。结果与假手术组比较,癫痫组大鼠定位航行实验逃避潜伏期明显延长(P<0.05);空间探索实验中总路程明显延长(P<0.05),平台区域路程及平台象限停留时间均明显缩短(P均<0.05),穿越平台次数明显减少(P<0.05);血清MDA含量明显升高(P<0.05),血清SOD及CAT活性均明显降低(P均<0.05);HE染色显示大鼠脑组织结构重度异常,海马CA1、CA3及DG区可见大量神经元变性,固缩深染,神经元纤维缠结;海马组织中Keap1蛋白表达量明显增加(P<0.05),Nrf2蛋白表达量明显降低(P<0.05)。与癫痫组比较,柴贝止痫汤组大鼠逃避潜伏期和总路程均明显缩短(P均<0.05),平台区域路程及平台象限停留时间均明显延长(P均<0.05),穿越平台次数明显增加(P<0.05);血清MDA含量明显降低(P<0.05),SOD及CAT活性均明显增高(P均<0.05);HE染色显示大鼠脑组织结构轻度异常,可见少量神经元变性,固缩深染,个别神经元纤维缠结现象;海马组织中Keap1蛋白表达量明显降低(P<0.05),Nrf2蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论柴贝止痫汤可改善海人酸致痫大鼠空间学习及记忆能力,保护神经元细胞,作用机制可能与激活Nrf2/Keap1信号通路,抑制氧化应激反应有关。

青藤碱激活Keap1/Nrf2信号通路抑制氧化应激和肺纤维化

目的:探讨青藤碱(SIN)对氧化应激损伤、肺纤维化的保护作用及与Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)信号通路的关系。方法:通过过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导MRC-5细胞建立氧化应激损伤模型,并予SIN处理,采用CCK-8法检测细胞活力,生化试剂盒检测丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性,Western blot检测Keap1、Nrf2蛋白表达。将30只SD大鼠随机分为对照组、博莱霉素A5(BLM)组和BLM+SIN组,每组包含10只动物,BLM组、BLM+SIN组气管内注射BLM建立大鼠肺纤维化模型,对照组气管内注射等体积9 g/L氯化钠溶液,造模后次日,BLM+SIN组以SIN灌胃,其余两组给予9 g/L氯化钠溶液灌胃,第28天处死大鼠,分离肺组织,通过HE和Masson染色观察肺组织病理学改变,测定肺组织MDA含量及SOD、GSH-Px、CAT活性,Western blot检测Keap1、Nrf2蛋白表达。结果:相对于H_(2)O_(2)组,SIN干预后MRC-5细胞活力增加,MDA含量降低,SOD、GSH-Px和CAT活性升高,下调Keap1表达,促进Nrf2核移位。与BLM组相比,SIN给药降低大鼠肺泡炎、肺纤维化病变和评分及肺组织MDA含量,增加肺组织SOD、GSH-Px和CAT活性,下调肺组织Keap1表达,升高胞核Nrf2水平。结论:SIN可能通过激活Keap1/Nrf2信号通路抑制氧化应激损伤,减轻大鼠肺纤维化。