ecp基因簇在路德维希肠杆菌AA4定殖松材线虫中的功能研究

松材线虫病生防细菌路德维希肠杆菌EnterobacterludwigiiAA4能够有效地定殖并杀死松材线虫。大肠杆菌共有型菌毛(Escherichia coli common pilus,ECP)在动植物共生与病原细菌中普遍存在,能够通过增强细菌与宿主细胞之间及生物膜群落中细菌之间的相互作用,提高共生与病原细菌的定殖能力。大肠杆菌共有型菌毛由ecp基因簇编码。为了探究ecp基因簇在菌株AA4定殖松材线虫中的功能,本研究通过BLAST比对分析,鉴定了菌株AA4中的ecp基因簇;利用Red重组技术构建了菌株AA4的ecp基因簇缺失突变体,并对上述突变体定殖松材线虫的能力与定殖相关表型进行了分析。研究结果表明,ecp基因簇缺失突变体菌毛装配能力显著减弱,运动性、生物膜形成能力以及在松材线虫上的定殖能力显著降低。因此,AA4的ecp基因簇可能通过调节菌毛装配,影响其运动性与生物膜形成能力,进而实现对菌株AA4定殖松材线虫的调控。上述研究结果将为揭示松材线虫病生防路德维希肠杆菌AA4定殖松材线虫的分子机制奠定理论基础,为松材线虫病生防微生物制剂的研发与高效应用提供科学依据。

射干麻黄汤加味联合孟鲁司特钠治疗儿童咳嗽变异性哮喘的疗效观察及对EOS和血清ECP、IgE、LTC4的影响

目的:观察射干麻黄汤加味联合孟鲁司特钠咀嚼片治疗儿童咳嗽变异性哮喘(CVA)的疗效及其对外周血EOS(嗜酸性粒细胞)和血清ECP(嗜酸性粒细胞阳离子蛋白)、IgE(免疫球蛋白E)、LTC4(白三烯C4)的影响。方法:78例CVA患儿随机分为孟鲁司特钠治疗对照组和射干麻黄汤加味联合孟鲁司特钠治疗观察组,每组39例。2组患儿均治疗30 d评价疗效,对治疗前后主症、次症进行严重程度评分,检测外周血EOS计数和血清ECP、IgE、LTC4(ELISA)水平。结果:治疗30 d后,2组患儿主症(咳嗽)和次症(咯痰清稀、喷嚏、鼻塞、流清涕、咽痒)评分均降低(P<0.05),观察组治疗后主、次症评分低于对照组(P<0.05);观察组总有效率(92.3%)高于对照组(79.5%)(P<0.05)。治疗后2组患儿外周血EOS计数明显减少(P<0.05),血清ECP、IgE、LTC4水平显著下降(P<0.05或0.01);观察组上述指标减少或下降较对照组明显(P<0.05或0.01)。结论:射干麻黄汤加味可提高孟鲁司特钠治疗儿童咳嗽变异性哮喘的临床疗效,有助于减少EOS数量及其释放的毒性物质ECP,降低气道高反应性,抑制气道炎症。

支气管哮喘血清IgE和ECP的水平及相关性分析

目的 探讨支气管哮喘血清IgE和ECP的水平 ,并分析IgE和ECP的相关性。方法 对象为 5 4例支气管哮喘患者和 2 0例健康正常人 ,采用酶联免疫法测定其血清IgE和ECP的水平。结果 支气管哮喘血清TIgE和ECP水平明显高于正常对照组 (P <0 .0 1) ;血清中TIgE含量与屋尘螨SIgE水平存在直线相关 (r =0 .2 96 ,P <0 .0 5 ) ;血清中的TIgE与ECP和屋尘螨SIgE与ECP之间并无明显相关性。结论 屋尘螨是引起支气管哮喘的重要变应原 ;血清TIgE和SIgE与ECP均无相关 ,初步解释为IgE表示患者变应体质的水平 ,但不能反映气道炎症的病理过程 ;而ECP水平可以客观地反映变应性哮喘患者体内炎性细胞激活的程度 ,可作为哮喘气道炎症监测的指标。

中药咳喘落对实验性哮喘豚鼠ECP和sICAM-1的影响

目的 探讨中药咳喘落对哮喘豚鼠可溶性细胞间粘附分子 -1(sICAM -1)、嗜酸性粒细胞及其脱颗粒产物嗜酸性粒细胞阳离子蛋白 (ECP)等的影响 ,阐明咳喘落治疗哮喘抗气道变应性炎症的作用机制。方法 采用荧光酶标记法、双抗体夹心ELISA法和密度梯度细胞分离法分别测定了哮喘豚鼠血浆中ECP ,sICAM -1的含量和肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞分类计数。结果 哮喘豚鼠血浆中ECP ,sICAM -1的含量以及肺泡灌洗液中细胞总数和低密度嗜酸性粒细胞数均显著高于正常组 (P <0 .0 1) ,经咳喘落和地塞米松治疗后显著下降 (P <0 .0 1) ,接近正常水平 (P >0 .0 5 )。结论 咳喘落通过调节白细胞介素 -5的水平 ,抑制嗜酸性粒细胞在气道内募集及其毒性颗粒蛋白的释放 ,从而发挥它抗气道变应性炎症的作用。

哮喘患儿血清IL-5、ECP的测定及相关性研究

为了探讨白介素_5(IL_5)、嗜酸粒细胞阳离子蛋白 (ECP)在儿童支气管哮喘发病机制中的作用 ,并评价其反映哮喘气道炎症的临床价值 ,收集23例哮喘急性发作患儿、22例哮喘缓解期患儿及17例正常儿童的外周血标本 ,用ELISA法测定血清IL_5的水平 ;以PharmaciaCAP系统检测血清中ECP的含量。结果 :哮喘急性发作组血清中IL_5、ECP水平明显高于缓解期组和正常组 ;且IL_5、ECP水平的升高程度与病情严重程度相关 ,两者之间呈正相关 ;而3组EOS计数差异无显著性。提示 :监测血清IL_5、ECP的动态变化 ,可以较好地反映气道嗜酸粒细胞炎症的反应过程 。

慢性阻塞性肺疾病急性加重期治疗前后诱导痰细胞分类、血ECP变化的临床分析

目的比较慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)及治疗后诱导痰细胞分类、血嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)的变化,探讨其在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道炎症中的作用。方法收集2011年6月至2012年8月住院的95例AECOPD患者,在入院当天和治疗7天后分别通过改良的诱导痰技术诱导痰标本进行细胞分类计数和抽血留取血标本通过荧光酶免疫法测定血ECP。结果在慢性阻塞性肺疾病急性加重期,中性粒细胞和嗜酸性粒细胞比例明显高于健康人群。经治疗后中性粒细胞比例下降、巨噬细胞比例上升(P=0.00<0.05),而嗜酸性粒细胞比例、血ECP略有下降,但差异无显著性(P>0.05)。结论中性粒细胞在慢性阻塞性肺疾病急性加重期明显升高,随病情缓解而降低,嗜酸性粒细胞和血ECP并不随病情缓解而降低。提示嗜酸性粒细胞主要参与慢性阻塞性肺疾病慢性炎症过程,可能与急性加重无明显相关;中性粒细胞除参与慢性阻塞性肺疾病慢性炎症外,还与急性加重期感染有关。

全橡胶ECP在阶梯式水平井完井固井中的应用

为了开采复杂油藏,采用了阶梯式水平井完井方式。阶梯式水平井完井工艺要求阶梯注水泥封固油、水层和阶梯筛管完井,而普通管外封隔器(ECP)不能应用于水平井的选择性完井。通过改进封隔器结构、选用压差式分级箍和自动灌浆单向阀,调整不同压力级别,选择和改进套管工具附件,完善筛管顶部注水泥工艺,取得了特殊完井固井成功,满足了选择性完井和多方式开采的需要,也解决了阶梯式水平井完井底部低压易漏油层水泥浆污染和水泥浆固死筛管问题。可以进一步推广应用到其他油田复杂油藏的开发中。

支气管激发试验、FeNO及诱导痰ECP在哮喘中的相关性及FeNO、诱导痰ECP诊断价值

目的 探讨哮喘患者中支气管激发试验、FeNO、诱导痰中的ECP相关性及FeNO、ECP诊断哮喘的临床价值。方法 收集2014年2月至2016年2月我院疑似支气管哮喘患者160例（最终诊断哮喘92例,非哮喘68例）,测定诱导痰嗜酸性粒细胞阳离子蛋白、呼出气一氧化氮水平,行肺通气功能、支气管激发试验检查。结果 FeNO水平与诱导痰ECP呈正相关（r=0.669,P=0.000）;FeNO水平与支气管激发定量试验呈负相关（r=-0.759,P=0.000）;诱导痰ECP与支气管激发定量试验呈负相关（r=-0.909,P=0.000）。通过ROC曲线分别评价FeNO、诱导痰ECP诊断支气管哮喘的价值,其约登指数的最大值分别为：59.1%、76.0%,最佳截断值分别为：42.2ppb、98.05μg/l,灵敏度分别为82.6%、84.8%,特异度分别为76.5%、91.2%,阳性预测值分别为82.6%（95%CI73.3%-89.7%）、92.9%（95%CI85.1%-97.3%）,阴性预测值分别为：76.5%（95%CI64.6%-85.9%）、81.6%（95%CI71.0%-89.5%）,曲线下面积分别为0.850、0.956（P〈0.05）。结论 哮喘患者中,支气管激发试验、FeNO、诱导痰ECP水平有显著相关性。支气管激发试验是公认的哮喘诊断的客观依据,FeNO、诱导痰ECP两者对哮喘的诊断均有较高价值,且诱导痰ECP诊断哮喘的价值优于FeNO,可作为哮喘诊断的重要辅助工具,但需要注意两者尚有临床局限性。

中医分期辨治对咳嗽变异性哮喘患儿血清IgE及ECP的影响

目的观察中医分期辨治对咳嗽变异性哮喘(CVA)患儿血清免疫球蛋白E(IgE)和嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)水平的影响,并探讨IgE和ECP检测的临床意义。方法将符合本研究标准的CVA患儿60例,随机分为治疗组和对照组各30例。治疗组(中药组)发作期给予温肺化痰饮,缓解期给予补肺健脾饮;对照组(西药组)服用孟鲁司特钠,发作期加服氨茶碱治疗。疗程3个月。观察治疗前后IgE和ECP的变化。结果治疗组血清IgE较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),且优于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);两组血清ECP水平较治疗前均有明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论中医分期治疗CVA患儿有较好的疗效,其作用机制可能与降低血清IgE与ECP有关。

基于“肺与大肠相表里”理论观察针刺对支气管哮喘患者外周血EOS、ECP的影响

目的基于"肺与大肠相表里"理论,通过针刺肺经和大肠经经穴,观察针刺对支气管哮喘患者外周血EOS、ECP的影响。方法采取随机数字表方法,将符合纳入标准的52例支气管哮喘慢性持续期中度患者按1:1:1:1的比例分入肺经穴组、大肠经穴组、肺大肠经穴组、对照组。对照组按需吸入硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂(万托林),每次1喷。肺经穴组、大肠经穴组和肺大肠经穴组在对照组的基础上针刺相应腧穴。观察治疗前后各组患者外周血EOS和ECP的变化。结果肺经穴组和肺大肠经穴组治疗后外周血EOS计数与同组治疗前比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。肺经穴组和肺大肠经穴组治疗后外周血EOS计数与对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。肺经穴组治疗后外周血EOS计数与大肠经穴组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。4组患者治疗后血清ECP与同组治疗前比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。肺经穴组、大肠经穴组、肺大肠经穴组治疗后血清ECP与对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论针刺肺经经穴、肺大肠经经穴均能降低外周血EOS计数和血清ECP水平,针刺大肠经经穴能降低血清ECP水平。

儿童慢性荨麻疹血清嗜酸细胞阳离子蛋白(ECP)和血清总IgE的检测及其意义

应用了 ECP FEI荧光酶标法检测了 32例典型慢性荨麻疹患儿及 13名正常儿童的血清嗜酸细胞阳离子蛋白 (ECP)值，同时还检测了患儿和正常儿童血清总 IgE值及外周血嗜酸粒细胞 (EOS)计数，并比较了它们之间的联系。结果显示：患儿血清 ECP值为 12.96± 9.72μ g/L、血清总 IgE值为 970.10± 312.61IU/mL，二者均明显高于正常对照组 (P< 0.05)；而患儿的血 EOS计数与正常儿童相比增高不明显 (P >0.05)。慢性荨麻疹患儿血清 ECP和血清总 IgE与外周血 EOS计数之间无相关性。提示儿童慢性荨麻疹中血清 ECP和血清总 IgE的变化可能较血 EOS计数变化更灵敏，更能反映 EOS的活化程度。

灭活卡介苗经皮接种治疗婴幼儿哮喘对IgE ECP IFN-γ IL-4水平的影响

目的 为进一步探讨灭活卡介苗治疗婴幼儿哮喘的免疫学作用机制 ,应用灭活卡介苗经皮接种 ,观察患儿机体IgE、嗜酸性细胞阳离子蛋白 (ECP)、IFN γ、IL 4的水平变化及改变程度。方法 将哮喘患儿随机分为常规治疗组 (常规组 )与灭活卡介苗治疗组 (卡介苗组 ) ,进行 6个月的治疗后 ,观察患儿在治疗前后的IgE ,ECP ,IL 4 ,IFN γ的变化 ,另设 2 0例正常儿童作为对照组。结果 ①治疗前卡介苗组和常规组IgE ,ECP与IL 4均高于对照组 ,IFN γ低于对照组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;卡介苗组与常规组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;②卡介苗组治疗后ECP与IL 4低于治疗前 ,IFN γ较治疗前有升高 ,其差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ,IL 4和IFN γ呈明显负相关 ,且IFN γ与IL 4的变化各自均有明显的线性关系。IgE在治疗前后无显著性差异 (P >0 .0 5 )。常规组治疗前后IgE ,ECP与IL 4水平差异无显著性 ,但IFN γ水平治疗后增加 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 灭活卡介苗治疗能刺激婴幼儿哮喘患儿IFN γ生成增多 ,下调IL 4水平 ,可能与干预治疗能诱导TH1细胞的优势分化 ,调节TH1 TH2平衡有关 ;同时 ,能降低ECP水平 ,减轻气道慢性炎症反应 ;但短期内对IgE水平未发现有显著影响。

过渡金属体系非线性光学性质计算的ECP基组研究

有效核势(ECP)方法是计算含有过渡金属体系的电子结构及物理性质的有效方法.本文比较了一系列典型的ECP基组对计算含过渡金属体系非线性光学性质精度的影响.分别在HF,MP2和DFT理论水平上对过渡金属元素使用不同的ECP基组,计算了几个过渡金属有机化合物的静态一阶超极化率β0.研究结果表明使用有效核势计算含过渡金属体系时,核电子的选取是提高计算精度的前提,ns和np电子应该和nd电子一同作为价电子处理;对于重原子,必须考虑自旋-轨道耦合相对论效应.经过综合评估,认为使用Stuttgart/Dresden赝势的ECP基组,MHF,在计算含有过渡金属体系非线性光学性质方面是比较好的基组;StuttgartRSC1997和SBKJCVDZ相对而言是较好的基组;基组Lanl2dz,Hay-WadtMB(n+1)和Hay-WadtVDZ(n+1)由于没有考虑自旋-轨道耦合,计算精确度次之;而基组CRENBL和CRENBS计算的偏差要大一些,尤其是CRENBS基组由于价电子选择得太少而导致与实验值的偏差最大.

支气管哮喘患儿血清ECP及IgE水平的测定及其临床意义

目的:探讨血清嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)和免疫球蛋白E(IgE)水平在儿童哮喘发病过程中的相关性及意义。方法:实验共对80名哮喘患儿及20名健康儿童血清ECP及IgE进行测定,将实验结果进行统计比较从而得出结论。结果:哮喘患儿发作期血清ECP水平明显高于稳定期、缓解期及健康儿童,三者间比较,差异均具有统计学意义(P<0.01);哮喘患儿发作期IgE水平高于缓解期和健康儿童,差异均具有统计学意义(P<0.01);但与稳定期比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ECP和IgE都可体现哮喘患儿的发病情况,但相比于IgE,ECP能更好地反映嗜酸性粒细胞的活化状态和气道炎症的发病情况。因此哮喘患儿血清ECP水平可作为诊断哮喘、判断病情发展状况及指导炎症治疗的可靠指标。

过敏性鼻炎患者血清SIgE和ECP水平的关系探讨

目的：分析过敏性鼻炎（ Ａ Ｒ） 患者血清特异性 Ｉｇ Ｅ（ Ｓ Ｉｇ Ｅ） 和嗜酸粒细胞阳离子蛋白（ Ｅ Ｃ Ｐ） 的关系。方法：采用荧光酶联法对３８ 例 Ａ Ｒ 患者进行吸入性过敏原过筛试验、 Ｓ Ｉｇ Ｅ 和血清 Ｅ Ｃ Ｐ 含量测定。结果：吸入性过敏原过筛试验阳性率为９４ ．７ ％ 。１０例对单一变应原有反应，２６ 例检出２ ～６ 种变应原（ 户尘螨、屋尘、普通豚草、蒿草、藜草和动物皮毛屑） 的 Ｓ Ｉｇ Ｅ，测定值为０ ．３５～６３ ．６ Ｋ Ｕ／ Ｌ，血清 Ｅ Ｃ Ｐ水平为２４ ．８７ ±１０ ．５５ μｇ／ Ｌ，健康对照组为９ ．９３ ±５ ．６２ μｇ／ Ｌ，两组有显著性差异（ Ｐ＜ ０ ．０１） 。临床观察， Ｓ Ｉｇ Ｅ 含量与患者症状及体征无明显相关性，但患者的咳喘程度与血清 Ｅ Ｃ Ｐ 的浓度有关，血清中 Ｓ Ｉｇ Ｅ 含量与 Ｅ Ｃ Ｐ浓度间相关性分析没有统计学意义（ｒ＝ ０ ．１０４７ ， Ｐ＞ ０ ．０５） 。结论：检查血清 Ｉｇ Ｅ 对过敏性鼻炎特异性病因诊断是非常重要的，也对该病病程发展和治疗监测有一定的参考意义。

ECP在完井固井工艺中的应用与分析

为保证固井质量,胜利油田在高压井、漏失井、复杂井、多套压力层系井的完井固井工艺中采用了套管外封隔器。在使用中,不断改进结构,并研制开发新型管外封隔器,改善了密封效果,满足了复杂油藏的开发和特殊工艺完井的需要。文中综述了应用情况,分析了存在的问题,针对更加复杂的油藏和多样的完井方式,提出了研究新型结构和特殊功能的封隔器的必要性,以满足老油田深层次开发完井固井的需要。

喘息性支气管炎与支气管哮喘儿童血清ECP检测的意义

本文分别测定了20例喘息性支气管炎(喘支)及20例支气管哮喘(哮喘)患儿血清中嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)的含量并与10例肺炎患儿作对照,结果提示:(1)哮喘患儿血清中ECP的水平明显高于肺炎患儿。(2)喘支及哮喘患儿血清中ECP的水平均明显升高,两者有一定的相关性。

温阳平喘颗粒对支气管哮喘患者血清、诱导痰嗜酸性粒细胞、嗜酸性细胞阳离子蛋白(ECP)、ACT评分的影响研究

目的观察温阳平喘颗粒对慢性持续期哮喘患者血清、诱导痰嗜酸性粒细胞(EOS)、嗜酸性细胞阳离子蛋白(ECP)、ACT评分的影响。方法 75例患者随机分为3组,各25例。中药组给予温阳平喘颗粒,联合组加用舒利迭,西药组吸入舒利迭治疗,3组疗程均为4周。结果联合组总有效率92.00%、中药组总有效率88.00%、西药组总有效率88.00%,3组总有效率差别不大(P>0.05)。治疗后联合组、中药组、西药组血清EOS均较治疗前下降(均P<0.01);联合组血清ECP水平较治疗前下降(P<0.01),而中药组、西药组血清ECP较治疗前差别不大(均P>0.05);治疗后各组血清EOS、ECP指标水平差别不大(均P>0.05)。治疗后3组痰液EOS、ECP指标较治疗前降低(P<0.01);治疗后联合组EOS、ECP降低程度优于西药组(P<0.05),联合组ECP指标高于中药组(P<0.05);中药组EOS指标改善优于西药组(P<0.05),ECP指标中药组与西药组比较无明显改善(P>0.05)。各组ACT评分较治疗前均改善(P<0.01),治疗后各组组间ACT评分比较,差别不大(P>0.05)。结论温阳平喘颗粒能减轻哮喘患者气道炎症和降低气道高反应性,其机制可能与抑制嗜酸性粒细胞、阳离子蛋白分泌有关。

果蝇中Ecp蛋白的表达、纯化与抗体制备

获得特异性抗Ecp多克隆抗体 ,为进一步研究ecp的功能奠定基础。利用特异引物 ,通过RT PCR扩增出编码Ecp蛋白的全长cDNA ,克隆至谷胱甘肽S转移酶融合蛋白表达载体pGEX 4T 1(His) 6C中 ,转染大肠杆菌DH5α,经诱导表达后 ,利用谷胱甘肽琼脂糖珠从细胞裂解物中特异吸附融合蛋白 ,经凝血酶裂解 ,释放出Ecp蛋白 ,再经Ni NTA亲和层析 ,最终获得高纯度的Ecp蛋白。用纯化的Ecp蛋白免疫新西兰家兔 ,亲和层析纯化抗Ecp抗体。利用该抗体进行的WesternBlot结果表明 :Ecp蛋白在野生型黑腹果蝇胚胎、三龄幼虫神经系统、成虫、成虫头部组织中均有明显表达 。

变应原特异性IgE抗体和ECP测定在哮喘中的意义

目的 通过对支气管哮喘患者变应原特异性IgE抗体和血清嗜酸粒细胞阳离子蛋白（eosinophilcationic protein,ECP）水平的测定,探讨其在哮喘发病中的作用。方法 应用 Pharmacia UniCAP系统测定48例支气管哮喘患者血清吸入性变应原特异性IgE抗体和ECP水平。结果 48例患者中变应原阳性者26例,占54.17％,阴性者22例,占45.83％;哮喘患者变应原阳性组ECP高于正常者的百分比明显高于阴性组。结论 支气管哮喘的发生中有相当一部分与吸入变应原有密切的关系;外源性哮喘患者血液中嗜酸粒细胞处于激活状态,易于释放蛋白颗粒。