独行菜eEF-1a基因片段分离克隆及RT-PCR分析

文章根据已知植物eEF-1a(编码Eukaryotic elongation factor1-alpha)基因的保守序列设计引物,采用RT-PCR的方法扩增独行菜(Lepidium apetalumWilld.)eEF-1a基因片段。结果获得一大小为570bp的基因片段,序列比对表明,该基因片段与拟南芥eEF-1a基因核苷酸序列的同源性达到95%,推测该其应该是独行菜eEF-1a基因片段。采用RT-PCR方法,对独行菜三个生长阶段材料及对应阶段冷诱导后地材料中的eEF-1a基因表达作了分析,表明eEF-1a在独行菜组织中表达稳定,可以作为实时荧光定量PCR研究独行菜基因表达分析中的看家基因。

mRNA差异显示技术分离羊草基因体外培养过程中特定基因及特性分析

羊草种质资源中储存着潜在的优良基因,本研究从分子生物学角度,对来自羊草基因型W4不同幼穗的愈伤组织中差异表达的基因进行了研究。采用DDRT-PCR技术对其差异表达的基因进行了分离,通过银染技术显示差异片段。将得到的差异片段进行回收、克隆测序,得到2个差异片段序列,经过序列分析表明,其中1个片段是与水稻翻译延伸因子eEF-1基因高度同源;另一差异片段与水稻谷胱甘肽转移酶GST基因高度同源。

与秀丽隐杆线虫氯离子通道CLH-1相互作用蛋白的构建:GFP-Trap技术和质谱分析(英文)

氯离子通道是一类分布广泛的阴离子选择性通道家族蛋白,在细胞容积维持、细胞质内pH调节、蛋白运输、细胞迁移、增殖及分化等重要生理过程中扮演着多种角色。然而,目前有关其功能调控研究较少。本研究构建了表达电压门控氯离子通道CLH-1融合绿色荧光蛋白(CLH-1::GFP)的转基因线虫。CLH-1::GFP主要表达在线虫头部神经元和身体后部肠道细胞中。利用最近发展起来的捕获GFP的GFP-Trap技术,从转基因线虫裂解液中捕获了可能调控氯离子通道CLH-1功能的相互作用蛋白。通过质谱鉴定,共有27个蛋白和CLH-1::GFP一起被捕获下来。生化实验显示其中真核生物延伸因子1(EEF-1)与CLH-1蛋白直接相互作用;并且,在和EEF-1共表达的情况下,CLH-1的蛋白水平显著上调。本结果表明利用线虫表达氯离子通道GFP融合蛋白,结合GFP-Trap和质谱分析技术,可以识别和电压门控氯离子通道相互作用蛋白,同时也表明EEF-1可以调控线虫CLH-1通道功能。