绵羊肺炎支原体延伸因子EF-P基因的克隆、表达及其重组蛋白免疫原性研究

为筛选绵羊肺炎支原体(MO)免疫相关蛋白,以MO新疆流行株基因组DNA为模板,通过PCR扩增其EF-P基因,测序后对其编码蛋白进行分子特征分析;用生物信息学软件预测其抗原表位集中区编码片段;进一步将该基因片段克隆入pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-32a(+)-EF-P,将pET-32a(+)-EF-P质粒转化至感受态细胞Escherichia coli BL21(DE3)中,IPTG诱导目的蛋白表达后,检测重组蛋白反应原性和免疫原性。SDS-PAGE结果显示,EF-P重组蛋白分子质量为29.5ku;Western blot结果显示,该重组蛋白可被MO阳性血清特异性识别,证实其具有良好的反应原性;小鼠免疫试验结果显示,该重组蛋白可诱导机体产生特异性抗体,采用正向间接血凝方法检测效价可达1∶64,提示其具有较强的免疫原性。

翻译延伸因子EF-P的结构和功能及其研究进展

EF-P(Elongation factor P)是普遍存在于细菌中的蛋白质翻译延伸因子,因其L型结构与t RNA类似,可挽救聚脯氨酸导致的翻译延宕,减缓核糖体的失速效应。EF-P虽然不是细菌生存的必需蛋白,但是对细菌自身的环境适应性以及一些致病菌的毒性维持至关重要。本文综述了细菌EF-P的结构、功能及其相关研究进展。

检测猪链球菌2型的胞外因子(EF)的PCR方法的建立

根据猪链球菌２型的ｅｆ基因和ｅｆ基因合成了一对可扩增长度为６２６ｂｐ目的片段的引物，成功地建立了检测胞外因子（ＥＦ）的 ＰＣＲ方法。用 Ｈａｅ Ⅱ内切酶进行酶切，获得了与预期一致的 ３５４ｂｐ和 ２７２ｂｐ的两个片段。并进行了 ＰＣＲ的特异性试验和敏感性试验。对马腺疫链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和猪肺炎支原体的ＰＣＲ检测结果均呈阴性；检测的敏感度可达１００个细菌。另外，对９株猪链球菌２型菌株进行了检测，７株呈ＥＦ阳性，１株呈ＥＦ阳性，１株呈ＥＦ阴性；对１５份正常屠宰猪扁桃体分离物的检测结果是１份为阳性。结果表明此法特异性和敏感性均很高，可作为ＥＦ快速诊断和流行病学调查的手段。

硬粒小麦-粗山羊草人工合成小麦的磷效率研究

为了挖掘磷高效种质资源、培育磷高效小麦品种,利用盆栽方法,设两个磷处理,以磷高效小麦品种长武134和磷低效小麦品种中国春为对照,研究了47份人工合成六倍体小麦(AABBDD)苗期的磷效率、磷吸收效率、磷利用效率的差异及评价指标。结果表明,SPAD值和地上部磷浓度不能作为评价人工合成小麦磷效率的指标,而低磷条件下幼苗的地上部干物质积累量、磷吸收效率与磷效率呈显著正相关。根据磷效率和地上部干物质积累量筛选出3份磷高效的人工合成小麦(SW23、SW24、SW26)。由本研究结果可知,粗山羊草包含与磷高效有关的基因,其与硬粒小麦杂交人工合成的小麦可作为育种材料和普通小麦杂交,进而选育磷高效小麦品种。

早期颅骨修补联合脑室腹腔分流治疗脑外伤的临床效果分析

目的分析探讨早期颅骨修补联合脑室腹腔分流治疗脑外伤的临床效果。方法方便选取2014年1月—2016年8月期间该院收治的141例脑外伤患者,采用随机数字表法分为观察组(n=70)和对照组(n=71)。对照组患者采用脑室腹腔分流联合后期颅骨修补术治疗,观察组患者脑室腹腔分流联合早期颅骨修补术治疗。分析比较两组患者的预后情况、不良反应情况、住院时间和患者治疗前后的神经功能缺损评分、格拉斯哥昏迷指数(GCS)评分。结果观察组患者的预后良好率高于对照组(40.00%、23.94%),致残率小于对照组(35.71%、54.93%),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组患者的神经功能缺损评分明显降低,GCS评分明显升高,观察组患者的住院时间短于对照组[(23.07±3.84)分、(30.30±3.57)分],神经功能缺损评分小于对照组[(14.35±2.75)分、(20.37±3.68)分],GCS评分大于对照组[(14.67±2.84)分、(10.49±2.52)分],差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的不良反应率低于对照组(12.86%,26.76%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论早期颅骨修补联合脑室腹腔分流治疗脑外伤能显著提高患者的治疗效果,改善患者的神经功能,安全性高。

醋柴胡不同部位对肝郁模型大鼠肝脏Na^+-K^+ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)ATP酶活性及P-糖蛋白mRNA表达的影响

目的:探讨醋柴胡不同提取部位治疗肝郁证的效果及可能机制。方法:SD大鼠随机分出空白组,其余夹尾制备肝郁模型。造模成功后给予醋柴胡不同部位提取液治疗3d,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆酸(TBA),肝脏组织的Na+-K+ATP酶、Ca2+-Mg2+ATP酶活性,RT-PCR法检测P-gp m RNA含量。结果:造模后,与空白组比较,模型组各肝功检测指标均升高(P<0.05,P<0.01),而醋柴胡多个部位均能降低肝郁模型大鼠的ALT、AST和TBA水平;增强ATP酶活力,其中水提液部位(WE)、正丁醇部位(BE)的Na+-K+、Ca2+-Mg2+ATP酶活力明显提高(P<0.05);RT-PCR实验显示醋柴胡各部位均能降低P-gp基因表达(P<0.05,P<0.01)。结论:醋柴胡各部位能够改善肝郁证导致的肝损伤,其机制与Na+-K+ATP酶、Ca2+-Mg2+ATP酶、P-gp调控有关。