CPB2为晚期肺腺癌EGFR-T790M耐药基因突变的潜在生物标志物

目的 通过平行反应监测(parallel reaction monitoring,PRM)定量蛋白组学技术验证晚期肺腺癌患者表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)-T790M耐药突变的生物标志物。方法 纳入2018年1月至2018年12月就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的口服EGFR-酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)吉非替尼的具有EGFR19del或EGFR 21 L858R基因突变的晚期肺腺癌患者44例。在患者疾病进展后行组织活检,使用下一代测序(next generation sequencing,NGS)方法检测出EGFR-T790M突变患者24例,非EGFR-T790M突变20例。提取44例患者的血清蛋白,通过SDS-PADE进行质量评估,两组分别得到10例质量合格血清蛋白样本。质量合格的血清蛋白样品分别进行丝氨酸蛋白酶酶解,通过PRM方法进行纳米液相色谱-串联质谱分析法(nanometer liquid chromatography-tandem mass spectrometry,nanoLC-MS/MS)检测。运行Skyline软件进行数据分析,得出与EGFR-T790M突变相关的差异表达蛋白。将基因本体论(Gene Ontology,GO)数据库的各节点映射,进行功能富集分析,并利用京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)数据库提供的绘图模块进行差异表达蛋白表达含量渲染,采用STRING数据库构建差异表达蛋白的蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络,寻找关键差异表达蛋白。结果 通过PRM方法确定14种与晚期肺腺癌EGFRT790M突变相关的差异表达蛋白。GO富集分析显示,这些差异表达蛋白在参与细胞组分方面,主要构成细胞外区域的部分;在发挥的分子功能方面,主要为抗原结合、作用于L氨基酸肽的肽酶活性和免疫球蛋白受体结合。KEGG富集通路分析显示,补体和凝血级联反应差异表达蛋白富集指数最高。该通路上的差异蛋白为凝血因子Ⅹ(coagulation factorⅩ,F10)、F9、纤溶酶原(plasminogen,PLG)和羧肽酶B2(carboxypeptidase B2,CPB2)。其中F10为上调蛋白,其余为下调蛋白。PPI网络构建分析显示,CBP2为差异表达蛋白中的关键节点。结论 CBP2是晚期肺腺癌EGFR-T790M耐药突变发生的潜在生物标志物。

基于PROTAC技术的EGFR降解剂的合成

表皮生长因子受体(EGFR)是治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的有效靶点,但获得性耐药极大地限制了EGFR小分子抑制剂的临床疗效。PROTAC技术有望通过蛋白降解克服耐药性问题。基于PROTAC技术设计并合成了6个靶向EGFR的降解剂,并进行了药理活性评价。Western blot测试结果显示化合物Ⅶ能有效地诱导EGFR^(del19/T790M/C797S)和EGFR^(L858R/T790M/C797S)突变蛋白的降解,细胞增殖抑制活性测试显示化合物Ⅶ能抑制Ba/F3-EGFR^(del19/T790M/C797S)和Ba/F3-EGFR^(L858R/T790M/C797S)细胞的增殖,半抑制浓度(IC_(50))值分别为8.072 nmol/L和7.675 nmol/L。

miRNA-7-EGFR/ERK通路用于卵巢癌治疗的研究进展

卵巢癌(OC)在女性生殖系统肿瘤中致死率最高,治疗多选择手术切除加辅助化疗,然而易出现耐药性,导致患者预后差。miRNA-7在卵巢癌细胞中低表达,通过靶向表皮生长因子受体(EGFR)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路发挥抗肿瘤作用。本综述介绍miRNA-7-EGFR/ERK通路在卵巢癌治疗中的作用,为卵巢癌的治疗提供新的思路。

突变EGFR PROTAC降解剂的设计与合成及活性研究

目的EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)治疗后会出现耐药性,采用PROTAC技术研究突变EGFR降解剂,为克服EGFR耐药提供一个新的方向。方法选取AZD-3759抑制剂对其进行设计和改构并合成AZDV-P1、AZDV-P2、AZDV-P3、AZDV-5、AZDV-7、AZDV-9和AZDV-10共7个PROTAC功能化合物,同时进行了药效测试。结果药效测试结果显示,化合物AZDV-9和AZDV-P1对EGFR19del突变效果较好,IC_(50)值为10 nM,化合物AZDV-10的IC_(50)值为81.1nM;同时观察到AZDV-P1和AZDV-10能引起蛋白降解,并呈现出“勾效应”。结论本研究设计并合成一系列靶向EGFR的PROTAC化合物,AZDV-P1和AZDV-10均能引起蛋白降解,并观测到了勾效应,这一结果或能为克服EGFR耐药提供一个新的方向。

anti-EGFR scFv-FTH1/AP1-FTH1纳米粒子的构建及其治疗哮喘小鼠的应用

采用基因工程方法分别将抗表皮生长因子受体(EGFR)的单链抗体(anti-EGFR scFv)和靶向白介素-4-受体(IL-4R)的AP1短肽分别修饰到铁蛋白重链亚基(FTH1)的N端,再通过蛋白表达、体外混合复性后成功制备了anti-EGFR scFv-FTH1/AP1-FTH1双靶向纳米粒子。结果表明:该纳米粒子能正确组装成铁蛋白的特征笼状结构,粒径为(13.2±1.3)nm。在哮喘小鼠模型中发现该纳米粒子能有效抑制哮喘多种症状,且在缓解气道高反应方面的效果优于单靶向anti-EGFR scFv-FTH1/FTH1纳米粒子。

EGFR酪氨酸激酶及其抑制剂的研究进展

表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor, EGFR)信号通路在肿瘤无限制生长、抗凋亡、侵袭和转移中发挥重要作用。筛选、评估和开发应用EGFR抑制剂已经成为靶向抗肿瘤药物研究的热点和趋势。目前,已有三代小分子EGFR抑制剂被研发并应用于非小细胞肺癌的临床治疗,但经过一段时间的治疗会出现耐药的现象,第四代的小分子EGFR抑制剂正处于研发阶段。本文对具有代表性的EGFR酪氨酸激酶抑制剂的结构、药效及其与EGFR蛋白的相互作用进行了综述,以此推进基于结构的药物设计策略在药物研发中的重要作用。

宫颈鳞状上皮病变中EGFR蛋白表达及基因扩增的临床意义

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)蛋白在宫颈鳞状上皮内瘤变和鳞状细胞癌中的表达及基因扩增,并评估其在宫颈癌发生、发展和预后中的价值。方法分别应用免疫组化EnVision法和荧光原位杂交(FISH)技术检测75例宫颈各种病变组织中的EGFR蛋白表达、基因扩增及基因拷贝数的变化,其中慢性宫颈炎10例,低级别鳞状上皮内瘤变(CIN)16例,高级别CIN 25例,宫颈癌24例。结果 EGFR在高级别CIN和宫颈癌中的阳性表达率分别是76%和79.17%,而在慢性宫颈炎和低级别CIN中的阳性表达率分别是10%和43.75%。高级别CIN和鳞癌中的基因扩增阳性率为25%,而慢性宫颈炎和低级别CIN中的阳性率为3.33%。42例EGFR阴性或低等阳性病例中FISH检测出26例(61.9%)二倍体和11例(26.2%)三倍体,而20例EGFR中等或强阳性病例中却有13例(65%)为多倍体或单纯EGFR基因扩增;所有EGFR基因扩增病例的蛋白表达均为中～强(+)。结论 EGFR可能参与了宫颈癌的发生,并且是宫颈癌发生的早期事件。EGFR蛋白过表达可能由EGFR基因扩增或基因拷贝数增加所致。

EGFR、蛋白激酶B在宫颈癌中表达及EGFR胞外区基因突变的研究

目的:探讨宫颈癌中表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶B(PKB/Akt)的表达及EGFR胞外区基因突变的规律和临床意义,为宫颈癌的发生发展机制和靶向个性化治疗提供实验依据。方法:采用免疫组化SP法检测EGFR、Akt蛋白在16例正常宫颈组织、40例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织和60例宫颈癌组织中的表达,并分析其与宫颈癌临床病理的关系。采用酚氯仿法抽提60例宫颈癌组织中DNA,PCR+DNA双向测序法检测EGFR胞外IV亚区基因突变。结果:正常宫颈组、CIN组及宫颈癌组中EGFR蛋白的阳性表达率分别为13.33%、43.33%及76.67%,Akt蛋白的阳性表达率分别为6.25%、35.00%及68.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组织中,EGFR表达水平与病理类型、细胞分化程度和临床分期有关(P<0.05),但与患者年龄和淋巴结转移无关(P>0.05);Akt表达水平与细胞分化程度和临床分期有关(P<0.05),但与患者年龄、病理类型和淋巴结转移无关(P>0.05)。60例宫颈癌中EGFR基因外显子15突变率为3.33%(2/60),突变类型G→A,未发现外显子14突变。宫颈癌组织中EGFR、Akt表达呈正相关性(r=0.556,P<0.05)。结论:EGFR、Akt可作为检测宫颈癌及癌前病变的重要参考指标,也为宫颈癌的多靶点联合治疗提供新思路;宫颈癌中EGFR胞外区可有基因突变,但突变率很低,关于其突变的规律和意义有待进一步研究。

EGFR和Cyclin D1的联合表达预测胶质瘤的放疗敏感性

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)和Cyclin D1蛋白的表达与胶质瘤放疗敏感性的关系。方法采用免疫组织化学方法检测EGFR和Cyclin D1蛋白在53例不同放疗敏感性胶质瘤和10例正常脑组织中的表达。结果EGFR或Cyclin D1蛋白的表达与胶质瘤的放疗敏感性均无统计学意义(P>0.05)。EGFR和Cyclin D1蛋白的联合表达与胶质瘤的放疗敏感性具有统计学意义(P<0.05)。结论EGFR和Cyclin D1蛋白的联合表达可预测胶质瘤的放疗敏感性。

EGFR在胃粘膜活检组织中的表达意义

目的:探讨EGFR在胃粘膜活检组织中的表达意义。方法:采用免疫组化iVision二步法检测胃镜活检组织,包括10例正常胃粘膜上皮、16例胃上皮瘤样病变、19例胃上皮内瘤、47例胃腺癌组织中EGFR的表达,并分析其表达意义。结果:在正常胃粘膜上皮、上皮瘤样病变、腺瘤及腺癌组织中,EGFR的表达阳性率分别为6.56±2.21%、10.25±3.59%、36.37±4.80%、70.47±7.78%,在胃上皮内瘤及腺癌组显著高于正常胃粘膜上皮及上皮瘤样病变组(P<0.05,P<0.01),腺癌组显著高于上皮内瘤组(P<0.05)。EGFR的表达阳性率与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度等无关(P>0.05)。结论:EGFR的表达增强可能与胃癌的发生发展有关;EGFR的检测有助于胃癌的诊断。

EGFR及p21蛋白在肺癌中的表达

目的：探讨表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）和ｐ２１蛋白表达与肺癌发生发展的关系及其两者的对应关系。方法：应用免疫组化Ｓ－Ｐ法对６３例肺癌及其癌旁组织进行了同位ＥＧＦＲ及ｐ２１蛋白的检测。结果：肺癌ＥＧＦＲ阳性率７７．７８％，其阳性率与病理类型及临床分期无关（Ｐ＞０．０５）。癌旁组织ＥＧＦＲ阳性率６７．９２％，其中增生组阳性率（７９．０６％）显著高于无增生组（３７．５０％）（Ｐ＜０．０１）。肺癌中ｐ２１蛋白的阳性率４７．６２％。腺癌阳性率显著高于鳞癌（Ｐ＜０．０５）。大细胞癌均阴性。ｐ２１蛋白表达与肺癌转移及临床分期无关。癌旁组织ｐ２１蛋白阳性率４５．７１％，增生组阳性率（６２．７９％）显著高于未增生组（１８．５１％）（Ｐ＜０．０１）。ＥＧＦＲ及ｐ２１蛋白在肺癌中的表达经χ２检验未显示一致性关系。结论：ＥＧＦＲ及ｐ２１蛋白过度表达和活性增强与癌旁上皮细胞增生有密切关系，并在肺癌发展过程中起作用，可能是肺癌发生的早期事件。ｐ２１蛋白及ＥＧＦＲ在肺癌中可能相互独立起作用。

EGFR、COX-2及p63蛋白表达与甲状腺乳头状癌侵袭转移的关系

目的 探讨甲状腺乳头状癌 (PTC)中表皮生长因子受体 (EGFR)、环氧化酶 2 (COX 2 )和 p6 3蛋白的表达与肿瘤侵袭转移的关系。方法 采用免疫组化S P法检测 6 7例PTC(其中腺内侵袭 4 1例、腺外侵袭 2 6例 ;有淋巴结转移 2 9例、无淋巴结转移 38例 )、3例滤泡癌和 15例甲状腺腺瘤中EGFR、COX 2及 p6 3蛋白的表达。结果 EGFR、COX 2和 p6 3蛋白在PTC组织中的阳性表达率分别为 88 1%、82 1%和 70 2 % ,均显著高于甲状腺腺瘤 (P <0 0 5 ) ;EGFR与COX 2、COX 2与p6 3蛋白在PTC组织中的的表达呈明显正相关 (P <0 0 5 ) ;EGFR和COX 2在PTC腺外侵袭组和有淋巴结转移组阳性表达率均明显高于腺内侵袭组和无淋巴结转移组 (P <0 0 5 ) ,p6 3蛋白阳性表达率与淋巴结转移有关 (P <0 0 5 )、与浸润程度无关。结论 EGFR与COX 2在PTC组织中的高表达可能促进肿瘤的侵袭和转移 ,p6

VEGF、EGFR及Parkin蛋白在鼻咽癌中的表达及三者间的相关性研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子受体(EGFR)及Parkin蛋白在鼻咽癌(NPC)中的表达情况以及三者间的相关性。方法应用免疫组化SP法检测48例NPC组织和34例正常鼻咽部上皮组织中VEGF、EGFR及Parkin蛋白的表达,并探讨三者间的相关性。结果 NPC组织中VEGF和EGFR蛋白表达阳性率明显高于正常鼻咽部上皮组织,Parkin蛋白表达阳性率则明显下降,且均有统计学差异(均P<0.05)。NPC组织中VEGF蛋白表达与NPC患者有无淋巴结转移及临床TNM分期密切相关(均P<0.05),而与患者的年龄、性别、病理类型、T分期均无关(均P>0.05);EGFR和Parkin蛋白表达与NPC患者有无淋巴结转移密切相关(均P<0.05),而与患者的年龄、性别、病理类型、T分期、临床TNM分期均无关(均P>0.05)。NPC组织中VEGF和EGFR蛋白的表达呈正相关(P<0.05),Parkin和VEGF、EGFR蛋白的表达无相关性(均P>0.05)。结论 VEGF、EGFR及Parkin蛋白与NPC发生、发展有关,VEGF、EGFR及Parkin蛋白表达可作为NPC的预后判断指标,NPC中VEGF和EGFR可能起协同作用,而Parkin则可能单独发挥作用。

EGFR、Raf、Akt在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的:检测食管鳞癌中EGFR信号传导通路相关分子EGFR、Raf、Akt的表达情况及三者之间的相互关系。方法:应用免疫组织化学EnVision法,检测60例食管鳞癌组织和15例食管正常黏膜中EGFR、Raf、Akt的表达情况。结果:在60例食管癌中EGFR、Raf、Akt阳性表达率分别为61.6%(37/60)、56.6%(34/60)和67%(40/60),15例食管正常黏膜中分别为33.3%(5/15)、13.3%(2/15)和20%(3/15);EGFR、Raf和Akt表达与鳞癌分级及肿瘤侵犯深度无关(P>0.05),与淋巴结转移有关(P<0.05)。结论:食管鳞癌组织EGFR、Raf、Akt的过表达可能与食管癌的发生发展有关;有可能成为靶向治疗的新靶点。

乳腺癌EGFR、p16蛋白表达与预后的关系

目的 :研究EGFR和 p16蛋白在人乳腺癌中表达及其与预后关系。 方法 :用免疫组化LSAB法 ,检测 5 4例乳腺癌中EGFR和p16蛋白的表达情况 ,并用HPLAS - 10 0 0高清晰度彩色病理图文分析系统进行定量测定。 结果 :EGFR的表达强度在乳腺癌组织学分级、淋巴结转移和预后方面差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;p16蛋白与乳腺癌预后之间有差异 (P <0 0 5 )。结论 :检测EGFR和

惠州客家人群食管癌EGFR蛋白表达及与MAPK信号通路相关性的初步研究

目的检测EGFR在惠州客家人群食管癌组织的表达,探讨EGFR与惠州客家人群食管癌发生发展之间的关系及与MAPK信号传导激活状态的相关性。方法采用免疫组织化学及免疫蛋白印迹方法 ,检测53例惠州客家人群食管癌和癌旁正常组织标本中EGFR、MAPK(ERK1/2)和p-ERK1/2蛋白的表达。结果 EGFR和p-ERK1/2在食管癌组织中的表达率显著高于癌旁正常组织(P<0.01);分化程度越低,EGFR和p-ERK1/2的表达越高;有淋巴结转移患者EGFR和p-ERK1/2的表达明显高于无淋巴转移者(P<0.01);浸润浅肌层患者的p-ERK1/2表达阳性率明显低于浸润深肌层(P<0.05)。结论 EGFR/MAPK信号传导与惠州客家人群食管癌的发生发展密切相关。伴随EGFR的过表达,MAPK(ERK1/2)信号通路活化水平升高,EGFR/MAPK信号通路可为食管癌的早期基因治疗提供新的靶点。

食管鳞癌IGF-1R、EGFR蛋白的表达及其临床意义

目的研究IGF-1R、EGFR蛋白在食管鳞癌患者中的表达情况及其临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测50例食管鳞癌患者IGF-1R、EGFR蛋白的表达情况,取20例手术标本正常组织作为对照组。结果食管鳞癌中IGF-1R蛋白阳性表达率明显升高(χ2=28.29,P<0.05),EGFR蛋白阳性表达率明显升高(χ2=4.56,P<0.05)。IGF-1R的阳性表达与食管癌的病理分级有关,分级越高阳性率越高,与浸润深度有关,侵及深肌层及外膜IGF-1R的表达明显高于侵及浅肌层及黏膜的表达,与TNM分期有关,分期越晚阳性率越高,差异均有统计学意义。淋巴结转移组IGF-1R或EGFR的表达明显高于非转移组。结论初步结果分析显示IGF-1R可能与食管鳞癌的病理分级及侵袭、转移有关,EGFR可能与食管鳞癌的转移有关。

融合蛋白IP10-EGFRvⅢScFv的构建及表达

目的构建细胞因子融合蛋白IP10-EGFRvⅢScFv,建立并检测稳定表达融合蛋白的细胞株NIH3T3。方法通过RT-PCR法扩增小鼠IP10基因,全基因人工合成EGFRvⅢScFv,两段目的基因依次克隆于表达载体pcDNA3.1(-)PCMV启动子下游,二者以编码(Gly4Ser)3的柔性接头序列(linker)相连。将构建好的pcDNA3.1(-)IP10-EGFRvⅢScFv转染NIH3T3细胞,并用G418筛选出阳性克隆,采用实时定量PCR和Western blot法检测克隆细胞目的基因和蛋白的表达量,并观察转染后的NIH3T3细胞体外生长状况。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)IP10-EGFRvⅢScFv,经过浓度为200mg/L的G418工作液筛选出了稳定高表达IP10-EGFRvⅢScFv的细胞系NIH3T3,且其生长状态并未受转染基因的影响。通过荧光检测、实时定量PCR、Western blot法检测到转染72h后目的基因和蛋白表达量最高,和稳定克隆株相比,表达量并无明显差异(P>0.05)。结论构建的新型细胞因子融合蛋白可以在NIH3T3细胞内获得稳定表达,为后期融合蛋白的提取及功能研究打下基础。

大肠癌c-erbB-2、EGFR及p21^(ras)蛋白共同表达与肿瘤细胞增殖

目的：探讨c-erbB-2、EGFR及p21ras癌基因蛋白共同表达对大肠癌细胞增殖的影响。方法：应用免疫组化ABC法检测c－erbB－2、EGFR及p21ras蛋白在69例大肠癌中的表达情况，同时计数肿瘤细胞PCNA增殖指数。结果：3种癌基因蛋白全部阳性，c－erbB－2和EGFR同时阳性及单独。erbB-2阳性的大肠癌，癌细胞PCNA指数高于3种蛋白全部阴性组（P＜0．05）。结论：c-erbB－2、EGFR和p21ras蛋白共同表达以及c-erbB-2和EGFR共同表达可能对大肠癌细胞的增殖有协同促进作用。

口咽鳞癌p16蛋白以及EGFR表达在放疗中的临床意义

目的探索口咽鳞癌患者中p16蛋白状态以及EGFR表达对放疗近期和远期疗效的影响。方法回顾性分析首程治疗为本中心放疗且留存有放疗前肿瘤病理标本的39例口咽鳞癌患者,将患者按照p16蛋白状态和EGFR表达进行分组,比较放疗近期疗效以及总生存情况。结果 39例口咽鳞癌患者以Ⅳ期为主(84.6%),其中23例患者(59.0%)p16蛋白表达阳性。p16(+)者放疗后可以获得更好的肿瘤退缩,而EGFR的表达不同未发现与肿瘤退缩情况相关,多因素分析显示p16蛋白是影响总生存的独立预后因素。结论 p16蛋白阳性的口咽癌患者较阴性者放疗敏感性更高、预后更好,但需要扩大样本量进行验证。