肺腺癌中RNPC1蛋白、EGFRv Ⅲ蛋白表达水平及意义

目的探讨肺腺癌中RNPC1蛋白、EGFRvⅢ蛋白表达水平及意义。方法选取2015年1月至2018年4月我院保存的肺腺癌组织标本89例,同时选取癌旁组织作为对照组,采用Western blot检测RNPC1蛋白、EGFRvⅢ蛋白表达。结果肺腺癌组织RNPC1和EGFRvⅢ蛋白相对表达量分别为(0.833±0.122)和(0.910±0.115),明显高于癌旁组织(P<0.05);肺腺癌Ⅲ期、有淋巴结转移患者RNPC1蛋白相对表达量分别为(0.892±0.115)和(0.898±0.120),明显高于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P<0.05);肺腺癌女性、中低分化患者EGFRvⅢ蛋白相对表达量分别为(0.960±0.139)和(0.933±0.112),明显高于男性、高分化患者(P<0.05)。结论肺腺癌中RNPC1蛋白、EGFRvⅢ蛋白表达明显升高,与临床病理特征有一定关系,值得进一步研究。

肿瘤特异性嵌合抗原受体EGFRv Ⅲ-CAR的构建及体外活性分析

嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(chimeric antigen receptor-T,CAR-T),是通过体外激活和扩增肿瘤特异或非特异性杀伤细胞达到抗肿瘤效果,在肿瘤免疫治疗方面具有良好的应用前景。本研究构建靶向EGFRⅢ(epidermal growth factor receptor variant III)的嵌合抗原受体(CAR)的重组慢病毒表达载体,利用慢病毒感染并筛选能够稳定表达该嵌合抗原受体的Jurkat细胞系。通过EGFRvⅢ分子刺激、与U87MG细胞共培养的方式检测细胞系的活化状况。结果显示,成功构建了p CDH-EGFRvⅢsc Fv-CAR-cop GFP-T2A-puro慢病毒表达重组质粒,并筛选出可稳定表达EGFRⅢ-CAR的Jurkat细胞系。CCK-8法检测显示,EGFRvⅢ分子刺激12 h的Jurkat-CAR细胞增殖率约是对照组的1.36倍(P<0.05);ELISA法检测显示,与U87MG细胞共孵育后,细胞上清中IL-2的浓度约是单独培养分泌在上清中IL-2的1.625倍(P<0.01)。以上结果表明,稳定表达CAR的jurkat细胞,可以靶向性识别EGFRvⅢ分子及EGFRvⅢ阳性的靶细胞,并引起IL-2细胞因子释放,为后续临床细胞免疫治疗提供了理论基础。

人肾透明细胞癌中EGFRvⅢ的表达及意义

目的检测表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)在肾透明细胞癌组织中的表达,探讨其与肾透明细胞癌发生、发展的关系。方法采用免疫组织化学染色和图像分析法检测80例肾透明细胞癌和24例正常肾组织中EGFRvⅢ的表达水平,进行统计学分析、比较。结果肾透明细胞癌组织和正常肾组织EGFRvⅢ的表达阳性率分别为46%、8%。通过半定量分析,二者EGFRvⅢ平均灰度值分别为148.49±13.05和155.65±14.86,其差异具有统计学意义(t=2.13,P=0.04);男、女患者EGFRvⅢ的平均灰度值分别为149.01±13.70和147.40±11.76,二者无显著性差异(t=0.54,P=0.59);EGFRvⅢ表达与年龄无显著相关性(r=0.01,P=0.92)。结论EGFR-vIII在肾透明细胞癌组织中存在高表达,与肾透明细胞癌的发生、发展有一定关系。

乳腺良、恶性病变中EGFR、EGFRvⅢ的表达及其临床意义

目的:探讨癌基因表皮生长因子受体(EGFR)及表皮生长受体Ⅲ型变异体(EGFRvⅢ)在人乳腺良、恶性病变发生发展中的作用。方法:应用RT-PCR和SupervisionTM免疫组化方法检测30例乳腺良性增生性病变、病变旁腺体组织及55例乳腺癌、癌旁腺体组织和转移淋巴结组织的EGFR、EGFRvⅢ的表达。结果:EGFR、EGFRvⅢ两基因在乳腺癌组表达高于乳腺良性增生性病变组(P<0.05);EGFRvⅢ在乳腺癌旁组织及正常乳腺组织极少表达;EGFR和EGFRvⅢ表达与乳腺癌病理分级、淋巴结转移数目(>4个)呈正相关(P<0.05),两者与患者年龄、绝经情况、肿瘤大小及ER、PR无关(P>0.05);EGFR表达与c-erbB-2表达无关(P>0.05),而EGFRvⅢ表达与c-erbB-2表达呈正相关(P<0.05)。结论:EGFR、EGFRvⅢ过度表达可能与乳腺癌发生发展密切相关,EGFRvⅢ有望作为预测乳腺癌预后的候选基因。

CD133、EGFRvⅢ在人脑胶质瘤组织中的共表达及临床意义

目的探讨CD133、EGFRvⅢ在人脑胶质瘤组织中的共表达及临床意义。方法选择行手术治疗的脑胶质瘤患者40例,采用免疫组化双重染色法检测其脑胶质瘤组织中的CD133、EGFRvⅢ表达。结果 40例患者脑胶质瘤组织中的CD133+细胞、EGFRvⅢ+细胞阳性表达率分别为100%、40%,二者双染阳性表达率为35%。CD133呈棕黄色,位于细胞质和细胞膜上,多数阳性细胞在肿瘤组织中散在分布,部分呈聚集现象;EGFRvⅢ呈深蓝色,主要分布在细胞膜上,细胞质中有少量分布;在肿瘤组织靠近血管区两种阳性细胞存在共聚集现象。结论 CD133、EGFRvⅢ在脑胶质瘤组织中的分布具有相关性,在细胞水平上存在共表达,二者可以成为胶质瘤干细胞治疗的分子靶点。

肺腺癌中EGFRvⅢ蛋白表达与EGFR基因突变的临床意义

目的探讨肺腺癌组织中EGFRvⅢ蛋白表达与EGFR基因突变之间的关系。方法以免疫组化及基因测序方法检测114例肺腺癌肿瘤组织的EGFRvⅢ蛋白表达及EGFR基因的突变。结果 114例中EGFRvⅢ蛋白检出率为30.7%(35/114);EGFR基因突变检出率为47.4%(54/114),主要发生在19、21号外显子。结论 EGFRvⅢ蛋白表达与EGFR基因突变呈正相关,EGFRvⅢ蛋白检测也许可以作为指导肺腺癌患者用药的一种新方法。

针对U87-EGFRvⅢ细胞的适配子对胶质瘤荷瘤鼠的抑瘤作用

目的观察应用细胞-配体指数富集的系统进化技术(cell systematic evolution of ligands by exponential enrichment,Cell-SELEX)筛选出的针对稳定过表达表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor vari-antⅢ,EGFRvⅢ)的U87-EGFRvⅢ细胞的适配子在荷瘤裸鼠动物模型中的抑瘤作用。方法选用4～6周的雄性裸鼠28只随机分为4组,分别为空白对照组、转染试剂对照组、DNA原库GN对照组、适配子U2治疗组,每组7只。皮下种植U87-EGFRvⅢ细胞悬浮液建立荷瘤裸鼠动物模型,通过in vivojet-PEI TM转染试剂的作用将筛选得到的适配子U2和原库GN分别进行瘤内注射。给药结束1周后,对肿瘤的重量和体积大小进行统计学分析。结果在形体上U2治疗组肿瘤大小明显小于其他组,试剂组与原库GN组均没有明显的差异,统计学分析U2治疗组与其它组的肿瘤重量和体积均有差异(P<0.05)。结论筛选得到的适配子对通过皮下种植U87-EGFRvⅢ细胞悬浮液建立荷瘤裸鼠动物模型中的肿瘤生长有一定的抑制作用,为适配子在荷瘤裸鼠动物模型中的应用提供了一定的技术理论基础。

c-Met siRNA对U87-EGFRvⅢ胶质瘤细胞凋亡和增殖的影响

目的:合成针对c-Met的小干扰RNA(siRNA),研究其对U87-EGFRvⅢ(表皮生长因子受体Ⅲ型突变体)胶质瘤细胞凋亡和增殖的影响。方法:用脂质体转染合成的c-Met siRNA入U87-EGFRvⅢ细胞,未转染组为对照组,荧光实时定量PCR和Western blotting分别检测c-Met基因和蛋白的表达,MTT和Annexin V-FITC/PI法检测细胞增殖和凋亡情况。结果:c-Met siRNA明显抑制c-Met表达(P<0.05);明显增加细胞凋亡率(P<0.05)。同时,c-Met siRNA单独或协同EGFRvⅢsiRNA可抑制胶质瘤细胞增殖(P<0.05)。结论:c-Met siRNA可抑制U87-EGFRvⅢ胶质瘤细胞增殖、诱导其凋亡,为研究c-Met基因在胶质瘤中的作用及其靶向联合治疗提供了理论基础。

EGFRvⅢ的表达对吉非替尼作用卵巢癌SKOV3细胞敏感性的影响

目的:探讨EGFRvⅢ的表达与卵巢癌SKOV3细胞对化疗药吉非替尼敏感性之间的关系,为临床治疗并合理选用抗肿瘤药物提供参考。方法:将质粒pcDNA4/TO-EGFRvⅢ稳定转染入SKOV3细胞,并用zeocin抗生素筛选出稳定表达EGFRvⅢ蛋白的细胞株(命名为SKOV3-EGFRvⅢ),用MTT法检测转染稳定株和原始株在吉非替尼作用下细胞的存活能力。然后,以吉非替尼分别对2株细胞建立的裸鼠异体肿瘤模型进行治疗,通过测量肿瘤体积大小评价肿瘤模型对吉非替尼的敏感性。结果:通过Western blot鉴定,SKOV3-EGFRvⅢ稳定株建立成功;MMT法结果表明SKOV3-EGFRvⅢ细胞在吉非替尼的作用下,其死亡率低于原始细胞株,且吉非替尼对SKOV3-EGFRvⅢ细胞建立的裸鼠肿瘤模型的抑制效果明显低于原始细胞株。结论:EGFRvⅢ的过表达导致卵巢癌SKOV3细胞及其体外移植肿瘤模型对化疗药吉非替尼的敏感性减弱。

表皮生长因子受体Ⅲ型变异体(EGFRvⅢ)多克隆抗体的制备及特异性

为了制备针对EGFRvⅢ的特异性多克隆抗体,在实验中利用耦联了血蓝蛋白的EGFRvⅢ特异性的PEP3合成短肽进行动物免疫,制备抗血清;构建了pET30a/E33XI原核表达载体,表达和纯化了融合蛋白His-E33(EGFRvⅢ的部分胞外区);以此融合蛋白作为抗原制备了抗体纯化柱,通过柱上纯化的方法从抗血清中提取针对EGFRvⅢ的特异性抗体.利用U87、U251、HeLa和HEK-293细胞进行免疫组化实验来检验抗体的特异性.

胶质瘤EGFR、EGFRvⅢ蛋白的表达及临床意义

目的:探讨EGFR、EGFRvⅢ蛋白在胶质瘤中的表达及其与临床病理的相关性,研究其与胶质瘤患者预后的相关性,分析胶质瘤患者的生存影响因素。方法:选取2013年8月-2018年10月在本院经手术治疗的胶质瘤病例104例,其中低级别胶质瘤(WHOⅡ级)27例,间变性胶质瘤(WHOⅢ级)20例,胶质母细胞瘤(WHOⅣ级)57例。存档蜡块免疫组化检测EGFR、EGFRvⅢ蛋白表达,收集临床病理参数、分子标记物,并进行随访。结果:EGFR蛋白表达阳性率为低级别胶质瘤(WHOⅡ级)44.4%(12/27),间变性胶质瘤(WHOⅢ级)50.0%(10/20),胶质母细胞瘤(WHOⅣ级)68.4%(39/57),随着组织学级别的增加,EGFR阳性率增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。EGFRvⅢ蛋白表达阳性率为低级别胶质瘤(WHOⅡ级)0,间变性胶质瘤(WHOⅢ级)为10.00%(2/20),胶质母细胞瘤(WHOⅣ级)为10.53%(6/57),差异无统计学意义(P>0.05)。13.1%(8/61)EGFR阳性胶质瘤表达EGFRvⅢ,EGFR阴性胶质瘤未发现有EGFRvⅢ的表达,两者呈正相关(r=0.242,P<0.05)。EGFR表达与分子标记物1p/19q杂合性缺失有关(P=0.029),与其他临床病理参数及其他分子标记物无关。EGFRvⅢ表达与临床病理参数及分子标记物无关。单因素分析显示EGFRvⅢ、年龄、组织学级别、KPS评分、治疗方案、IDH1基因突变、ATRX基因突变与胶质瘤患者生存有关(P<0.05),Cox分析显示年龄、组织学级别、治疗方案及分子标记物IDH1是胶质瘤患者独立的预后预测因素(P<0.05),EGFRvⅢ不是胶质瘤患者独立的预后因素(P>0.05)。结论:胶质瘤EGFR、EGFRvⅢ蛋白的表达具有一定的临床意义,但不能作为胶质瘤的独立预后因素。

抗人EGFRvⅢex单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的研制抗人表皮生长因子受体突变体Ⅲ胞外区(EGFRvⅢex)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法采用原核表达的EGFRvⅢex蛋白免疫BALB/c小鼠,以间接ELISA法筛选分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,采用蛋白印迹、间接免疫荧光和免疫组化染色鉴定mAb的特异性。结果获得1株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株。mAb的Ig亚类为IgM,效价为10-6。mAb可识别U87细胞膜上稳定转染的人EGFRvⅢex和SPC-A1细胞膜上高表达的EGFR。结论成功制备1株抗EGFRvⅢex的mAb,经蛋白印迹、免疫荧光和免疫组化染色检测,mAb的特异性良好,能够检测细胞上的EGFR和EGFRvⅢex,为肿瘤的治疗提供了良好的手段。

EGFRvⅢ特异性单链抗体的制备及其靶向性能

目的:应用噬菌体展示技术筛选出能与EGFRvⅢ特异性结合的单链抗体(single-chain Fv,scFv),并研究其靶向性能。方法:构建EGFRvⅢ特异性scFv噬菌体库,ELISA筛选阳性克隆,阳性EGFRvⅢ-scFv质粒重新克隆入pCANTAB-Throm-bin-His载体,转化E.coli HB2151,IPTG诱导可溶性EGFRvⅢ-scFv表达。间接免疫荧光及裸鼠活体成像技术鉴定EGFRvⅢ-scFv与EGFRvⅢ的特异性结合。结果:成功构建了EGFRvⅢ-scFv噬菌体库,ELISA筛选得到16个EGFRvⅢ-scFv克隆,取一克隆命名为EGFRvⅢ-scFv-2A1。EGFRvⅢ-scFv-2A1质粒重新克隆入pCANTAB-Thrombin-His载体,成功表达可溶性EGFRvⅢ-scFv-2A1。EGFRvⅢ-scFv-2A1在体外可特异性结合HuH7-EGFRvⅢ肝癌细胞,但不结合HuH7-EGFR和HuH7肝癌细胞;荧光标记的EGFRvⅢ-scFv-2A1裸鼠体内可特异性结合U87MG-EGFRvⅢ胶质瘤细胞移植瘤,而不结合U87MG细胞移植瘤。结论:成功制备的EGFRvⅢ-scFv-2A1可特异性靶向结合EGFRvⅢ,在肿瘤的诊断和靶向治疗中具有潜在应用价值。

表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)单链抗体亲和力检测的间接ELISA的建立及优化

目的建立检测表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ)单链抗体PD0721亲和力检测的ELISA,并且对实验条件进行优化。方法利用本课题组制备的单链抗体PD0721,建立检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA,并采用棋盘滴定法对实验条件中的抗体抗原浓度、二抗浓度、包被条件等方面进行优化,对本方法的灵敏度及精密度进行考察。结果使用PBS稀释抗原至1.25 mg/L于4℃包被12 h,加入120 ng/mL PD0721单链抗体以及1∶8000的酶标抗体为最佳检测结果。优化后的结果,在PD0721单链抗体浓度为15 ng/mL~480 ng/mL范围内回归模型拟合效果良好,最低检测限为7.5 ng/mL。组内差异系数为0.11%~0.99%,组间差异系数为0.68%~3.15%。结论建立了能准确、稳定检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA。

人脑胶质瘤组织中CD133与EGFRvⅢ的：共表达及其临床意义

目的:观察人脑胶质瘤组织中肿瘤干细胞标记物CD133与表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factorreceptor variantⅢ,EGFRvⅢ)的共表达情况及其临床意义。方法:取河南省人民医院自2011年1月至2011年6月手术切除的脑胶质瘤组织40例,其中Ⅱ级17例、Ⅲ级12例、Ⅳ级11例。流式细胞术检测不同级别脑胶质瘤中CD133+、EGFRvⅢ+和CD133+/EGFRvⅢ+细胞所占的比例,分析其临床意义。结果:CD133、EGFRvⅢ在人脑胶质瘤组织中的表达率及其阳性表达细胞比例均随肿瘤级别逐步升高(均P﹤0.05)。不同级别脑胶质瘤中均发现CD133和EGFRvⅢ共表达细胞,CD133+/EG-FRvⅢ+细胞共表达率在(4.75±1.26)%～(18.26±3.45)%之间,Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中CD133+/EGFRvⅢ+细胞的共表达率高于Ⅱ级(P﹤0.05)。CD133+/EGFRvⅢ+细胞比CD133+细胞、EGFRvⅢ+细胞对脑胶质瘤患者的生存期影响更大,共表达细胞患者的中位生存时间明显缩短。结论:人脑胶质瘤组织中存在CD133+/EGFRvⅢ+共表达细胞,其与胶质瘤的恶性程度及患者生存时间有关,本研究为脑胶质瘤的靶向治疗提供了潜在新的靶点。

EGFRvⅢ/CAR-T对EGFRvⅢ^+U87胶质瘤细胞和裸鼠移植瘤的特异性杀伤作用

目的:制备靶向EGFRvⅢ的第三代CAR-T(EGFRvⅢ/3CAR-T),检测其在体外和体内对EGFRvⅢ+U87胶质瘤细胞的特异性杀伤效应。方法:用磷酸钙沉淀法将三质粒共转染HEK293T细胞包装EGFRvⅢ/3CAR慢病毒(LV-EGFRvⅢ/3CAR),感染健康人CD3+T细胞,Western blotting和流式细胞术检测T细胞中EGFRvⅢ/3CAR的表达水平,51Cr释放法检测EGFRvⅢ/3CART对EGFRvⅢ+U87细胞的体外杀伤效应,ELISA法检测EGFRvⅢ/3CAR+T的IFN-γ分泌水平。构建裸鼠异种胶质瘤移植模型,检测EGFRvⅢ/3CAR-T对移植瘤的体内杀伤活性。结果:EGFRvⅢ/3CAR慢病毒包装成功,滴度值为5×10~6TU/ml。Western blotting在相对分子质量58 000处检测到EGFRvⅢ/3CAR表达,未转导组无相同分子量蛋白表达。流式细胞术检测结果显示EGFRvⅢ/3CAR转导效率平均为52.3%,^(51)Cr释放法检测EGFRvⅢ/3CAR-T特异性杀伤作用与E∶T值(E∶T为4∶1、为8∶1、16∶1、32∶1)呈正比关系。ELISA法检测到细胞因子IFN-γ分泌量为(1 836±148.2)pg/ml,与NT T和GFP+T细胞相比差异有统计学意义(P<0.01)。EGFRvⅢ/3CAR+T细胞的特异性杀伤活性及IFN-γ分泌均依赖于EGFRvⅢ在U87细胞中的表达水平。体内肿瘤生长检测结果显示,注射后3周EGFRvⅢ/3CAR+T组肿瘤体积较GFP+T细胞和PBS组差异有统计学意义(P<0.01)。结论:EGFRvⅢ/3CAR-T在体外和体内均能发挥靶向杀伤EGFRvⅢ+脑胶质瘤细胞的作用,为后续临床试验提供依据。

EGFRvⅢ胞外段修饰DC诱导CTL对EGFRvⅢ^(+)胃癌细胞的杀伤作用

目的构建表达EGFRvⅢ的树突状细胞(dendritic cells,DC),并使其诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)成熟,检测该细胞对胃癌细胞及EGFRvⅢ^(+)胃癌细胞的杀伤作用。方法制备携带EGFRvⅢ的慢病毒,并用荧光定量法测定慢病毒滴度。分别使用携带EGFRvⅢ的慢病毒、空白对照的慢病毒转染DC,Western blotting测定EGFRvⅢ的表达。自身CTL分别与EGFRvⅢ^(+)DC、空白慢病毒感染的DC、成熟DC共培养,采用ELISA法检测上清液中IL-10和IFN-γ水平。按不同比例(1∶5、1∶10、1∶20、1∶40)将传代后的SGC7901细胞和SGC7901-EGFRvⅢ^(+)细胞分别加入不同组的CTL培养24 h,MTT法测定CTL对胃癌细胞的杀伤作用。以上所有实验均重复3次。结果慢病毒感染DC的感染率可达58%。EGFRvⅢ将慢病毒作为载体可使DC感染并成功表达EGFRvⅢ。在体外应用EGFRvⅢ^(+)DC诱导CTL成熟,可使CTL产生更多IL-10、INF-γ,且呈剂量依赖性(P<0.01),其对胃癌细胞的杀伤作用更强(P<0.05),而且对高表达EGFRvⅢ的胃癌细胞的杀伤作用最强。结论相同条件下,由EGFRvⅢ^(+)DC诱导成熟的CTL对EGFRvⅢ^(+)胃癌7901细胞在体外的免疫杀伤作用明显增强。

绿色荧光蛋白-EGFRvⅢ真核表达载体的构建及在Tca8113细胞中的表达

目的构建含有表皮生长因子受体Ⅲ型变异体（EGFRvⅢ）的增强型绿色荧光蛋白表达载体，转染到舌癌Tca8113细胞中，建立稳定表达的细胞系，为研究EGFRvⅢ在舌癌细胞传导通路中的作用奠定实验基础。方法以从人乳腺癌细胞中提取的总RNA为模板经反转录为cDNA，用RT-PCR的两步法扩增得出合有HindⅢ和Xhol的EGFRvm目的基因连接到绿色荧光蛋白pEGFP-N1载体上。将重组质粒通过脂质体转染的方法转染到舌癌细胞中观察，以G418筛选表达目的基因的单细胞系并通过RT-PCR的方法进行目的基因的表达水平检测。结果经过PCR引物扩增得到1218bp基因片段，生物公司测序正确，重组质粒pEGFP-N1-EGFRvⅢ经双酶切分析检测无误；质粒转染舌癌细胞可见荧光信号表达，经过G418筛选后成功获得细胞克隆株。结论成功构建pEGFP-N1-EGFRvⅢ表达载体，并能够在舌癌细胞中高度表达，为研究EGFRvⅢ在舌癌MAPK传导通路中的作用建立细胞模型奠定了实验基础。

EGFRvIII/PEP-3 cDNA与HBcAg重组基因原核表达载体的构建、表达与免疫分析

目的:构建EGFRvIII与HBcAg重组基因的原核表达质粒,进行原核表达、纯化,观察表达蛋白的免疫原性和抗原性。方法:通过双酶切从pGEM-TEasy/PEP-3载体获得编码EGFRvIII突变区的cDNA片段,插入去除了主要免疫优势区的重组质粒pGEMEX/HBcAg中,获得重组质粒pGEMEX/c-PEP-3-c,将重组基因亚克隆于原核表达载体pET28a(+)中,通过IPTG诱导蛋白表达,利用Ni2+-NTA亲和层析法对融合蛋白进行纯化;用融合蛋白常规免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA检测小鼠血清中抗体的滴度。结果:经酶切鉴定、序列测定证实融合基因已插入pET28a(+)载体中,融合基因序列与设计序列完全一致。原核表达后表达量占沉淀全菌蛋白的56%,纯化产物占总蛋白的92%,浓度约8g/L。BALB/c小鼠经4次免疫后,其血清中中和抗体的滴度可达1∶16000,第6次免疫后血清中中和抗体的滴度达到1∶2.56×105,抗PEP-3抗体滴度达到1∶1.28×105,抗HBcAg抗体滴度小于1∶4×103。结论:融合基因PEP-3-HBcAg在大肠杆菌中可获得高效表达,表达的融合蛋白可以诱导小鼠产生高滴度和高特异性中和抗体,从而为高表达EGFRvIII恶性肿瘤基因工程疫苗的研究奠定基础。

表皮生长因子受体及其Ⅲ型突变体在人食管癌的表达及意义

目的检测表皮生长因子受体(EGFR)及表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)在人食管癌组织中的表达,探讨其与食管癌发生、发展的关系及其与各临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组织化学染色法(Maxvision TM二步法)检测食管癌组织及正常食管组织中EGFR和EGFRvⅢ蛋白的表达水平,并将检测结果与临床病理参数进行综合分析。结果食管癌组织EGFR和EGFRvⅢ的表达率分别为65.6%、58.5%,正常食管黏膜EGFR和EGFRvⅢ表达率为30.0%、0%。EGFR在食管癌组织的表达明显高于正常食管组织(P<0.01),EGFRvⅢ在正常食管黏膜不表达。二者在食管癌组织的表达与性别、年龄、肿瘤大小和生长部位均无相关(P>0.05),与食管癌的分化程度、淋巴结转移、远隔器官转移及临床分期相关(P<0.05)。结论EGFR、EGFRvⅢ过度表达可能与食管癌的发生发展密切相关,EGFR、EGFRvⅢ有望作为预测食管癌预后的候选基因,EGFRvⅢ在食管癌组织中特异性表达,可能使其成为食管癌治疗的理想的靶点。