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EHEC O157:H7二重PCR的建立及应用 被引量:7
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作者 李丽 张雪寒 +13 位作者 何孔旺 姜平 赵攀登 叶青 栾晓婷 温立斌 倪艳秀 周俊明 吕立新 郭容利 俞正玉 茅爱华 李彬 王小敏 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期59-66,共8页
建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法。根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以E... 建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法。根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以EHEC O157:H7纯培养和模拟制备的3种阳性样品为原材料,对方法的敏感性和特异性进行分析。运用成功建立的二重PCR,从带菌率最高的牛粪便中检测EHEC O157:H7,并进行菌株分离和鉴定。成功建立了rfbE与fliC的二重PCR方法,rfbE与fliC引物比例为2.5∶1,PCR循环参数中退火温度为56℃,扩增片段长度rfbE为812 bp,fliC为625 bp。检测阳性临床样品检测敏感性可以达到10 cfu/g。检测24株非EHEC O157:H7大肠杆菌和15株非大肠杆菌,只有EHECO157:H7能够扩增出特异性的rfbE条带,EHEC O157:H7和EPEC O55:H7能够扩增出fliC。只有EHEC O157:H7能够同时扩增出rfbE与fliC 2条目的条带。从63份牛粪便样品中分离到4株EHEC O157:H7:生化试验表明4株EHEC O157:H7具有典型EHECO157:H7的生化特性;药敏试验表明4株EHEC O157:H7具有较为广谱的耐药性;rfbE序列分析与GenBank序列同源性介于97.3%~99.2%之间,fliC序列与GenBank序列同源性介于97.6%~100%之间;4株EHEC O157:H7对Balb/c小鼠的致病性有差异,EHEC O157:H728#和EHEC O157:H738#致病性强,EHEC O157:H73#和EHEC O157:H717#较弱。以rfbE和fliC为目的基因成功建立了二重PCR,敏感性和特异性良好,可用于临床样品的检测,提高细菌分离率。 展开更多
关键词 o157:h7 二重PCR 方法建立 细菌分离 样品检测
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河南省新发传染病EHEC O157:H7监测研究 被引量:8
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作者 夏胜利 沈刚健 +2 位作者 靳会娟 马宏 张锦 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2008年第23期4691-4694,共4页
[目的]了解河南省肠出血性大肠杆菌(EHEC)感染性腹泻的发病情况、宿主带菌状况、食品污染程度及志贺毒素(stx)基因型,为制订有效的防治对策提供依据。[方法]采集河南省监测点腹泻病人、家畜、家禽粪便,水和肉食品等标本分离EHEC菌株,应... [目的]了解河南省肠出血性大肠杆菌(EHEC)感染性腹泻的发病情况、宿主带菌状况、食品污染程度及志贺毒素(stx)基因型,为制订有效的防治对策提供依据。[方法]采集河南省监测点腹泻病人、家畜、家禽粪便,水和肉食品等标本分离EHEC菌株,应用分子生物学技术检测分析菌株rfbO157、rfbO111、hlyA、eaeA、stx2和stx1等毒力基因和突变基因。[结果](1)从腹泻病人、家畜、家禽、食品、水、蜣螂和苍蝇中均分离出EHEC菌株共275株,总分离率7.88%;其中O157︰H7菌株为232株(84.36%),携带stx2基因EHECO157︰H7菌株88株(37.93%);非O157︰H7菌株43株(15.64%)。(2)宿主动物中羊带菌率最高(6.96%),是河南省EHEC最主要宿主动物;多重PCR检测出8种不同毒力基因组合型,主要为rfbO157+、hlyA+、eaeA+、stx2+组合。stx2变种毒素GK探针检测出3种毒素变种杂交带型,其中stx2原毒素+stx2vha型占7.4%,stx2vha型的占72.2%,未知新杂交带型占20.4%。(3)EHECO157︰H7菌株可分为9个PFGE型,自羊、牛、鸡和蜣螂和腹泻病患者中分离的携带stx2vha菌株同属一个PFGE型。(4)144株不携带志贺毒素的O157菌株中发现O157︰H38、O157︰H42和O157︰Hund(未确定型)新菌株。[结论]河南省家禽、家畜中普遍携带EHECO157︰H7大肠杆菌,羊是最主要的宿主动物;EHECO157︰H7为我省优势菌型,其毒素基因型为stx2-eaeA-hlyA并以stx2vha亚型为主。EHEC在外环境中污染严重并可在人与人、动物与人之间传播,家畜、家禽携带stx2 EHECO157︰H7率的高低与EHEC人群感染发病呈相关关系。 展开更多
关键词 ehec o157:h7 腹泻 志贺毒素基因 基因型 多重PER PFGE
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首次发现一株与EHEC O157:H7血清交叉凝集的维罗纳气单胞菌温和生物变种
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作者 李刚山 徐庆 +4 位作者 朱姝媛 周卫国 龙沛然 范泉水 邱薇 《中华临床医药杂志(北京)》 CAS 2004年第22期59-60,共2页
2002年夏季,我们对云南战区部队感染性腹泻病原监测时,从1例腹泻患者粪便标本中分离到1株氧化酶阳性,能与EHEC O157:H7诊断血清发生强凝集反应的维罗纳气单胞菌温和生物变种(Aeromonas Veronni biovar sobria),国内未见报道,现将... 2002年夏季,我们对云南战区部队感染性腹泻病原监测时,从1例腹泻患者粪便标本中分离到1株氧化酶阳性,能与EHEC O157:H7诊断血清发生强凝集反应的维罗纳气单胞菌温和生物变种(Aeromonas Veronni biovar sobria),国内未见报道,现将结果报告如下。 展开更多
关键词 ehec o157:h7 交叉凝集 维罗纳气单胞菌温生物变种 诊断血清 药敏试验
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超产毒性EHEC O157:H7实验感染无菌鼠
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作者 冯洁 江丽君 《生物制品快讯》 2003年第6期5-6,共2页
关键词 超产毒性ehec o157:h7 实验 感染 无菌鼠 动物模型
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EHEC O157:H7大肠杆菌的流行病学特征和检测方法概述
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作者 聂青平 《中国畜产与食品》 1998年第5期233-234,共2页
关键词 ehec 流行病学特征 o157:h7 大肠杆菌 检测
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鼠李糖乳杆菌制剂抗EHEC O157:H7的作用
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作者 王燕 陈锦荣 《生物制品快讯》 2003年第6期19-19,共1页
关键词 鼠李糖乳杆菌制剂 ehec o157:h7感染 微生态免疫促进制剂 小鼠 免疫应答
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Antibacterial mechanism of kojic acid and tea polyphenols against Escherichia coli O157:H7 through transcriptomic analysis 被引量:1
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作者 Yilin Lin Ruifei Wang +4 位作者 Xiaoqing Li Keren Agyekumwaa Addo Meimei Fang Yehui Zhang Yigang Yu 《Food Science and Human Wellness》 SCIE CSCD 2024年第2期736-747,共12页
Escherichia coli O157:H7 is one of the major foodborne pathogenic bacterial that cause infectious diseases in humans.The previous found that a combination of kojic acid and tea polyphenols exhibited better activity ag... Escherichia coli O157:H7 is one of the major foodborne pathogenic bacterial that cause infectious diseases in humans.The previous found that a combination of kojic acid and tea polyphenols exhibited better activity against E.coli O157:H7 than using either alone.This study aimed to explore responses underlying the antibacterial mechanisms of kojic acid and tea polyphenols from the gene level.The functional enrichment analysis by comparing kojic acid and tea polyphenols individually or synergistically against E.coli O157:H7 found that acid resistance systems in kojic acid were activated,and the cell membrane and genomic DNA were destructed in the cells,resulting in“oxygen starvation”.The oxidative stress response triggered by tea polyphenols inhibited both sulfur uptake and the synthesis of ATP,which affected the bacteria's life metabolic process.Interestingly,we found that kojic acid combined with tea polyphenols hindered the uptake of iron that played an essential role in the synthesis of DNA,respiration,tricarboxylic acid cycle.The results suggested that the iron uptake pathways may represent a novel approach for kojic acid and tea polyphenols synergistically against E.coli O157:H7 and provided a theoretical basis for bacterial pathogen control in the food industry. 展开更多
关键词 Kojic acid Tea polyphenols Antibacterial mechanism Escherichia coli o157:h7 RNA-SEQ
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食品中肠出血性大肠杆菌O157∶H7的检测技术研究进展
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作者 周炳武 于泽 +5 位作者 闫兆伦 刘雨涵 侯嘉欣 刘晓倩 谢婧宜 刘晔 《中国食品添加剂》 CAS 2024年第1期303-313,共11页
近年来,因食源性致病菌造成的食品中毒正在不断增加,严重威胁了人类的健康,大肠杆菌(E.coli)O157∶H7由于其低感染剂量和高致病性等特点引起了研究人员和世界卫生组织的高度重视。因此精准快速的检测食品中的E.coli O157∶H7对食品安全... 近年来,因食源性致病菌造成的食品中毒正在不断增加,严重威胁了人类的健康,大肠杆菌(E.coli)O157∶H7由于其低感染剂量和高致病性等特点引起了研究人员和世界卫生组织的高度重视。因此精准快速的检测食品中的E.coli O157∶H7对食品安全问题有着重要的意义,是预防和控制食源性疾病传播的重要技术,为此本文对E.coli O157∶H7的常规检测方法、免疫学法、分子生物学法和其他方法进行论述,介绍了这些方法的优缺点,对各种方法进行了整体比较,以期为有关工作者在选择检测方法或研发新方法提供参考。 展开更多
关键词 食源性致病菌 大肠杆菌o157h7 食品安全 检测方法
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一种可快速检测大肠杆菌O157:H7的纸基传感器的制备与应用
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作者 王晓颖 施锦辉 +3 位作者 王金娟 戴晗祎 郭骁驹 王晓惠 《现代食品》 2024年第3期173-177,共5页
大肠杆菌O157:H7是一种致病性较强的食源性细菌,通常在生制食品中被检出,一旦被人体摄入会引发肠道疾病,严重危害公众健康。本研究制备了功能化的长余辉探针,并结合适配体的特异性识别功能构建了能快速检测大肠杆菌O157:H7的纸基传感器... 大肠杆菌O157:H7是一种致病性较强的食源性细菌,通常在生制食品中被检出,一旦被人体摄入会引发肠道疾病,严重危害公众健康。本研究制备了功能化的长余辉探针,并结合适配体的特异性识别功能构建了能快速检测大肠杆菌O157:H7的纸基传感器,检出限达7.5×10^(3) CFU·mL^(-1)。该传感器可同时检测3个样品,具有特异性好、操作简便和环境友好的特点,可应用于大量样品中大肠杆菌O157:H7的快速筛查。 展开更多
关键词 大肠杆菌o157:h7 长余辉探针 纸基传感器 快速筛查
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不同方法检测食品中大肠埃希氏菌O157:H7/HM能力验证结果比较与分析
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作者 燕妮 段鹏 杨雅珺 《甘肃科技》 2024年第1期70-73,共4页
为提高实验室对食品中大肠埃希氏菌O157∶H7的检验检测能力,笔者单位参加了由中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的食品中大肠埃希氏菌O157∶H7检测能力验证计划。此次实验采用国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃... 为提高实验室对食品中大肠埃希氏菌O157∶H7的检验检测能力,笔者单位参加了由中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的食品中大肠埃希氏菌O157∶H7检测能力验证计划。此次实验采用国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157∶H7/NM检验》(GB 4789.36—2016)中的第一法和实时荧光PCR方法,分别对能力验证样品进行检测。结果显示,样品23-G520中未检出大肠埃希氏菌O157∶H7;样品23-F568中检出大肠埃希氏菌O157∶H7,结果反馈为满意。在能力验证实验中,不同检测方法同时使用、综合判断,能有效提高检测能力和结果的准确性。 展开更多
关键词 能力验证 大肠埃希氏菌o157:h7 实时荧光PCR
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河南省肠出血性大肠杆菌(EHEC O157:H7)感染之流行与基因特征研究 被引量:13
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作者 马宏 张锦 +4 位作者 王建丽 夏胜利 黄丽莉 沈刚健 王殿法 《河南医学研究》 CAS 2004年第2期116-120,127,共6页
目的 :了解河南省肠出血性大肠杆菌 (enterohemorrhagicescherichiacoli,EHEC)的流行状况与流行菌株的志贺毒素基因型。方法 :采集河南省 14个监测点上腹泻病人、家畜家禽粪便和肉食品等标本分离E HEC菌株。应用分子生物学技术检测EHEC... 目的 :了解河南省肠出血性大肠杆菌 (enterohemorrhagicescherichiacoli,EHEC)的流行状况与流行菌株的志贺毒素基因型。方法 :采集河南省 14个监测点上腹泻病人、家畜家禽粪便和肉食品等标本分离E HEC菌株。应用分子生物学技术检测EHEC菌株的rfbO157、rfbO111、hlyA、eaeA、stx2 和stx1等毒力基因和志贺毒素基因亚型 ,应用细胞培养技术检测菌株Vero细胞毒性。结果 :从腹泻病人、家畜家禽、肉食品、苍蝇、蜣螂中均分离出EHECO15 7:H7菌株 ,波尔山羊的带菌率最高达到 2 9.8%。 13 8株携带志贺毒素基因的菌株中 ,EHECO15 7:H7计 95株 ,占产毒菌株的 68.8% ;EHEC非O15 7菌株 43株 ,占 3 1.2 %。菌株可分为 5种毒素基因型 ,EHECO15 7:H 7仅含stx2 基因 ,以stx2 vha亚型为主 ,不含有stx1基因。EHEC非O15 7血清型毒素基因型较复杂。携带stx1和 /或stx2 的菌株均具有Vero细胞毒性。结论 :河南省腹泻病人和家畜家禽中存在EHEC感染。EHECO15 7:H7血清型是优势菌型 ,羊是主要宿主动物。目前河南省EHECO15 7:H7菌株毒素基因型为stx2 并以stx2 vha亚型为主。 展开更多
关键词 河南 肠出血性大肠杆菌 细菌感染 流行病 基因 多重PCR
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EHEC O157∶H7志贺毒素ⅡA1亚单位蛋白的构建表达与免疫原性鉴定 被引量:7
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作者 罗萍 曾浩 +5 位作者 易勇 张卫军 郭鹰 刘璐 陈洪章 邹全明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期287-290,共4页
目的构建表达GST-STX2A1融合蛋白并鉴定其免疫原性。方法通过PCR反应从EHEC O157∶H7EDL933标准株菌中扩增STX2A1基因,将此基因克隆到GST融合蛋白原核表达载体PGEX-6p-1,得到阳性克隆PGEX-6p-1/STX2A1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导GST-STX... 目的构建表达GST-STX2A1融合蛋白并鉴定其免疫原性。方法通过PCR反应从EHEC O157∶H7EDL933标准株菌中扩增STX2A1基因,将此基因克隆到GST融合蛋白原核表达载体PGEX-6p-1,得到阳性克隆PGEX-6p-1/STX2A1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导GST-STX2A1融合蛋白的表达,采用亲和层析纯化该蛋白,SDS-PAGE分析其表达量、表达形式和纯度;用纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,免疫双向扩散鉴定抗血清效价,Western blotting鉴定抗血清的特异性。结果成功构建重组质粒PGEX-6p-1/STX2A1,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致,并在大肠杆菌中表达出Mr约为5.3×104大小的可溶性目的蛋白,经亲和层析纯化后纯度可达90%,免疫Balb/c小鼠产生的抗血清效价为1∶16,Western blotting表明可与天然STX2A蛋白反应。结论在大肠杆菌中成功表达了可溶性的GST-STX2A1融合蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性,为O157∶H7亚单位疫苗及制备抗STX2A1的单克隆抗体提供了必要的物质基础。 展开更多
关键词 o157h7 STX2A1 免疫原性
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肠出血性大肠杆菌(EHEC) O157∶H7志贺毒素研究进展 被引量:14
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作者 陈洪章 邹全明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期83-85,共3页
关键词 肠出血性大肠杆菌 志贺毒素 o157:h7 o157:h7感染 大肠杆菌o157 革兰氏阴性杆菌 法定报告传染病 公共卫生问题
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一株与EHECO_(157):H_7诊断血清交叉凝集的维罗纳气单胞菌温和生物变种的分离鉴定 被引量:6
14
作者 李刚山 范泉水 +3 位作者 朱姝媛 周卫国 龙沛然 邱薇 《解放军预防医学杂志》 CAS 北大核心 2005年第3期219-220,共2页
目的对检出引起腹泻的新病原菌进行分离鉴定,为腹泻病原学理论及腹泻病因的防治提供依据。方法采取在SMAC上分离获纯培养菌、血清学检验、药敏试验和电子显微镜观察形态,以及微生物鉴定仪进行系统生化鉴定的方法。结果检出1株氧化酶阳... 目的对检出引起腹泻的新病原菌进行分离鉴定,为腹泻病原学理论及腹泻病因的防治提供依据。方法采取在SMAC上分离获纯培养菌、血清学检验、药敏试验和电子显微镜观察形态,以及微生物鉴定仪进行系统生化鉴定的方法。结果检出1株氧化酶阳性且能与EHECO157:H7诊断血清发生强凝集反应的维罗纳气单胞菌温和生物变种。结论该菌株的发现提示在分离EHECO157:H7时,为避免出现假阳性,必须进行系统化鉴定,以确保菌株鉴定的准确性。 展开更多
关键词 维罗纳气单胞菌温和生物变种 肠道病原菌 ehec o157:h7诊断血清
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纳米金与纳米金花标记的免疫层析法的建立及快速检测大肠杆菌O157∶H7的比较研究
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作者 王英林 吴娅芳 +3 位作者 刘程 黄志强 刘坤 刘箐 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第22期287-294,共8页
为实现大肠杆菌O157∶H7早期现场的快速检测,该试验通过化学还原法与介导生长法制备了AuNPs与AuNFs作为标记探针,建立2种用于大肠杆菌O157∶H7现场快速检测的免疫层析试纸条,并对2种试纸条的的灵敏度、特异性和准确性进行检测。结果显示... 为实现大肠杆菌O157∶H7早期现场的快速检测,该试验通过化学还原法与介导生长法制备了AuNPs与AuNFs作为标记探针,建立2种用于大肠杆菌O157∶H7现场快速检测的免疫层析试纸条,并对2种试纸条的的灵敏度、特异性和准确性进行检测。结果显示,所建立的2种免疫层析方法均可在15 min内检出食品中的大肠杆菌O157∶H7,其中AuNP试纸条最低检出限为3.2×10^(5)CFU/mL,AuNFs试纸条最低检出限为3.2×10^(4)CFU/mL,与单增李斯特菌、沙门氏菌、坂崎肠杆菌等常见食源性致病菌没有交叉反应。对人工污染果冻、牛奶和牛肉等样品AuNPs试纸条分别在前增菌5、6、5 h时检出,AuNFs试纸条分别在前增菌5、5、4 h时检出,且不受食品复杂机制的影响。结果表明,所建立的2种免疫层析试纸条灵敏度高、特异性强、操作简便,适用于大肠杆菌O157∶H7现场快速检测。 展开更多
关键词 大肠杆菌o157h7 新型胶体金 纳米金花 快速检测
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EHECO157∶H7stx基因缺失突变株的构建及其特性 被引量:1
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作者 孙洋 刘军 +3 位作者 郭学军 常国权 尹铁勇 冯书章 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期166-169,共4页
针对肠出血性大肠杆菌 (EHEC) O1 5 7∶H7的 stx基因 ,通过 PCR扩增出缺失了 1 83bp的 stx基因片段 ,将其克隆到自杀性载体 p CVD4 4 2中 ,然后通过接合性转导将重组自杀性质粒 p CVD4 4 2∷Δstx从大肠杆菌 SM1 0转到 O1 5 7∶ H7中 ,... 针对肠出血性大肠杆菌 (EHEC) O1 5 7∶H7的 stx基因 ,通过 PCR扩增出缺失了 1 83bp的 stx基因片段 ,将其克隆到自杀性载体 p CVD4 4 2中 ,然后通过接合性转导将重组自杀性质粒 p CVD4 4 2∷Δstx从大肠杆菌 SM1 0转到 O1 5 7∶ H7中 ,利用抗性标记和 PCR方法筛选出 O1 5 7∶ H7stx基因缺失突变菌株。Vero细胞毒性试验证实 ,该突变株不能产生完整的 Stx。动物试验表明 ,与强毒株相比该突变株的致病性明显降低。该突变株的构建为研究志贺毒素在 EHEC O1 5 7感染中所起的作用和研制 O1 5 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌 stx基因 基因缺失突变 致病性 自杀载体技术 表型
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EHEC O157:H7志贺毒素Ⅱ型A、B亚单位的表达及功能鉴定 被引量:1
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作者 焦永军 郭喜玲 +5 位作者 史智扬 曾晓燕 朱进 孙慧 万佳艺 汪华 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期20-23,共4页
目的克隆、表达肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157:H7志贺毒素(Shigatoxin,Stx)Ⅱ型A、B亚单位,并鉴定其免疫学功能。方法从EHECO157:H7基因组中克隆编码StxⅡ型A、B亚单位的基因,经测序、酶切... 目的克隆、表达肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157:H7志贺毒素(Shigatoxin,Stx)Ⅱ型A、B亚单位,并鉴定其免疫学功能。方法从EHECO157:H7基因组中克隆编码StxⅡ型A、B亚单位的基因,经测序、酶切后,导人表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌Top10F′,经诱导、纯化得到谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)-A和GST-B融合蛋白。分别用A、B亚单位融合蛋白免疫BALB/c小鼠获得高免血清,观察A、B亚单位血清对小鼠进行毒素攻击的保护作用。结果StxⅡ型A、B亚单位的GST融合蛋白获得高效表达并纯化;A、B亚单位的高免血清可以保护小鼠对致死量毒素的攻击。结论StxⅡ型A、B亚单位蛋白可以作为EHECO157:H7疫苗的候选分子,同时针对A、B亚单位蛋白的中和单抗可以对易感人群起到紧急保护作用。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌(ehec)o157:h7 志贺毒素Ⅱ型A B亚单位 功能鉴定
原文传递
一株肠出血性大肠杆菌O_(157)H_7免疫奶牛实验即抗EHEC O_(157)H_7免疫乳的试制 被引量:5
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作者 郭军 张和平 +4 位作者 李立民 刘桂芳 云振宇 武俊瑞 周然 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第8期254-258,共5页
用1株O157H7菌株和另外11株人类肠道主要病原细菌配制O157H7单菌疫苗和多菌联合多价疫苗,对荷斯坦牛进行免疫实验。对免疫常乳中抗EHEC O157H7特异性抗体凝集价进行了长期监测,并对受试奶牛的免疫反应、应激反应及疫苗对奶牛可能产生的... 用1株O157H7菌株和另外11株人类肠道主要病原细菌配制O157H7单菌疫苗和多菌联合多价疫苗,对荷斯坦牛进行免疫实验。对免疫常乳中抗EHEC O157H7特异性抗体凝集价进行了长期监测,并对受试奶牛的免疫反应、应激反应及疫苗对奶牛可能产生的毒性作用进行了观察。结果证明,疫苗免疫效果很好,所有奶牛在整个泌乳期一直保持较高的特异性抗体效价(滴度),均在27以上,下个泌乳期开始阶段也未见明显下降的迹象。本次实验意外发现约有30%的未进行过免疫注射的对照组乳样有较高的O157H7特异性抗体滴度,个别乳样凝集价高达27,这可能说明这些牛群中有较高的O157H7感染率或携带率。O157H7是人类近二十余年来才开始认识到的出血性结肠炎(HC)的主要致病菌,能造成出血性腹泻和其它严重并发症。是值得研究和重点防范的病原细菌。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌o157h7 免疫奶牛 免疫乳 疫苗 抗体滴度 免疫注射
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EHECO157:H7紧密粘附素胞外特异性片段(intiminC)的表达纯化及免疫检测的初步应用 被引量:2
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作者 罗云 易勇 +3 位作者 毛旭虎 邹全明 肖敏 敬华 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第8期1473-1476,1555,共5页
目的:克隆表达并纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7紧密粘附素胞外特异性片段(intiminC),摸索其免疫检测的初步应用。方法:设计引物采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增紧密粘附素胞外特异性片段的编码基因eaeC,T-A克隆后构建原核表达质... 目的:克隆表达并纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7紧密粘附素胞外特异性片段(intiminC),摸索其免疫检测的初步应用。方法:设计引物采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增紧密粘附素胞外特异性片段的编码基因eaeC,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-21a(+)-eaeC,经测序鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测。目的蛋白经包涵体洗涤,使用含谷胱甘肽氧化还原系统的复性缓冲液进行稀释并结合透析复性后,再用阴离子交换柱Resource Q和分子筛柱Superdex200进行纯化。将所得高纯度目的蛋白包被ELISA酶标板,对实验动物的免疫血清进行检测。结果:PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增出了约570 bp的目的片段;原核表达质粒pET-21a(+)-eaeC经酶切及测序鉴定与设计序列一致。转化E.coliBL21(DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约35%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约20×103,破菌后电泳证实目的蛋白均以包涵体形式表达。包涵体复性后目的蛋白纯化效果明显,高纯度的intiminC蛋白包被ELISA板,对实验室动物免疫血清的检测效果良好。结论:EHEC O157:H7紧密粘附素胞外特异性片段经基因克隆后获得了较好的表达,复性纯化后获得高纯度的目的蛋白intiminC,在此基础上建立的ELISA检测方法对实验室动物免疫血清的检测效果良好。为进一步的人血清抗体检测及EHEC O157:H7感染的流行病学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌(ehec)o157:h7 紧密粘附素 克隆表达 免疫检测
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安徽省114株EHECO_(157)∶H_7菌株毒力因子基因的初步分析 被引量:2
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作者 胡万富 贾嘉 +1 位作者 虞勇 陆美娟 《疾病监测》 CAS 2003年第10期367-369,共3页
目的 对安徽省近几年分离的肠出血性大肠杆菌O1 57∶H7(EHECO1 57∶H7)菌株的毒力因子基因进行实验室检测 ,以分析和研究肠出血性大肠杆菌O1 57∶H7的毒力特征和致病特性。方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测EHECO1 57∶H7的两种重要的... 目的 对安徽省近几年分离的肠出血性大肠杆菌O1 57∶H7(EHECO1 57∶H7)菌株的毒力因子基因进行实验室检测 ,以分析和研究肠出血性大肠杆菌O1 57∶H7的毒力特征和致病特性。方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测EHECO1 57∶H7的两种重要的毒力因子志贺样毒素 (SLT)和溶血素 (hly)的特异性基因片段 ,并辅以血清学试验、生化试验进行菌株的生物学特性鉴定。结果和结论 检测结果显示 ,有 6 3 2 %的EHECO1 57∶H7菌株携带SLT、hly基因 ,动物源的菌株以家禽较高 ,家畜次之 ,3株源自腹泻病人的菌株毒力因子基因携带率为33 3% ,说明分离的EHECO1 57∶H7菌株具有较强的致病性 ;114株菌株中 ,有 14 0 %的菌株在 2 4h内发酵山梨醇 ,发酵山梨醇菌株的毒力因子基因携带率 18 8% ,显著低于不发酵菌株的 70 4 % 。 展开更多
关键词 安徽 eheco157:h7 毒力因子 基因缺失 基因携带率 肠出血性大肠杆菌 聚合酶链反应
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