猪瘟兔化弱毒E2蛋白A/D区的高效表达和蛋白纯化及其应用

本试验对表达猪瘟E2囊膜糖蛋白的原核表达载体pET-E2的表达条件进行了优化,在此基础上,对表达的蛋白质进行了纯化。在6 mol/L盐酸胍存在的条件下,将包涵体溶解在Tris-HCI中,并直接用于His Band亲和层析。收集过柱产物并透析,在2%SDS条件下,对所得的重组蛋白质进行了定量。重组蛋白质被用来包被96孔ELISA板并应用于免疫猪瘟抗体水平的测定。

重组日本血吸虫26kDaGST抗原免疫家兔后抗体动态观察

目的： 探讨重组日本血吸虫２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原免疫家兔后抗体水平动态变化。方法： 家兔随机分为免疫组与佐剂对照组，免疫组用纯化重组日本血吸虫 ２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原加福氏佐剂免疫；佐剂对照组用０．８５％ 盐水加福氏佐剂免疫。免疫后，每兔逐周取耳静脉血，采用酶联免疫吸附试验（ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 检测血清中特异性抗体水平。结果： 免疫组家兔从免疫后第４ ｗ ｋ 起血清中特异性抗 Ｇ Ｓ Ｔ 抗体升高，且维持在较高的水平达６５ ｗ ｋ。结论： 重组日本血吸虫 ２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原免疫家兔后，特异性抗 Ｇ Ｓ Ｔ 抗体水平较对照组明显升高，且至少能维持 １ 年。

2379例不孕不育患者的抗精子抗体分析

目的分析抗精子抗体(AsAb)与不孕不育的关系。方法采用EILSA方法检测2346例患者的血清、精浆和宫颈粘液中的AsAb。结果男性精浆样本1366例,其中273例AsAb-IgA阳性(19.99%),血清样本1366例,其中231例AsAb-IgG阳性(16.91%);女性宫颈粘液样本983例,其中294例AsAb-IgA阳性(29.90%),女性血清样本983例,其中196例AsAb-IgG阳性(19.94%)。结论女性AsAb阳性率均相应高于男性,男女生殖道分泌物中IgA阳性率均分别高于血清中的IgG阳性率,进行抗精子抗体的检测对不孕不育的诊断和治疗有重要的意义。

快速ELISA和压片镜检法对猪胴体中旋毛虫检验的比较

应用快速酶联免疫吸附试验(ELISA)分别对448头猪胴体和895头猪胴体检测旋毛虫抗体,并与常规压片镜检法进行了比较。前者检测结果表明:血样、肌样ELISA检测旋毛虫抗体阳性检出率分别为9.82％(44/448)和9.15％(41/448),压片镜检法检出有虫体猪阳性检出率为4.91％(22/448),压片镜检法与血样、肌样ELISA的检测结果有明显差别(P<0.05);镜检法检出虫体的22头猪胴体,血样ELISA均为阳性,肌肉样ELISA有21头相符:ELISA与血样ELISA比较,它们的阳性符合率为93.18％(41/44)。后者检测结果表明:ELISA检测旋毛虫抗体阳性检出率为6.59％(59/895),压片镜检法旋毛虫阳性检出率为3.01％(27/895),压片镜检法与ELISA的检测结果有明显差异(P<O.05)。快速ELISA对猪囊虫肉未见发生交叉反应;在猪胴体上采取血凝块、肉块或新鲜断面上组织液做快速ELISA反应,均获得满意结果。试验结果表明,本法灵敏度高、特异性强、操作简便、快速、完成整个过程需要10～13分钟;在定点屠宰检疫或进行市场肉品兽医卫生监测时,采用快速ELISA能提高猪肉肌旋毛虫检出率。

三种抗-HCV试剂盒的比较

抗HCV检测结果的一致现象不容忽视,现用不同厂商提供的EIISA法检测抗-HCV试剂盒,进行检测性能的比较。丙型肝炎又称输血后肝炎,是慢性血液传播疾病中最常见的疾病,在我国人群感染丙型肝炎的病毒情况不一,有的地区抗-HCV阳性率达到1.3%,实验室检测抗-HCV的常用方法是酶联免疫吸附法（ELISA），不少国内厂家推出了抗一HCV试剂检测盒，卫生部规定对这些试剂实行质量检定，这样对保证检验结果有很大意义。我们用了三个厂家的抗一HCV诊断试剂盒检测标本，对其进行质量比较，结果如下：

酶联免疫吸附试验检测血清抗中性粒细胞胞质抗体方法的建立与临床应用

目的建立总抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)的方法,初步探讨其在ANCA相关血管炎中的表达及临床应用价值。方法从人的中性粒细胞中提取总抗原,用棋盘滴定法选择ELISA测定的最佳条件,确定临界值。测定系统性红斑狼疮(SLE)、肾病、血管炎、类风湿关节炎(RA)等患者血清总ANCA,并与间接免疫荧光(IIF)法、特异性髓过氧化物酶(MPO)-ANCA及蛋白酶3(PR3)-ANCA进行分析比较。结果总抗原ELISA与IIF法检测肾病、SLE、血管炎及RA患者血清ANCA阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。抗原特异性ELISA、IIF法检测肾病、血管炎、RA患者血清ANCA阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05),而SLE差异有统计学意义(P<0.05)。结论ELISA检测ANCA可行且具有广泛的推广应用前景。

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断脑囊虫病报告——附3例病例报告

目的:通过临床应用酶联免疫吸附试验(EIISA),证明该试验对诊断脑囊虫病的临床价值。方法:ELISA试验是目前由免疫学发展起来的。它在不破坏酶的催化活性及免疫球蛋白的免疫活性的条件下,将酶分子标记到免疫球蛋白分子上,进行抗原或抗体的示踪、定位或定量测定。酶与抗原或抗体分子结合稳定,具有灵敏、特异、判断结果方便等优点。本院神外实验室每年约检测该项目平均150余次,结合临床症状、体征、CT、MRI等表现给予分析。结果:检测阳性结果对脑囊虫病的诊治有实用参考价值。结论:临床上应用EIISA检测的方法,特别通过3例脑囊虫病人的病例进一步证明此试验对脑囊虫病的诊断、鉴别诊断,愈后判断及随访确有实用价值及临床意义。

表面表达猪水肿病毒素保护性抗原重组大肠杆菌激发仔猪黏膜免疫反应的研究

以菌体表面表达猪水肿病毒素保护性抗原(SLT-ⅡeB)的重组大肠杆菌(PZBSPAX),对1日龄、15日龄仔猪口服免疫,用ELISA法对口服免疫后10 d1、5 d、30 d仔猪肠黏液中特异性SIgA和血清中特异性IgAI、gG进行检测,结果显示口服免疫猪能产生较高水平的肠黏液特异性SIgA及血清特异性IgA和IgG,证明该重组菌能有效激发肠道黏膜免疫反应,同时也能激发全身性体液免疫反应。

TRAP—PCR ELISA及银染法检测肺刷落细胞中端粒酶活性

以非同位素法检测肺刷落细胞中端粒酶活性及在肺癌中的诊断价值。方法采用端粒酶重复放大程序ＴＲＡＰ（ＴｅｌｏｍｅｒａｓｅＲｅｐｅａｔＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎＰｒｏｔｏｃｏｌ）ＰＣＲＥＬＩＳＡ法及聚丙烯酸胺凝胶电泳一银染法，对８０例支气管肺刷落细胞样本进行定性及定量端粒酶活性检测。结果肺癌患者患侧端粒酶定性检测阳性率为８８．６％，其对侧部位为２２．７％，肺炎阳性率为１１．８％。定量法检测肺癌病人的端粒酶活性水平（中位ＯＤ值：０．０８９）明显高于其对侧肺部（中位ＯＤ值：０．０２８）及肺炎组（中位ＯＤ值：０．０１４）。另外病理发现不典型增生者６例中有５例端粒酶阳性。结论应用该方法对肺刷落细胞中端粒酶活性的测定可以作为肺部恶性肿瘤诊断有效而敏感的手段之一。

急性脑梗死患者血清白细胞介素-18水平及临床意义

目的探讨急性脑梗死患者血清白细胞介素-18(IL-18)水平的变化及临床意义。方法选择急性脑梗死患者46例,按梗死体积及神经功能缺损程度分组,用ELISA法检测血清IL-18水平并与正常对照组比较。结果小梗死组、中梗死组、大梗死组患者血清IL-18水平依次逐级升高(P<0.05),血清IL-18水平与脑梗死体积呈正相关性(r=0.819,P<0.001)。轻型组、中型组、重型组患者血清IL-18水平逐渐升高(P<0.05),血清IL-18水平与临床神经功能缺损程度评分呈正相关性(r=0.847,P<0.001)。结论急性脑梗死患者血清IL-18水平升高;血清IL-18水平与脑梗死体积及临床神经功能缺损程度密切相关,有助于判断急性脑梗死患者病情及预后。

过敏性紫癜患儿淋巴细胞活化、分泌及雷公藤对其作用

目的 探讨过敏性紫癜(HSP)患儿外周血淋巴细胞(PBLs)活化、分泌状态的变化以及雷公藤内酯醇(TP)对其作用。方法 常规分离PBLs,以流式细胞仪检测CD3、CD2 5抗原表达率,以EILSA法检测白细胞介素-4 (IL - 4 )分泌水平。结果 与健康儿童比较,HSP患儿PBLs培养0、4 8hCD+ C D+ 2 5细胞百分率及IL - 4分泌水平均明显升高(P <0 .0 5 ) ;应用TP后,培养4 8hHSP患儿PBLsCD3(+)CD2 5 (+)细胞百分率及IL - 4分泌水平均明显降低(P <0 .0 5 )。结论 HSP患儿PBLs活化及分泌水平异常增高,可能参与HSP的发病机制;TP抑制PBLs活化及分泌,可能是雷公藤对HSP作用机制之一。

核酸检测技术在血液检测中的应用评价

HBV、 HCV以及HIV病毒可通过核酸检测来缩短其检测的窗口期, 以达到早发现、 早治疗、 早控制以及预防交叉感染的目的. 日本以及德国等国家在很早以前就在血液检测中引入核酸检测技术进行检测, 五六年前我国全面开展核酸试点检测工作. 卫生部为了支持该项技术的开展, 提出一种EIISA方法加核酸检测技术进行血液样品的筛查. 本次研究以86520份血液标本为研究对象, 探究核酸检测技术在血液检测中的应用价值. 现报道如下.

基于改良方法的光密度值标准化平台开发

开发一套能够将酶联免疫吸附(ELISA)试验结果标准化的应用平台,以克服ELISA法检测结果变异大,而标准化过程又包含环节多的不足。平台设计以改良光密度值变换法(I-STOD)为基础,标准化公式中的参数估计采用高斯-牛顿迭代法,以程序设计语言VB为平台界面开发工具。结果显示,标准化平台可判断实验结果的有效性,给出可标准化的检测值范围,计算标准化浓度值,对于不在该范围内的样本,给出重新检测时的稀释倍数,规范了标准化工作的流程。该平台界面友好,使用方便,为广大科研人员提供了便捷有效的标准化工具。