姜黄素对膀胱癌EJ细胞的作用研究

目的 :观察姜黄素对膀胱癌系细胞EJ的体外作用 ,并探讨其可能的作用机制。方法 :应用光镜形态学 ,MTT法、流式细胞仪和免疫细胞化学法观察了 5、10、2 0mg/L姜黄素在体外对膀胱癌EJ细胞的生长抑制和诱导凋亡作用 ,以及对细胞DNA含量 ,对NF κB、CyclinD1表达的影响。结果 :所有浓度组姜黄素均对膀胱癌EJ细胞有明显的生长抑制作用 ,抑制率≥ ( 2 7 5± 3 1) % (P <0 0 5 )。 10mg/L以上浓度均可出现显著的诱导调亡作用 ,凋亡率≥ 4 6 %± 1 8% (P <0 0 5 ) ,下调NF κΒ(表达率≤ 35 8%± 4 2 % ,P <0 0 5 ) ,下调CyclinD1的表达 (表达率≤ 2 9 7%± 3 2 % ,P <0 0 5 )。姜黄素导致的细胞周期阻滞以G1期为主 ,使S期细胞比例显著减少 (P <0 0 5 )。结论 :姜黄素对膀胱癌细胞系EJ有明显的生长抑制和诱导凋亡作用 ,其作用机制与其影响细胞周期和下调NF κB、CyclinD1的表达相关 。

斑蝥酸钠对膀胱癌EJ细胞株毒性作用的研究

目的:探讨斑蝥酸钠对膀胱癌EJ细胞株的毒性作用。方法:采用5,10,20μg/ml斑蝥酸钠作用于EJ细胞株2,4,24,48 h后,观察细胞形态改变,MTT法检测药物对细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞增殖周期的改变以及细胞凋亡情况。结果:5μg/ml斑蝥酸钠作用2,4 h后细胞无明显改变,10,20μg/ml作用2,4 h后细胞出现水肿、空泡、核固缩以及细胞溶解现象;药物作用细胞后其抑制率显著增高(P<0.05);细胞周期中G2/M期延长,细胞凋亡明显增加(P<0.05)。结论:斑蝥酸钠对膀胱癌EJ细胞株有明显的毒性作用,通过诱导细胞凋亡的途径抑制细胞生长。

三氧化二砷抑制人膀胱癌EJ细胞增殖及其作用机制探讨

背景与目的:观察三氧化二砷(Arsenictrioxide,As2O3)对人膀胱癌EJ细胞生长抑制作用,并探讨其作用机理。材料与方法:四甲基偶氮唑蓝(3_[4,5_dimethylthiazol_2_yl]_2,5diphenyltetrazoliumbromid,MTT)法检测EJ细胞增殖活力;荧光染色观察凋亡细胞的形态学变化;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡;免疫细胞化学染色观察caspase_3蛋白的表达。结果:As2O3 与EJ细胞生长抑制率之间有显著的浓度依赖关系,IC50 为22.51μmol/L;荧光显微镜下观察到经As2O3 作用后,EJ细胞出现凋亡现象;流式细胞术结果表明20μmol/L的As2O3 处理EJ细胞48h后,细胞周期变化无显著性差异,细胞凋亡率从对照组的3.37 %上升到19.07 %;免疫细胞化学染色结果显示,20μmol/L的As2O3 处理EJ细胞48h后,能够诱导caspase_3蛋白的表达。结论:As2O3 能显著抑制EJ细胞增殖,诱导caspase_3蛋白表达,并进一步诱导细胞凋亡。

白花蛇舌草对膀胱癌EJ细胞株的增殖抑制作用及其机制

目的探讨分析白花蛇舌草的提取物在膀胱癌EJ细胞株增殖抑制中发挥的作用及其机制。方法将2016年5月—2017年5月培养的的膀胱癌EJ细胞株按照随机数字法分为对照组和研究组,对照组不加任何物质,研究组的细胞株加入白花蛇舌草的提取物,利用MTT法测定细胞的增殖抑制作用,并利用流式细胞仪检测膀胱癌EJ细胞株的端粒酶含量,观察对比两组细胞株的生长抑制率以及端粒酶的含量。结果研究组的EJ细胞株加入白花蛇舌草提取物12、24、48、72 h的生长抑制率分别为(7.38±0.49)、(11.94±0.78)、(18.46±0.24)、(28.76±0.57),均明显高于对照组的(5.14±0.38)、(7.96±0.98)、(12.64±0.37)、(15.79±0.76)(P<0.05);而研究组细胞株12、24、48、72 h的端粒酶含量分别为(33.13±1.84)、(25.46±2.79)、(15.34±2.13)、(9.54±1.79),均明显低于对照组的(37.16±2.31)、(31.91±2.78)、(18.49±1.4)、(12.48±2.07)(P<0.05)。结论白花蛇舌草中的提取物应用于膀胱癌EJ细胞中能够有效抑制细胞的增殖作用,作用机制与端粒酶的含量有关,是一种抗肿瘤的新型药物,在临床上值得进一步推广应用,有巨大的参考价值。

AS_2O_3诱导人膀胱癌EJ细胞株凋亡作用的体外研究

目的观察三氧化二砷(Arsenic trioxide,AS2O3)对人膀胱癌EJ细胞生长抑制作用,并探讨其作用机理。方法四甲基偶氮唑蓝(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyl tetrazolium bromid,MTT)法检测EJ细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞凋亡,并对半胱天冬酶(Caspase)—3活性进行检测。结果AS2O3可有效地抑制EJ细胞生长,且呈时间、浓度依赖性特点;经药物作用后,膀胱癌细胞凋亡明显增加,凋亡率随作用时间的延长而增多。结论ASO可显著抑制膀胱癌细胞生长,诱导细胞凋亡是其作用机制之一。

可溶性人TRAIL基因表达载体的构建及其诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的构建可溶性肿瘤坏死因子(TNF)相关凋亡诱导配体TRAIL基因表达载体并研究其瞬时转染对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用重叠延伸PCR法克隆含有TNF-α信号肽的人TRAIL基因,并将其连入pUCm-T载体,测序正确后克隆入表达载体pcDNA3.1中,采用Gene-CompanionTM非脂质体型聚阳离子转染试剂体外瞬时转染人膀胱癌EJ细胞,RT-PCR法检测目的基因mRNA水平的表达,Westernblot检测细胞培养上清中目的基因的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞存活。结果成功构建了可分泌表达的人可溶性TRAIL表达载体,体外转染TRAIL的EJ细胞凋亡率均显著高于未转染细胞及转染空载体细胞的凋亡率,并明显抑制细胞存活,细胞存活率为51.34%,明显低于未转染细胞及转染空载体的细胞存活率。结论所构建的可溶性TRAIL表达载体转染肿瘤细胞可诱导细胞凋亡及抑制肿瘤细胞的生长存活。

慢病毒介导的过表达microRNA-663a对膀胱癌细胞功能学的影响

目的探讨负载microRNA-663a(miR-663a)的慢病毒上调miR-663a对膀胱癌EJ和5637细胞系功能学的影响。方法将负载过表达miR-663a的慢病毒转染人膀胱癌EJ和5637细胞系。EJ和5637细胞系各设干扰组、阴性对照组和空白对照组,转染72h后置于荧光显微镜下观察转染效率,采用实时定量PCR法检测miR-663a的表达量,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测膀胱癌细胞增殖生长情况,通过细胞划痕实验检测膀胱癌细胞迁移能力,通过Transwell小室侵袭实验检测膀胱癌细胞侵袭能力。结果 EJ和5637细胞系中,干扰组的miR-663相对表达量均显著高于空白对照组和阴性对照组(P值均<0.05),空白对照组的miR-663a相对表达量与阴性对照组间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。EJ细胞系转染miR-663a后第4、5天,干扰组D值显著低于阴性对照组和空白对照组同时间(P值均<0.05);5637细胞系转染miR-663a后第3、4、5天,干扰组D值显著低于阴性对照组和空白对照组同时间(P值均<0.05)。EJ和5637细胞系中,干扰组细胞培养48h时的闭合率均显著低于空白对照组和阴性对照组同时间(P值均<0.05)。EJ和5637细胞系中,干扰组Transwell小室滤膜下表面细胞数均显著低于空白对照组和阴性对照组(P值均<0.05)。结论 miR-663a体外可显著抑制膀胱癌EJ和5637细胞系的细胞增殖、迁移和侵袭能力,为miR-663a可能成为膀胱癌的治疗新靶点提供了实验依据。

尿道致病性大肠杆菌黏附人尿路膀胱癌细胞的实验研究

目的检测尿道致病性大肠杆菌(UPEC)菌株毒力基因,并将人膀胱癌细胞系EJ细胞应用于UPEC的黏附作用研究。方法利用PCR和复合PCR方法检测UPEC132菌株毒力基因pap C,hly和cnf1;制备EJ的单层细胞爬片用于UPEC和阴性对照菌株E.coli K-12p678-54的黏附试验;分别于不同作用时间观察黏附细胞形态学变化,并计算黏附率和黏附指数。结果PCR检测显示UPEC132菌株具有毒力基因pap C,hly和cnf1,将其作用于EJ细胞后,15 min细菌开始黏附,120 min达到高峰。而阴性对照组结果均为阴性。经光镜镜检,UPEC黏附EJ细胞后使其产生明显的形态学变化。结论 EJ细胞可用于UPEC的黏附试验,为建立UPEC细胞感染模型和深入探究UPEC的致病机制奠定基础。

膀胱移行细胞癌侧群细胞的分离与鉴定

目的探讨膀胱移行细胞癌新鲜癌组织和一些细胞系中是否存在侧群(SP)细胞及其比例,并鉴定其功能。方法利用双波长FACS检测4例膀胱移行细胞癌新鲜癌组织和3个膀胱移行细胞癌细胞系EJ、UM-UC-3、T24中是否存在SP细胞及其比例,并从细胞增殖能力,克隆形成能力(CFE),细胞周期的分布,自我更新和长期分化能力,ABCG2和干性基因Notch-1、β-catenin、SMO的表达,对放化疗的抵抗等差异证实膀胱移行细胞癌中SP细胞是否有肿瘤干细胞的特点。结果 4例新鲜膀胱癌组织中SP的比例分别为1.1%、1.8%、4.1%、1.2%,与维拉帕米预孵30min后,SP的比例分别下降到0.8%、0.9%、2.4%、0.6%;3个膀胱癌细胞系中只有T24中存在SP细胞,比例为34.7%,EJ和UM-UC-3中不含SP细胞。与NSP细胞相比,T24中的SP细胞有更强的生长增殖能力和克隆形成能力(P<0.05);有更多的细胞处于G0/G1期(87.4%vs 63.3%,P<0.05),更少的细胞处于S期(31.1%vs 9.1%,P<0.05);分选后的SP和NSP细胞经过约10d的常规培养,SP细胞中NSP的比例占76.2%,而NSP细胞中SP的比例只占2.6%;RT-PCR的结果表明SP细胞中ABCG2和干性基因Notch-1、β-catenin、SMO的表达更高;SP细胞对放化疗有更强的抵抗能力,而且这种抵抗能力与ABCG2的高表达有关。结论膀胱移行细胞癌细胞中存在侧群细胞,而且T24中的侧群细胞有肿瘤干细胞的特点。

LncRNARP11-79H23.3在膀胱癌细胞中的作用及其发生、发展的研究

背景与目的:虽然许多长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)的异常表达与膀胱癌的发生有密切关系,但对于lnc RNA RP11-79H23.3暂未见报道。该研究旨在探讨lnc RNA RP11-79H23.3在膀胱癌EJ细胞中的作用及其发生、发展的机制。方法:采用微阵列方法对4对膀胱癌患者的癌和癌旁组织进行组学分析,随后用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测膀胱癌组织、癌旁组织及正常人膀胱上皮细胞sv-HUC-1、膀胱癌EJ细胞中RP11-79H23.3的表达。通过转染p IRES2-RP11-79H23.3上调该基因后,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和Ed U的方法检测EJ细胞的增殖活性,通过Transwell小室和平板划痕实验分别检测EJ细胞的侵袭和迁移能力,应用流式细胞术、Hoechst33342及Tunel检测细胞凋亡,应用细胞免疫荧光检测PTEN在膀胱癌细胞中的定位,采用鬼笔环肽染色观察细胞骨架形成,应用蛋白[质]印迹法(Western blot)分析过表达RP11-79H23.3后EJ细胞中PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达情况。结果:Lnc RNA RP11-79H23.3在膀胱癌组织和膀胱癌EJ细胞中表达下调(P<0.001,P<0.01),p IRES2-RP11-79H23.3转染EJ细胞结果显示,RP11-79H23.3的表达量较转染前显著增加(P<0.01)。上调RP11-79H23.3的表达可诱导膀胱癌EJ细胞的凋亡,相反,转染p IRES2-EGFP可促进EJ细胞的增殖、侵袭和迁移能力,同时,Western blot结果显示,转染p IRES2-RP11-79H23.3后可上调PTEN在EJ细胞中的表达,下调p-PI3K、p-AKT及p-Gsk3β蛋白的表达(P<0.05)。结论:Lnc RNA RP11-79H23.3在膀胱癌组织和膀胱癌EJ细胞中低表达(P<0.001,P<0.01),并且过表达RP11-79H23.3会降低膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。提示lnc RNA RP11-79H23.3在膀胱癌恶性肿瘤中发挥重要的作用,可能会成为治疗膀胱癌的药物作用靶点。

消痔灵注射液对膀胱癌EJ细胞生长抑制作用研究

目的研究消痔灵注射液对膀胱癌EJ细胞生长的抑制作用及其机制。方法将膀胱癌EJ细胞用不同浓度消痔灵溶液(1、2、3、4、6、8、10 g/L)处理,另设对照组。采用CCK-8法检测消痔灵溶液作用不同时间(12、24、48 h)对EJ细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术观察EJ细胞生长抑制情况;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色进一步观察其凋亡诱导作用;采用Western Blot检测Caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白表达。结果消痔灵对EJ细胞生长有明显的抑制作用,且在消痔灵浓度低于6 g/L时随作用浓度增高抑制率显著增加(P<0.01),作用时间延长对增殖抑制率也有一定影响(P<0.05)。流式细胞分析显示细胞在消痔灵作用后被阻滞在G0/G1期,且随给药浓度增高细胞凋亡率明显增高(P<0.01)。AO/EB染色显示EJ细胞凋亡形态学特征与药物作用时间和浓度有明显的相关性。Western Blot结果显示,与对照组比较,消痔灵组Caspase-3及Bax蛋白的表达水平增高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论消痔灵注射液对膀胱癌细胞生长有显著的抑制作用,可能与其阻断细胞增殖周期及诱导癌细胞凋亡有关。

蛇葡萄素钠对人膀胱癌EJ细胞增殖的抑制作用

目的:研究蛇葡萄素钠(AMP-Na)对人膀胱癌EJ细胞增殖的抑制作用。方法:体外传代培养EJ细胞。以25、33、43.5、57.4、75.8、100μg/ml AMP-Na培养细胞24、48、72 h后,采用MTT法测定细胞活力并计算抑制率。以0、43.5、57.4、75.8μg/ml AMP-Na与2μg/ml顺铂培养细胞24 h后,采用流式细胞仪检测细胞数并计算细胞凋亡率与细胞周期分布。以0、43.5、57.4、75.8μg/ml AMP-Na与2μg/ml顺铂培养细胞24、48 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法测定细胞中Cyclin D1 m RNA的表达。结果:以25、33、43.5、57.4、75.8、100μg/ml AMP-Na培养细胞24、48、72 h后对细胞具有明显抑制作用,且呈明显的时间依赖关系。以57.4、75.8μg/ml AMP-Na培养细胞24、48 h后在G0/G1峰之前出现凋亡峰;以75.8μg/ml AMP-Na培养细胞24 h与43.5、75.8μg/ml培养细胞48 h后,Cyclin D1 m RNA的表达减弱(P<0.05)。结论:AMP-Na能高效抑制EJ细胞的增殖并促进其凋亡,其机制可能与诱导细胞凋亡、下调Cyclin D1 m RNA表达以及使细胞周期阻滞于G0/G1期有关。

五倍子单宁酸体外诱导人膀胱癌EJ细胞凋亡及机制研究

目的观察五倍子单宁酸(TA)在体外培养条件下对人膀胱癌EJ细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法将EJ细胞分为阴性对照组(TA浓度为0μmol/L)和不同梯度浓度TA实验组,阴性对照组加入不含TA药物的培养基,其他各组加入含有梯度浓度TA的培养基;用台盼蓝染色检测细胞损伤率,CCK-8检测细胞增殖率,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色以及流式分析检测细胞凋亡率,Western Blot(WB)检测细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),BCL2-AssociatedX蛋白(Bax),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达。结果与阴性对照组比较,实验组TA可降低EJ细胞活力,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,促进细胞内Caspase3表达、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax/Bcl-2比值差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论TA可能通过调节细胞内Caspase3、Bax、Bcl-2蛋白表达诱导EJ细胞凋亡,抑制增殖,提示TA可能是一种潜在的抗膀胱癌药物。