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Determnation of ochratoxin A in grain by monoclonal antibody-based enzyme-linked immunosorbent assay
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作者 Yang Chuanhe Luo Xueyun +4 位作者 Liu Chang Li Wenyan Li Yiepeng Zhao Danyu Ji RongInstitute of Food Safety Control and inspection. Ministry of Public HealthBeijing 100021 . China 《Journal of Environmental Sciences》 SCIE EI CAS CSCD 1994年第1期116-122,共7页
The simple rapid and sensitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) methods, di-rect and indirect ELISA, for quantitation of ochratoxin A in cereal had been developed by theutilization of monoclonal antibody on i... The simple rapid and sensitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) methods, di-rect and indirect ELISA, for quantitation of ochratoxin A in cereal had been developed by theutilization of monoclonal antibody on immunomicroplate. Direct FLIAS was found to be less timeconsuming than indirect ELISA. For direct FLISA, recovery of 1 -500 ppb OA added to wheat was78.9-100.0% and rice was 88.9- 120.0%. For indirect EI.IAS, recovery of 1-500 ppb OA addedto wheat was 79.0- 110.0% and rice was 82.0 120.0%. The minimal detection level for OA was Ippb. Analyses of 31 samples that caused humanintoxicant for OA showed that the ELISA resultsagreed wtll with those obtained by thin-layer chromatogrdphy. 展开更多
关键词 enzyme-linked immunosorbent assay (elisa) ochratoxin A monoclonal antibody cereal.
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Development of an Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Seromonitoring Contagious Bovine Pleuropneumonia Using Recombinant Lipoprotein LppQ of Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC as Antigen
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作者 XIN Jiu-qing GAO Yun-long +2 位作者 LI Yuan WANG Yan-fan QIAN Ai-dong 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2007年第1期100-107,共8页
Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC (MmmSC) is the etiological agent of contagious bovine pleuropneumonia (CBPP). The lipoprotein LppQ encoded by lppQ gene is specific to MmmSC and is found in the type strain an... Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC (MmmSC) is the etiological agent of contagious bovine pleuropneumonia (CBPP). The lipoprotein LppQ encoded by lppQ gene is specific to MmmSC and is found in the type strain and in field strains isolated in Europe, Africa, and Australia, as well as in vaccine strains. No serological cross-reactions were observed with the related mycoplasmas of the Mycoplasma mycoides cluster. The N-terminal domain of the mature lipoprotein LppQ is hydrophilic, and it induces a strong, specific, early, and persistent immune response in naturally and experimentally infected animals. Mycoplasma-specific TGA (Trp) codons are utilized as stop codons in most other organisms. The lppQ N-terminal fragment from MmmSC HVRI X strain, the Chinese strain for CF antigen production, was mutated with one-step overlapping extension PCR. Sequence analysis confirmed the successful mutation from A to G in codon 198 in the lppQ gene. The fragment containing the mutation site was subcloned into the pET32a expression vector. The recombinant protein with molecular weight of 42 kDa was purified using the Ni-NTA His.Bind purification kit, with a purity of up to 95%. Western blot indicated that the standard positive serum of CBPP could react with the recombinant protein. The purified protein was diluted to 0.35 μg mL^-1, and coated to microtiter enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) plates. Indirect ELISA reaction conditions were optimized. The value of P/N was determined to be 4.8 (0.934/0.193), the sensitivity to be 95.8% (46/48), and the specificity to be 98.9% (161/163). 3 817 cattle serum samples from three different provinces were detected by the indirect ELISA and CFT. The Kappa value is 0.63, which is middle or high agreement between the two methods. 展开更多
关键词 contagious bovine pleuropneumonia (CBPP) lipoprotein LppQ MUTAGENESIS indirect enzyme-linked immunosorbent assay elisa
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A Comparison of Enzyme-Linked Immunosorbent Assay versus Multiplex Methodology Using an <i>in Vitro</i>Model of Pulmonary Hypertension and Inflammation
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作者 Yan Zhu Deepthi Alapati +3 位作者 Joanna Costa Victoria L. Maduskuie Paul T. Fawcett Thomas H. Shaffer 《Journal of Biomedical Science and Engineering》 2014年第7期419-426,共8页
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is the most widely used method for measuring a single cytokine. Recent developments in cytokine quantification such as multiple arrays measure multiple cytokines simultaneousl... Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is the most widely used method for measuring a single cytokine. Recent developments in cytokine quantification such as multiple arrays measure multiple cytokines simultaneously. Although good correlations between ELISA and multiplex methods have been observed, side by side comparisons are limited. In the present study we hypothesized that ELISA and Luminex techniques are comparable in detecting cytokines in culture medium when pulmonary artery smooth muscle cells (PASMC) are exposed to stress. Primary human PASMC were cultured in modular chambers and exposed to 21% FiO2 and peak inspiratory and positive end expiratory pressure of 24 and 8 cmH2O respectively, and 95% FiO2. At 24 hours, culture medium was collected and assayed for interleukin-6 (IL-6) and IL-8 by quantitative ELISA and by Human Cytokine 25-Plex Panel using a Luminex 200 analyzer. A comparative analysis of agreement between our ELISA and Luminex data was detailed for control and stress conditions using the Bland-Altman plot analysis. Each assay resulted in comparable increased (p < 0.001) levels of IL-6 and IL-8 as compared to control in response to oxidative and biophysical stress. The Bland-Altman analysis demonstrated that 95% of the differences between ELISA and Luminex values were within ±1.96 SD from the mean difference indicated by the 95% limits of agreement for the measurements of IL-6 and IL-8. There was no systematic bias as a function of inflammation level. We conclude that in this cell culture model, ELISA and Luminex are comparable in detecting the levels of IL-6 and IL-8 in the culture medium. If measurements of multiple cytokines are demanded and the amount of sample is limited, Luminex multi-analyte profiling technology is accurate and sensitive. 展开更多
关键词 enzyme-linked immunosorbent assay (elisa) LUMINEX Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells (PASMC) INFLAMMATION Bland-Altman PLOT Analysis
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SERODIAGNOSIS OF CLONORCHIASIS BY ENZYME—LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY WITH HRP—SPA
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作者 谷宗藩 王尊哲 +2 位作者 崔巍 王士谔 黄红 《潍坊医学院学报》 1985年第2期146-151,共6页
In thes paper the authors used the Horseradish peroxidase labelledstaphylococcal protein A(HRP—SPA)in ELISA,for the detection of Clo-norchis sinensis infection.Serum tests were made on 116 confirmed cases ofclonorchi... In thes paper the authors used the Horseradish peroxidase labelledstaphylococcal protein A(HRP—SPA)in ELISA,for the detection of Clo-norchis sinensis infection.Serum tests were made on 116 confirmed cases ofclonorchiasis,103(88.8%)of them showed positive,while only 6(4.4%)werepositive among 138 healthy people.Samples were collected on filter paperstrips,111(95.7%)cases were positive among 116 comfirmed cases tested,but only 2(1.5%)were positive out of 138 healthy persons.The resultswere similar to those obtained by sheep antihuman IgG.Animal experimentalso showed that the SPA—ELISA can be used for the diagnosis ofclonorchiasis.In an endemic area,stool egg positive rate was 8.8%(62/703).whenchecked with SPA—ELISA,the rate of conformity in both filter paperstrips and stool examinations was 90.3(56/62).Among 641 serum testsfrom individuals negative in stool examinations,only 35(5.5%)reactedpositively.The authors suggested—that SPA—ELISA with soluble Clo-norchis antigens could be used in a large scale seroepidemiological surveyin endemic areas. 展开更多
关键词 linked immunosorbent assay WITH HRP elisa SERODIAGNOSIS OF CLONORCHIASIS BY enzyme SPA
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基于VP6蛋白的牛轮状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用
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作者 刘广阔 邹敏 +5 位作者 吴发兴 于皓同 王凯茸 张锐铮 张琪 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第1期1-6,共6页
为了建立牛轮状病毒(BRV)血清抗体的检测方法,从病料中克隆牛轮状病毒VP6基因,构建其表达载体,利用原核表达技术表达重组VP6蛋白,建立牛轮状病毒血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组VP6蛋白大小为40 ku,以包涵体形式表达,Western ... 为了建立牛轮状病毒(BRV)血清抗体的检测方法,从病料中克隆牛轮状病毒VP6基因,构建其表达载体,利用原核表达技术表达重组VP6蛋白,建立牛轮状病毒血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组VP6蛋白大小为40 ku,以包涵体形式表达,Western blot证实重组VP6蛋白有良好的反应原性;以4μg/mL浓度的抗原包被酶标板,一抗血清50倍稀释,酶标二抗稀释10000倍稀释,为最佳工作条件,阴阳临界值为0.233,表明该方法具有良好的特异性和敏感性。建立的检测BRV抗体的间接ELISA可用于临床BRV感染的检测。 展开更多
关键词 牛轮状病毒 VP6蛋白 原核表达 间接酶联免疫吸附试验
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山羊源贝氏柯克斯体抗体间接ELISA检测方法的建立与应用
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作者 张锐铮 于皓同 +2 位作者 王凯茸 张琪 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期21-26,共6页
为建立山羊源贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)抗体间接ELISA检测方法,对贝氏柯克斯体的com1基因进行克隆及原核表达,以com1纯化蛋白作为抗原,建立间接ELISA检测方法,并对临床收集的血清样本进行检测。结果显示,重组蛋白大小为27 ku,经W... 为建立山羊源贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)抗体间接ELISA检测方法,对贝氏柯克斯体的com1基因进行克隆及原核表达,以com1纯化蛋白作为抗原,建立间接ELISA检测方法,并对临床收集的血清样本进行检测。结果显示,重组蛋白大小为27 ku,经Western blot鉴定com1蛋白反应原性良好;ELISA检测方法抗原包被量为4μg/mL,血清的稀释倍数为1∶100,酶标二抗稀释倍数为1∶2500,阴阳临界值为0.278。用该方法对流产衣原体、山羊支原体、牛支原体阳性血清进行检测,均为阴性;当C.burnetii阳性血清稀释至2048倍时检测结果仍为阳性;批内、批间变异系数均小于10%。用该方法对陕西省部分羊场收集到的307份血清样本进行检测,样本阳性率为9.12%。成功建立了一种检测贝氏柯克斯体抗体的间接ELISA检测方法,这为C.burnetii引起的Q热的实验室诊断和流行病学调查提供了技术支持。 展开更多
关键词 贝氏柯克斯体 com1蛋白 酶联免疫吸附试验 抗体检测
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Serological diagnosis of nasopharyngeal carcinoma by enzyme linked immunosorbant assay:optimization,standardization and diagnostic criteria 被引量:8
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作者 M.H. Ng, H.L. Chen, R.X. Luo, K.H. Chan, P.C.Y. Woo, J.S.T. Sham, J. Huang, W.H.Seto P. Smith and B.E. Griffin 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 1998年第6期51-56,共6页
Objectives To produce an enzyme linked immunosorbant assay (ELISA) to detect antibodies against Epstein Barr virus (EBV) specified nuclear antigen 1 (EBNA 1) and the 18kD EBV matrix protein, and to determine and optim... Objectives To produce an enzyme linked immunosorbant assay (ELISA) to detect antibodies against Epstein Barr virus (EBV) specified nuclear antigen 1 (EBNA 1) and the 18kD EBV matrix protein, and to determine and optimize its sensitivity and specificity for the diagnosis of nasopharyngeal carcinoma (NPC).Methods We used a combination of highly purified glutathione transferase fusion proteins of the 40kD carboxy domain of EBNA1 and the 18kD EBV matrix protein for coating ELISA plates. In three separate studies, we tested for IgA antibodies in serum specimens from 28 EBV seronegative donors, 284 EBV seropositive donors and 160 newly diagnosed NPC patients. By comparing the sensitivity and specificity of diagnosis obtained for different cutoff values, we derived several quantitative parameters to evaluate assay performance, establish objective diagnostic criteria which optimize the intrinsic diagnostic capability of the assay and assess the significance of individual test results, respectively. Optimum cutoff optical density (OD) is defined as the cutoff OD where sensitivity of the assay equals its specificity, and resolution of the assay is indicated by the value of sensitivity (or specificity) determined at the optimum cutoff OD. Diagnosis of NPC was achieved by setting a cutoff zone at +/-20% of this value.Results All the EBV seronegative donors tested were not reactive, and most of the EBV seropositive donors were weakly reactive, while the majority of NPC patients were moderately or strongly reactive. While the assay was thus shown to be specific for EBV, there was an overlap in the level of these serum antibodies between few individuals of the two latter groups. It was shown that the assay performed equally well in two separate studies conducted under different testing conditions and using different collections of sera in that assay resolution determined on these occasions were 86% and 87% respectively. Diagnosis of NPC can be achieved at the same expected sensitivity of 89% and 83% determined at the lower and upper limits of the cutoff zones, with the corresponding values of specificity being 78% and 91%. It was further shown in the third study that resolution of the assay can be increased to 90% using an assay produced with a higher concentration of the same antigens, and that diagnosis of NPC can be achieved at a higher sensitivity ranging between 86% and 95% at a corresponding specificity of 93% and 86%.Conclusions After optimization and standardization, the ELISA can achieve a sensitivity ranging from 86% to 95%, with corresponding specificities of 93% and 86% respectively for the diagnosis of NPC. 展开更多
关键词 Serological diagnosis of nasopharyngeal carcinoma by enzyme linked immunosorbant assay
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Development of ELISA and immunochromatographic assay for ofloxacin 被引量:3
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作者 Wu Yong Sun Wen Ying Liu Ling Bo Qu 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2007年第9期1107-1110,共4页
Two rapid, sensitive and reliable immunoassay methods, namely competitive indirect enzyme-linked immunosorbent assay (CI-ELISA) and colloidal gold-based immunochromatographic assay (CGIA), were developed to detect ofl... Two rapid, sensitive and reliable immunoassay methods, namely competitive indirect enzyme-linked immunosorbent assay (CI-ELISA) and colloidal gold-based immunochromatographic assay (CGIA), were developed to detect ofloxacin (OFL). The linear range of the CI-ELISA was from 0.5 to 128 ng/mL with a limit of detection (LOD) of 0.35 ng/mL. Good recoveries were obtained in analyzing simulated swine urine samples. The CGIA could accurately estimate OFL at concentrations as low as 10 ng/mL in less than 10 min, and test results were read visually without any instrument. 展开更多
关键词 Ofloxacin (OFL) Polyclonal antibody (pAb) Competitive indirect enzyme-linked immunosorbent assay (CI-elisa) Colloidal gold-based immunochromatographic assay (CGIA)
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口蹄疫病毒抗体SA-ELISA快速检测方法的建立
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作者 周广青 刘晓庆 +3 位作者 史喜绢 杨大鹏 袁莉刚 常惠芸 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2020-2029,共10页
旨在解决如何对现有方法进行优化创新以建立口蹄疫抗体检测新方法的问题,本研究在基于原有液相阻断ELISA的基础上进行方法优化,实现口蹄疫病毒抗体的快速、灵敏检测。本研究通过对抗口蹄疫IgG抗体标记生物素技术与HRP标记链霉亲和素(HRP... 旨在解决如何对现有方法进行优化创新以建立口蹄疫抗体检测新方法的问题,本研究在基于原有液相阻断ELISA的基础上进行方法优化,实现口蹄疫病毒抗体的快速、灵敏检测。本研究通过对抗口蹄疫IgG抗体标记生物素技术与HRP标记链霉亲和素(HRP-SA)相结合建立新的液相阻断ELISA检测方法(SA-LPBE),在猪,牛、羊血清样品中具有较高的符合率。结合实际情况,判定优化后牛、羊血清抗体效价≥128,猪血清效价≥64时,判定为阳性,与商用检测试剂盒结果一致。并且经符合率分析,与原试剂盒具有92.3%的符合率,其批内变异系数<5%,批间变异系数<10%。该方法改变了原有的需要制备兔抗豚鼠抗血清再标记HRP技术路线,根本上提高了酶促反应的效率,保证了方法原有敏感性的同时提高了方法的特异性;利用生物素标记抗体与HRP-SA反应迅速、标记原料稳定、检测背景值等优点实现了将液相阻断ELISA试剂盒操作时间由2 d缩短为3 h,解决了原有方法操作繁琐、用时过长、操作疲劳、不稳定、易出错等问题。建立的SA-LPBE可应用于FMDV抗体检测,为FMD流行和临床检测提供了技术方法。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 液相竞争elisa elisa 抗体检测 链霉亲和素
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大熊猫源犬细小病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
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作者 李强 严立恒 +5 位作者 兰景超 邓英 孙珊珊 罗娌 史纪强 颜其贵 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2023年第5期795-802,共8页
【目的】建立一种检测大熊猫血清中犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)抗体的间接酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。【方法】以大熊猫源CPV DNA为模板,利用PCR扩增VP2基因,再用原核表达系统对VP2基因... 【目的】建立一种检测大熊猫血清中犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)抗体的间接酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。【方法】以大熊猫源CPV DNA为模板,利用PCR扩增VP2基因,再用原核表达系统对VP2基因进行表达,经纯化后的蛋白作为ELISA包被抗原;制备并纯化兔抗大熊猫IgG,采用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记作为间接ELISA酶标二抗,通过棋盘法确定抗原包被质量浓度及血清稀释度等条件,并评估建立方法与商业试剂盒检测样品结果的符合率。【结果】原核表达成功获得约70 ku的VP2蛋白,将其作为间接ELISA包被抗原,抗原最佳包被质量浓度为2.0μg/mL,血清最佳稀释度为1∶400,用该方法进行检测血清样品时OD450≥0.258为阳性,反之为阴性。采用建立的ELISA方法检测大熊猫血清样本阳性率为60.0%,高于商业化检测试剂盒检测的阳性率(52.5%),两者总符合率达到87.5%。【结论】本研究首次建立了基于大熊猫源CPV VP2蛋白为抗原、自制HRP标记兔抗大熊猫IgG为酶标二抗的间接ELISA方法,该方法特异性强、灵敏性较高、重复性好,为大熊猫血清中CPV抗体的检测提供了技术支持。 展开更多
关键词 大熊猫 犬细小病毒 VP2蛋白 原核表达 间接酶联免疫吸附剂测定(elisa)
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猪肉中2-(三氟甲基)吩噻嗪的Ic-ELISA检测
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作者 刘广兴 韩晓利 +1 位作者 李昳晴 王庭欣 《河北大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2023年第6期638-645,共8页
为了快速检测猪肉中的镇静剂2-(三氟甲基)吩噻嗪(2-(trifluoromethyl)phenothiazine,TFPTZ),分别用偶氮苯甲酸法、混合酸酐法合成了半抗原、完全抗原,通过免疫新西兰大耳白兔获得了多克隆抗体,采用间接竞争酶联免疫方法(Ic-ELISA)对猪肉... 为了快速检测猪肉中的镇静剂2-(三氟甲基)吩噻嗪(2-(trifluoromethyl)phenothiazine,TFPTZ),分别用偶氮苯甲酸法、混合酸酐法合成了半抗原、完全抗原,通过免疫新西兰大耳白兔获得了多克隆抗体,采用间接竞争酶联免疫方法(Ic-ELISA)对猪肉中TFPTZ进行了定量分析,实验条件:包被抗原浓度1.25μg/mL,多克隆抗体稀释16000倍,37℃包被3 h,封闭液为质量分数1%的牛血清白蛋白(BSA),TFPTZ稀释液为含体积分数10%的DMSO的PBS,竞争反应60 min.该方法相关系数R^(2)为0.9991,IC_(50)为1.5002μg/L,最低检测限IC_(10)为0.2841μg/L,线性(IC_(20)~IC_(80))为0.4307~5.2252μg/L,与5种TFPTZ结构类似物的交叉反应率小于1.2%,样品添加回收率为93.26%~109.13%,变异系数小于6%,实际样品检测结果与高效液相色谱法测定结果高度一致,表明建立的快速检测猪肉中TFPTZ的Ic-ELISA方法具有良好的准确度,适用于快速检测猪肉中TFPTZ的残留量. 展开更多
关键词 2-(三氟甲基)吩噻嗪 抗原合成 间接竞争酶联免疫方法(Ic-elisa)
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随机质控加样方法在献血者血液ELISA法检测中的应用与评价
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作者 冯友江 俞凯敏 《中国输血杂志》 CAS 2023年第9期827-830,共4页
目的 评价将随机质控加样方法应用于献血者血液ELISA法筛查的质控效果。方法 选择本站2022年5月-2022年7月的献血者血样5 mL/(人)份,在全自动加样仪上常规加样操作,将J标准物质(3.0 mL/支)作为日常标本分别加入HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和... 目的 评价将随机质控加样方法应用于献血者血液ELISA法筛查的质控效果。方法 选择本站2022年5月-2022年7月的献血者血样5 mL/(人)份,在全自动加样仪上常规加样操作,将J标准物质(3.0 mL/支)作为日常标本分别加入HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP酶标板A1孔、H12孔以及随机孔位后,置于全自动酶免分析仪中检测:以随机孔位质控作为室内质控判定标准,连续检测20次,按照孔位不同分为A1(孔位)组、H12(孔位)组和随机(孔位)组3个组,以随机组质控为框架,利用Levey-Jennings质控图法绘制质控图,再以实验室当日相对应的A1、H12组检测结果绘制在质控图并与随机组比较。结果 献血者输血感染性指标ELISA检测质控水平均值:HBsAg为3.87±0.28,抗-HCV为3.79±0.38,抗-HIV为3.64±0.30,抗-TP为4.53±0.51;随机组、A1组、H12组比较:HBsAg(3.87±0.28、4.09±0.30、3.64±0.26),抗-HCV(3.78±0.37、3.96±0.38、3.63±0.38),抗-HIV(3.63±0.31、3.82±0.32、3.48±0.28),抗-TP(4.51±0.51、4.71±0.52、4.36±0.51),每项指标S/CO值均为H12(孔)组<随机(孔)组<A1(孔)组(P<0.05),其中随机组与每项检测指标的质控水平均值相近(P>0.05)。以随机组为质控框架(标准),A1组中有5个点落在■+2s外,H12组中有1个点落在■-2s外,亦即发生6次“告警”,这意味着只要将质控物置于酶标板A1孔,势必会影响到对整个酶标板检测结果的判断,特别是对酶标板最后1排低浓度病毒标志物标本的结果判断有一定影响。结论 随机质控加样方法应用在献血者血液ELISA检测中,不仅有效减少了人为设置酶标板固定孔位质控引起的系统误差,还可能发现影响检测结果的边缘效应,是很适合血站的1种科学、合理的质控方法。 展开更多
关键词 随机质控 酶联免疫吸附试验 献血者筛查 输血传染性指标 随机孔加样 酶标板
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综合洗消体系对阻断非洲猪瘟病毒传入猪场的作用 被引量:1
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作者 张韵 金睿妍 +2 位作者 何佳蔚 程光胜 丁红雷 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第2期152-156,F0003,共6页
切断非洲猪瘟病毒(ASFV)传播途径是防控非洲猪瘟的有效手段。本试验旨在通过在某种猪场建立综合洗消体系以阻断ASFV传入。对拟进入猪场的车辆在出发前和距猪场1 km处清洗和消毒,在猪场门口进行第3次消毒;人员进入猪场前洗澡和隔离,并将... 切断非洲猪瘟病毒(ASFV)传播途径是防控非洲猪瘟的有效手段。本试验旨在通过在某种猪场建立综合洗消体系以阻断ASFV传入。对拟进入猪场的车辆在出发前和距猪场1 km处清洗和消毒,在猪场门口进行第3次消毒;人员进入猪场前洗澡和隔离,并将其衣物消毒;输入物资进场前消毒。通过实时荧光定量PCR检测经洗消的车辆、人员、物资和猪场内猪只携带ASFV核酸情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测猪只的ASFV抗体水平。结果显示,2019、2020、2021和2022年,车辆ASFV检出率分别为2.6%、1.3%、0和0,人员ASFV检出率分别为3.0%、1.1%、0和0.9%,物资ASFV检出率分别为12.5%、0、5.9%和0;4年间,猪场内猪只的ASFV核酸和抗体检测均为阴性。结果表明,通过建立完善的洗消体系并开展ASFV检测,能有效阻断ASFV传入猪场。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 实时荧光定量PCR 酶联免疫吸附测定(elisa) 车辆 人员 物资
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莫米松糠酸酯高特异性抗体制备及酶联免疫分析方法
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作者 谢桂勉 黄莹星 +1 位作者 林俊虹 张世伟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期126-131,共6页
莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫... 莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫半抗原和包被半抗原。免疫半抗原以活泼脂法连接钥孔血蓝蛋白获得全抗原,通过免疫小鼠、细胞融合及筛选获得能够稳定分泌抗MF单克隆抗体的细胞株,制备并纯化了抗体。该抗体的主要识别区域为MF的五元环区域,因此不和常见的64种糖皮质激素发生交叉反应。建立了基于异源包被的MF间接竞争酶联免疫检测法,其半抑制浓度(IC_(50))为1.2 ng/mL,对肌肉和肝脏的最低检出限分别为0.52μg/kg和0.59μg/kg。灵敏度相比于同源包被提升了20倍。使用60%甲醇水溶液提取动物组织的添加回收率为70%~82%。该方法能有效应用于动物组织中MF的快速筛查。 展开更多
关键词 糖皮质激素 莫米松糠酸酯 单克隆抗体 异源包被 间接竞争酶联免疫检测法(ic-elisa)
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新霉素ELISA检测方法的建立 被引量:9
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作者 刘沙洲 桑小雪 +2 位作者 欧阳华学 雷绍荣 白林含 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第14期227-231,共5页
目的:比较直接和间接竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的优缺点,建立新霉素残留ELISA检测方法。方法:利用自制的新霉素多克隆抗体,采用直接竞争和间接竞争ELISA方法检测新霉素残留,并比较两种方法的优缺点。结... 目的:比较直接和间接竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的优缺点,建立新霉素残留ELISA检测方法。方法:利用自制的新霉素多克隆抗体,采用直接竞争和间接竞争ELISA方法检测新霉素残留,并比较两种方法的优缺点。结果:新霉素抗血清和庆大霉素的交叉反应率为2.04%,和卡那霉素的交叉反应率为0.02%,和氨苄青霉素、红霉素、四环素的交叉反应率均小于0.01%。初步测试新霉素间接竞争ELISA法的准确性和回收率。板内误差小于4%,板间误差小于11%,回收率为135.5%~191.3%。直接竞争和间接竞争ELISA方法的检测极限分别为28.58ng/mL和51.74ng/mL,达到了国家对新霉素规定的500μg/kg MRL检测限。结论:建立了直接竞争和间接ELISA吸附检测方法,条件优化更成功的间接竞争ELISA可用于开发新霉素检测试剂盒。 展开更多
关键词 新霉素 多克隆抗体 竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay elisa) 方法建立
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鲫鱼(Carassius auratus)卵黄蛋白原的ELISA检测 被引量:27
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作者 李康 周忠良 +2 位作者 于静 王明山 余晓君 《中国环境科学》 EI CAS CSSCI CSCD 北大核心 2003年第3期276-280,共5页
采用Sephadex G-200柱层析从鲫鱼(Carassius auratus)成熟鱼卵中提取卵黄脂磷蛋白并制备抗卵黄脂磷蛋白抗血清.用DEAE-cellulose阴离子交换层析和Sephacryl S-300分子筛凝胶层析相结合的两步层析从经17(-雌二醇诱导的雌鱼血浆中提纯卵... 采用Sephadex G-200柱层析从鲫鱼(Carassius auratus)成熟鱼卵中提取卵黄脂磷蛋白并制备抗卵黄脂磷蛋白抗血清.用DEAE-cellulose阴离子交换层析和Sephacryl S-300分子筛凝胶层析相结合的两步层析从经17(-雌二醇诱导的雌鱼血浆中提纯卵黄蛋白原.免疫印迹反应显示卵黄脂磷蛋白和卵黄蛋白原都与抗卵黄脂磷蛋白抗血清有特异的反应.以抗卵黄脂磷蛋白抗血清作为抗体,卵黄蛋白原作为竞争抗原建立了间接竞争法酶联免疫吸附反应(ELISA)方法来检测雄鱼血液中卵黄蛋白原含量.该方法可测的最低浓度为7.8ng/mL,工作范围为0.39~25(g/mL,批内和批间误差分别为6.5%和7.5%. 展开更多
关键词 环境雌激素 鲫鱼 elisa 卵黄蛋白原
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凡纳滨对虾红体病病原菌间接ELISA快速检测方法的研究 被引量:26
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作者 樊景凤 梁玉波 +3 位作者 宋立超 王斌 臧红梅 李文哲 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期113-117,共5页
以凡纳滨对虾红体病病原菌副溶血弧菌为抗原,免疫兔获得高免血清,建立一种快速检测凡纳滨对虾红体病病原菌副溶血弧菌的ELISA技术。采用棋盘滴定法确定抗原和抗血清的最适工作浓度分别为106CFU·mL-1和1∶2000;病原菌检测灵敏度为每... 以凡纳滨对虾红体病病原菌副溶血弧菌为抗原,免疫兔获得高免血清,建立一种快速检测凡纳滨对虾红体病病原菌副溶血弧菌的ELISA技术。采用棋盘滴定法确定抗原和抗血清的最适工作浓度分别为106CFU·mL-1和1∶2000;病原菌检测灵敏度为每孔104CFU;抗血清与其它细菌标准菌株的交叉反应结果均呈阴性;阻断实验中的阻断率达75.88%;交叉反应和阻断实验结果表明该方法具有较高的特异性。将该方法标准化后检测了30份人工感染后的凡纳滨对虾和健康凡纳滨对虾,阳性检测率分别为93.3%和13.3%,表明该技术不仅能够检测已发病的凡纳滨对虾,而且能够检测带菌的凡纳滨对虾,这对于水产养殖业中疾病的早期诊断有着重要意义。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 红体病 副溶血弧菌 间接elisa技术
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河豚毒素单抗ELISA检测试剂盒的研制 被引量:23
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作者 宫慧芝 计融 +1 位作者 江涛 杨军 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1423-1424,共2页
目的研制快速检测河豚鱼类中的河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)试剂盒.方法在生产的抗TTX单克隆抗体基础上,利用间接竞争酶联免疫吸附方法研制TTX快速检测试剂盒.结果该试剂盒的最低检出浓度为5ng/ml,标准曲线的线性范围为5~500ng/ml,回归... 目的研制快速检测河豚鱼类中的河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)试剂盒.方法在生产的抗TTX单克隆抗体基础上,利用间接竞争酶联免疫吸附方法研制TTX快速检测试剂盒.结果该试剂盒的最低检出浓度为5ng/ml,标准曲线的线性范围为5~500ng/ml,回归方程为Y=-0.3546x+1.1006,r=0.99(P<0.05);河豚鱼25和100ng/ml 2个水平的加标回收率为72.45%~111.24%;试剂盒常温下可保存225d;与牛血清白蛋白(BSA)无交叉反应;实验室内的变异系数和实验室间的变异系数均<20%.结论该试剂盒快速、简单、灵敏,可满足实际工作需要. 展开更多
关键词 河豚毒素 酶联免疫吸附试验 试剂盒
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动物饲料中玉米赤霉烯酮ELISA检测方法的建立 被引量:18
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作者 张晓 张晴晴 +3 位作者 程罗根 张心明 刘媛 刘贤进 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2007年第4期351-355,共5页
为检测动物饲料中玉米赤霉烯酮的含量,建立酯联免疫检测法(ELISA)。结果显示:该方法检测回收率范围为67%~99%,其最低检出限为0.1μg/kg;以建立的ELISA法对随机添加的35个普通动物饲料样本进行分析,并以HPLC法对同一批样品... 为检测动物饲料中玉米赤霉烯酮的含量,建立酯联免疫检测法(ELISA)。结果显示:该方法检测回收率范围为67%~99%,其最低检出限为0.1μg/kg;以建立的ELISA法对随机添加的35个普通动物饲料样本进行分析,并以HPLC法对同一批样品进行检测,两种方法回收率相关系数为0.9561。证明建立的ELISA检测方法适合动物饲料中玉米赤霉烯酮的检测。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 动物饲料 酶联免疫检测法
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马杜霉素在鸡组织中残留检测方法的研究 Ⅰ酶联免疫吸附测定(ELISA) 被引量:13
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作者 沈建忠 钱传范 +1 位作者 杨汉春 江海洋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期172-179,共8页
本文用混合酸酐法和活化酯法合成4种马杜霉素结合抗原。用其中一种作免疫原,免疫家兔产生抗体;用其余三种作包被原,探讨不同包被原用于ELISA检测马杜霉素残留时,对其灵敏度(I50)和方法回收率的影响。试验结果表明,马杜... 本文用混合酸酐法和活化酯法合成4种马杜霉素结合抗原。用其中一种作免疫原,免疫家兔产生抗体;用其余三种作包被原,探讨不同包被原用于ELISA检测马杜霉素残留时,对其灵敏度(I50)和方法回收率的影响。试验结果表明,马杜霉素结合抗原免疫家兔制备的抗体对马杜霉素具有很高的特异性、亲合性和选择性。在间接竞争ELISA中,使用M-C6-OVA(AE)、M-OVA(MA)和M-OVA(AE)作包被原时,马杜霉素标准工作曲线的I50值分别为323、975和880ng/ml,这证明M-C6-OVA(AE)作包被原能大大提高ELISA检测的灵敏度。添加回收率试验测得鸡各组织样本回收率为777%~1043%,变异系数为38%~180%,检测极限为30~80μg/kg。 展开更多
关键词 马杜霉素 鸡组织 elisa 药物残留
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