EM发酵豆渣、鱼杂、鸡血及其粗蛋白含量测定分析

生产生活中产生的农副产品,如豆渣、鱼杂、鸡血等,含有大量的粗蛋白,可以作为一种物美价廉的饲料。本实验在已有研究基础上,利用环境微生物(environment microbe,EM)菌种对其进行发酵处理,采用凯氏定氮法(GB/T6432-94)检测其粗蛋白质含量。发酵结果表明:处理后的豆渣+麦麸、玉米粉+鱼杂、玉米粉+鸡血、玉米粉+豆渣4组材料的粗蛋白含量分别提高2.63、2.62、2.71和2.07个百分点,其营养价值得到有效提高;其中残留的有害物质如重金属、抗生素等能够得以降解消除;病原微生物如某些致病厌氧细菌和大肠杆菌等能得到很好的抑制;同时,饲料的适口性大大提高。

利用UV和EMS诱变选育高产油微藻藻株的研究

分别采用不同剂量的紫外线(UV)和甲基磺酸乙酯(EMS)诱变2种真眼点藻(波氏真眼点藻(Eustigmatos polyphem)和魏氏真眼点藻(Eustigmatos vischeri)),以氯霉素、红霉素、硫酸新霉素、硫酸卡那霉素为抗性筛选剂,利用抗生素最小致死浓度法筛选出抗性突变株。使用改良的BG-11培养基对反复筛选所获得的抗性突变株进行固、液培养,并以生物量干重、干藻粉的总脂含量、单位体积总脂含量、单位体积总脂产率为评价指标对抗性突变株的优劣进行评价。结果获得2株具稳定遗传特性、生长速度快、单位体积总脂产率高和具生产潜力的优良突变株。

产碱性纤维素酶浅黄金色单胞菌Chrysemonas luteola的诱变选育

以筛选到的一株产碱性纤维素酶浅黄金色单胞菌为出发菌株,经紫外线、紫外线和甲基磺酸乙酯(EMS)复合诱变等处理后,筛选到一株产CMC酶活较高的变株.经5代诱变后,变株产CMC酶活从原来的(发酵液)156.61U/mL提高到325.45U/mL,同时,结果表明变株FQ2产酶特性已趋于稳定.

泡盛曲霉FCYN206对EM菌青贮香蕉茎叶中单宁的影响

为了高效降解青贮香蕉茎叶中的单宁,本试验研究添加产单宁酶菌株——泡盛曲霉FCYN206对香蕉茎叶青贮品质的影响。试验设计对照组、泡盛曲霉FCYN206菌组、EM菌组和EM菌+泡盛曲霉FCYN206菌组,青贮20 d,开封测定青贮品质。结果表明:与对照组比,菌株泡盛曲霉FCYN206可减少干物质损失,显著降低单宁含量(P<0.05),但对饲料粗蛋白质含量无明显作用;EM菌能提高饲料粗蛋白质含量,但对单宁降解无效果;EM菌+泡盛曲霉FCYN206组p H为3.91,达到青贮标准,感官评价最好,且与对照组相比,单宁含量显著降低4.49%(P<0.05)。添加泡盛曲霉FCYN206对EM菌青贮香蕉茎叶中的单宁有明显降解作用,能改善青贮香蕉茎叶饲料的感官品质和风味。

EM菌的制作及其在猕猴桃生产中的应用

将EM菌应用在猕猴桃种植上,分析土壤氮、磷数值,以及物候期、生长势、病虫害的发生情况和产量、果实品质等。结果发现,在猕猴桃种植生产上施用有机肥后,加施EM菌,能够显著提高土壤全氮、速效氮、有效磷含量,增加猕猴桃枝条生长长度,增粗猕猴桃枝条,提早展叶和开花,提高单株产量和单果重量,提高可溶性固形物和干物质含量,提早采收期。

新型EM菌剂的研制

本研究选用枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、酵母菌和光合细菌等为主要菌种。各菌种经培养扩大后分别接种到以麦麸为原料的发酵培养基中 ,进行好氧或厌氧发酵 ,配制成三种菌剂 EM 、EM 、EM ,这些菌剂的特点为固态、耐热。

玉米EMS抗旱杂交品系田间鉴定

以7份郑单958为背景的EMS诱变玉米杂交品系为试验对象,在干旱胁迫、正常灌水2个处理条件下,鉴定其抗旱表型、测定其产量,筛选出较抗旱杂交品系。研究表明,在干旱胁迫条件下,7份杂交品系抗旱性明显不同,经过T检验分析后,4号EMS诱变玉米杂交品系水区和旱区产量均较对照(CK,郑单958)产量达到显著差异;5号水区和旱区产量均较CK产量达到极显著差异。4号和5号在干旱胁迫下开花-吐丝间隔期(ASI)均小于CK,产量分别比CK高13.58%和22.43%,且抗旱指数高于1,分别为1.06和1.15,是抗旱性强的高产玉米杂交品系。

EM菌培养基的优化及菌株数量的检测

通过正交试验确定最适合EM菌生长的碳源、氮源和温度。结果表明:最适合菌株生长的碳源为葡萄糖,适合EM菌生长的氮源为蛋白胨,温度对菌株生长的影响较大,在35℃时,菌株的生长状况最好。将EM菌接入到优化后的培养基中培养3d后,通过稀释平板计数法确定芽孢杆菌的数量为3.4×105,酵母菌的数量为9.7×109,乳酸菌的数量为6.4×109,菌株总的数量达到1.6×1010CFU/mL。

优势复合菌群用于城市生活污水净化新技术的研究

利用有效微生物 (EM )对广西南宁某污水塘进行了水体净化试验 ,在考察污染水体pH、水温等环境因素对EM影响的基础上 ,较系统地研究了EM技术对池塘水体各项主要污染指标的去除性能。试验结果表明 ,各项污染指标已达到GB1 2 94 1 -91景观娱乐用于C类水质标准。EM技术容易操作 ,处理费用低廉 ,是废水稳定塘治理的一种新方法、新技术。

油菜抗羟脯氨酸突变体的筛选

本文用脯氨酸的类似物羟脯氨酸筛选出经甲基磺酸乙酯（ＥＭＳ）诱变处理的油菜幼胚培养苗的抗羟脯氨酸突变体．抗性系叶片中的绝大多数游离氨基酸的含量都比对照品种“Ｏｒｏ”高，其中游离脯氨酸的含量是“Ｏｒｏ”的２２倍，表明用羟脯氨酸筛选出的突变体植株细胞内的游离氨基酸，特别是游离脯氨酸的含量明显增加．抗性系后代的多种农艺性状试验结果表明，抗性系的产量比对照高３１１％，发病率低３８５％，病情指数下降００９％。

基于微生物固态发酵豆粕转化大豆异黄酮的研究

大豆异黄酮具有较高的营养价值和生理保健功能,现已广泛应用到食品、饲料和医药等领域中。为了研究EM菌、枯草芽孢杆菌ATCC 6633和植物乳酸杆菌ATCC 8014单独和混合发酵对大豆异黄酮(Soybean insoflavones,SIF)转化效率的研究,本实验将接种量的接种水平全部考虑进去建立微生物固态发酵和菌种组合的方法,通过真空密封发酵和高效液相色谱(High performanceliquid chromatography,HPLC)分析方法研究大豆异黄酮中糖苷转化为苷元的效率,此外,还研究了饲料发酵后的干物质含量和在优化条件下样品的重复性研究。结果表明,三种微生物的单独发酵都比混合发酵的效果好,在7 d后枯草芽孢杆菌ATCC 6633单独发酵的效果最好,其苷元含量占大豆异黄酮的比例达到64.56%,且样品重复性和稳定性较高,从而为工业化发酵转化SIF提供一定的理论基础和参考依据。

化学诱变结合结构类似物法选育高苯丙氨酸解氨酶菌种

ＥＭＳ诱变结合结构类似物法提高含ＰＡＬ出发菌株红酵母Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｓｐ．ＣＩＢＡＳＡ１４０１１００ 生物转化能力阳性率为３５．５ ％ ，部分突变株ＰＡＬ转化能力提高１ 倍以上，其中Ｅ１０５，Ｅ２４０ 具有快速转化能力，反应３ ｈＬＰｈｅ累积浓度达到１ ｇＬ左右．φ１０％ 甘油和３０ ｇＬＧｌｕ 对ＰＡＬ转化具有明显的稳定作用．用含φ１０％ 甘油和３０ ｇＬＧｌｕ 的反应液进行生物转化制备，Ｅ１０５ 和Ｅ２４０ 在２４ ｈ 期间ＬＰｈｅ 质量浓度大于２０ ｇＬ，转化率达８０ ％ ．

甲基磺酸乙酯对杜氏盐藻生长的作用效应

利用不同浓度的甲基磺酸乙酯(EMS)处理杜氏盐藻,旨在筛选放线菌酮Act抗性突变株和研究EMS对杜氏盐藻生长的影响。结果表明:出发藻株A1对Act的抗性浓度为0.05 mg/L,诱变后得到了对Act抗性浓度为0.4 mg/L的突变株,突变株的生长速率明显小于出发藻株A1。EMS抑制杜氏盐藻的生长。

瑞氏木霉外源基因表达系统中受体菌株的改造

将解除了葡萄糖阻遏的纤维素酶高产菌株瑞氏木霉TrichodermareeseiRutC30经EMS诱变后,在酪蛋白平板上筛选出部分蛋白酶缺陷突变菌株T.reeseiRutC30M3。RutC30M3的胞外蛋白酶活力比亲本株降低约74%,但生长特性、产纤维素酶活力等性状与亲本株相同。用携带潮霉素磷酸转移酶基因(hph)的表达质粒pAN7-1分别转化瑞氏木霉RutC30和RutC30M3原生质体,转化结果显示RutC30M3(pAN7-1)对潮霉素的抗性比RutC30(pAN7-1)提高约20%,而Northernblot分析结果显示在两菌株中潮霉素基因转录水平相似,由此证明宿主菌蛋白酶缺陷对保护重组蛋白免于降解有明显作用。蛋白酶缺陷菌株RutC30M3适于作为瑞氏木霉外源基因表达系统中的受体菌株用于大量生产同源与异源蛋白。

中华绒螯蟹2龄早熟和晚熟品系选育第4代(G4)在成蟹阶段养殖性能的比较

为评估选育第4代(G4)的中华绒螯蟹在成蟹阶段的养殖性能和性腺发育情况,以G4中华绒螯蟹2龄早熟和2龄晚熟品系为试验对象,以未经选育的养殖群体作对照,比较了这3个群体的扣蟹在成蟹养殖阶段生长、性腺发育及最终养殖效果的差异。试验结果显示:(1)2个选育品系在成蟹养殖阶段的平均体质量始终高于对照组,其中在9月份和11月份,2龄晚熟雌、雄个体的平均体质量均显著高于对照组(P<0.05);(2)2龄早熟雌、雄个体的生殖蜕壳时间均早于其他2组,此外,2龄晚熟雌、雄个体分别在7月25日和8月15日的生殖蜕壳率显著低于另外2组(P<0.05);(3)就性腺发育而言,2龄早熟品系在性腺发育期间的性腺指数(GSI)始终较高,而2龄晚熟品系的GSI始终较低,其中在9月25日2龄早熟雌蟹的GSI显著高于另外2组(P<0.05);(4)2个选育品系成蟹的最终平均体质量和单位面积产量均显著高于对照组,且晚熟雌蟹的成活率显著高于对照组(P<0.05);(5)就规格分布而言,晚熟雄蟹体质量在145.00~169.99 g所占的比例显著低于对照组,而在195.00 g以上的比例显著高于其他2组(P<0.05);晚熟雌蟹体质量在80.00~99.99 g所占的比例显著低于对照组,而在140.00 g以上的比例显著高于另外2组(P<0.05)。结果表明,遗传选育可以有效控制中华绒螯蟹的性腺发育速度及最终体质量。这一结果为2龄早熟和2龄晚熟新品种的申报提供了数据支撑。

三重复合诱变选育林可霉素高产菌株

以提高林可霉素的生产水平为目的,将林可霉素产生菌LK15-012先用0.6%甲基磺酸乙酯(EMS)处理3 h,然后常压室温等离子体(ARTP-200W)照射90 s、最后紫外线(UV)照射50 s。结果表明:致死率为98.5%,正突变率为71.8%。最终获得2株高产突变株LK16-032和LK16-049,摇瓶效价比出发菌株LK15-012提高了42.50%和35.25%。将两株突变株分别通过100 L小试、10 t中试和60 t大生产进行发酵验证,发酵效价明显高于生产菌株。采用EMS-ARTP-UV三重复合诱变明显提高了林可霉素的生产水平。

IFA筛选经EMS诱导的沙眼衣原体突变株

目的:用甲基磺酸乙酯(Ethylmethylsulfone,EMS)诱导D型沙眼衣原体突变,利用间接免疫荧光法筛选出突变菌株,为研究不同衣原体基因的功能提供实验依据。方法:将D型沙眼衣原体标准株接种Mc Coy细胞,加入EMS诱导突变,收集存活菌株,利用空斑实验进行衣原体的分离和纯化,并用不同衣原体蛋白单克隆抗体做间接免疫荧光实验筛选突变株。结果:用间接免疫荧光筛选经EMS作用的沙眼衣原体,筛选出三株包涵体形态偏小的菌株(56#、58#、95#),一株圆形包涵体的突变株(61#)和一株D413N表达阴性的突变菌株(83#)。结论:用EMS作为诱导剂诱导D型沙眼衣原体突变,并成功筛选出三种突变株。为寻找衣原体功能基因与衣原体表型之间的联系奠定了实验基础。

传染性法氏囊病病毒不同毒力毒株的冷冻电镜结构帮助理解其组装和入侵机制

传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)引起的传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是鸡的一种高度传染性免疫抑制疾病,往往导致养禽业严重的经济损失.IBDV超强毒株(very virulent IBDV,vvIBDV)能引起鸡群的高致死率,不能适应体外细胞培养.相反,IBDV弱毒株对鸡不致病,能适应体外细胞培养.IBDV T=1亚病毒颗粒(sub-viral particles,SVP)的晶体结构已经被报道,但IBDV不同毒力毒株的全病毒结构尚未被解析,而这对于深入理解IBDV组装和入侵的分子机制非常重要.本研究利用冷冻电镜三维重构技术分别解析了传染性法氏囊病病毒vvIBDV Gx株和其致弱毒株Gt全病毒的3.3和3.2Å的高分辨率结构.与T=1 SVP相比,IBDV T=13全病毒呈现一些独特的、保守的结构特征,尤其是在SVP中呈现柔性的结构蛋白VP2的N末端,在T=13全病毒中与临近VP2三聚体S结构域的β束SF相互作用形成β折叠,这种相互作用将临近的VP2三聚体“拴”在一起,有助于病毒的组装和稳定.两种不同毒力毒株的结构比较发现,与vvIBDV Gx株相比,弱毒株Gt的VP2 P结构域的H254和T284之间形成氢键,并呈现正表面电势,这提示VP2的Q253H/A284T突变以及相应的表面电势的改变可能是Gt株适应体外细胞培养的重要机制.此外,VP2表面含有一个呈负表面电势的凹槽,该凹槽内含有在病毒结合细胞过程中发挥重要作用的整合素结合基序IDA,可能在IBDV的入侵过程中发挥重要作用.