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马泰勒虫新疆株EMA-1基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
被引量:
6
1
作者
宋瑞其
王盼举
+4 位作者
王振宝
瓦热斯.吐尔松
闻秀秀
张杨
巴音查汗
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第9期1737-1743,共7页
马泰勒虫裂殖子表面抗原1(EMA-1)是用于马梨形虫病诊断的重要靶抗原之一。为建立实用有效的间接酶联免疫吸附试验方法,笔者根据马泰勒虫EMA-1基因序列设计并合成引物,将新疆株EMA-1全基因序列克隆于原核表达载体pGEX-4T-1上,构建pGEX-4T...
马泰勒虫裂殖子表面抗原1(EMA-1)是用于马梨形虫病诊断的重要靶抗原之一。为建立实用有效的间接酶联免疫吸附试验方法,笔者根据马泰勒虫EMA-1基因序列设计并合成引物,将新疆株EMA-1全基因序列克隆于原核表达载体pGEX-4T-1上,构建pGEX-4T-1/EMA1重组质粒,转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导得到EMA-1融合蛋白,切胶纯化后作为包被抗原建立检测马泰勒虫抗体的rELISA方法。结果显示:(1)GST-EMA1蛋白相对分子质量56ku,与其理论值基本一致;(2)通过Western blot分析证明其具有很好的特异性和反应原性;(3)以GST-EMA1蛋白作为包被抗原建立的rELISA可明显区分马泰勒虫、驽巴贝斯虫阳性血清和健康马血清;批内和批间重复试验的最大变异系数分别为14.79%和11.06%;(4)使用建立的间接ELISA与cELISA商品试剂盒分别对新疆伊犁马场收集的96份马血清样品进行检测,检出阳性率分别为27.1%(26/96)和25.0%(24/96),两者总符合率为95.8%。结果表明,基于原核表达的GST-EMA1蛋白所建立的rELISA特异性、重复性好,检出率与马泰勒虫临床分离率接近,可为新疆马泰勒虫病(特别是隐性带虫马)的检测、监控提供有效手段。
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关键词
马泰勒虫
新疆株
ema-
1
间接ELISA
抗体
诊断
下载PDF
职称材料
犬新孢子虫新疆Nc-1株NcSRS2基因的克隆及原核表达
被引量:
4
2
作者
杨帆
陈亮
+1 位作者
王莲芳
巴音查汗
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期846-850,共5页
根据GenBank中犬新孢子虫NcSRS2基因序列设计了1对引物,从新孢子虫病阳性牛血液中提取总DNA,经PCR扩增NcSRS2基因,将其插入原核表达质粒pGEX-4T-2中,重组质粒pGEX-4T-NcSRS2经测序确定后,转入表达菌株BL21,优化其表达条件,并探讨了GST-N...
根据GenBank中犬新孢子虫NcSRS2基因序列设计了1对引物,从新孢子虫病阳性牛血液中提取总DNA,经PCR扩增NcSRS2基因,将其插入原核表达质粒pGEX-4T-2中,重组质粒pGEX-4T-NcSRS2经测序确定后,转入表达菌株BL21,优化其表达条件,并探讨了GST-NcSRS2蛋白的生物活性。结果显示,在37℃条件下,经终浓度为0.5mmol/L的IPTG诱导表达4h后,获得融合蛋白。Western-blot分析表明该融合蛋白可与相应抗体发生特异性结合,rELISA检测与弓形虫和布鲁氏菌阳性血清无交叉反应。
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关键词
犬新孢子虫
新疆Nc-
1
株
NCSRS2基因
原核表达
原文传递
题名
马泰勒虫新疆株EMA-1基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
被引量:
6
1
作者
宋瑞其
王盼举
王振宝
瓦热斯.吐尔松
闻秀秀
张杨
巴音查汗
机构
新疆农业大学动物医学学院
伊犁出入境检验检疫局综合技术服务中心
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第9期1737-1743,共7页
基金
国家自然科学基金-新疆联合基金重点项目(U1403283)
文摘
马泰勒虫裂殖子表面抗原1(EMA-1)是用于马梨形虫病诊断的重要靶抗原之一。为建立实用有效的间接酶联免疫吸附试验方法,笔者根据马泰勒虫EMA-1基因序列设计并合成引物,将新疆株EMA-1全基因序列克隆于原核表达载体pGEX-4T-1上,构建pGEX-4T-1/EMA1重组质粒,转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导得到EMA-1融合蛋白,切胶纯化后作为包被抗原建立检测马泰勒虫抗体的rELISA方法。结果显示:(1)GST-EMA1蛋白相对分子质量56ku,与其理论值基本一致;(2)通过Western blot分析证明其具有很好的特异性和反应原性;(3)以GST-EMA1蛋白作为包被抗原建立的rELISA可明显区分马泰勒虫、驽巴贝斯虫阳性血清和健康马血清;批内和批间重复试验的最大变异系数分别为14.79%和11.06%;(4)使用建立的间接ELISA与cELISA商品试剂盒分别对新疆伊犁马场收集的96份马血清样品进行检测,检出阳性率分别为27.1%(26/96)和25.0%(24/96),两者总符合率为95.8%。结果表明,基于原核表达的GST-EMA1蛋白所建立的rELISA特异性、重复性好,检出率与马泰勒虫临床分离率接近,可为新疆马泰勒虫病(特别是隐性带虫马)的检测、监控提供有效手段。
关键词
马泰勒虫
新疆株
ema-
1
间接ELISA
抗体
诊断
Keywords
Theileria equi
ema-1 gene of xinjiang strain
indirect ELISA
antibody
diagnosis
分类号
S852.72 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
犬新孢子虫新疆Nc-1株NcSRS2基因的克隆及原核表达
被引量:
4
2
作者
杨帆
陈亮
王莲芳
巴音查汗
机构
新疆农业大学动物医学学院
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期846-850,共5页
基金
新疆维吾尔自治区高技术研究与发展计划项目(200811110)
文摘
根据GenBank中犬新孢子虫NcSRS2基因序列设计了1对引物,从新孢子虫病阳性牛血液中提取总DNA,经PCR扩增NcSRS2基因,将其插入原核表达质粒pGEX-4T-2中,重组质粒pGEX-4T-NcSRS2经测序确定后,转入表达菌株BL21,优化其表达条件,并探讨了GST-NcSRS2蛋白的生物活性。结果显示,在37℃条件下,经终浓度为0.5mmol/L的IPTG诱导表达4h后,获得融合蛋白。Western-blot分析表明该融合蛋白可与相应抗体发生特异性结合,rELISA检测与弓形虫和布鲁氏菌阳性血清无交叉反应。
关键词
犬新孢子虫
新疆Nc-
1
株
NCSRS2基因
原核表达
Keywords
Neospora caninum
xinjiang
strain
of Nc-1
NcSRS2
gene
prokaryotic expression
分类号
S852.723 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
马泰勒虫新疆株EMA-1基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
宋瑞其
王盼举
王振宝
瓦热斯.吐尔松
闻秀秀
张杨
巴音查汗
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
6
下载PDF
职称材料
2
犬新孢子虫新疆Nc-1株NcSRS2基因的克隆及原核表达
杨帆
陈亮
王莲芳
巴音查汗
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2010
4
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