淫羊藿苷基于PLCγ1/AKT/eNOS/NO信号通路改善大鼠少弱精症

目的:探究淫羊藿苷对少弱精症的治疗作用及其作用机制。方法:以奥硝唑(800 mg/kg)所致少弱精症大鼠为动物模型,以淫羊藿苷(50、100 mg/kg)及左卡尼汀(100 mg/kg)干预。称量生殖器官质量,统计实验产仔率,分析附睾精子密度和精子活力;ELISA试剂盒检测血清睾酮含量;苏木精-伊红(HE)观察各组大鼠睾丸组织病理学;免疫荧光染色检测生精小管Sertoli细胞数量;试剂盒测定血清NO含量;Western Blot检测睾丸p-PLCγ1、p-AKT、p-eNOS表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠睾丸指数、附睾指数、产仔率、附睾精子密度、附睾精子活力、血清睾酮含量、睾丸组织NO含量、生精小管直径及Sertoli细胞数量和睾丸组织PLCγ1、AKT、eNOS蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,淫羊藿苷100 mg/kg组大鼠睾丸指数、附睾指数、产仔率、附睾精子密度、附睾精子活力、血清睾酮含量、睾丸组织NO含量、生精小管直径及Sertoli细胞数量和睾丸组织PLCγ1、AKT、eNOS蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.01)。结论:淫羊藿苷可以改善少弱精症,其机制可能与PLCγ1/AKT/eNOS/NO通路有关。

近红外荧光成像监测ENO1 mAb在宫颈癌荷瘤小鼠体内生物分布的研究

本研究探讨近红外荧光成像(NIRF)观察烯醇化酶1(ENO1)单克隆抗体(mAb)在宫颈癌荷瘤小鼠体内的分布、代谢及肿瘤靶向效率。利用癌症基因组图谱分析ENO1的表达与肿瘤分期和预后以及肿瘤免疫浸润的关系;Cy7-NHS和FITC与ENO1 mAb偶联成Cy7-ENO1 mAb和FITC-ENO1 mAb,通过激光共聚焦显微镜验证ENO1 mAb在宫颈癌细胞TC-1的定位,并建立宫颈癌皮下肿瘤模型,尾静脉注射Cy7-ENO1 mAb后在1、6、24、48、72和120 h进行近红外荧光成像,成像24 h后迅速解剖主要脏器进行体外成像。生物信息学分析结果表明ENO1在正常宫颈组织与宫颈癌组织中的表达有显著差异,免疫组织化学(IHC)结果提示ENO1蛋白在宫颈癌组织中高表达;此外,其表达与肿瘤分期和淋巴结分期显著相关,并且ENO1的高表达与多种糖酵解酶相关;激光共聚焦显微镜扫描显示FITC-ENO1 mAb能特异性结合在TC-1细胞膜表面,细胞未见内化;近红外荧光成像证明Cy7-ENO1 mAb主要富集在肝脏、肾脏和肿瘤组织,并且具有较高的肿瘤靶向效率。NIRF成像可以实时、动态监测ENO1 mAb在宫颈癌荷瘤小鼠体内的分布,其代谢器官主要是肝脏和肾脏,并且证实ENO1 mAb具有靶向宫颈癌作用。

ENO1对急性髓系白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨Enolase 1(ENO1)调节急性髓系白血病(AML)细胞的代谢及分子机制。方法:分析GEO、TCGA等数据库中AML患者ENO1表达情况;运用Kaplan-Meier分析基因表达水平与患者生存期之间的关系;构建ENO1 shRNA慢病毒质粒体系,感染MV4-11、NB4细胞系构建分组,应用Western blot法检测ENO1在AML两种细胞系中的敲降效率;CCK-8法检测其对AML细胞生长的影响;Annexin V-PE/7-AAD法检测细胞凋亡情况;应用GO、KEGG富集方法分析ENO1在细胞中的功能及相关信号通路。结果:通过GEO、TCGA数据库分析表明ENO1在多数AML患者体内显著高表达(P<0.05,P<0.01),而在其它类型白血病患者中无此变化;ENO1在AML细胞中,在白血病干细胞,在AML小鼠模型造血干细胞中均显著高表达(P<0.001)。Kaplan-Meier分析表明ENO1高表达AML患者生存期显著低于ENO1低表达患者(P<0.05,HR>1)。敲降ENO1显著抑制AML细胞生长,诱导AML细胞凋亡(P<0.01)。富集分析发现,AML细胞中ENO1可能参与组蛋白甲基化、RNA干扰复合物的形成、糖代谢相关生物过程;其负相关共表达基因主要富集在自噬和FOXO信号通路。结论:ENO1在AML患者中尤其是AML干细胞中高表达并与生存期呈负相关。且ENO1高表达可促进AML细胞生长、抑制AML细胞凋亡,ENO1有望为AML患者的治疗和预后提供一定的参考。

高脂血症小鼠心脏和肺组织中eNOS及HO-1的表达

目的观察高脂饲料喂养的小鼠心脏和肺组织中内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric-oxide syn-thase,eNOS)及血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的含量变化,探讨高脂血症对eNOS和HO-1表达的影响。方法高脂饮食组(n=8)和普通饮食组(n=8)C57BL/6小鼠分别经高脂饲料和普通饲料喂养18周后,测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(high density lipopro-tein,HDL)和低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)含量,采用Real-ti me PCR检测心脏和肺组织中eNOS及HO-1的mRNA水平,以免疫组化方法检测其蛋白表达。结果高脂饮食组TC、TG和LDL明显高于普通饮食组,HDL则低于普通饮食组;高脂饮食组心脏和肺组织中eNOS的mRNA和蛋白水平低于普通饮食组,HO-1的mRNA和蛋白水平高于普通饮食组。结论高脂饲料喂养能使小鼠形成高脂血症,并引起心脏和肺组织中eNOS的表达降低,同时HO-1的表达升高。

四川白鹅ENO1基因特征及其在HPG轴组织中发育性表达的研究

旨为研究鹅ENO1基因分子特征,阐明不同繁殖期鹅下丘脑、垂体和卵巢组织ENO1表达规律。应用生物信息学技术分析并预测四川白鹅ENO1结构和功能,实时荧光定量PCR技术检测产蛋前期(6月龄)和产蛋期(8月龄)鹅下丘脑、垂体和卵巢组织ENO1的表达量。结果表明,四川白鹅ENO1是内源性蛋白质,含3个N-糖基化位点和16个磷酸化位点,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,主要分布于细胞质(73.9%)和细胞核(13.0%)。四川白鹅ENO1的4个Mg2+结合位点和1个烯醇化酶标签进化保守,但是其纤溶酶原受体结构域和MBP-1结构域分别与人氨基酸序列存在4处(422Arg→Lys、432Arg→Leu、433Ile→Ala和434Asn→Lys)和5处变异(124Ala→Val、141Pro→Ser、176Asp→Ala、177Thr→Asn和223Ala→Gly)。产蛋期鹅下丘脑、垂体和卵巢组织ENO1表达量分别是产蛋前期的1.80(P<0.05),1.64(P<0.05)和3.05倍(P<0.05)。四川白鹅ENO1是多功能的、进化保守的内源性蛋白质,ENO1可通过调节HPG轴功能来参与调控鹅的繁殖功能。

孟鲁司特联合糖皮质激素对支气管哮喘患者血清MPO、ENO_(1) 水平及肺功能的影响

目的探讨孟鲁司特联合糖皮质激素对支气管哮喘患者肺功能及中性粒细胞炎症因子的影响.方法选取支气管哮喘患者82例,应用随机数字表法分为观察组和对照组,每组41例.对照组患者在常规治疗基础上予以糖皮质激素类药物布地奈德治疗,观察组患者在对照组基础上予以孟鲁司特口服.观察两组患者治疗前后临床症状评分,检测第1秒用力呼吸容积(FEV_(1))、用力肺活量(FVC)、呼吸峰值流速(PEF),计算FEV_(1)/FVC值.应用酶联免疫吸附法检测气道高反应血清因子[半胱氨酸白三烯(CysLTs)、5-脂氧合酶激活蛋白(FLAP)、转化生长因子(TGF-β_(1))、嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)]和炎症反应血清因子[髓过氧化物酶(MPO)、α-烯醇化酶(ENO_(1))]水平,记录不良反应发生情况.结果治疗1个月后,两组患者日间、夜间症状评分均较治疗前降低,且观察组低于对照组(P<0.05),FEV_(1)、FVC、PEF、FEV_(1)/FVC均较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05);治疗1个月后,两组患者血清CysLTs、FLAP、MPO、TGF-β_(1)、ECP、ENO_(1)水平均较治疗前降低,且观察组低于对照组(P<0.05);两组患者均未见明显的不良反应.结论孟鲁司特联合糖皮质激素可显著改善支气管哮喘患者日间、夜间症状,提高肺功能,减轻炎症反应和气道高反应,且用药安全性较高,利于病情转归.

ENO1在肝癌细胞株和肝细胞癌中的表达及与临床病理参数的关系

目的探讨α-烯醇化酶(ENO1)在肝癌细胞株及肝细胞癌(HCC)组织中的表达,分析其表达与临床病理参数之间的关系。方法分别采用RT-PCR、Western blot检测32例肝细胞癌及其相应癌旁组织,L-O2细胞、HepG2细胞及HepG2.215细胞中ENO1mRNA及其蛋白的表达;用组织芯片技术检测80例肝癌组织及对应癌旁组织中ENO1的表达,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果与癌旁肝组织相比,肝细胞癌组织中ENO1mRNA和蛋白表达均增高(P<0.05);与正常肝细胞L-O2相比,HepG2细胞和HepG2.215中ENO1mRNA和蛋白表达量均增高(P<0.05),HepG2.215细胞表达量高于HepG2.0细胞(P<0.05);组织芯片结果显示肝癌组织中ENO1蛋白表达高于癌旁组织(P<0.05),并且ENO1的表达水平与年龄、性别、甲胎蛋白(AFP)、肿瘤转移及肿瘤复发无关(P>0.05),与肿瘤大小、HBV感染有关(P<0.05)。结论 ENO1在肝癌细胞系及肝细胞癌组织中均高表达,并与肿瘤大小、HBV感染有关。

子宫内膜异位症患者血清ENO1和CA125的水平变化和临床意义

目的探讨子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)患者血清ENO1和CA125变化的意义。方法选取2018年1月至2020年6月我院收治的的子宫内膜异位症患者40例为观察组,入组患者均经腹腔镜或剖腹探查及术后病理检查确诊;同时选取本院体检中心健康体检的妇女40例为对照组。比较两组之间以及不同r-AFS分期血清ENO1和CA125水平的差异。结果观察组血清ENO1和CA125水平较对照组明显升高(P<0.01);r-AFSⅢ期血清ENO1和CA125水平较Ⅰ期+Ⅱ期明显升高(P<0.01),且Ⅳ期血清ENO1和CA125水平较Ⅲ期又有明显升高(P<0.01)。结论ENO1和CA125可用于子宫内膜异位症的早期诊断、筛查以及病情程度的判别,但诊断界值和不同r-AFS分期参考区间的确定,更有助于临床早期精准干预。

不同强度的耐力运动对STZ介导的糖尿病大鼠血清NO、eNOS与肾脏PAI-1表达的影响

目的:观察不同运动强度对糖尿病大鼠血糖,血清中NO、eNOS含量及肾脏PAI-1的表达的影响,以期对运动预防糖尿病肾病的发生提供理论依据。方法:采用雄性SD大鼠进行高脂高糖膳食6周后,注射STZ,并通过测定血糖确定造模成功,将糖尿病大鼠随机分为4组,对照组(DMC),糖尿病运动1组(DME1,跑速为10m/min),糖尿病运动2组(DME2,跑速为15m/min),糖尿病运动3组(DME3,跑速为20m/min),运动组每天1小时跑台运动,每周5天,持续6周。结果:与安静对照组相比,运动组血糖极显著下降(P<0.01);血清NO、eNOS显著或极显著上升(P<0.05,P<0.01);肾PAI-1含量显著或极显著下降(P<0.05,P<0.01),而运动组间差异不显著(P>0.05)。结论:不同耐力运动可有效地控制血糖,提高血清NO,eNOS的含量,降低了肾脏PAI-1的表达,其中运动1组和运动2组更明显地控制了糖尿病的进一步发展。

自发性2型糖尿病大鼠主动脉胰岛素受体底物1与eNOS的蛋白表达

应用免疫组织化学和Western印迹方法 ,测定 16周及 2 4周自发性 2型糖尿病OLETF大鼠主动脉胰岛素受体底物 1(IRS 1)和内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)的蛋白表达 ,以同种系非糖尿病LETO大鼠作为正常对照 ,以探讨胰岛素受体后信号传递分子IRS 1与胰岛素抵抗状态下大血管病变的关系。结果显示IRS 1和eNOS在主动脉内膜呈阳性表达 ;OLETF大鼠呈胰岛素抵抗特征 ,在 16周和 2 4周其主动脉组织内IRS - 1的蛋白表达水平均明显低于对照组 ,分别减少 2 8 2 %和 33 9% (P <0 0 1)。eNOS蛋白水平分别减少 2 7 7%和 35 8% (P <0 0 1)。两者变化方向一致。提示血管组织胰岛素受体后信号传递分子异常 ,导致内皮细胞胰岛素抵抗及一氧化氮生成障碍 ,可能是糖尿病患者早期大血管病变危险性增加的机制之一。

人参皂苷Rb1通过Caveolin-1/eNOS/NO通路抗人脐静脉内皮细胞衰老

目的:观察人参皂苷Rb1延缓人脐静脉内皮细胞(HUVECs)复制性衰老的作用,并探讨Caveolin-1/eNOS/NO通路在其中的作用。方法:建立HUVECs复制性衰老模型,根据细胞形态的变化、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性率和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的表达水平评估HUVECs衰老;使用不同浓度人参皂苷Rb1处理衰老细胞后,观察衰老指标SA-β-Gal染色和PAI-1蛋白变化;采用Western blot方法检测各组细胞Caveolin-1、eNOS蛋白的表达;最后使用RNA干扰技术抑制Caveolin-1表达后,检测各组细胞Caveolin-1、eNOS、PAI-1 mRNA和蛋白表达及细胞上清中NO的含量。结果:累计细胞群体倍增殖(CPDL)16的HUVECs可作为复制性衰老模型。与模型组比较,80μmol/L的人参皂苷Rb1能显著降低SA-β-Gal染色阳性细胞数及PAI-1、Caveolin-1蛋白表达,升高eNOS蛋白表达(P<0.05);使用siRNA抑制Caveolin-1表达后,人参皂苷Rb1对Caveolin-1作用减弱,但其对eNOS mRNA和蛋白表达无明显影响(P>0.05),NO含量显著升高,PAI-1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:人参皂苷Rb1可延缓人脐静脉内皮细胞复制性衰老,其机制可能与调控Caveolin-1/eNOS/NO通路有关。

SIRT1/eNOS/NO通路在人参皂苷Rb1抗内皮细胞复制性衰老中的作用

目的:观察人参皂苷Rb1延缓人脐静脉内皮细胞(HUVECs)复制性衰老的作用,并探讨SIRT1/e NOS/NO通路在其中的作用机制。方法:建立原代HUVECs复制性衰老模型,根据细胞形态的变化、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性率和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的表达水平评估HUVECs衰老情况;采用real-time PCR方法和Western blot法检测沉默SIRT1前后衰老细胞中e NOS和PAI-1的mRNA和蛋白表达,并检测细胞上清NO的含量。结果:累积细胞群体倍增水平(CPDL)为16的HUVECs可作为复制性衰老模型; 80μmol/L人参皂苷Rb1处理后衰老细胞内SIRT1和eNOS的mRNA及蛋白表达水平增加,NO含量增加(P <0. 05),而PAI-1的mRNA和蛋白表达水平下降(P <0. 05);沉默SIRT1后,衰老细胞内e NOS的mRNA及蛋白表达减少,PAI-1的mRNA及蛋白表达增加,NO含量减少(P <0. 05);与SIRT1沉默组比较,在沉默SIRT1基础上加用人参皂苷Rb1后,e NOS和PAI-1表达水平及NO的含量未见明显变化。结论:人参皂苷Rb1可通过调控SIRT1/e NOS/NO通路延缓HUVECs复制性衰老。

不同强度耐力运动对大鼠动脉粥样硬化形成过程中血管eNOS/NO、HO-1/CO系统调节作用研究

目的初步探讨不同强度的长期耐力运动对e NOS/NO、HO-1/CO系统水平的调节作用及其与抗动脉粥样硬化(AS)形成作用的关系。方法雄性SD大鼠40只,随机分为普通饮食对照组(C组),高脂饮食对照组(H组)及高脂饮食大强度运动组(Hh组)、高脂饮食中强度运动组(Hm组)、高脂饮食低强度运动组(Hl组),H组及Hh组、Hm组、Hl组均以高脂饲料喂养,同时Hh组、Hm组、Hl组予以相应强度的长期耐力运动干预。14周后,观察大鼠主动脉结构变化并计算粥样斑块面积;检测血管e NOS、HO-1蛋白量水平及其相应产物NO、CO含量,检测活性氧代谢产物MDA水平;检测血脂代谢水平,计算动脉硬化指数。结果高脂饲料喂养的各组大鼠主动脉出现不同程度AS病变,血管e NOS/NO及HO-1/CO系统水平不同程度下降及升高,血脂代谢、动脉硬化指数出现不同程度异常变化,且血管MDA含量不同程度升高;但上述异常变化均以Hm组、Hl组最轻。结论长期高脂饮食喂养可引起大鼠AS病变,这与e NOS/NO系统水平不足有关,而HO-1/CO系统水平增加可一定程度上弥补e NOS/NO系统功能不足。中、低强度耐力运动可改善血脂代谢,下调动脉硬化指数以及血管氧化应激水平,从而缓解e NOS/NO水平的下降程度,发挥抗AS形成功效;HO-1/CO系统水平下降可作为运动抗AS形成的一个良性信号。建议采用耐力运动抗AS形成的运动强度不宜过大。

雄激素致无排卵大鼠卵巢nNOS、eNOS、ET-1的表达

目的观察雄激素致无排卵大鼠(ASR)血浆及卵巢血管舒张因子一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(nNOS、eNOS)、环磷酸鸟苷(cGMP)、血管收缩因子内皮素1(ET-1)、血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)的变化,探讨卵巢血管舒-缩因子在无排卵发病机制中的作用。方法建立雄激素致无排卵大鼠模型,分为模型组和正常组。采用放射免疫法测定模型组、正常组大鼠血浆NO、cGMP、ET-1、ATⅡ以及血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)含量;采用免疫组化法检测大鼠卵巢nNOS、eNOS、ET-1表达;采用HE染色观察大鼠卵巢组织形态学变化。结果与正常组比较,模型组大鼠血浆NO、cGMP含量降低(P<0.01),血浆ET-1、ATⅡ含量升高(P<0.01)。血清E2、T含量及E2/P显著升高(P<0.01),血清P含量无统计学差异(P>0.05);与正常组比较,模型组大鼠卵巢颗粒细胞以及髓质nNOS、eNOS表达减弱(P<0.01),ET-1表达增强(P<0.01);正常组大鼠卵巢皮质可见发育期各级卵泡及黄体;模型组大鼠卵巢皮质卵泡囊状扩张,颗粒细胞层极薄。结论雄激素致无排卵大鼠血浆及卵巢血管舒张因子降低、收缩因子增高,可能使卵巢血液供应障碍、颗粒细胞凋亡,导致卵泡在排卵前闭锁,无排卵的发生。

烯醇化酶ENO1抑制非小细胞肺癌细胞上皮间质转换

背景与目的已有的研究表明:上皮间质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是非小细胞肺癌发展和转移的一个重要过程,受到众多信号通路的精细调节。经典的丝裂原活化激酶(mitogen activatedprotein kinase,MAPK)信号通路是转化生长因子(transforming growth factor β,TGFβ)诱导EMT发生的必要条件。本研究以非小细胞肺癌细胞系A549为模型,对烯醇化酶(enolase-1,ENO1)影响细胞EMT过程的分子机制进行了初步研究。方法建立稳定过表达ENO1的A549细胞,用划痕实验检测细胞运动能力;用Western blot技术检测EMT过程相关分子标志物的变化;通过TGFβ-1诱导实验检测ENO1过表达对EMT的影响;通过上皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导实验和Western blot检测ENO1过表达引起胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated protein kinase,ERK)磷酸化的改变。结果 ENO1过表达抑制A549细胞侧向迁移能力。ENO1过表达还会引起上皮样标志物E-cad-herin表达上调,同时间质样标志物N-cadherin和Vimentin表达下降;TGFβ-1诱导实验也证实了ENO1对EMT进程的抑制作用。EGF活化实验显示ENO1对ERK磷酸化的抑制作用。结论在非小细胞肺癌细胞中,ENO1具有抑制细胞EMT的作用,且很可能是通过抑制MAPK通路来实现。

ENO1过表达对籽鹅卵泡颗粒细胞凋亡基因Bcl-2表达的影响

本试验将原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞转染ENO1腺病毒过表达载体,应用实时荧光定量PCR方法检测ENO1过表达对颗粒细胞Bcl-2mRNA表达量的影响。结果发现ENO1过表达使卵泡颗粒细胞Bcl-2mRNA表达量极显著增加(P<0.01)。提示ENO1可能通过使Bcl-2基因表达量增加,从而抑制籽鹅卵泡颗粒细胞凋亡,促进卵泡的发育。

沉默ENO1对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响

目的探讨α-烯醇化酶(ENO1)在宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法运用免疫化学染色和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测48例宫颈癌患者的癌组织和癌旁组织中ENO1的表达情况。运用RNA干扰技术对人宫颈癌HeLa细胞中的ENO1进行干扰,将细胞分为对照组(PBS组)、空载体组(GV102组)和干扰组(shENO1组),采用RT-PCR和Western blot检测干扰效率。通过MTT实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测ENO1对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果ENO1在宫颈癌组织中高表达(P<0.001),与年龄、FIGO分期、淋巴转移、病理类型及分级无明显相关性(P>0.05)。shENO1组ENO1 mRNA和蛋白表达水平较PBS组和GV102组显著降低(P<0.05)。MTT实验、细胞划痕实验和Transwell实验结果显示,shENO1组细胞增殖、迁移和侵袭能力较PBS组和GV102组显著降低(P<0.05)。结论ENO1在宫颈癌组织中呈高表达,体外实验发现沉默ENO1能抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

纳他卡林激活内皮细胞ATP敏感性钾通道SUR2B/Kir6.1亚型对eNOS磷酸化的调节作用

目的 纳他卡林可选择性激活ATP敏感性钾通道（Katp）SUR2B／Kir6．1亚型，引起胞内ca2＋’浓度升高，一氧化氮合酶（eNOS）活性增强，NO释放增加。eNOS活性与eNOS磷酸化密切相关，研究表明eNOS-Serll77、eNOS-Ser635、eNOS-Set615磷酸化增强eNOS活性，eNOS-Thr495、eNOS-Serl16磷酸化抑制eNOS活性。本文研究纳他卡林激活Km对eNOS各磷酸化位点的影响，以此认识纳他卡林增强eNOS活性的作用特点。方法在培养的内皮细胞上给予（1）10^-9-10^-9mol·L^-1不同浓度的纳他卡林孵育5min，（2）预孵育0．01-1μmol·L。格列苯脲30min，给予1肛mol·L^-1纳他卡林孵育5rain，提取细胞总蛋白，用Western blot法检测eNOS-Serl177、eNOS-Ser635、eNOS-Set615、eNOS-Thr495、eNOS．Serll6磷酸化的变化。结果纳他卡林可浓度依赖性的升高eNOS．Serll77、eNOS，Ser635的磷酸化及eNOS．Thr495的去磷酸化，而对eNOS-Ser615和eNOS-Serl16磷酸化无影响。此作用可被K。特异性阻断剂格列苯脲拮抗。结论纳他卡林通过激活内皮细胞Katp，调节eNOS-Serll77、eNOS．Ser635的磷酸化及eNOS-Thr495的去磷酸化，但不影响eNOS-Ser615和eNOS-Serl16磷酸化，从而增强eNOS活性。

切应力通过Pim1/eNOS途径调节人脐静脉内皮细胞NO分泌

目的:探讨层流切应力是否可通过Pim1调节内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性,从而调节血管内皮细胞一氧化氮(NO)分泌。方法:体外原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),运用平行平板流动腔系统给HUVECs加载层流切应力(15 dyn/cm^2)。采用Western blot法检测Pim1蛋白表达及eNOS-Ser1177磷酸化水平;硝酸还原酶法检测NO分泌量;利用特异性小干扰RNA(siRNA)转染技术沉默Pim1基因后再检测上述指标的变化。结果:切应力作用HUVECs 15 min,可以显著上调Pim1蛋白表达(P<0.05),同时显著增强eNOS-Ser1177磷酸化水平(P<0.05),伴随HUVECs NO分泌显著增多(P<0.05)。转染siPim1可以抑制切应力诱导的Pim1表达(P<0.05),同时抑制eNOS-Ser1177磷酸化(P<0.05),NO分泌随之显著降低(P<0.05)。结论:流体切应力可能通过Pim1/eNOS途径调节血管内皮细胞NO分泌。

ECE1过表达通过eNOS/NO通路促进Ang Ⅱ诱导的体外培养大鼠心肌细胞肥大和凋亡

目的:探讨过表达内皮素转换酶1(ECE1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的体外培养大鼠H9C2心肌细胞肥大和凋亡的影响。方法:采用AngⅡ作用于体外培养的H9C2心肌细胞,建立心肌细胞肥大模型。将细胞分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+质粒空载体(AngⅡ+NC)组和AngⅡ+ECE1过表达组。CCK-8法检测细胞活力;RT-qPCR检测ECE-1及心脏肥大因子心房钠尿肽(ANP)和脑钠肽(BNP)的mRNA表达水平;流式细胞术检测心肌细胞凋亡;Western blot检测ECE1、Bcl-2、Bax、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和p-eNOS的蛋白水平;硝酸还原酶法检测细胞中一氧化氮(NO)含量。结果:与空白对照组相比,AngⅡ组中ECE1表达、ANP和BNP mRNA表达、Bax蛋白表达及细胞凋亡显著增加(P<0.05),而细胞活力、NO含量及Bcl-2和p-eNOS蛋白水平显著下降(P<0.05);与AngⅡ组相比,AngⅡ+ECE-1过表达组中ECE1表达、ANP和BNP的mRNA表达、Bax蛋白表达及细胞凋亡进一步增加(P<0.05),而细胞活力、NO含量及Bcl-2和p-eNOS蛋白水平进一步下降(P<0.05)。结论:ECE1过表达可能通过调控eNOS/NO通路而促进AngⅡ诱导的体外培养大鼠H9C2心肌细胞发生肥大和凋亡。