miRNA-455-3p对HCT116结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及机制研究

目的探讨miRNA-455-3p对HCT116结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及机制研究。方法采用脂质体LipofectamineTM3000将miR-455-3p mimics和miR-455-3p NC转入HCT116结肠癌细胞中,Real-time PCR检测细胞中miR-455-3p表达,MTT法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases2,MMP2)、MMP9、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路相关蛋白的表达。结果与miR-455-3p NC组比较,miR-455-3p mimics组miR-455-3p表达量显著提高(P<0.01),细胞活力、迁移能力、侵袭能力均显著降低(P<0.01),MMP2、MMP9、PI3K及p-AKT表达量均显著下调(P<0.01)。结论 miR-455-3p mimics可能通过阻断PI3K/AKT信号通路抑制HCT116细胞的迁移及侵袭。

长链非编码RNA KCNQ1OT1靶向调控miR-218-5p对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(lncRNA KCNQ1OT1)调控micro RNA-218-5p(miR-218-5p)对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能机制。方法:收集2019年1月至4月在宜昌市第一人民医院行根治性结肠癌切除术的30例肿瘤组织和相应的癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测lncRNA KCNQ1OT1,miR-218-5p在结肠癌组织、癌旁正常组织、5种结直肠癌细胞系(HCT-116,SW480,SW620,DLD-1,HT29)及正常结肠上皮细胞系CCD841中的表达水平;干预结肠癌细胞系HCT-116和SW480中lncRNA KCNQ1OT1和miR-218-5p的表达,采用CCK-8法检测结肠癌细胞的增殖,Transwell法检测结肠癌细胞的迁移和侵袭;采用流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡率;用Starbase数据库预测lncRNA KCNQ1OT1的靶向miRNA,并用qRT-PCR、双荧光素酶报告基因法验证lncRNA KCNQ1OT1与miR-218-5p的靶向关系。结果:与癌旁正常组织和正常结肠上皮细胞系相比,结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平显著上调,miR-218-5p的表达显著下调(P<0.05);过表达lncRNA KCNQ1OT1促进SW480细胞的增殖、迁移和侵袭,且减少处于G0/G1期的细胞比率,抑制细胞凋亡;在结直肠癌组织中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平与miR-218-5p的表达水平呈负相关(r^2=0.437,P<0.001);双荧光素酶报告基因法分析证实lncRNA KCNQ1OT1能特异性结合miR-218-5p,并能降低其表达;过表达miR-218-5p抑制HCT-116细胞的增殖、迁移和侵袭,增加处于G0/G1期的细胞比率,促进细胞凋亡,且miR-218-5p的表达可以抑制由lncRNA KCNQ1OT1过表达引起的细胞增殖、迁移和侵袭能力的增加及凋亡的减少。结论:LncRNA KCNQ1OT1通过靶向调控miR-218-5p表达影响结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进结直肠癌的发展。

结直肠癌组织和结肠癌细胞中miR-31的表达及功能

目的:研究结直肠癌组织和结肠癌细胞中miR-31的表达及与临床病理指标间的关系,并探讨其功能。方法:采用实时荧光定量PCR法检测98例结直肠癌组织和对应正常黏膜组织中miR-31的表达,并分析其和临床病理指标之间的关系。利用anti-miR-31转染特异性抑制结肠癌细胞HCT-116中miR-31的表达,并分析转染前后细胞增殖、细胞周期及迁移能力的变化。结果:结直肠癌组织中miR-31的表达是正常黏膜组织中的15倍(P=0.001);miR-31的表达和结直肠癌患者TNM分期及肿瘤局部浸润有关(t=2.261和2.296,P<0.05)。anti-miR-31转染能特异性抑制HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞中miR-31的表达(P<0.05),转染后2种HCT-116细胞的增殖及细胞周期均无变化(P均>0.05),但细胞迁移能力降低(t=3.007和12.948,P<0.05)。结论:miR-31在结直肠癌组织中高表达,可能参与结直肠癌的发生发展;降低结肠癌细胞中miR-31的表达可降低其迁移能力。

三种除藻剂处理滇池水的探讨

滇池水含藻量高,现已属重富营养化水体。采用两种国外除藻剂ALGAWAY、ENVIRO-116-P及国内常用混凝剂(PAC)分别用于处理滇池水样,通过监测叶绿素a、总氮、总磷、浊度的变化,得出ALGAWAY在处理滇池水样时性能优于PAC和ENVIRO-116-P。

国外两种生物药剂处理滇池水的实例

滇池水含藻量高,现已属重富营养化水体。本实验将ALGAWAY、ENVIRO-116-P两种国外生物药剂用于处理滇池的草海、外海水样,通过观察反应现象,监测总磷、浊度的变化,比较得出ALG-AWAY在处理高含藻量的滇池水样时性能优于ENVIRO-116-P。

LncRNA-MALAT1通过调控miR-106b-5p介导结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶耐药机制研究

目的探讨LncRNA-MALAT1(MALAT1)通过调控miR-106b-5p介导结直肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药分子机制。方法收集2016-03-17-2019-04-10就诊于南华大学附属南华医院资料完整的30例5-FU化疗敏感和30例5-FU化疗耐药的结直肠癌患者癌组织。采用5-FU诱导结直肠癌细胞HCT116产生耐药性细胞HCT116/5-FU,将HCT116/5-FU细胞分为空白对照组(Control)、siRNA阴性对照组(siRNA-NC)、MALAT1 siRNA干扰组(si-MALAT1)、si-MALAT1+inhibitor-NC组和si-MALAT1+miR-106b-5p inhibitor组。采用不同浓度(0、5、10、20 mg/L)5-FU处理细胞48 h,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性;实时荧光定量PCR法检测结直肠癌组织或细胞中MALAT1和miR-106b-5p表达水平;双荧光素酶报告基因实验检测MALAT1、miR-106b-5p和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的靶向关系。采用SPSS 21.0进行数据分析,多组间比较采用单因素方差分析或两因素方差分析,两两多重比较采用LSD-t检验。结果 (1)临床标本测定:5-FU耐药结直肠癌组织中MALAT1表达量为7.57±1.76,高于5-FU敏感结直肠癌组织(3.15±1.13),t=11.541,P<0.001;而miRNA-106b-5p表达量为8.59±2.32,低于5-FU敏感结直肠癌组织(11.57±2.97),t=4.329,P<0.001。(2)体外细胞实验:0、5、10、20 mg/L 5-FU处理48 h后,HCT116/5-FU细胞在450 nm波长处光密度值D(450 nm)高于HCT116细胞,差异有统计学意义,F组别=93.335,F浓度=48.983,F组别×浓度=11.848,均P<0.001。HCT116/5-FU细胞中MALAT1表达量高于HCT116细胞(t=12.883,P<0.001),miRNA-106b-5p表达量低于HCT116细胞,t=8.101,P<0.001;si-MALAT1组HCT116/5-FU细胞中MALAT1表达量为0.04±0.01,低于Control组(1.01±0.07)和si-NC组(0.99±0.02),F=397.841,P<0.001;0、5、10、20 mg/L 5-FU处理48 h后,si-MALAT1组HCT116/5-FU细胞增殖率低于Control组和si-NC组,差异有统计学意义,F组别=263.160,F浓度=180.634,F组别×浓度=33.675,均P<0.001。si-MALAT1组HCT116/5-FU细胞中miRNA-106b-5p表达量为8.33±0.76,高于Control组(1.10±0.30)和si-NC组(1.00±0.15),F=228.724,P<0.001;0、5、10、20 mg/L 5-FU处理48 h后,si-MALAT1+inhibitor组HCT116/5-FU细胞增殖率高于si-MALAT1组,差异有统计学意义,F组别=164.881,F浓度=361.263,F组别×浓度=19.318,均P<0.001;双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR-NC组比较,miR-106b-5p mimics能降低MALAT1和HIF-1α野生型细胞荧光素酶活性,t值分别为11.961和25.390,均P<0.001。结论 MALAT1可能靶向调控miR-106b-5p/HIF-1α表达,进而促进结直肠癌细胞对5-FU耐药。

刺五加内生青霉鲨烯合酶基因的克隆与序列分析

【目的】克隆刺五加内生青霉Penicillium minioluteum P116-1a的鲨烯合酶(Squalene synthase,SS)基因。【方法】采用cDNA 5末端快速扩增(Rapid Amplification ofcDNA 5 Ends,5 RACE)技术扩增P.minioluteum P116-1a SS基因的全长cDNA序列和DNA序列;运用生物信息学方法对该基因进行分析,预测其编码蛋白的结构与功能;并通过RT-PCR法和SDS-PAGE法检测SS的表达情况。【结果】P.minioluteum P116-1a的SS基因含有4个外显子和3个内含子,开放阅读框长1 416 bp,编码471个氨基酸,预测蛋白含67.73%的α螺旋,5.31%的延伸链,2.97%的β折叠,23.99%的无规则卷曲,含有鲨烯合酶和八氢番茄红素合成酶的特异性识别区域,定位于内质网膜。与P.marneffei和Talaromyces stipitatus中SS蛋白的氨基酸同源性达90%以上。不同温度下SS的表达情况不同。【结论】首次在刺五加内生青霉P.minioluteum P116-1a中克隆到SS基因,为进一步研究P.minioluteum P116-1a提高刺五加皂苷含量的机制奠定基础。